重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白(rhG-CSF-Fc)的质量研究

目的:建立重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白的质控方法和质量标准。方法:采用NSF-60细胞增殖法测定生物学活性;非还原SDS-PAGE电泳和RP-HPLC测定纯度;以ELISA法分别测定残留CHO细胞蛋白和蛋白A;其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行。结果:用建立的方法对重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。     

重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白质量控制方法与质量标准研究

研究建立重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白(rhLFA3-IgG1)质量控制方法和质量标准。采用针对Jurkat细胞表面CD2分子的竞争结合试验测定融合蛋白的体外活性，以分子筛和离子交换色谱分别确定制品纯度，将制品还原、羧甲基化后再以胰蛋白酶裂解并经反相高效液相色谱进行肽图分析，采用ELISA法分别测定蛋白A与CHO宿主细胞蛋白残留量。建立了重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白生物学活性、理化特性与残留杂质等质量控制方法和质量标准。所建立的质量控制方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点，可用于重组人淋巴细胞功能相关抗原3-抗体融合蛋白(rhLFA3-IgG1)的质量控制与产品检定。     

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白优化治疗活动期类风湿关节炎的研究

目的： 通过对比重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白（rhTNFR：Fc）不同时间给药联合甲氨蝶呤（MTX）治疗活动性类风湿关节炎的临床疗效,探索重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白最佳治疗时间。方法： 2015年1月至2017年12月收治的活动性类风湿关节炎患者90例随机分为重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白上午治疗组和重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白下午治疗组,各45例。重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白上午治疗组给予基础药物（MTX）与上午（8：00~10：00）重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白治疗,重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白下午治疗组给予基础药物（MTX）与下午（16：00~18：00）重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白治疗,均治疗12周。比较治疗前后临床症状、实验室参数的变化情况及不良反应发生情况。结果： 治疗后2组患者的压痛关节数（TJC）、肿胀关节数（SJC）、血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）、基于28个关节的疾病活动指数（DAS28-ESR）、类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（ACPA）、血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）水平均较治疗前显著降低（P<0.05）,且重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白下午治疗组患者的TJC、SJC、ESR、DAS28-ESR、ACPA及血清IL-6水平显著低于重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白上午治疗组（P<0.05）;2组患者不良反应总体发生率相似（P>0.05）。结论： 重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白下午（16：00~18：00）给药联合甲氨蝶呤治疗活动性类风湿关节炎的疗效可能优于重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白上午（8：00~10：00）给药联合甲氨蝶呤,需进一步研究。     

重组人源化兔抗VEGF单克隆抗体质控方法与质量标准研究

目的:建立重组人源化兔抗VEGF单抗的质控方法和质量标准。方法:利用HUVEC细胞增殖抑制试验测定重组人源化兔抗VEGF单抗的生物学活性;SDS-PAGE和SEC-HPLC测定纯度;胰酶酶切,HPLC测定其肽图;实时定量PCR检测CHO宿主DNA残留量;采用ELISA法分别测定VEGF结合力、残留ProA含量和残留菌体蛋白含量;水平等电聚焦电泳法测定等电点;其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行。结果:用建立的方法对重组人源化兔抗VEGF单抗的原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》、《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。     

重组人白介素12质量标准与检测方法研究

目的：建立白介素12的质量标准与检测方法，用于该产品的质量控制。方法：采用诱导PBMC生成IFN-γ的方法测定生物学活性；用胰酶酶解分析肽图；用分子排阻HPLC、离子交换HPLC和SDS-PAGE法分析蛋白纯度；免疫印迹及N端氨基酸序列测定分析、鉴定产品特性。按照《中国药典》三部2005年版的有关规定进行了其他项目检查。结果：用建立的方法对重组人白介素12成品及原液进行检定，结果各项指标均符合《中国药典》的要求。结论：建立了重组人白介素12的质量标准，并可有效地控制制品的质量。     

肿瘤治疗性多肽疫苗——重组人纽表位肽12质控方法的研究

目的建立重组人纽表位肽12质控方法和检定规程。方法采用FVB/N转neu基因小鼠,以ELISA法检测给药后小鼠的抗体阳转百分率评价其生物学活性,用胃蛋白酶酶切分析肽图,用SEC-HPLC法测定抗原含量。结果与结论建立了重组人纽表位肽12的生物学活性、肽图分析、抗原含量测定等质控方法及检定规程,并已用于重组人纽表位肽12产品的检定。     

FGF21-Fc融合蛋白体外活性试验的建立和优化

成纤维细胞生长因子-21(FGF21)-Fc融合蛋白体外活性试验的建立分为蛋白水平的结合活性试验和细胞水平的生物学活性试验2种。该研究建立了均相时间分辨荧光(HTRF)法用于检测FGF21-Fc融合蛋白与β-Klotho配体蛋白的结合活性;并自主构建了报告基因细胞,当FGF21-Fc融合蛋白与β-Klotho的结合,激活其FGF受体和诱导胞内信号转导所必需的共同受体,可通过检测萤光素酶活性,间接定量测定生物学活性。在建立过程中,分别对结合活性试验中样品和配体的浓度、供体和配体的稀释比例以及孵育时间进行优化,并进行了方法学验证,证明该HTRF技术具有良好的重复性和特异性,可用于FGF21-Fc融合蛋白和β-Klotho的结合活性检测。随后,对生物学活性试验中胎牛血清的浓度、报告基因细胞的密度、试验板的类型以及细胞种板形式进行优化,并进行了方法学验证,证明该报告基因法具有良好的重复性和特异性,可用于FGF21-Fc融合蛋白的生物学活性检测。本研究建立了FGF21-Fc融合蛋白的质控方法,为有同样活性检测难点的药物提供了一种分析技术参考,填补了国内外空白。     

PEG化重组人促红素质量控制方法和标准研究

目的:建立PEG化重组人促红素质量控制方法和质量标准。方法:用正常小鼠网织红细胞计数法测定体内生物学活性,使用iCE毛细管等电聚焦电泳分析异构体,用离子色谱确定N-糖链指纹图谱,反相HPLC进行Lys-C蛋白内切酶酶切的肽图分析以及纯度测定。其余检测项目按2010年版中国药典三部方法进行。结果:建立的方法经过比较和对PEG化重组人促红素的检测,结果稳定可靠,重复性好,各指标符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和2010年版中国药典三部的要求。结论:本研究建立了一套完善的PEG化重组人促红素质量控制体系。     

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白联合沙利度胺、柳氮磺胺吡啶治疗强直性脊柱炎髋关节病变的临床研究

目的观察重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白联合沙利度胺、柳氮磺胺吡啶治疗强直性脊柱炎髋关节病变的临床疗效和安全性。方法应用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白治疗36例AS髋关节病变的患者,50mg/次,每周1次,疗程12周,同时加用DMARDS(沙利度胺100mg,1次/晚,柳氮磺胺吡啶1.0g/次,2次/日),12周后停用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体—抗体融合蛋白,继续DMARDS至36周。观察治疗前后患者的症状、体征、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、AS疾病活动指数(BASDAI)、髋部骨髓水肿MRI等指标及不良反应。结果重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白联合沙利度胺、柳氮磺胺吡啶治疗强直性脊柱炎36周后可以显著改善BASDAI,治疗前BASDAI平均评分(6.13±1.05)分,治疗36周后BASDAI平均评分(3.14±0.36)分,差异具有统计学意义(P0.05),晨僵、夜间痛、ESR、CRP等疗效指标治疗前后差异具有统计学意义(P0.05)。MRI显示治疗后髋关节骨髓水肿显著改善。另外,本研究发现在停用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白、继续使用沙利度胺、柳氮磺胺吡啶24周后(36周时),患者的临床症状、体征、炎性指标(ESR、CRP)、BASDAI和骨髓水肿等较重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白治疗12周时差异无统计学意义(P0.05)。最常见的不良反应主要是注射部位反应和轻度肝功能损害。结论重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白联合沙利度胺、柳氮磺胺吡啶治疗强直性脊柱炎髋关节病变疗效显著,患者耐受性好。     

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的质量标准和质控方法研究

目的:建立聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的质量标准和质控方法.方法:采用荧光分光光度法测定PEG-rhG-CSF的PEG化率,RP-HPLC方法蒸发光检测器检测游离PEG残留量,胰蛋白酶裂解进行肽图分析,其它指标按照<中国生物制品规程>进行.结果:建立了聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的质控方法和质量标准.结论:建立的方法和质量标准已用于聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子产品的检定.     

重组人脑利钠肽质量标准与检定方法研究

目的：建立重组人脑利钠肽（rhBNP)质量标准与检定方法，用于该产品的质量控制。方法：用离体动脉条测定法测定rhBNP的生物活性；用反相HPLC和SDS-PAGE分析蛋白纯度；用肽图，免疫印迹及N-端氨基酸序列测定分析。鉴定产品特性；用固相斑点杂交法测定残余外源DNA含量；用ELISA测定残余工程菌蛋白含量；用《中国生物制品规程》的方法对rhBNP成品进行无菌，热原，细菌内毒素和异常毒性等常规试验等。结果：用建立的方法对连续3批rhBNP原液和成品进行检定，结果各项指标均符合《重组DNA制品质量控制要点》和《中国生物制品规程》的要求。结论：建立的rhBNP质量标准与检定方法，具有保证产品安全，有效，质量可控等特点，可用于该产品的常规检定。     

注射用人组织尿激酶型纤溶酶原激活剂质量标准研究

目的:建立注射用人组织尿激酶型纤溶酶原激活剂(HTUPA)的质控方法和质量标准。方法:以纤维蛋白平板法测定HTUPA 的生物学活性,还原型 SDS-PAGE 确定相对分子质量,SDS-PAGE 和反相高效液相色谱测定纯度,毛细管电泳法测定等电点,用胰蛋白酶酶切后分析肽图,其余检测项目按2005年版中国药典三部规定进行。结果:用建立的方法对原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组 DNA 制品质量控制技术指导原则》和2005年版中国药典三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于注射用人组织尿激酶型纤溶酶原激活剂产品的常规检定。     

首批科博肽国家对照品的研制

目的:建立科博肽含量测定用首批国家对照品。方法:以眼镜蛇毒抗血清试验及紫外分光光度法进行鉴别,TOF-MS测定相对分子质量,反相高效液相 C_8柱、C_(18)柱及毛细管电泳分别测定纯度,凯氏定氮及 Lowry 法测定蛋白含量。结果:用建立的方法对科博肽的原料进行测定,符合国家药品标准的要求。结论:建立的质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于科博肽产品的常规检定。     

Anti-inflammatory activity of aucubin by inhibition of tumor necrosis factor-alpha production in RAW 264.7 cells

To elucidate a possible mechanism for the anti-inflammatory action of iridoid glycosides, the effects of both aucubin (AU) and its hydrolyzed product (H-AU) by beta-glucosidase treatment were studied on the production of TNF-alpha in RAW 264.7 cells. H-AU suppressed the production of both mRNA for TNF-alpha and subsequent TNF-alpha protein in the culture, but AU did not. The production of TNF-alpha protein was inhibited in a dose-dependent manner with an IC (50) of 9.2 microM. In addition, treatment with H-AU blocked both the I-kappa B alpha degradation and the translocation of NF-kappa B from the cytosol fraction to the nuclear fraction (55 % inhibition) in the culture. However, treatment with H-AU did not affect the intracellular level of cAMP formed by forskolin treatment in human monocytes U937 culture, implying that there is no influence on the cAMP level in other cell systems. The present study indicates a possible justification for those medicinal plants containing iridoid glycoside that have been used for the treatment of inflammation.