99Tc-亚甲基二膦酸盐对胶原诱导性关节炎大鼠的治疗作用及其对滑膜MMP-3和TIMP-1的影响

目的观察~(99)Tc-亚甲基二膦酸盐(~(99)Tc-MDP)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及其对滑膜基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)的影响,探讨~(99)Tc-MDP治疗类风湿关节炎(RA)的机制。方法建立CIA大鼠关节炎模型,分为正常对照组、模型对照组、~(99)Tc-MDP组和甲氨蝶呤组。采用关节炎指数评分法评价其关节的炎症程度；观察关节病理组织形态学变化；反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测滑膜MMP-3和TIMP-1 mRNA水平。结果①模型组、甲氨蝶呤组、~(99)Tc-MDP组大鼠随着免疫时间延长关节炎指数(Al)评分增加。②模型组关节组织学评分均高于甲氨蝶呤组和~(99)Tc-MDP组(P＜0．05)；软骨破坏和骨质破坏评分,~(99)Tc-MDP组低于甲氨蝶呤组(P＜0．05)。③模型组、甲氨蝶呤组、~(99)Tc-MDP组MMP-3 mRNA水平显著高于正常组(P＜0．01)；模型组高于~(99)Tc-MDP组(P＜0．05)。各组滑膜TIMP-1 mRNA水平差异无统计学意义(P＞0．05)。结论~(99)Tc-MDP明显减轻CIA大鼠的关节炎症状,延缓关节破坏的进展；~(99)Tc-MDP降低滑膜MMP-3 mRNA水平,可能是其治疗RA的机制之一；在延缓CIA大鼠软骨和骨质破坏的病理学改变及降低滑膜MMP-3 mRNA水平,其近期疗效优于甲氨蝶呤。     

重组抗肿瘤坏死因子-α人鼠嵌合单克隆抗体对类风湿关节炎患者RANK/RANKL/骨保护素系统的影响

目的 探讨重组抗肿瘤坏死因子(TNF)-α人鼠嵌合单克隆抗体(Infliximab)对类风湿关节炎(RA)患者外周血核因子κB受体因子(RANK)/核因子κB受体活化因子(RANKL)/骨保护素系统的影响.方法 50例经严格筛选的类风湿关节炎(RA)患者按随机分配原则分为2组.一组患者接受Infliximab(3 mg/kg)+甲氨蝶呤治疗;一组患者接受甲氨蝶呤单独治疗作为对照,分别于0、2、6、14周给药.观察0周与18周Infliximab治疗组与对照组患者相关临床指标的改变,对比外周血中RANK、RANKL mRNA表达情况以及血清中骨保护素蛋白水平的变化.用t检验和x2检验做统计学分析.结果 经Infliximab治疗后,在RA患者关节放射成像中,可以观察到骨破坏程度有减缓趋势.与对照组比较,Infliximab治疗组(病史＞1年)患者骨丢失情况得到控制;Infliximab治疗组(0周:80.25;18周:63.2)与对照组(0周:83.37;18周:30.87)患者外周血中RANK、RANKL mRNA表达水平均下降(P＞0.05);与对照组比较,Infliximab可使RA患者外周血骨保护素/RANKL比值下降趋势减缓.虽然,经甲氨蝶呤或Infliximab+甲氨蝶呤治疗后,对照组[0周:(238±15)pg/ml;18周:(118±l0)pg/ml]和Infliximab治疗组[0周:(223±6)pg/ml;18周:(162±6)pg/ml)]患者血清中骨保护素水平均下降(P＞0.05),但Infliximab治疗组患者血清骨保护素下降趋势得以减缓.结论 RA患者经Infliximab联合甲氨蝶呤治疗后,骨破坏受到抑制,其作用机制可能是部分通过对RANK/RANKL/骨保护素系统的调节来行使的.     

雷公藤多苷对胶原诱导性关节炎大鼠中高迁移率族蛋白B1影响的研究

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在类风湿关节炎(RA)治疗中的作用及雷公藤多苷治疗RA的可能机制.方法 建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型建立后,将造模成功的大鼠随机分为模型组、甲氨蝶呤治疗组、雷公藤多苷治疗组、雷公藤多苷和甲氨蝶呤联合治疗组进行药物干预,4周后取材,采用免疫组织化学法检测HMGB1在正常组、模型组和各治疗组大鼠的滑膜与关节中的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测HMGB1在正常组、模型组和各治疗组大鼠血清中的含量.统计方法采用方差分析.结果 HMGB1在模型组大鼠滑膜、关节中的蛋白表达以及血清中的含量[(23.8±2.2)ng/ml]明显高于正常组[(7.4±1.6)ng/ml](P＜0.01),3个治疗组大鼠滑膜、关节中HMGB1的表达和血清中HMGB1的含量[分别为(133±3.1),(17.4±4.9),(11.7±1.5)ng/ml]显著低于模型组(P＜0.01),但又高于正常组(P＜0.05).结论 HMGB1参与了CIA滑膜增生、软骨和骨质破坏的病理过程;甲氨蝶呤与雷公藤多苷治疗RA滑膜炎和骨质破坏的分子机制与其降低HMGB1的表达相关.     

单用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白及联合甲氨蝶呤对胶原诱导性关节炎大鼠关节骨破坏影响的实验研究

目的 通过建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,评价单用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc)及其联合甲氨蝶呤在抑制CIA大鼠关节骨破坏方面的作用及机制.方法 利用皮下注射牛Ⅱ型胶原诱导Wistar大鼠发病,建立CIA大鼠模型.将造模成功,炎症评分≥2分的CIA大鼠随机分为生理盐水组(0.4 ml/周,腹腔注射)、甲氨蝶呤治疗组(1 mg周,腹腔注射)、rhTN FR:Fc治疗组(0.8 mg,每周2次,腹腔注射)、甲氨蝶呤+rhTN FR:Fc治疗组(甲氨蝶呤1 mg/周+rhTNFR:Fc 0.8mg,每周2次,腹腔注射).治疗8周后,处死大鼠,取踝关节拍摄X线片,胫骨上段行微计算机断层扫描技术扫描和制作硬组织切片,观察各组踝关节骨破坏情况,评价胫骨上段骨小梁变化及骨量变化.统计学处理采用SNK-q检验.结果 治疗8周后,rhTN FR:Fc组,甲氨蝶呤+rhTNFR:Fc组骨小梁面积百分数[(29.1±0.3)％,(26.7±0.6)％]及骨小梁数量(4.4±0.5)/mm,( 4.0±0.6 )/mm]明显高于0.9％氯化钠注射液组和甲氨蝶呤组[(12.9±0.5)％,( 13.2±0.4)％与(2.0±0.3 )/mm,(2.2±0.2)/mm](P＜0.01);rhTNFR:Fc组、甲氨蝶呤+rhTNFR:Fc组骨小梁分离度明显小于0.9％氯化钠注射液组和甲氨蝶呤组(P＜0.01).结论 单用rhTNFR:Fc及联合甲氨蝶呤均具有明显抑制关节骨破坏的作用,且其抑制炎症关节周围骨量减少的作用与抑制局部骨小梁数量减少及骨小梁分离度的增大相关.     

罗格列酮通过p-ERK通路抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞表达核因子κB受体激活配体

目的 探讨罗格列酮对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞(RA-FLS)核因子κB受体激活配体(RANKL)和骨保护素表达的影响及信号传导通路。方法 原代培养RA-FLS,不同浓度罗格列酮（0、5、10、15、20 μmol/L）干预3 d,检测罗格列酮对RA-FLS增殖及RANKL、骨保护素mRNA和蛋白表达的影响,并检测0、15、20 μmol/L罗格列酮对RA-FLS p-ERK、p-p38、p-JNK蛋白表达的影响。多组间比.较采用单因素方差分析,两两比较采用Bonferroni法。结果 5、10、15、20 μmol/L罗格列酮干预可抑制RANKL mRNA (0.503±0.005、0.438±0.031、0.161±0.042、0.050±0.018）和蛋白(1.72 ±0.09、1.58±0.05、1.46±0.11、1.22±0.14)表达（F=200.820,F=13.602,均P＜0.01）,上调骨保护素mRNA (2.8±0.5、7.0±3.2、8.4±2.3、25.7±5.1)和蛋白(1.21±0.11、1.52±0.16、1.63±0.11、1.91 ±0.03)表达（F=26.531,F=24.872,均P＜0.01）,RANKI/骨保护素mRNA和蛋白比率降低（F=453.425,P＜0.01;F=4.173,P＜0.05）,且呈剂量依赖性;15、20μmol/L罗格列酮明显抑制p-ERK蛋白表达（0.55±0.06、0.45±0.06,F=6.991,P＜0.05）。结论 罗格列酮可能通过p-ERK信号途径抑制RA-FLS表达RANKL并上调骨保护素的表达。     

羟基喜树碱与甲氨蝶呤治疗胶原诱导性关节炎模型大鼠的比较研究

目的 探讨羟基喜树碱(HCPT)在胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及临床治疗类风湿关节炎(RA)的潜在价值.方法 ①建立CIA大鼠模型:随机分为健康对照组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)治疗组、低剂量HCPT治疗组、高剂量HCPT治疗组;②观察不同时间点大鼠一般情况、关节肿胀度;③测量造模15周后大鼠关节滑膜病理改变及原位末端标记技术(TUNEL)染色滑膜细胞凋亡率;④测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β浓度.结果 HCPT、MTX治疗组与模型组比较,各治疗组均可改善模型鼠一般情况、缓解关节炎指数及足肿胀度、减少炎性细胞浸润、滑膜细胞增生及减轻关节内软骨和骨破坏、提高滑膜细胞凋亡率、降低血清TNF-α、IL-1β浓度,差异有统计学意义(P<0.05),各治疗组间无统计学意义(P>0.05).结论 HCPT在临床治疗RA方面具有潜在价值.     

OPG/RANK/RANKL系统与骨折和类风湿性关节炎

骨保护素(OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子(RANK)和RANK配体(RANKL)是偶联成骨细胞、基质细胞和破骨细胞分化、活化及生物活性的3种主要细胞因子,其形成的局部调节体系在骨代谢中起十分重要的作用。本文简要介绍了OPG/RANK/RANKL系统及该系统在骨质疏松性骨折发生中的作用,RANKL/OPG比值与骨折的关系,OPG和RANKL对骨折愈合的作用,血清OPG或RAN-KL水平与骨折的联系,OPG基因多态性与骨折关系的研究结果。另外还介绍其在类风湿性关节炎发病机制中的作用,OPG/RANK/RANKL与滑膜组织的联系,OPG治疗的相关实验进展。     

99Tc-亚甲基二膦酸盐对大鼠胶原诱导性关节炎骨质破坏的抑制作用及其对TNF-α的影响

目的探讨^99Tc-亚甲基二膦酸盐（^99Tc-MDP）对胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis，CIA）大鼠的关节炎症、骨质破坏的治疗作用及其对肿瘤坏死因子（TNF）-α的影响。方法以大鼠CIA为动物模型，予以^99Tc-MDP对其进行干预，通过观察关节肿胀变化、放射学和组织病理学及细胞因子TNF-α水平变化评价药物的治疗作用。结果大体评分显示：^99Tc-MDP对关节肿胀具有明显抑制作用。放射学评分和组织学切片显示：^99Tc-MDP能明显减轻骨质破坏。^99Tc-MDP治疗组血清TNF-α水平明显低于模型对照组。结论^99Tc-MDP可减轻CIA炎症和抑制骨质破坏；并能显著抑制TNF-α的产生。     

骨保护素和RANKL基因单核苷酸多态性对类风湿关节炎易感性及其骨密度和疾病活动性的影响

目的 探讨骨保护素基因(TNFRSF11B) 1181G＞C(rs2073618)、163A＞G(rs3102735)位点和核因子κB活化因子受体配体(RANKL)基因(TNFRSF 11)401A＞G (rs2277438)位点单核苷酸多态性(SNP)对类风湿关节炎(RA)疾病易感性及其骨密度和疾病活动性的影响.方法 采用连接酶检测反应(LDR)聚合酶链反应(PCR)方法检测200例RA患者和201名健康对照组骨保护素基因rs2073618、rs3102735位点和RANKL基因rs2277438位点SNP;采用双能X线骨密度仪(DEXA)法测定其股骨和腰椎部位骨密度.比较其等位基因分布频率、基因型频率及单倍体型在2组中的分布,并比较不同基因型RA患者骨密度及疾病活动性的差别.统计学方法采用方差分析,t检验和x2检验.结果 ①骨保护素基因rs2073618位点、rs3102735位点和RANKL基因rs2277438位点各等位基因及基因型分布频率在RA组与对照组中差异均无统计学意义(P＞0.05).3个位点单倍体型研究表明:骨保护素和RANKL基因单倍体型(rs2073618G-rs2277438G-rs3102735G)携带者RA疾病易感性明显降低(1.5％与6.0％,OR:0.216,95％CI:0.081～0.575,P=0.0008),骨保护素和RANKL基因单倍体型(rs2073618G-rs2277438A-rs31 02735G)携带者RA易感性明显增加(14.5％与8.4％,OR:1.862,95％CI:1.179～2.943,P=0.007).②RANKL基因rs2277438位点表达为纯合型(AA和GG型)的RA患者(62例)腰椎3(1.05±0.22与0.93±0.26,t=2.314,P=0.023)、腰椎4(1.06±0.24与0.94±0.28,t=2.207,P=0.030)、腰椎2～4(1.04±0.21与0.89±0.28,t=2.788,P=0.007)部位骨密度均明显高于杂合型(AG型)RA患者(39例);骨保护素基因rs2073618和rs3102735位点不同基因型RA患者间骨密度差异无统计学意义(P＞0.05).③骨保护素基因rs2073618位点表达为纯合型(CC、GG型)的RA患者(60例)在以下疾病活动性指标上明显高于表达为杂合型(CG型)的RA患者(40例):压痛关节数(13±7与10±6,t=2.154,P=0.034)、压痛关节指数(19±11与13±9,t=2.318,P=0.023)、疼痛视觉模拟(VAS)评分(5.7±1.9与4.8±1.8,t=2.481,P=0.015).RANKL基因rs2277438位点、骨保护素基因rs3102735位点不同基因型RA患者间各疾病活动性指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 骨保护素基因rs2073618、rs3102735位点和RANKL基因rs2277438位点SNP与中国籍汉族RA患者易感性无关,但骨保护素和RANKL基因单倍体型(rs2073618G-rs2277438G-rs3102735G)为RA的保护性因素,而单倍体型(rs 2073618G-rs2277438A-rs31 02735G)是危险因素.RANKL基因rs2277438位点SNP与RA骨代谢相关;骨保护素基因rs2073618位点SNP与RA患者疾病活动性相关.     

移植间充质干细胞在胶原诱导性关节炎大鼠关节的分布和作用

目的 探讨移植人的异基因骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)在类风湿关节炎(RA)动物模型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠炎症关节局部的转归以及对关节局部组织损伤的修复作用.方法 分别选取5只Wistar幼年大鼠和30只Wistar成年雌性大鼠,5只Wistar幼年大鼠用以提取BM-MSCs,30只Wistar成年雌性大鼠随机分为CIA造模A组、B组和正常C组各10只.BM-MSCs分离、传代培养后用5-溴脲嘧啶脱氧核苷(5-BrdU)进行标记.CIA大鼠成功造模后,采取尾静脉注射移植于A组和C组大鼠,移植细胞数为1.0×107/kg.移植后1-4周观察各组动物一般状况和关节局部肿胀度的变化;于移植4周后用关节组织病理切片局部免疫组织化学抗5-BrdU和骨保护素的方法观察BM-MSCs向受体关节局部的趋化和聚集以及对关节组织中骨保护素表达的影响.2组间比较采用t检验.结果 BM-MSCs移植后,受试动物关节肿胀开始消退[(200±350)μl],移植后2、3、4周时与未移植BM-MSCs的B组动物[(320±110)μl]之间比较差异有统计学意义(P＜0.05);在受者关节滑膜、血管内膜及软骨组织中均可见5-BrdU阳性细胞,滑膜组织处的平均灰度值CIA造模A组(85±9)低于正常C组(110±6),差异有统计学意义(P＜0.05);BM-MSCs移植后CIA造模A组关节滑膜中骨保护素阳性率增加,平均灰度值为54±4,明显低于未移植的CIA造模B组(77±6),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 通过外周静脉移植的BM-MSCs可以特异性趋化和聚集到炎症关节局部,并可以减轻关节损害,而这种局部组织损伤修复作用可能是通过增加局部炎症关节组织中骨保护素的含量而发挥的.

Abstract：

Objective To study the distribution of allogenic bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BM-MSCs) on joints of collagen-induced arthritis (CIA) rats and to investigate their repair effects on joint damages. Methods Five Wistar rats were used for extraction of mesenchymal stem cells and 30 adult female Wistar rats were divided into 3 groups: the CIA rats group A (n=10), CIA rats group B (n=10) and normal rats control group C (n=10). BM-MSCs of Wistar rats were isolated, cultured in vitro routinely and the fourth passages was taken for identification of specific surface antigens by flow cytometry, then the cells were labeled with 5-bromodeoxyuridine (5-BrdU) in vitro. The models of CIA rats were established. 5-BrdU labeled BM-MSCs (1.0×107 cells/kg) were imfused from through tail vein to CIA rats group A and control group C. During the first 4 weeks after BM-MSCs transplantation, changes of general condition and left hind paw swelling were examined. At the fourth week, immunohistochemical examination of 5 -BrdU and osteoprotegerin (OPG) were performed to investigate BM-MSCs aggregation around the knee joints. The contribution of BM -MSCs to repairing of joint damages was identified. Comparisons between groups were performed by t-test. Results After BM-MSCs transplantation, left hindpaw swelling of group A were relieved compared with group B (P＜0.05) and the mobility of the joints was significantly improved. At the fourth week, much more implanted cells (5-BrdU positive cells.) were detected in the damaged knee joints than those in normal knee joints. The average grey scale values on synovium of knee joints in the CIA group A (85±9) was significantly lower than that of the normal group C (110±6, P＜0.05). At the same time, OPG expression was increased in damaged knee joints. The average grey scale values on synovium of knee joints in CIA group A (54±4) was significantly lower than that of the CIA group B (77±6, P＜0.05). Conclusion The transplanted allogeneic bone marrow mesenchy-mal stem cells can migrate to sites of damaged tissue in arthritis. They can prevent tissue damage and repair the damaged joints tissue by increasing OPG expression. This study has provided some evidence for developing effective therapy for rheumatoid arthritis.     

周期联合甲氨蝶呤和环磷酰胺对大鼠胶原诱导性关节炎滑膜细胞周期蛋白D1表达的研究

目的 通过研究大鼠胶原诱导件关节炎(CIA)滑膜组织细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达以及甲氨蝶呤(MTX)和环磷酰胺(CTX)对其的影响,从周期调控的角度探讨两者联合治疗类风湿关节炎(RA)可能的协同效应机制.方法 建立Ⅱ型胶原诱导的雌性Wistar大鼠CIA模型,随机分为正常对照组、CIA模型对照组、小剂量MTX治疗组(每周0.9 mg/kg)、大剂量MTX治疗组(每周2.7mg/kg)、小剂量CTX间歇治疗组(每3周24 mg/kg)、联合治疗组(MTX每周0.9 mg/kg+CTX每3周24mg/kg).治疗24周后全部动物处死取材,再经同定、脱钙、包埋,原位杂交法检测滑膜细胞周期蛋白cyclin D1 mRNA.结果 CIA模型组大鼠关节滑膜组织的cvclin D1 mRNA的阳性染色强度明显高于正常对照组(P＜0.05),各治疗组滑膜cvclin D1 mRNA下调,联合治疗组cyclin D1 mRNA表达最低,各组间平均灰度值差异有统计学意义(P＜0.05).MTX与CTX存在药物交互作用(P＜0.05),联合治疗组优于单用药治疗组.结论 提示MTX和CTX联合治疗为协同效应,可能的重要机制是使滑膜cyclin D1 mRNA下调,从而抑制了滑膜细胞异常增殖.     

雷公藤甲素对佐剂性关节炎大鼠核因子κB受体激活剂配基表达的影响

目的 探讨雷公藤甲素对佐剂性关节炎（AA）大鼠核因子κB受体激活剂配基（RANKL）和护骨素（OPG）表达的影响及其与抑制关节炎大鼠骨侵蚀的关系。方法 AA大鼠经雷公藤甲素治疗后，测定关节中RANKL、OPG的表达，并测定外周血单个核细胞（PBMC） RANKL mRNA的表达水平和外周血中肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-1β水平，同时测定胫骨关节端骨密度，并作关节骨侵蚀病理积分。结果 雷公藤甲素组和甲氨蝶呤组骨密度高于模型组（P〈0.01），关节骨侵蚀积分低于模型组（P〈0．01）。雷公藤甲素组大鼠关节滑膜（P〈0.01）及骨组织（P〈0.05）RANKL表达量低于模型组，滑膜OPG表达量低于模型组（P〈0.05）。雷公藤甲素组PBMC中RANKLmRNA表达水平低于模型组（P〈0.01），并且TNF-α和IL-1β水平低于模型组（P〈0．01）。结论 雷公藤甲素可能通过抑制RANKL表达而抑制AA大鼠骨质侵蚀。未见雷公藤甲素对OPG表达有促进作用。     

小剂量白细胞介素-18对胶原诱导性关节炎作用的研究

目的 研究小剂量白细胞介素(IL)-18对早晚期Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)的作用.方法 重组小鼠IL-18(0.2 μg/小鼠)每日1次腹腔注射发病前或发病晚期的CIA小鼠,连用5 d,用关节炎评分评估关节炎病情的进展,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定CIA小鼠髌骨及邻近滑膜组织的细胞因子表达水平;用组织学染色评价膝关节的软骨和骨破坏.结果 小剂量IL-18早期免疫干预CIA小鼠,不能降低CIA小鼠关节炎发病率,无法延缓CIA小鼠膝关节病理学进展;滑膜和软骨附近的Th1型细胞因子和Th2型细胞因子与对照组相比差异无统计学意义.小剂量IL-18晚期免疫干预CIA小鼠,加剧了病理学进展,免疫第43天,治疗组关节炎评分(0.33±0.11)显著高于对照组(0.25±0.09)(P<0.05);髌骨及邻近滑膜组织的细胞因子IL-10与IL-18结合蛋白(IL-18BP)与对照组相比显著降低(P<0.05).结论 IL-18对早期Ⅱ型胶原诱导的关节炎没有疗效.IL-18晚期免疫干预CIA小鼠,恶化了关节炎病情,其机制可能为IL-18抑制了IL-10和IL-18BP的表达.     

高迁移率族蛋白1在胶原诱导性关节炎大鼠滑膜中的表达及丙酮酸乙酯对其拮抗作用的研究

目的 本研究以胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠为研究对象,通过比较丙酮酸乙酯干预前后正常大鼠、CIA大鼠及与丙酮酸乙酯(EP)干预组大鼠关节滑膜组织高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达,阐明HMGB1在关节炎中的作用及EP对其拮抗作用.方法 实验分为正常对照组、CIA大鼠组与EP干预组,每组12只大鼠,分别在造模开始的第6、9周每组解剖6只大鼠.采用免疫组织化学检测关节滑膜组织HMGB1的表达,以病理图像分析软件IPP对胞质部位进行图像分析,表达水平以表达强度表示;采用实时定量-聚合酶链反应(PCR)检测各组大鼠滑膜组织HMGB1 mRNA的表达量,以正常对照组第6周大鼠滑膜组织HMGB1 mRNA表达量为参照的相对定量来表达.采用t检验比较各组间大鼠滑膜组织HMGB1的表达.结果 关节滑膜组织HMGB1免疫组织化学检测结果:第6周时,正常对照组、CIA大鼠组及EP干预组表达强度分别为2.1±0.6、7.3主1.2、6.0±1.2;第9周时,分别为2.2±0.7、12.4±4.5、5.5±1.0;大鼠滑膜组织HMGB1 mRNA实时定量PCR检测结果:第6周时,正常对照组、CIA大鼠组及EP干预组相对定量分别为1、2.865、2.602;第9周时,分别为1.005、4.694、1.729.在第6、9周采用免疫组织化学及实时定量PCR检测HMGB1在CIA组的表达明显高于正常对照组(P＜0.05),CIA组关节滑膜中HMGB1的表达在第9周时较第6周明显增高(P＜0.05);第6周时,EP干预组滑膜HMGB1的表达较CIA组降低,但差异无统计学意义(P＞0.05),第9周时,其表达明显降低(P＜0.05).结论 HMGB1在CIA大鼠滑膜中的表达量明显增高,在晚期尤甚,推测HMGB1可能作为炎症因子参与了CIA的疾病过程,尤其作为晚期致炎因子发挥重要的作用;经EP干预后HMGB1表达量明显下降,推测EP可能对HMGB1具有拮抗作用,为RA患者提供新的的治疗手段.     

针刺配合芹菜素治疗对胶原诱导性关节炎小鼠Th1/Th2细胞亚群的影响

目的观察针刺配合芹菜素对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠的疗效和外周血中Th细胞亚群分布,探讨针刺配合芹菜素对类风湿关节炎(RA)的疗效及其机制。方法在初次免疫后第4周开始对CIA小鼠连续针刺治疗3 w,观察其关节炎指数,应用ELISA技术对CIA组小鼠和对照组小鼠脾淋巴细胞中辅助T细胞(Th)亚群分布进行检测。结果治疗后与模型组相比,针刺组、芹菜素组及针刺加芹菜素组小鼠的关节炎指数下降(P0.05),针刺加芹菜素组下降更明显(P0.01)。针刺和芹菜素均能抑制CIA小鼠Th1细胞分泌,降低Th1/Th2比值,对Th2细胞的分泌无明显影响。结论针刺配合芹菜素治疗CIA小鼠疗效明显优于单独针刺或芹菜素治疗CIA小鼠的关节炎,可能是通过调节Th1/Th2,抑制Th1分化格局使之接近动态平衡而起作用的。     

雷公藤多苷对胶原诱导性关节炎大鼠表皮生长因子受体家族表达的影响

目的 观察表皮生长因子受体(EGFR)家族成员EGFR、ErbB-2在胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜及软骨中的表达及雷公藤多苷(TWP)对其影响,探讨EGFR、ErbB-2在CIA大鼠发病中的,作用及TWP治疗RA的药理作用机制.方法 建立CIA大鼠模型,分别采用免疫组织化学染色及实时定量聚合酶链反应( PCR)检测EGFR、ErbB-2在滑膜和软骨中的表达.统计学处理采用单因素方差分析.结果 EGFR、ErbB-2的蛋白表达及mRNA水平在CIA模型组滑膜(EGFR 0.268±0.059,ErbB-2 0.25±0.04.EGFR mRNA:14.2±0.55,ErbB-2 mRNA 23.46±3.64)和软骨(EGFR 0.193±0.018,ErbB-2 0.217±0.033,EGFR mRNA:4.16±0.50,ErbB-2 mRNA 9.23±0.66)中明显高于正常组(P＜0.01),在治疗组中表达低于模型组(P＜0.01).结论 初步证明EGFR、ErbB-2参与了CIA的病理过程.TWP治疗RA的机制可能与其降低EGFR、ErbB-2的表达有关.     

破骨细胞和骨保护素/细胞核因子-κB受体活化因子配体系统在银屑病关节炎骨质破坏中的作用

目的 探讨银屑病关节炎( PsA)患者体内破骨细胞和骨保护素/细胞核因子-κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)系统的水平与骨质破坏的关系.方法 分离41例PsA患者、20例骨关节炎患者及24名健康对照者的外周血单个核细胞诱导生成破骨细胞,采用耐酒石酸酸性磷酸酶染色法进行鉴定.运用酶联免疫吸附试验( ELISA)法测定3组患者血清中的骨保护素和RANKL的水平,同时收集PsA患者的临床实验室资料.采用单因素方差分析和直线回归分析进行统计学处理.结果 PsA组的破骨细胞数目[(17.7±4.8)个,视野]明显多于骨关节炎组[(6.5±1.6)个,视野]和健康对照组[(6.4±1.6)个,视野],差异有统计学意义(P＜0.05).PsA组的RANKL水平[(178±38) pg/ml]明显高于骨关节炎组[( 32±4) pg/ml]和健康对照组[(67±17) pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.05).与无骨质破坏的PsA组相比较,破骨细胞和RANKL的水平在有骨质破坏的PsA组中明显增高[(17.6±0.9)个／视野与(7.9±1.3)个／视野和(199±72) pg/ml与(128±44) pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.01).PsA患者的影像学评分和破骨细胞、RANKL的水平呈正相关(r=0.83,0.76;P＜0.05).结论 PsA患者外周血中的破骨细胞数目和RANKL水平显著升高,PsA患者体内的破骨细胞和RANKL水平升高与骨质破坏相关密切,提示破骨细胞及RANKL水平的变化可以反映骨质破坏的严重程度.     

Light诱导类风湿关节炎滑膜细胞向破骨细胞转化

目的 观察Light在类风湿关节炎(RA)滑膜细胞向破骨细胞转化过程中的作用.方法 取8例RA患者滑膜组织,胶原酶消化获取滑膜细胞,每例滑膜细胞分成5份培养,第1组加入巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)作阴性对照,第2组加入MCSF和LIGHT,第3组加入MCSF和核因子(NF)-κB受体激动剂配体(RANKL),第4组加入MCSF、LIGHT和RANKL,第5组加入LIGHT.体外培养2周后,行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,F肌动蛋白(F-actin)染色以及象牙片上骨吸收陷窝观察破骨细胞的形成和活性.结果 第1组和第5组TRAP(-),F-actin(-),象牙片上无骨吸收陷窝形成;第2组TRAP(+),F-actin(+),骨陷窝形成(+),多核破骨细胞呈圆形和椭圆形,体积较小,骨陷窝分散,体积较小;第3组TRAP(++).F-actin(++),骨陷窝形成(++),多核破骨细胞体积大,骨陷窝较多,体积大,形态不规则;第4组TRAP(+++),F-actin(+++),骨陷窝形成(++++),多核破骨细胞更多,骨陷窝大且有融合趋势.结论 Light能诱导RA滑膜细胞向破骨细胞转化,并能促进RANKL诱导滑膜细胞向破骨细胞转化的能力.     

甲氨蝶呤联合环磷酰胺对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞p53表达的研究

目的 通过对类风湿关节炎(RA)动物模型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的实验研究,从滑膜细胞p53表达的角度,探讨甲氨蝶呤(MTX)联合环磷酰胺(CTX)治疗RA协同作用和机制.方法 建立Ⅱ型胶原诱导的雌性Wistar大鼠CIA模型,将造模成功的75只大鼠随机分成5组:CIA模型对照组、小剂量MTX治疗组(每周0.9 mg/kg)、大剂量MTX治疗组(每周2.7 mg/kg),小剂量CTX治疗组(每3周24 mg/kg)及小剂量MTX联合小剂量CTX组(MTX每周0.9 mg/kg+CTX每3周24 mg/kg).选8只大鼠为健康对照组,共6组.治疗24周后处死全部动物并取材,经固定、脱钙、包埋,通过免疫组织化学法检测滑膜细胞突变型p53的表达.结果 突变型p53在CIA组表达上调(P<0.05),联合治疗组下调突变型p53优于小剂量MTX、小剂量CTX组(P<0.05),与大剂量MTX组相当(P<0.05).结论 联合治疗组在下调突变型p53表达的作用均优于小剂量MTX、小剂量CTX单用药治疗组,提示MTX和CTX联合治疗为协同作用.