人参皂苷Rg1可能通过丝裂素活化蛋白激酶途径抑制细胞凋亡

目的探讨人参皂苷Rg1对MPP+诱导细胞凋亡保护作用的可能信号传导途径.方法用吖啶橙-溴化乙锭染色观察SHSY5Y细胞凋亡率,流式细胞仪检测细胞内活性氧ROS水平,Western Blotting法检测JNK(c-jun NH2-terminal kinase)激酶活性,免疫细胞化学染色法检测裂解的Caspase-3阳性细胞的表达率.结果经10 μmol*L-1 Rg1或2.5 mmol*L-1 N-乙酰半胱氨酸预处理后,MPP+诱导的SHSY5Y细胞凋亡受到明显抑制,同时细胞内ROS下降,JNK激酶的活性减弱,裂解的Caspase-3阳性细胞表达率下降.结论 Rg1可抑制MPP+诱导的SHSY5Y细胞凋亡,其作用机制可能是通过清除ROS、减弱JNK激酶的活性,从而减少Caspase-3的激活.     

抗氧化作用可能是人参皂甙Rg1抗细胞凋亡的机制

目的 :探讨人参皂甙Rg1对MPP+诱导SHSY5Y细胞凋亡的保护作用及其可能的机制。方法 :用吖啶橙溴化乙锭染色观察SHSY5Y细胞凋亡率 ,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位及细胞内活性氧 (ROS)水平 ,WesternBlot法检测bcl 2、bax蛋白表达水平。结果 :经 10 μmol·L- 1Rg1预处理后 ,MPP+诱导的SHSY5Y细胞凋亡受到明显的抑制 ,虽然线粒体跨膜电位无明显改变 ,但细胞内ROS下降 ,而bcl 2蛋白表达水平增加 ,bax蛋白表达水平减少。结论 :Rg1可抑制MPP+诱导的SHSY5Y细胞凋亡 ,其作用机制可能是通过清除ROS、调节bcl 2、bax蛋白表达水平起作用。     

丝裂素活化的蛋白激酶反义寡核苷酸抑制表皮生长因子诱导体外 …

目的：探讨丝裂素活化的蛋白激酶（ＮＡＰＫ）反义寡核苷（ＯＤＮ）对表皮生长因子（ＥＧＦ）诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞增生的抑制作用。方法：用脂质体将Ｐ４２－和Ｐ４４－ＭＡＰＫ ＯＤＮ０．２μｍｏｌˉＬ＾－１转染入大鼠血管平滑肌细胞，设正义及随机ＯＤＮ为对照，用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法结合Ｐ－８１滤纸法以髓磷脂碱性蛋白为底物测定ＭＡＰＫ活性。［＾３Ｈ］胸腺嘧啶核苷酸掺入测定平滑肌细胞ＤＮＡ合成。结果     

人参皂苷Rg1对PC12细胞凋亡保护作用的可能机制

目的探讨人参皂苷Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法用流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白表达率,RT-PCR分析bcl-2和baxmRNA表达水平,荧光分光光度计法检测CPP32活力.结果经10μmol·L^-1Rg1预处理后,由多巴胺诱导的PC12细胞凋亡受到明显的抑制.同时,Bcl-2蛋白和mRNA表达增加,Bax蛋白和mRNA表达减少,CPP32活力明显下降.结论Rg1可抑制多巴胺诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制可能通过调节Bcl-2与Bax蛋白的比值和抑制CPP32的激活而起作用.     

丝裂素活化的蛋白激酶反义寡脱氧核苷酸防治血管内膜增殖

目的：探讨Ca^2 -钙调蛋白依赖性蛋白激酶（丝裂素活化的蛋白激酶）（CCDPK）在生长因子诱导体外培养大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用及反义CCDPK寡脱氧核苷酸（ODN）对球囊损伤后大白鼠血管内膜增生的抑制作用。方法：利用脂质体转染17－mer CCDPK反义ODN进入培养的血管平滑肌细胞以抑制CCDPK活性,设正义及随机ODN作对照。用蛋白质印迹法测定CCDPK表达。[^3H]胸腺嘧啶核苷酸掺入测定平滑肌细胞DNA合成。用2F球囊导管造成大白鼠颈动脉再狭窄模型,利用多聚胶F127－ODN系统由血管外膜部位给药。于损伤后2周取样,固定及HE染色观察内膜增生情况。FITC标记的ODN观察体内外给药方法的分布及吸收情况。结果：CCDPK反义ODN能明显抑制PDGF及ET诱导的CCDPK蛋白表达及[^3H]胸腺嘧啶核苷酸掺入。在大鼠颈动脉再狭窄模型,能明显抑制血管内膜增生。结论：CCDPK介导了PDGF及ET诱导的血管平滑肌细胞增殖。针对p42-和p44-CCDPK起始部位设计的17－mer反义ODN能有效抑制生长因子诱导的血管平滑肌细胞的增殖及球囊损伤大鼠血管内膜增生。     

人参皂苷Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的:研究人参皂苷Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响。方法:采用大鼠右侧大脑中动脉阻断(middle cerebral artery occulusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,缺血前给予人参皂苷Rg1 25、501、00 mg.kg-1灌胃,7 d。末次给药1h后制备MCAO模型,缺血2 h,再灌注22 h后,分别用Longa’s法T、TC染色法评价大鼠的神经功能状态及脑梗死面积;用TUNEL法测定缺血再灌后神经细胞凋亡的程度;用Western blot法测定大脑缺血侧脑组织中与凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2的蛋白表达。结果:人参皂苷Rg1(50、100 mg.kg-1)可明显减少MCAO再灌注后脑梗死面积,改善神经功能症状,与模型组比较具有显着性差异(P<0.05或P<0.01);脑缺血2 h再灌22 h后,模型组大鼠缺血侧细胞凋亡程度、Caspase-3蛋白表达明显增加,同时Bcl-2的蛋白表达降低。给予人参皂苷Rg1(50,100mg.kg-1)后,缺血侧细胞凋亡程度、Caspase-3蛋白表达降低,而Bcl-2的蛋白表达增加,与模型组相比具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡具有明显的保护作用,其机理可能与人参皂苷Rg1影响Caspase-3、Bcl-2的表达有关。     

人参皂苷Rg1抗黑质神经元凋亡的可能机制

目的研究人参皂苷Rg1抗1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的小鼠黑质神经元凋亡的作用及其机制。方法MPTP制备的帕金森病(Parkinson′s disease,PD)小鼠模型,经人参皂苷Rg1预处理后,用尼氏(Nissl)染色和TH组化染色观察黑质神经元的损害情况,借助TUNEL染色了解黑质神经元的凋亡情况,并用免疫组织化学方法检测黑质神经元caspase-3的活化以及iNOS和nNOS的表达情况。结果人参皂苷Rg1预处理能减少PD鼠模型黑质致密带Nissl阳性神经元和TH阳性神经元的脱失现象,降低黑质神经元TUNEL染色的阳性率。结论人参皂苷Rg1预处理对MPTP诱导的小鼠黑质神经元凋亡有明显的保护作用。     

人参皂苷 Rg5通过抑制蛋白激酶 B信号通路调控肝癌 HepG2细胞生物学行为

目的 探讨人参皂苷Rg5对肝癌HepG2细胞生物学行为和蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测不同浓度人参皂苷Rg5对HepG2细胞24、48和72 h下的细胞存活率,并计算出半数抑制浓度(IC50)以筛选出合适的作用浓度.Transwell小室实验检测人参皂苷Rg5对细胞侵袭和迁移的影响,流式细胞仪检测人参皂苷Rg5对细胞周期和凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)检测人参皂苷Rg5对细胞中AKT、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达的影响.结果 与对照(0μmol/L)组相比,40、80和160μmol/L人参皂苷Rg524 h下细胞存活率降低(P<0.05),20、40、80和160μmol/L人参皂苷Rg548 h下细胞存活率明显降低(P<0.05),不同浓度的人参皂苷72 h下均可使细胞存活率降低(P<0.05).人参皂苷Rg5作用HepG2细胞24、48和72 h后的IC50值分别为138.60、91.12和46.92μmol/L.与对照(0μmol/L)组相比,40、80和160μmol/L处理组中侵袭细胞数[(57.38±3.65)个,(35.26±2.15)个,(32.48±2.23)个比(82.55±6.02)个]、迁移细胞数[(94.25±6.12)个,(51.57±3.15)个,(48.73±3.26)个比(137.62±8.83)个]、细胞在S期的百分比[(30.06±1.75)％,(23.32±1.51)％,(21.95±1.13)％比(36.85±2.26)％]和p-AKT[(0.61±0.04),(0.32±0.03),(0.28±0.03)比(0.79±0.06)]、cyclin D1、MMP-9、Bcl-2蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05),而细胞凋亡率[(12.58±2.12)％,(28.35±2.26)％,(25.27±3.23)％比(5.06±1.25)％]、细胞在G0/G1期的百分比[(52.85±3.42)％,(64.54±4.03)％,(67.02±4.15)％比(44.16±3.08)％]均明显升高(P<0.05).结论 人参皂苷Rg5可抑制肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和迁移并诱导细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制可能与抑制AKT信号通路活化有关.     

人参皂苷Rg3通过调控ROS途径诱导人肺癌细胞A549凋亡

摘 要 目的：探究人参皂苷Rg3（GS Rg3）对人肺癌细胞A549凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法: 将人肺癌细胞A549分为5组,分别为对照组、N L酰半胱氨酸（NAc）组、GS Rg3低剂量组、GS Rg3中剂量组、NAc+GS Rg3高剂量组,采用MTT实验和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡,采用实时荧光定量PCR（qRT PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）检测A549细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase 3）、caspase 9、BAX和B细胞淋巴瘤基因 2（BCL 2）表达情况。结果: NAc组ROS水平、细胞凋亡率及细胞中caspase 3、caspase 9、BAX mRNA相对表达量和蛋白表达情况均低于对照组（P＜0.05）,GS Rg3低剂量组、中剂量组和NAc+GS Rg3高剂量组ROS水平、细胞凋亡率及caspase 3、caspase 9、BAX mRNA相对表达量和蛋白表达情况高于对照组和NAc组（P＜0.05）;NAc组细胞增殖率及细胞中BCL 2mRNA相对表达量和蛋白表达情况高于对照组（P＜0.05）,GS Rg3低剂量组、中剂量组和NAc+GS Rg3高剂量组细胞增殖率及BCL 2mRNA和蛋白表达低于对照组和NAc组（P＜0.05）。结论: GS Rg3能够调控人肺癌细胞A549中ROS途径,进而诱导细胞凋亡,为肺癌的临床治疗提供一定的理论依据。     

人参皂苷Rg3对人胃癌细胞Pim-3及Bad凋亡蛋白表达的影响

目的研究人参皂苷Rg3对人胃癌细胞株MKN28中Pim-3及磷酸化Bad蛋白pBad（Ser112）,pBad（Ser136）表达的影响。方法用浓度为0,10,20,40和80μmol/L的人参皂苷Rg3处理MKN28细胞24h后。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测人参皂苷Rg3对MKN28细胞增殖的抑制作用,倒置显微镜和流式细胞术观察人参皂苷Rg3对MKN28细胞凋亡的诱导作用,Westernblot方法检测经不同浓度人参皂苷Rg3处理后MKN28细胞中Pim-3,pBad（Ser112）和pBad（Ser136）的表达情况。结果10,20,40和80μmo1/L的人参皂苷Rg3对MKN28细胞增殖的抑制率分别为18.70,34.06,54.49,69.28%。10～80μmol/L的人参皂苷Rg3处理细胞呈现明显的凋亡形态学改变,80μmol/L人参皂苷Rg3处理MKN28细胞24h后,凋亡细胞占（12.23±2.1）%,处理组比正常对照组（3.28±1.7）%凋亡明显增加,差异有统计意义（P〈0.01）。Bad总蛋白表达没有明显影响。pim-3和pBad（Ser112）的表达均随人参皂苷Rg3浓度的增加而逐渐减弱。pBad（Ser136）不表达。结论人参皂苷Rg3的抗癌活性与其调节Pim-3以及磷酸化Bad蛋白表达有关;Pim-3可磷酸化Bad抑制胃癌细胞的凋亡。     

毛蕊花苷对MPP~+诱导的SHSY5Y细胞凋亡的保护作用

目的观察肉苁蓉提取物毛蕊花苷对MPP+诱导的SHSY5Y细胞损伤的影响。方法用MTT法检测细胞存活率,以流式细胞仪检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,以及细胞凋亡的发生,并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性,蛋白印迹测定Bcl-2的表达水平。结果200μmol·L-1MPP+处理细胞24h降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达38.9%;细胞内活性氧水平及caspase-3的活性升高;而线粒体膜电位却明显降低。而预先给予0.1、1或者10mg·L-1浓度的毛蕊花苷处理细胞12h,可提高细胞存活率;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到29.5%,15.3%和8.6%,而且细胞内活性氧的水平明显降低,并可逐渐恢复线粒体的高能量状态;caspase-3的活性不断降低,Bcl-2的表达水平增高,并呈现一定的剂量依赖性。结论毛蕊花苷能抑制MPP+诱导的SHSY5Y细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平,维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关。     

JNK信号传导通路在赭曲毒素A体外诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的探讨赭曲毒素A(OA)诱导人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的作用机制。方法体外培养HKC,随机分为空白对照组、溶剂(0.04%乙醇)对照组、OA 1μmol·L-1处理组及c-Jun氨基端激酶(JNK)阻断剂SP600125 0.5μmol·L-1预处理+OA组。细胞处理24h后,分别采用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,免疫细胞化学染色和Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶(caspase)3蛋白的表达以及JNK的磷酸化水平(p-JNK)。结果OA组细胞凋亡率明显高于溶剂对照组〔(4.24±0.17)%vs(1.06±0.14)%〕,SP600125预处理+OA组HKC凋亡率〔(2.44±0.38)%〕明显低于OA组。OA组caspase 3蛋白的表达和p-JNK水平明显升高,SP600125预处理+OA组caspase 3蛋白的表达和p-JNK水平较OA组明显降低。结论OA可能通过激活JNK,上调caspase 3蛋白的表达而诱导HKC凋亡。     

人参水提物对MPP^＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的研究人参水提物（WEG）对四氢吡啶离子（MPP^＋）诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP＋致SH-SY5Y细胞凋亡的模型,同时给予WEG干预。应用MTT比色法检测细胞活力;Hoechst33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果0.5mmol·L^-1MPP^＋作用于SH-SY5Y细胞60h,MTT值降低到（51.97%±2.46%）（P〈0.01）,Hoechst 33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,凋亡率增加到（40.52%±1.68%）（P〈0.01）,而WEG则能明显改善SH-SY5Y细胞的凋亡特性,显著升高其MTT值,降低凋亡率（P〈0.05）。结论人参水提物对MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的保护作用。     

人参蛋白协同H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤

目的:探讨人参蛋白(GP)协同H₂O₂诱导人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)氧化应激损伤的作用,并筛选二者的最佳联合浓度。方法:首先采用不同浓度H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤,然后采用不同浓度GP联合200 μmol·L^-1H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤;采用倒置荧光显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活,Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡。结果:SH-SY5Y细胞经GP-H₂O₂作用后,细胞数量减少,轴突缩短或消失,胞体变圆、缩小,大小不等;细胞存活率降低;Heochst 33342染色呈现高蓝光;GP 60 mg·L^-1+H₂O₂ 200 μmol·L^-1为联合诱导氧化应激损伤的最佳浓度。结论:GP有协同H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的作用,抑制细胞增殖、促进细胞凋亡是其可能的作用机制。     

Silica nanoparticles induced intrinsic apoptosis in neuroblastoma SH-SY5Y cells via CytC/Apaf-1 pathway

The present study was to investigate effects of Silica nanoparticles (SiNPs) on nervous system and explore potential mechanisms in human neuroblastoma cells (SH-SY5Y). Cytotoxicity was detected by cell viability and Lactate dehydrogenase (LDH) release. Flow cytometry analysis was applied to assess mitochondrial membrane potential (MMP) loss, intracellular Ca²⁺ and apoptosis. To clarify the mechanism of SiNPs-induced apoptosis, intrinsic apoptosis-related proteins were detected. Our results showed that SiNPs caused cytotoxicity, cell membrane damage and Ca²⁺ increase in a dose-dependent manner in SH-SY5Y cells. Both the mitochondrial membrane potential (MMP) loss and potential mitochondria damage resulted in Cyt C release to the cytoplasm. The elevated Cyt C and Apaf1 further triggered intrinsic apoptosis via executive molecular caspase-9 and caspase-3. The present study confirmed that SiNPs induced intrinsic apoptosis in neuroblastoma SH-SY5Y cells via CytC/Apaf-1 pathway and provided a better understanding of the potential toxicity induced by SiNPs on human neurocyte.     

Rotenone-induced apoptosis is mediated by p38 and JNK MAP kinases in human dopaminergic SH-SY5Y cells.

Rotenone is a naturally derived pesticide that has recently been shown to evoke the behavioral and pathological symptoms of Parkinson's disease in animal models. Though rotenone is known to be an inhibitor of the mitochondrial complex I electron transport chain, little is known about downstream pathways leading to its toxicity. We used human dopaminergic SH-SY5Y cells to study mechanisms of rotenone-induced neuronal cell death. Our results suggest that rotenone, at nanomolar concentrations, induces apoptosis in SH-SY5Y cells that is caspase-dependent. Furthermore, rotenone treatment induces phosphorylation of c-Jun, the c-Jun N-terminal protein kinase (JNK), and the p38 mitogen activated protein (MAP) kinase, indicative of activation of the p38 and JNK pathways. Importantly, expression of dominant interfering constructs of the JNK or p38 pathways attenuated rotenone-induced apoptosis. These data suggest that rotenone induces apoptosis in the dopaminergic SH-SY5Y cells that requires activation of the JNK and p38 MAP kinases and caspases. These studies provide insights concerning the molecular mechanisms of rotenone-induced apoptosis in neuronal cells.     

红花甙对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞凋亡保护作用的实验研究

目的研究红花甙(carthamin)对过氧化氢(H2O2)诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞(SH-SY5Y cells)凋亡的影响,并探讨其机制。方法实验分为空白对照组、H2O2损伤组及红花甙高、中、低剂量组。用H2O2作用于SH-SY5Y细胞,使其发生凋亡。MTT法检测SH-SY5Y细胞活性,比色法测丙二醛(MDA)的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与损伤组比较,随着红花甙剂量的增加,SH-SY5Y细胞存活率提高(P<0.01),MDA生成量减少(P<0.01),凋亡率下降(P<0.05)。结论红花甙对H2O2诱导SH-SY5Y细胞凋亡有保护作用,与红花甙能抗氧化、降低细胞凋亡有关。     

黄芩苷通过上调SIRT1保护SH-SY_5Y氧化应激的损伤

观察黄芩苷(baicalin,BL)对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用,并初步探讨SIRT1是否是其发挥作用的靶点及其可能机制。培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入黄芩苷(25、50及100μmol·L-1)预孵育12 h,加入H2O2(150μmol·L-1)作用24 h诱导产生氧化损伤,应用MTT比色法检测细胞存活率,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、一氧化氮(NO)含量;并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及应用免疫荧光组化法检测Caspase-3的活性、RT-PCR检测SIRT1水平。结果表明,与H2O2模型组比较,黄芩苷(50和100μmol·L-1)组的细胞存活率增高(P<0.05、P<0.01),而LDH、NO的释放量及细胞凋亡数(P<0.05、P<0.01)、Caspase-3的表达量均减少;SIRT1 mRNA表达明显(P<0.05、P<0.01)。黄芩苷对H2O2损伤的SY5Y细胞具有保护作用,可减轻神经细胞的损伤、抑制细胞的凋亡,其作用机制可能是通过上调SIRT1水平而抑制Caspase-3表达实现的。