抗癌药物诱导肝细胞肝癌凋亡阈值的研究

［目的］探讨阿霉素（ＡＤＭ）、顺铂（ＣＤＤＰ）作用于肝细胞肝癌（ＨＣＣ）的细胞凋亡阈值。［方法］采用原代细胞培养技术,研究１８例ＨＣＣ对ＡＤＭ和ＣＤＤＰ的敏感性。［结果］ＡＤＭ和ＣＤＤＰ作用于ＨＣＣ的细胞凋亡阈值分别为１．０μｇ／ｍｌ,１．５μ／ｍｌ（临床剂量分别为２０ｍｇ和３０ｍｇ）。［结论］寻求抗癌药物的细胞凋亡阈值可减少抗癌药物的临床剂量和多药耐药性的出现。     

阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡模型的建立

目的建立肝癌细胞凋亡模型,为进一步研究细胞凋亡分子机理打下基础。方法用抗癌药阿霉素诱导培养的人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞发生凋亡,用四唑盐比色试验（ＭＴＴ法）检测。结果研究发现,０．５μｇ／ｍｌ放线菌素Ｄ可明显抑制２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素对肝癌细胞凋亡的诱导作用。用２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素作用肝癌细胞３小时,换培养液继续培养１２小时后,肝癌细胞ＤＮＡ结构断裂,电泳呈梯状带型。肝癌细胞形态学改变出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征。用流式细胞仪测定,出现典型的凋亡峰,凋亡细胞占７２．１％。用２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素诱导肝癌细胞凋亡后,细胞周期Ｇ１期、Ｓ期和Ｇ２期分别为７５．９％,２４．１％和０％,肝癌细胞活细胞率为３５．５％。结论用抗癌药阿霉素成功地诱导人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞发生凋亡,该细胞凋亡模型的建立,将有助于进一步探讨肝癌细胞凋亡的分子机制。     

肿瘤化疗药物诱导细胞凋亡的研究进展

化疗是肿瘤综合治疗手段之一,随着对凋亡机制的深入了解,人们越来越清楚化疗药物是通过类似诱导凋亡的机制起作用的.而实际上许多对凋亡调节机制的认识也是通过化疗药物诱导凋亡来证实.近年来肿瘤化疗和细胞凋亡的研究更加引人注目,我们从凋亡的发生、传导和调控角度,阐述化疗诱导凋亡的机制、特征及其临床指导意义.     

康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的：探讨康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡的作用。为康莱特注射液治疗肝癌提供理论依据。方法：采用免疫组织化学及透射电镜技术观察康莱特注射液对肝癌细胞凋亡的影响。结果：肝癌细胞经康莱特注射液培养24h后,其凋亡的百分率明显高于对照组和空白组,有显著性差异（P＜0．05）,且组织细胞凋亡在50％以上者占44．12％（15／34）,而对照组及空白组无1例凋亡超过50％;电镜相可见较为典型的细胞凋亡的形态学变化,细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,凋亡小体形成等。结论：康莱特注射液能诱导肝癌细胞发生凋亡;诱导细胞凋亡可是康莱特注射液治疗作用的重要机制。     

凋亡素诱导人成骨肉瘤细胞多药耐药株凋亡的研究

目的研究凋亡素对人成骨肉瘤细胞0S-732多药耐药株R-OS-732的作用.方法凋亡素基因VP3经酶切后克隆入质粒pIRES1,获得重组质粒pIRVP3,通过脂质体法pIRVP3转染R-0S-732细胞,RT-PCR检测凋亡素在细胞中的表达;光镜及电镜下观察瘤细胞;提取瘤细胞基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳;流式细胞仪检测凋亡率.结果凋亡素基因已在转录水平表达;光镜及电镜下两组细胞形态变化明显;电泳见转染组DNA呈梯状条带,对照组为单一条带;转染组凋亡率明显高于空白对照组(P＜0.01).结论凋亡素可有效诱导R-OS-732细胞凋亡.     

紫杉醇诱导肝癌细胞SMMC—7721凋亡的实验研究

目的：研究紫杉醇（Taxol)对肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制和诱导凋亡的作用。方法：应用MTT法观察紫杉醇对SMMC-7721的生长抑制作用。通过瑞氏染色，荧光显微镜，透射电镜，流式细胞仪和TUNEL染色研究紫杉醇对SMMC-7721诱导凋亡的作用。结果：紫杉醇对肝癌细胞SMMC-7721有明显的生长抑制作用，其IC50为21.6nmol/L。紫杉醇作用细胞后，可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化。细胞核固缩，染色质凝集成新月型紧贴于核膜周边，核碎裂，染色质片断化，凋亡小体形成等，流式细胞仪上可见S期和G2/M期和DNA含量增加，并出现典型的亚二倍体“凋亡小峰”。TUNEL染色显示。紫杉醇作用于SMMC-7721后，随药物浓度增加和作用时间延长，凋亡指数增加。结论：紫杉醇对SMMC-7721有明显的生长抑制作用；紫杉醇对SMMC-7721有诱导凋亡的作用。     

小肝细胞癌CT研究的新进展

小肝细胞癌(Small HepatocellularCarcinoma,SHCC)的手术切除率高,术后生存期长,据上海医科大学肝癌研究所报告,5年生存率高达70％以上。因此,SHCC的早期发现和诊断是目前临床工作中面临的重大课题。本文所指SHCC是以病灶最大径≤3cm为标准。     

乙醇诱导肝癌细胞凋亡及其相关蛋白的研究

目的探讨乙醇对肝细胞癌(简称肝癌)细胞凋亡的诱导作用,并对其相关蛋白的表达进行初步分析。方法用含6%乙醇的培养液培养6h诱导肝癌细胞系HCC-9204细胞凋亡,进行台盼蓝染色、Hoechst33258荧光染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测和流式细胞仪DNA含量分析。SDS-PAGE电泳分析诱导凋亡前后的细胞蛋白表达的情况。结果6%乙醇可使HCC-9204细胞产生明显的凋亡形态学变化。大部分细胞呈台盼蓝拒染,并且为TUNEL阳性着色。流式细胞仪分析可见亚二倍体凋亡峰。SDS-PAGE电泳显示,乙醇诱导凋亡的HCC-9204细胞中有新的分子量约大于97.4kD的蛋白产生。结论低剂量乙醇能够明显地诱导HCC-9204肝癌细胞凋亡,并且可使其产生新的大分子量蛋白质。     

肝细胞癌电镜下细胞凋亡的自然状态观察

目的了解肝细胞癌中肝细胞凋亡的形态特征。方法运用透射电镜观察了未经治疗的肝细胞癌及癌旁组织中细胞凋亡的典型、完整的形态学特征。结果凋亡现象出现于单个分散的癌及癌旁组织肝细胞。凋亡的肝细胞体积变小，胞质电子密度增高，细胞表面微绒毛消失，与邻近细胞接触松弛。最早的形态学改变为核染色质分离、浓集，界限清楚紧靠核膜，呈新月形或帽状。线粒体结构尚完好，内质网空泡化，糖原颗粒聚集。继而凋亡细胞以出芽方式形成完整的膜包裹的凋亡小体。已凋亡脱落的凋亡小体被邻近细胞分别吞噬。同时还观察到凋亡小体边形成边被吞噬的现象。结论凋亡小体形成与被吞噬可以是一连续过程。癌旁组织中肝细胞凋亡比癌组织中更常见。未经治疗的肿瘤组织中的细胞凋亡可能对肿瘤的生长起延缓作用     

生长抑素受体亚型介导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的研究生长抑素类似物奥曲肽诱导人肝癌细胞株细胞凋亡的作用,观察不同的人肝癌细胞株生长抑素受体(SSTR)亚型的表达情况.探讨SSTR亚型与肝癌细胞凋亡之间的关系.方法分别培养人肝癌细胞株(SMMC-7721,HHC-98,HepG2),荧光染色、透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测细胞SSTR亚型mRNA的表达.结果0.25～4.0μg/mL的奥曲肽作用48 h后,三种肝癌细胞部分呈现典型的凋亡形态学改变,细胞凋亡率呈浓度依赖性升高.3种肝癌细胞株均表达SSTR2、3、4,SSTR5则在两种肝癌细胞株SMMC-7721和HHC-98中表达,所有细胞株均未检测到SSTR1的表达.结论奥曲肽可以诱导肝癌细胞凋亡,其作用与肝癌细胞中广泛表达的SSTR亚型相关.     

原发性肝细胞癌病灶形态学的CT研究

我们对２３２例原发性肝细胞癌病灶的术前ＣＴ表现进行分析。以病灶的形态、轮廓光整度、边缘整齐度作为指标，将肝癌病灶术前ＣＴ表现分为３种类型：类圆膨胀生长型（Ⅰ型）、不规则膨胀生长型（Ⅱ型）、不规则浸润型（Ⅲ型）。对不同ＣＴ分型与手术病理结果对照观察发现：从Ⅰ型～Ⅲ型，肿瘤的肝内播散率分别为１８．６％、３７．７％、４７．８％，肝外淋巴结转移率分别为０、７．８％、２３．２％，门静脉瘤栓形成率分别为２．３     

Bak基因过表达诱导肝癌细胞凋亡

目的：本文旨在研究ｂｃｌ－２基因家族促凋亡蛋白Ｂａｋ在肝癌细胞凋亡中的作用,同时评价它作为肿瘤治疗的潜在靶基因的可能性。方法：免疫组织化学法研究Ｂａｋ在ＨＣＣ组织中的分布,并结合ＴＵＮＥＬ染色,分析Ｂａｋ在肝癌细胞凋亡中潜在的作用。采用ＭＴ－Ⅱ调节系统,通过加锌离子（ＺｎＳＯ４,１００μｍｏｌ／Ｌ）诱导Ｂａｋ基因表达。ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞系作为靶细胞,获得表达Ｂａｋ基因的稳定转染子。结果：在Ｈ     

乙醇诱导肝癌HCC—9204细胞凋亡的研究

目的：探讨乙醇对肝癌细胞系HCC－9204凋亡的诱导作用。建立乙醇诱导肝癌细胞凋亡的模型。方法：用噻唑蓝（MTT）法检测浓度分别为2％－10％的乙醇对HCC－9204的杀伤作用，然后用6％乙醇作用6h诱导HCC－9204细胞凋亡，以透射电子显微镜，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法和流式细胞术分别检测凋亡细胞的形态学变化，DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化，结果：乙醇对HCC－9204细胞的杀伤作用随浓度的增加而增加，6％乙醇可使HCC－9204细胞产生明显的凋亡形态学变化，大部分细胞为TUNEL阳性，并且流式细胞仪分析可明显的亚二倍体凋亡峰。结论：低浓度乙醇能有效诱导HCC－9204细胞凋亡。     

nm23基因在肝细胞肝癌组织中表达及临床意义

肝细胞肝癌（ＨＣＣ）经手术治疗的病人约５０％死于肝内复发，如何从分子生物学阐明ＨＣＣ肝内转移及复发的机理是当今研究的课题。ｎｍ２３是一与转移有关的基因，有Ｈ１和Ｈ２两个亚型，与转移有关的主要是ｎｍ２３－Ｈ１。本文应用Ｓ－Ｐ免疫组化法检测６１例ＨＣＣｎ...     

小肝细胞癌的CT研究及影像学评价

鉴于目前的设备和检测手段，大部分原发性肝癌病例发现时已属晚期，手术切除率低，预后不良；而小肝癌（≤3cm）手术切除率高，术后五年生存率可达60％－70％。因此肝癌的早期发现和诊断具有重要的临床意义。一、小肝癌的CT检查和各种影像学方法比较从1989年－1992年，我们对200例小肝癌进行了前瞻性研究，其中118例共187个病灶经手术病理证实，统计结果表明，病灶愈小．各种影像学方法和检出率愈低。3cm以上病灶均易位出；2cm－3cm病灶，虽有一定的假阴性（漏检），但阳性事甚高，各种方法差异不大；2cm以内特别是≤1cm的病灶，阳性举（检…     

caspase3基因表达与原发性肝细胞癌细胞凋亡无关

目的　研究caspase3在原发性肝细胞癌 (HCC)中的表达并观察其与细胞凋亡的关系。方法　原位杂交检测caspase3在HCC中的表达 ,原位末端标记检测细胞凋亡。结果　 39例HCC中的2 1例 (5 3 8% )不同程度的表达caspase3,而 46 2 %的HCC未见caspase3表达。HCC中caspase3阳性率低于癌旁非癌肝组织中的阳性率 (87 5 % ,7/ 8) ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。caspase3的表达与肿瘤的分化有关 ,中等至高分化的HCC中阳性率 (72 2 % )明显高于低分化HCC中的阳性率 (38 1% ,P <0 0 5 ) ,而与肿瘤的大小、分级无关。尽管在已转移的HCC中阳性率 (6 2 5 % )高于无转移的HCC中的阳性率 (5 1 6 % ) ,但差异无显著性 (P >0 0 5 )。检测HCC中的细胞凋亡发现 ,肿瘤组织中caspase3的表达与肿瘤细胞的凋亡无明显的关系 ,caspase3阳性的HCC中 ,其细胞凋亡指数 (AI)与caspase3阴性的HCC中的AI相比 ,差异无显著性 (7 1‰∶6 6‰ ,P >0 0 5 )。结论　caspase3失表达在HCC的发生中起重要作用 ,但与HCC中细胞凋亡的关系不很密切。     

大黄素抑制PDGF诱导的肝癌细胞增殖

目的观察大黄素（Emodin,EM）对血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor,PDGF）诱导的人肝癌HepG2细胞体外增殖的影响并探讨其作用机制。方法体外培养HepG2细胞,经一定量的PDGF或PDGF与EM共同作用后,以MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;免疫细胞化学法检测细胞NF-κB及PDGF的表达。结果在2.5～5.0ng/mL浓度范围内,外源性PDGF可明显促进HepG2细胞增殖,抑制细胞凋亡,影响细胞周期,使G0/G1期比例降低,S期比例增高。并能增强NF-κB的表达,PDGF各处理组与对照组相比,P〈0.05。而EM可明显抑制PDGF的上述作用,EM处理组与PDGF处理组相比,细胞增殖数、细胞凋亡率、细胞周期分布、NF-κB的表达差异均有统计学意义,P〈0.05。且EM可直接抑制PDGF的表达。结论EM对PDGF诱导的人肝癌HepG2细胞增殖有显著抑制效应,其机制可能与直接减弱PDGF的效应有关。     

顺铂诱导人肝癌细胞凋亡机理研究

顺铂是多种化疗方案的核心药物,在对人卵巢癌细胞和大鼠肝癌细胞的研究中,发现其具有诱导凋亡的作用。本实验从细胞形态、ＤＮＡ裂解片段、细胞周期、ＤＮＡ断裂点末端标记,凋亡相关基因观察顺铂诱导人肝癌细胞凋亡的作用机理。1　材料与方法1.1　细胞培养及药物人肝癌细胞ＳＭＭＣ-7721,引自中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库。在含10%小牛血清的ＲＰＭＩ-1640培养基(Ｇｉｂｃｏ产品),37℃,5%ＣＯ2条件下培养。顺氯氨铂(ｃｉｓｐｌａｔｉｎ,ＤＤＰ齐鲁制药厂出品,批号:960601),用含10%正常大鼠血清的ＲＰＭＩ-1640培养液配制,ＤＤＰ终…     

紫杉醇诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的实验研究

目的 :研究紫杉醇 (Taxol)对肝癌细胞SMMC 772 1的生长抑制和诱导凋亡的作用。方法 :应用MTT法观察紫杉醇对SMMC 772 1的生长抑制作用 ,通过瑞氏染色、荧光显微镜、透射电镜 ,流式细胞仪和TUNEL染色研究紫杉醇对SMMC 772 1诱导凋亡的作用。结果 :紫杉醇对肝癌细胞SMMC 772 1有明显的生长抑制作用 ,其IC50 为 2 1.6nmol/L。紫杉醇作用细胞后 ,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化 ,细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧贴于核膜周边 ,核碎裂、染色质片断化、凋亡小体形成等。流式细胞仪上可见S期和G2 /M期和DNA含量增加 ,并出现典型的亚二倍体“凋亡小峰”。TUNEL染色显示。紫杉醇作用于SMMC 772 1后 ,随药物浓度增加和作用时间延长 ,凋亡指数增加。结论 :紫杉醇对SMMC 772 1有明显的生长抑制作用 ;紫杉醇对SMMC 772 1有诱导凋亡的作用。