抗癌抗生素力达霉素诱导人肝癌BEL-7402细胞死亡的特征

目的　研究抗癌抗生素力达霉素(LDM)诱导人肝癌BEL-7402细胞死亡的特征。方法用荧光染料Hoechst 33342和PI联染;琼脂糖凝胶电泳检测;流式细胞术检测等。结果　LDM1μmol.L^-1处理该细胞后6h,可观察到一种有别于典型凋亡的染色质凝集方式：核膜一直保持完整,细胞仍贴壁,无凋亡小体形成;琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带。流式细胞术检测到的G1亚峰,仅在LDM处理BEL-7402细胞后24h出现。LDM处理BEL-7402细胞后6h,caspase-3,6的活性分别增高5,4倍。染色质开始凝集的时间比caspase-6活性达到高峰的时间早。结论　力达霉素诱导人肝癌BEL-7402细胞死亡的特征有别于典型的凋亡,此结果可能有助于解释其极高活性地杀死肿瘤细胞的分子机制。     

BMH-21诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的探讨核仁应激对人肝癌BEL-7402细胞的凋亡诱导作用。方法以人肝癌BEL-7402细胞为研究对象,依据给药剂量实验分为4组:对照组(0μmol/L),1、2和4μmol/L组。MTT检测BEL-7402细胞生存率,共聚焦显微镜观察核仁应激标志蛋白变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白印迹检测凋亡相关蛋白表达。结果 MTT结果表明BMH-21对BEL-7402细胞生长抑制作用呈剂量依赖性,共聚焦显微镜观察发现BMH-21诱导BEL-7402细胞核仁应激标志蛋白发生变化,流式细胞仪检测结果表明BMH-21以剂量依赖性的方式诱导细胞凋亡,蛋白印迹结果显示凋亡相关蛋白表达明显增加(P0.05)。结论 BMH-21诱导人肝癌BEL-7402细胞核仁应激,导致细胞凋亡的发生。     

酒精诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡的作用研究

目的 体外观察不同浓度的酒精对肝癌细胞BEL-7402诱导凋亡的作用,为寻求肝癌的治疗提供新思路.方法 不同浓度的酒精与肝癌细胞BEL-7402通过体外培养,MTT法检测细胞增殖的变化;Hoechst 33258/PI 荧光双染色观察细胞形态学变化;蛋白质免疫印迹(Western blotting)半定量分析Caspase-3和p53和Bax的表达变化.结果 药物浓度在100～300 mmol/L的范围显著抑制肝癌细胞增殖,且抑制率随浓度和时间呈依耐性,Caspase-3,Bax和p53的蛋白表达量明显增加.药物浓度在100～300 mmol/L作用48 h,肝癌细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05).结论 不同浓度的酒精对肝癌细胞BEL-7402有诱导凋亡的作用,其抑制作用呈浓度和时间依赖性.     

力达霉素对人肝癌BEL—7402细胞基因组DNA的影响

目的：深入研究力达霉素对人肝癌BEL－7402细胞基因组DNA的影响。方法：琼脂糖凝胶电泳检测DNA泳带;Suthern杂交检测对基因的损伤;中性凝胶电泳检测DNA断裂修复;超螺旋GEM质粒检测断裂DNA位点。结果：力达霉素1μmol/L处理BEL-7402细胞,15,30,60min,可检测到明显的DNA梯带。低浓度的力达霉素对活跃基因N－ras的外显子和内含子均有明显的损伤作用,但对沉默IL－2基因没有影响。力达霉素断裂DNA后,DNA损伤难以修复。力达霉素断裂GEM质粒DNA的位点是－OH HO－。结论 ：力达霉素明显地损伤人肝癌BEL－7402细胞的基因组DNA。该结果有助于解释其高活性地杀伤肿瘤细胞的分子机制。     

力达霉素经线粒体依赖通路介导细胞凋亡

力达霉素(lidamycin，LDM)是具有我国自主知识产权的烯二炔类抗生素，具有较强的抗肿瘤活性，其抗肿瘤机制有待深入阐明。本研究主要利用人肝癌BEL-7402和乳腺癌MCF-7细胞研究了力达霉素对线粒体凋亡通路相关因子的影响。通过MTT法检测不同剂量力达霉素对肿瘤细胞增殖毒性；蛋白印迹技术检测线粒体和细胞质细胞色素c、总Bax，Bcl-2及p53表达；RT-PCR检测p53和bax mRNA表达等。结果发现，LDM能迅速激活肿瘤细胞线粒体凋亡通路，在2 h内就引起线粒体中细胞色素c释放至细胞质中。同时Bcl-2家族成员中促凋亡成员Bax持续增加，而抗凋亡成员Bcl-2先增加后减少。p53蛋白在6 h显著增加。Bax蛋白表达升高与其mRNA转录水平升高有关，p53蛋白表达升高与转录后水平有关。 Caspase抑制剂可以部分抑制LDM的增殖毒性。因此LDM可以通过激活细胞色素c启动的线粒体凋亡通路发挥抗肿瘤作用。     

正常人肝细胞和肝癌细胞对力达霉素诱导的有丝分裂性细胞死亡的差异

[摘要]目的：探讨力达霉素（lidamycin, LDM）诱导人肝癌BEL-7402和正常人肝L-02细胞出现的有丝分裂性细胞死亡的差异。方法：采用MTT法观察LDM对BEL-7402和L-02细胞生长曲线的影响;使用Giemsa染色和流式细胞术观察有丝分裂性细胞死亡特征;用Western blot法检测蛋白表达变化。结果：LDM抑制BEL-7402和L-02细胞的生长,二者均表现出有丝分裂性细胞死亡的特征,即细胞体积增大、G2/M期阻滞、出现多核化,但BEL-7402细胞对LDM更敏感。在LDM处理的BEL-7402和L-02细胞中,与凋亡相关的Bax和Smac的蛋白表达水平没有增加,caspase-3和caspase-9未被活化,但L-02细胞的Akt通路被激活。结论：人正常L-02细胞对LDM引起的有丝分裂性细胞死亡明显低于人肝癌BEL-7402细胞,对LDM的反应敏感性存在差异的原因可能与Akt信号通路有关。     

力达霉素抗肝癌作用的实验研究

目的观察力达霉素(LDM)在体外、体内对肝癌的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法测定力达霉素和丝裂霉素C对人肝癌BEL-7402细胞及小鼠肝癌22细胞的增生抑制作用。以小鼠移植性肝癌22模型观察不同剂量力达霉素的治疗效果。结果力达霉素和丝裂霉素对人肝癌BEL-7402细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.0030±0.0006)nmol/L和(150±27)nmol/L。力达霉素对小鼠肝癌22细胞的IC50为0.025nmol/L。体内试验:力达霉素静脉给药1次及延迟静脉给药3次对小鼠移植性肝癌22细胞的生长均有显著抑制作用。当通过静脉给予1次力达霉素剂量为0.025、0.05和0.1mg/kg时对肝癌22细胞抑瘤率分别为62%、72%和85%。结论力达霉素在体外对肝癌细胞增生有强烈的抑制作用,动物试验有显著疗效     

顺铂联合姜黄素诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的：研究应用顺铂联合姜黄素对诱导胃癌细胞HGC27凋亡的影响及机制。方法：用CCK8法检测单独或联合使用不同剂量顺铂或/和姜黄素对胃癌细胞HGC27增殖的影响;用Hochest33258染色检测联合应用顺铂和姜黄素诱导胃癌细胞HGC27凋亡的发生率。用Western blot检测细胞凋亡相关分子PARP1蛋白剪切体和DNA损伤蛋白p-γH2AX的表达变化。结果：单用顺铂可以呈剂量依赖性地促进HGC27细胞凋亡。5μmol·L-1姜黄素对HGC27细胞增殖无明显作用,10μmol·L-1姜黄素反而轻微促进HGC27细胞增殖。20、40、80μmol·L-1姜黄素对HGC27细胞的增殖抑制率分别为10.97%、15.15%、32.93%。分析联合用药组：5μmol·L-1姜黄素联合顺铂组反而促进HGC27细胞生长;10μmol·L-1姜黄素联合不同剂量顺铂和单用顺铂组比较,组间抑制率没有统计学差异（P>0.05）。20μmol·L-1姜黄素联合4、6μmol·L-1顺铂有明显的促进细胞的凋亡作用,抑制率分别为70.68%、87.30%。 Hochest33258染色结果显示,联合用药组细胞凋亡小体和坏死细胞明显增多。 Western blot结果显示,在联合用药组HGC27细胞PARP1剪切体蛋白和p-γH2AX蛋白表达明显增加。结论：顺铂联合姜黄素可以促进胃癌细胞HGC27的凋亡,机制是姜黄素可以加重顺铂引起的细胞DNA双链损伤。     

甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸对人BEL-7402细胞毒性作用的机制研究

目的探讨甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸对人BEL-7402细胞的毒性作用机制。方法采用色-质联用仪对甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸进行分析;采用流式细胞仪、MTT法和扫描电镜法检测其毒性作用。结果分别给予BEL-7402细胞0.2、0.8、3.2mg.L-1甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸培养48h,测定结果显示,甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸对人BEL-7402细胞增殖抑制率分别为34.0%、44.8%和70.7%,半数抑制浓度(IC50)为0.812mg.L-1;凋亡率分别为18.6%、22.7%和24.2%;细胞膜微绒毛断裂,细胞破裂。结论甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸对人BEL-7402细胞具有毒性作用,其机制可能与破坏细胞膜结构,抑制细胞分裂,损伤线粒体结构有关。     

依托泊苷联合顺铂对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨依托泊苷联合顺铂对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响,为骨肉瘤的治疗找寻新的化疗方法。方法采用MTT法检测药物对骨肉瘤细胞增殖的影响。倒置相差显微镜来观察用药前后细胞形态改变,用流式细胞仪检测药物分别及联合作用骨肉瘤细胞后细胞凋亡情况。结果依托泊苷联合顺铂能明显抑制骨肉瘤细胞的生长,与两药单独使用相比较,联合用药抑制骨肉瘤细胞增殖的作用明显增强。依托泊苷联合顺铂作用于骨肉瘤细胞后凋亡率增高。倒置相差显微镜可见两药联用时大量骨肉瘤细胞凋亡脱落。结论依托泊苷联合顺铂能有效抑制骨肉瘤细胞增殖,且促进骨肉瘤细胞凋亡,具有协同抗肿瘤作用。     

格尔德霉素与抗肿瘤药物的协同作用

目的　研究格尔德霉素(Geldanamycin ,GDM)对人肝癌BEL-7402细胞周期的影响及顺铂和丝裂霉素C等药物联用GDM后的体外体内抗肿瘤作用。方法　用MTT法检测药物对肝癌BEL-7402细胞的生长抑制作用;流式细胞术分析细胞周期;小鼠移植性肝癌22模型研究药物的体内抗肿瘤作用。结果　MTT法测得GDM对BEL7402细胞的生长抑制作用IC₅₀为0.28μmol·L^-1。GDM 0.1,1.0和10μmol·L^-1处理BEL-7402细胞,引起S期细胞比例下降和G2/M期的明显阻断。在较低浓度,GDM 0.1μmol·L^-1和0.2 μmol·L^-1均增强一系列化疗药物包括顺铂、丝裂霉素C、阿霉素和阿糖胞苷对BEL-7402细胞的细胞毒作用。小鼠移植肝癌22模型中,GDM 0.38mg·kg-1增强顺铂和丝裂霉素C的抗肿瘤作用。协同作用十分显著,CDI<0.7。结论　这些结果提示GDM作为以抑制热休克蛋白90 (Hsp90 )功能为靶点的生化调节剂可能应用于肿瘤联合化疗的前景。     

神经酰胺诱导肝肿瘤Bel7402细胞凋亡(英文)

目的:了解神经酰胺信号转导在肝肿瘤细胞中的生物学意义。方法:MTT法、荧光染色、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳、Western blot。结果:神经酰胺对Bel7402细胞生长抑制的IC_(50)值为14.28μmol·L~(-1)。细胞核浓缩,荧光明显增强;DNA呈现典型“梯型”变化;p53蛋白表达呈下降趋势;Bcl-2蛋白表达明显降低;Bax蛋白表达无明显改变。结论:神经酰胺诱导肝肿瘤细胞凋亡,与Bcl-2表达下调有关。     

安宫牛黄丸通过诱导细胞凋亡和降低线粒体膜电位抑制肿瘤细胞增殖

目的 观察安宫牛黄丸的抗肿瘤作用,并探索其可能的作用机制。方法 安宫牛黄丸9,30,90,300和900 mg·L^-1分别与人胃癌MGC-803和人肝癌BEL-7402细胞孵育24,48和72 h。采用噻唑蓝(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5(3-羧基甲基苯基)-2-(4-磺酸苯基)-2H-四氮唑)细胞毒实验MTS法和克隆实验观察安宫牛黄丸对MGC-803和BEL-7402细胞增殖的影响;应用Hoechst 33258/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;荧光分光光度计检测线粒体膜电位。结果 安宫牛黄丸具有浓度依赖性地抑制肿瘤细胞增殖的作用。MTS法测定结果表明,安宫牛黄丸作用48和72 h对MGC-803细胞增殖具有抑制作用,浓度-效应相关系数分别为0.996(P=0.002)和0.756(P=0.024);与BEL-7402细胞作用48和72 h的浓度-效应相关系数分别为0.732(P=0.030)和0.702(P=0.037)。细胞克隆实验结果表明,安宫牛黄丸作用24 h可浓度依赖性地抑制MGC-803细胞(r=0.914,P=0.011)和BEL-7402细胞(r=0.871,P=0.024)克隆形成。Hoechst 33258/PI染色和流式细胞仪检测结果表明,安宫牛黄丸900 mg·L^-1作用24 h可诱导MGC-803和BEL-7402细胞凋亡,细胞凋亡百分率分别达27.2%和19.7%。安宫牛黄丸900 mg·L^-1作用后连续检测3 min,MGC-803和BEL-7402细胞的线粒体膜电位比对照组分别下降15.9%和15.0%。结论 安宫牛黄丸具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用机制与诱导细胞凋亡和降低肿瘤细胞线粒体膜电位有关。     

三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞分化和凋亡的影响

目的探讨三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞BEL-7402的诱导分化和凋亡作用。方法用不同剂量的3-吡啶-3-基-4-[(4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-37)与BEL-7402细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和LH-37对细胞增殖的抑制作用;RT-PCR方法检测细胞甲胎蛋白(α-FP)和白蛋白(Alb)mRNA表达;ELISA法测定细胞α-FP含量;免疫组织化学检测细胞内激活型Caspase-3表达;Western blot检测Caspase-3和Caspase-9蛋白表达;可见光法测定超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力;荧光显微镜观察凋亡细胞形态;Annexin-Ⅴ和PI双染流式细胞术测定凋亡细胞数。结果LH-37在10μmol·L-1~1mmol·L-1的浓度范围能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度的增加而增高(P<0·05或P<0·01),10μmol·L-1和1·0μmol·L-1的LH-37使细胞Alb mRNA表达量增高,α-FP mRNA和蛋白质表达量明显下降,Caspase-3和Caspase-9表达量明显增加,Caspase-3阳性细胞明显增加;药物浓度达100μmol·L-1作用48h后,BEL-7402细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,细胞凋亡率高于对照组(P<0·05)。结论三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌BEL-7402细胞具有抗增殖、促分化和凋亡作用,作用可能与过氧化氢的氧化损伤作用有关。     

氧化吲哚类化合物Z24的体内抑瘤活性及其血管生成抑制作用(英文)

目的　从抗血管生成活性的角度 ,寻找新的抗肿瘤药物 ,研究Z2 4的体内抑瘤活性及其对血管内皮细胞的选择性抑制作用。方法　MTT法检测不同浓度的Z2 4作用 72h时对人肝癌细胞系BEL 74 0 2及正常人胚肺二倍体细胞 2BS的生长抑制作用 ,并从浓度 抑制率曲线求出IC50 ;台盼蓝拒染计数法检测不同浓度的Z2 4作用 72h时对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)的生长抑制作用 ,从浓度 抑制率曲线求出IC50 ;小鼠S180 ,H2 2和裸小鼠皮下移植性人肝癌BEL 74 0 2模型研究Z2 4的体内抑瘤作用。鸡胚尿囊膜 (CAM )血管生成模型检测Z2 4的血管生成抑制活性。结果　MTT法测得Z2 4对BEL 74 0 2生长抑制作用的IC50 为 10 6 μmol·L- 1,对 2BS生长抑制作用的IC50 为 116 μmol·L- 1。台盼蓝拒染计数法测得Z2 4对HUVEC生长抑制作用的IC50 为 6 .4 4μmol·L- 1。Z2 4可明显抑制鸡CAM新生血管的形成Z2 4 10 0mg·kg- 1可使S180 ,H2 2和裸小鼠人肝癌BEL 74 0 2模型的肿瘤重量较对照组分别下降 5 2 .5 %(n =10 ,P <0 .0 1) ,4 1.5 % (n =10 ,P <0 .0 1)和5 3.4 % (n =6 ,P <0 .0 1)。Z2 4可显著抑制CAM的血管生成。结论　Z2 4对多种肿瘤动物模型均具有显著的体内抑瘤活性 ,对血管内皮细胞有选择性抑制作用 ,并明显抑制CAM新生血管的生成?