薄盖灵芝化学成分的研究 Ⅳ.灵芝碱甲、灵芝碱乙和灵芝嘌呤的化学结构

自薄盖灵芝Ganoderma capense(Lloyd)Teng发酵的菌丝体中得到三个新的生物碱,分别为灵芝碱甲(ganoine,Ⅰ)、灵芝碱乙(ganodine,Ⅱ)和灵芝嘌呤(ganoderpurine,Ⅲ),并根据它们的理化性质和光谱数据确定了其结构。     

赤芝子实体中三萜化学成分的研究

自赤芝[Ganoderma lucidum (Fr.)Karst]的二氯甲烷溶解部分分离得到一个新的三萜内酯化合物,命名为灵芝内酯(ganolactone)。根据光谱(UV,IR,¹HNMR,¹³CNMR,MS和2DNMR)解析,确定其结构为I式。同时还从赤芝子实体中分到三个已知化合物,即灵芝醇A(ganoderiolA,II),灵芝醇B(ganoderiolB,II)和灵芝三醇(ganodermatriolIV)。     

灵芝多糖的药理研究进展

灵芝多糖(Ganoderma lucidum Polysaccharide,GLP)是灵芝的主要有效成分之一[1].国内外学者对灵芝多糖的药理作用做了大量的研究工作,取得了许多新的进展.笔者对近年来的研究作一概述.     

灵芝多糖的药理研究进展

灵芝多糖(Ganoderma lucidum Polysaccharide,GLP)是灵芝的主要有效成分之一[1].国内外学者对灵芝多糖的药理作用做了大量的研究工作,取得了许多新的进展.笔者对近年来的研究作一概述.     

加热因素对灵芝含片总多糖含量测定的影响性研究

目的 对灵芝含片中总多糖的含量进行测定,考察加热因素对测试结果的影响。方法 以葡聚糖为对照品,采用硫酸苯酚比色法测定灵芝含片中总多糖的含量,对测定过程中直接冷却和加热后冷却对测定结果的影响进行考察。结果 直接冷却操作的线性回归方程为Y=0.014 6X-0.016 7,r=0.997 8,在15~50 μg·mL^-1浓度范围呈良好线性关系,平均加样回收率为98.47%,RSD 2.70%,测得3批灵芝含片中总多糖含量分别为12.09、12.97、12.81 mg·g^-1;加热后冷却的线性回归方程为Y=0.013 8X-0.033 5,r=0.997 7,在15~50 μg·mL^-1浓度范围呈良好线性关系,平均加样回收率为98.32%,RSD1.78%,测得相同3批灵芝含片中总多糖含量分别为13.88、13.80、13.42 mg·g^-1。结论 硫酸苯酚比色法操作中直接冷却和加热后冷却两种方法均可行,但总多糖在加热条件下,充分水解产生的衍生物和苯酚反应显色,测得的总多糖含量比不加热的要大,用于灵芝含片质量标准中总多糖的含量测定结果更准确。     

裂褶菌孢内多糖和孢外多糖对小鼠免疫功能的影响

裂褶菌孢内多糖(SPG₁)和孢外多糖(SPG₂)是分别从发酵培养的裂褶菌菌丝体和发酵液中提取的多糖。SPG₁和SPG₂均能显著促进Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应,SPG₁还显著地对抗氢可的松对淋巴细胞增殖反应的抑制作用。SPG₁和SPG₂均可恢复14月龄老年小鼠低下的脾淋巴细胞增殖反应。给小鼠ip SPG₁和SPG₂均能显著增强二硝基氯苯(DNCB)所致小鼠迟发型皮肤过敏反应(DCH)。小鼠ip SPG₁可显著增强羊红细胞(SRBC)诱导的小鼠脾脏空斑形成细胞(PFC)反应。SPG₁和SPG₂还可使老年小鼠的PFC反应恢复至成年小鼠水平。     

基于结肠癌HCT116细胞三维培养模型的灵芝水提物抗肿瘤活性研究

目的 采用结肠癌HCT116细胞的二维（2D）和三维（3D）培养模型研究灵芝水提物（Ganoderma lucidum water extract，GLWE）的抗肿瘤作用。方法 采用紫外-可见光分光光度法测定GLWE中灵芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharides，GLP）、三萜和甾醇的含量，HPLC分析GLP中水溶性单糖的组成和比例；以Matrigel基质胶为基质材料建立体外HCT116细胞3D培养模型，评价GLWE的抗肿瘤及辅助抗肿瘤活性；CCK-8法检测细胞活力；Real-time PCR检测细胞mRNA表达水平；Western blotting检测细胞蛋白表达水平。结果 GLWE中GLP和三萜及甾醇的含量分别为20.92%和7.18%，其中GLP主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、D-木糖、L-岩藻糖组成；GLWE和5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）作用48 h可呈浓度依赖性抑制2D和3D培养的HCT116细胞增殖；与2D培养相比，3D培养的HCT116细胞中整合素β1（Integrin β1）和钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA的表达显著升高，并对GLWE和5-FU的敏感性降低；在HCT116细胞3D培养模型中，GLWE既可降低CDK2、CDK4和Bcl-2蛋白的表达，升高p21、p27、cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白的表达，还可显著降低Integrin β1和E-cadherin mRNA的表达，并加强5-FU的抗肿瘤活性。结论 GLWE通过抑制细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制3D培养的HCT116细胞增殖，并通过抑制Integrin β1和E-cadherin mRNA的表达增强5-FU的抗肿瘤活性。     

五味子多糖通过Traf3/NF-кB通路降低脂多糖对大鼠肝细胞的炎症反应

目的 探讨五味子多糖对脂多糖（LPS）诱导原代大鼠肝细胞炎症反应的影响,并研究潜在机制。方法 体外原代培养大鼠肝细胞,并分为空白对照组、LPS诱导组、五味子多糖低、中、高剂量组,CCK-8法检测五味子多糖对大鼠肝细胞增殖的影响,ELISA法检测五味子多糖对大鼠肝细胞分泌IL-6和TNF-α炎症因子的影响,免疫印迹方法检测五味子多糖对Traf3/NF-кB信号通路的影响。结果 与LPS诱导组相比,五味子多糖能显著改善LPS对大鼠肝细胞增殖的抑制作用（P<0.05）;与LPS诱导组相比,不同剂量五味子多糖均显著降低了大鼠肝细胞分泌的IL-6和TNF-α炎症因子水平（P<0.05）;免疫印迹法检测发现,各剂量五味子多糖组相对LPS诱导组细胞中Traf3和p-NF-кB表达水平明显降低（P<0.05）。结论 五味子多糖可抑制大鼠肝细胞炎症反应,进而改善炎症对细胞增殖的抑制作用,其作用机制可能与下调Traf3/NF-кB信号通路活化有关。     

赤芝子实体中一个新的三萜化合物(英文)

赤芝 (Ganoderma lucidum) 是我国及东亚地区常用的民间草药, 具有良好的治疗及保健作用。本文对赤芝子实体的化学成分进行了研究, 从中分离并鉴定了两个羊毛甾烷型三萜类化合物, 其中化合物1为新化合物, 鉴定为 (24S)-羊毛甾-7-氧-8-烯-3β, 24, 25-三醇, 并命名为灵芝三醇 M (1); 化合物2为灵芝酸ε 。     

灵芝菌丝体多糖对K562细胞的抑制作用及免疫调节作用研究

目的研究灵芝菌丝体多糖（ganoderma lucidum mycelia polysaccharides,GLMP）对K562白血病细胞及小鼠体外脾淋巴细胞增殖的影响。方法 MTT法检测不同浓度GLMP对K562白血病细胞增殖及对小鼠体外脾淋巴细胞增殖的作用;血细胞计数方法绘制生长曲线。结果不同浓度的GLMP处理K562细胞48h后,50mg/L及以上浓度抑制率与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,而且随浓度的增加抑制率增加。作用48h的IC50为270.2mg/L。生长曲线也表明随时间的延长和浓度的增加,细胞增殖能力下降。GLMP作用小鼠体外脾淋巴细胞48h后,在多糖浓度为50、100mg/L和25、50、100mg/L时能显著刺激静止性和激活型细胞的增殖。结论 GLMP可以抑制K562白血病细胞增殖而且具有免疫调节能力。     

灵芝多糖拮抗环孢素A,氢化可的松及抗肿瘤药的免疫抑制作用

灵芝多糖在50,100和200μg·ml~1时可完全拮抗环孢素A,丝裂霉素C,氟尿嘧啶和阿糖胞苷对小鼠混合淋巴细胞反应(MLR)的轻度抑制(抑制50％以下)作用,部分拮抗氢化考的松对MLR的严重抑制(抑制50％以上)作用。     

灵芝多糖对体外树突状细胞诱导细胞毒性T-淋巴细胞的调节作用(英文)

目的:研究灵芝多糖(Gl-PS)在抗原提呈阶段对体外培养树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T-淋巴细胞(CTL)功能的调节及其机制。方法:体外培养小鼠骨髓来源DC经P815肿瘤细胞冻融抗原冲击致敏,并与不同浓度Gl-PS(0.8,3.2,或12.8 mg/L)共培养。成熟DC与脾淋巴细胞共培养诱导P815特异性CTL生成。第5天收集各组悬浮细胞及培养上清,采用乳酸脱氢酶法比较CTL特异性杀伤活性;RT-PCR法测定T扰素γ(IFNγ)及颗粒酶B mRNA在CTL的表达;ELISA或Western blot法检测IFNγ或颗粒酶B蛋白的表达。结果:3种浓度的Gl-PS均可增高培养上清中释放的LDH活性(P<0.01);增加CTL表达IFN7及颗粒酶B mRNA(IFNγ:Gl-PS 12.8 mg/L组与RPMI-1640组,P<0.05;颗粒酶B:P<0.01);促进CTL培养上清中IFNγ蛋白生成(P<0.05)以及CTL表达颗粒酶B蛋白(Gl-PS 12.8 mg/L组与RPMI-1640组,P<0.05)。结论:Gl-PS可在抗原提呈阶段促进P815肿瘤冻融抗原冲击致敏DC所诱导的特异性CTL的杀伤活性,其机制可能是通过IFNγ及颗粒酶B途径的调节。     

灵芝孢子粉与子实体中三萜类化合物、多糖及重金属元素的含量比较

目的:比较灵芝孢子粉与子实体中三萜类化合物、多糖及重金属元素的含量差异。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法分析灵芝孢子粉和子实体样品中的三萜类化合物,用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)技术对上述样品中5种重金属元素的含量进行测定,用蒽酮-硫酸法测定其中多糖的含量。结果:灵芝孢子粉和子实体中三萜类化合物的HPLC特征图谱差异明显;灵芝孢子粉中多糖的含量高于子实体中的含量;而重金属元素的含量二者没有显著差异。结论:本试验结果可为灵芝孢子粉与子实体药理作用的差异提供理论依据。     

灵芝发酵终点的确定及高产灵芝多糖菌种的筛选

目的确定灵芝发酵终点,筛选高产灵芝多糖的菌种,用于产业化生产。方法对六株来源于不同地区的灵芝菌种进行同条件发酵测其生物量、灵芝胞内多糖及pH值,革兰染色镜检菌丝。结果与讨论灵芝发酵终点应控制在pH值3.5~4.5,镜检菌丝出现少量自溶点,此时灵芝胞内多糖含量最高;BLGL32(福州)所产灵芝多糖最高,胞内多糖1.53g.L-1,胞外多糖7.02g.L-1。     

Antitumor and anti-angiogenic activity of Ganoderma lucidum polysaccharides peptide

AIM: To investigate the antitumor and anti-angiogenic activity of Ganoderma lucidum polysaccharides peptide (GLPP). METHODS: Antitumor effect of GLPP was observed in tumor-bearing mice in vivo. At the same time,the effects of GLPP on proliferation of tumor cells and human umbilical cord vascular endothelial cell (HUVEC) were detected by MTr assay in vitro. Subsequently, spleen lymphocytes proliferation of nude mice was stimulated by LPS or ConA. To investigate the anti-angiogenic effect of GLPP, GLPP 80 μg per disc and GLPP-treated serum 10μL per disc were added to the chick chorioallantoic membrane (CAM) respectively in vivo. RESULTS: GLPP 50, 100, and 200 mg/kg inhibited growth of Sarcoma 180 in BALB/c mice markedly by 35.2 %, 45.2 %, and 61.9 %,respectively. GLPP which was directly added to the cultured medium did not inhibit PG cell proliferation in vitro;but GLPP-treated serum 50, 100, 200 mg/kg potently inhibited PG cell proliferation by 22.5 %, 26.8 %, and 30.3 %,respectively; and reduced the xenograft (human lung carcinoma cell PG) in BALB/c nude mice greatly in vivo by 55.5 %, 46.0 %, and 46.8 %, respectively. Lymphocytes proliferation of nude mice could be stimulated by LPS 5 mg/L but not by ConA 2.5 mg/L, indicating that GLPP could not promote the T lymphocyte proliferation and neutral red phagocytosis of peritoneal macrophages of nude mice. The CAM assay showed that GLPP and GLPP-treated serum had anti-angiogenic effect. GLPP (1, 10, and 100 mg/L) inhibited HUVEC proliferation in vitro with the inhibitory rate of 9.4 %, 15.6 %, and 40.4 %, respectively. CONCLUSION: GLPP has antitumor and antiangiogenic activity. The anti-angiogenesis of GLPP may be a new mechanism underlying its anti-tumor effects.     

灵芝多糖的急性毒性和抗肿瘤作用

目的：探讨灵芝多糖的急性毒性和抗肿瘤作用。方法：观察灵芝多糖的LD50及对S180小鼠肉瘤细胞的抑制作用。结果：灵芝多糖的LD50远大于国家标准15g/kg,属无毒级别。同时当灵芝多糖的剂量为250mg/kg时,对S180小鼠肉瘤细胞的抑瘤率为43.44%。结论：灵芝多糖有很好的抗肿瘤作用,同时无急性毒性,值得推广应用。     

灵芝多糖对肿瘤细胞与内皮细胞相互作用的影响

目的:研究灵芝多糖对肿瘤细胞与内皮细胞相互作用的影响。方法:应用免疫荧光法配合使用显微镜将内皮细胞区分出来后,通过MTT法观察灵芝多糖在内皮细胞增殖分化过程中的作用,并使用相同的方法观察肿瘤细胞的增殖分化过程与灵芝多糖的关系,同时观察灵芝多糖是否干扰2种细胞间产生的黏附作用及迁移反应。结果:内皮细胞的增殖分化过程与灵芝多糖不存在明显联系,肿瘤细胞的增殖分化过程与灵芝多糖也不存在明显联系,即无明显的细胞毒性反应。但灵芝多糖可阻碍2种细胞间产生的黏附作用和迁移反应,减少肿瘤细胞的迁移百分比。结论:灵芝多糖具有抗肿瘤功效,其作用机制为阻碍肿瘤细胞的黏附作用和迁移反应。     

灵芝多糖对S180荷瘤小鼠血清细胞因子水平与脏器指数的影响

目的:研究灵芝多糖对S180荷瘤小鼠血清细胞因子水平与脏器指数的影响。方法:瘤细胞悬液接种于小鼠右前肢腋窝皮下(0.2 ml/只)以复制S180荷瘤模型。60只KM小鼠随机均分为正常对照(等容生理盐水)组、模型(等容生理盐水)组、环磷酰胺(40 mg/kg,连续3 d)组与灵芝多糖高、中、低剂量(160、80、40 mg/kg,连续10 d)组。灌胃给药,每天1次。ELISA法测定小鼠血清干扰素(IFN)-γ与白细胞介素(IL)2含量,称定瘤质量并计算抑瘤率,称定胸腺和脾脏质量并计算胸腺和脾脏指数。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠血清IFN-γ和IL-2含量减少,瘤质量增加,胸腺和脾脏指数降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,灵芝多糖高、中剂量组小鼠血清IFN-γ和IL-2含量增加,瘤质量减少,胸腺和脾脏指数升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:灵芝多糖对S180荷瘤小鼠具有一定的抗肿瘤及增强免疫的功能,其机制与调节血清细胞因子水平,降低脏器指数有关。     

肉灵芝提取物调控长链非编码RNA BRCA1相邻基因2/双特异性磷酸酶4/细胞外信号调节激酶通路对肝癌细胞Hep3B增殖及凋亡的影响

目的 探讨肉灵芝提取物是否可通过长链非编码RNA BRCA1相邻基因2(LncRNA NBR2)/双特异性磷酸酶4/细胞外信号调节激酶(DUSP4/ERK)通路而影响肝癌HepB细胞增殖及凋亡。方法 体外培养肝癌HepB细胞,分为1 mg/L肉灵芝提取物组、2 mg/L肉灵芝提取物组、4 mg/L肉灵芝提取物组、si-NC组、si-LncRNA NBR2组、pcDNA-NC组、pcDNA-LncRNA NBR2组、肉灵芝提取物+si-NC组、肉灵芝提取物+si-LncRNA NBR2组;采用MTT检测肝癌HepB细胞增殖;流式细胞术检测肝癌HepB细胞凋亡;RT-qPCR检测LncRNA NBR2的表达量;蛋白质印迹法(Western blotting)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)、DUSP4、p-ERK蛋白表达量。结果 肉灵芝提取物可明显降低肝癌HepB细胞增殖率与PCNA、DUSP4、p-ERK蛋白水平(P<0.05),提高肝癌HepB细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白水平及Lnc...