氨基多糖对RANKL诱导的RAW264.7向破骨细胞样细胞分化的抑制作用观察

目的 探讨氨基多糖(GAGs)对核因子KB受体活化因子配体(RANKL)诱导的RAW264.7向破骨细胞分化的影响.方法 采用RANKL单独诱导RAW264.7细胞(对照组),分别采用不同浓度肝素、高分子量透明质酸(HA)、硫酸软骨素(CS)C联合RANKL诱导RAW264.7分化(分别为肝素组、HA组、CSC组).细胞培养第3、5、7、8天采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色法(TRAP)检测破骨细胞样细胞并计数;ELISA法检测第8天各组培养液上清中抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b)含量.结果 与对照组比较,诱导第3、5、7、8天,破骨样细胞数均明显减少(P＜0.05);其中肝素组随浓度的增大而减少(P＜0.05).第8天培养液中TRAP5b含量与细胞计数结果相符.结论 氨基多糖对RANKL诱导下RAW264.7向破骨细胞样细胞的分化具有抑制作用;肝素的作用具有剂量依赖性.     

铁调素对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响

目的探讨铁调素对小鼠单核细胞株RAW264.7向成熟破骨细胞分化的影响。方法将不同浓度铁调素加入含有核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的RAW264.7细胞培养基,24 h后用CCK-8法检测细胞的增生活性;4 d后对细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,光镜下观察;用RT-PCR法检测TRAP、组织蛋白酶K(CTK)、金属蛋白酶9(MMM-9)基因表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中TRAP-5b含量;24 h后用共聚焦显微镜(CLSM)测定细胞内铁离子浓度。结果铁调素在0~800 nmol/L浓度围内可增加RAW264.7细胞TRAP染色阳性数目,上调TRAP、CTK和MMP-9基因表达,增加上清液TRAP-5b含量(P0.05),同时增加RAW264.7细胞内铁离子浓度(P0.05)。结论铁调素可以促进RAW264.7细胞向破骨细胞分化,其作用机制可能与铁调素增加细胞内铁离子有关。     

破骨细胞分化刺激因子在佐剂性关节炎大鼠滑膜中的表达及意义

目的探讨破骨细胞分化刺激因子在佐剂性关节炎（AA）大鼠滑膜中的表达与破骨细胞形成及软骨破坏的关系。方法 SD大鼠右足垫皮下注射完全弗氏佐剂,以诱发AA。30 d后,提取膝关节滑膜,用半定量RT-PCR法检测滑膜中破骨细胞分化刺激因子（ODF）及其配体骨保护素（OPG）、炎症因子IL-1、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的基因表达,并用免疫组织化学检测滑膜中ODF的表达,TRAP染色检测滑膜中的破骨细胞数量。结果在mRNA水平,模型组中的ODF、TRAP表达明显高于对照组（P均〈0.01）,ODF/OPG与TRAP的表达呈正相关（r=0.932,P〈0.01）,滑膜中TRAP阳性细胞数目与关节破坏呈正相关（r=0.941,P〈0.01）。结论 AA大鼠滑膜高度表达ODF,破骨细胞的形成及活化与ODF/OPG密切相关。     

罗格列酮对破骨细胞生成的影响

目的探讨罗格列酮对破骨细胞生成的影响。方法取C57BIM6小鼠骨髓内单个核细胞,用细胞核因子kappaB受体活化因子配基（RANKL）及巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）诱导其向破骨细胞分化,在诱导开始时即分成3组：空白对照组（G1）,0．5μmoL／L罗格列酮组（G2）,2．0μmol／L罗格列酮组（G3）,诱导结束后进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、检测TRAP活性以及实时PCR检测相关基因的表达。应用单因素方差分析进行统计学分析。结果破骨细胞生成的数目在G2组[（54±5）个]、G3组[（72±5）个]均高于G1组[（32±5）个],差异有统计学意义（F=82．43,P〈0．05）,TRAP活性也高于对照组（G1：2．32±0．14,G2：2．83±0．08,G3：3．35±0．10,F=108．12,P〈0．05）;过氧化物酶增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）、组织蛋白酶K、c-fos与c-jun基因表达也高于对照组,且随着罗格列酮的浓度升高,相关基因的表达也增高（F值分别为33．50、37．46、53．73、39．77,均P〈0．05）。结论罗格列酮可能通过促进细胞增殖而促进破骨细胞生成,这司能是罗格列酮导致骨丢失的重要原因之一。     

RANKL诱导破骨细胞前体细胞分化成熟

目的 用核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导破骨细胞前体细胞分化成熟,建立获取成熟破骨细胞的方法.方法 用破骨细胞前体细胞RAW264.7细胞为模型,RANKL诱导培养4～9 d,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察TRAP阳性多核细胞形成,罗丹明-鬼笔环肽荧光染色观察纤维性肌动蛋白(F-actin)环,DAPI染色观察细胞核,甲苯胺蓝染色观察牛骨片表面的吸收陷窝情况.结果 RANKL可诱导RAW264.7细胞形成TRAP染色阳性的多核细胞,形成F-actin环,骨片吸收陷窝明显.结论 RANKL可诱导RAW264.7细胞向成熟破骨细胞分化,该诱导模型可用于破骨细胞分化研究.     

高铁环境对成骨细胞生物活性的影响

目的探讨高铁环境对人成骨细胞(hFOB1.19)活性指标的影响。方法采用细胞贴壁法培养成骨细胞(hFOB1.19)后,将不同浓度枸橼酸铁铵(50、100、200μmol/L)加入细胞培养基,用MTT法检测成骨细胞增生活性;碱性磷酸酶活性试剂盒检测碱性磷酸酶活性;流式细胞仪检测成骨细胞凋亡情况;Vonkossa染色法行钙结节染色;用RT-PCR和Western blotting分别检测Ⅰ型胶原(COL1)的基因及蛋白表达变化。结果用不同浓度枸橼酸铁铵干预成骨细胞后,与对照组相比,48 h与72 h组成骨细胞增生活性呈剂量依赖性降低,差异有统计学意义(P0.05);48 h组成骨细胞凋亡率呈浓度依赖性升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);不同浓度枸橼酸铁铵干预10 d和14 d时各组成骨细胞碱性磷酸酶活性均随枸橼酸铁铵浓度增高而降低,差异有统计学意义(P0.05);与对照组相比,枸橼酸铁铵干预17 d后钙结节染色结果显示,矿化面积和钙结节形成随铁离子浓度增加而减少;枸橼酸铁铵干预3 d后呈剂量依赖性下调Ⅰ型胶原基因和蛋白的表达。结论高铁环境使成骨细胞成骨活性指标均受到抑制。     

刺老苞根皮黄酮类化合物对破骨细胞分化的影响

目的研究刺老苞根皮黄酮类化合物对体外破骨细胞分化的影响。方法建立由骨保护素配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)共同细胞因子的小鼠破骨细胞骨髓诱导体系,将不同浓度的刺老苞根皮黄酮类化合物作用于破骨细胞。受试细胞分为对照组、刺老苞根皮黄酮类化合物低剂量组(10-8mol/L)、中剂量组(10-7mol/L)和高剂量组(10-6mol/L),并设立空白对照组。7 d后取细胞玻片进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,观察破骨细胞并计数;测量TRAP活性以及破骨细胞表面NF-κB活化受体(RANK)mRNA表达量。结果诱导培养的破骨细胞形态特征明显;刺老苞根皮黄酮类化合物中、高剂量组在细胞数量、TRAP活性上与对照组相比有明显差异(P<0.05);刺老苞根皮黄酮类化合物各剂量组RANK mRNA表达量与对照组有明显差异(P<0.05),且呈量效关系。结论刺老苞根皮黄酮类化合物可抑制体外培养的破骨细胞分化。     

激活视黄醇类X受体对氧化型低密度脂蛋白诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7向树突样细胞分化的影响

目的探讨激活核受体视黄醇类X受体（RXR）对氧化型低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导巨噬细胞向树突状细胞分化的影响及其机制。方法小鼠巨噬细胞系RAW264．7经ox-LDL诱导48h后分化为树突样细胞,相差显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面标志物,CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧浓度。结果ox—LDL诱导48h后,表达与树突状细胞免疫成熟和激活有关的细胞表面标志物CIMO、CD86、CD83、MHCClassⅡ和CD1d的RAW264．7细胞比例明显升高,同时给予天然型RXR特异性配体9-cisRA（10^-7mol／L）上述比例分别下降约47％、43％、48％、32％和17％,同时给予合成型RXR特异性配体SR11237（10^-6mol／L）上述比例分别下降约38％、38％、46％、36％和32％,并且均表现剂量依赖性。相差显微镜观察发现树突样细胞形态改变也得到部分抑制。ox-LDL引起细胞内活性氧浓度显著升高[平均荧光强度（MFI）38．24±4．20比4．46±0．39,P〈0．05],同时给予9．cisRA（10.mol／L）或SR11237（10^-6mol／L）MFI分别降低到12．60±1．52和17．89±1．91,较ox-LDL单独处理组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论激活核受体RXR能够部分抑制ox-LDL诱导巨噬细胞向树突状细胞分化,其机制可能与减轻细胞氧化应激损伤有关。     

初诊2型糖尿病患者铁代谢与胰岛β细胞功能的关系

采用酶联免疫吸附法检测初诊2型糖尿病患者（T2DM组）及健康对照组血清胰岛素（FINS）、铁蛋白（FT）、转铁蛋白（TRF）水平，生化法检测空腹血葡萄糖（FPC）、血清铁（Fe）、总铁结合力（TIBC）、血脂水平。结果与对照组比较，T2DM组FPG、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及FT升高，胰岛素分泌指数（HOMA-IS）及β细胞功能指数（HOMA-β）降低（P均〈0．05）；FT与HOMA-IR及TIBC与HOMA-β均呈正相关（r=0．34、0．38，P均〈0．05）。提示铁超载可能通过增加胰岛素抵抗、降低胰岛β细胞功能而引发T2DM。     

Kruppel样因子4抑制巨噬细胞向破骨细胞分化介导平滑肌细胞钙化

目的 探讨Kruppel样因子4(KLF4)在巨噬细胞向破骨细胞分化中的作用及相关机制.方法 提取雄性C57BL/6J小鼠腹腔原代巨噬细胞并鉴定,将其分为对照组,NF-κB受体激动剂配体(RANKL)组,共刺激组(KLF4抗体和RANKL共刺激4 d),用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞分化情况,用鬼笔环...     

Calpain及抑制剂对小鼠破骨细胞分化的作用

目的 探讨Calpain及其抑制剂Calpastatin能否抑制核因子-κB活化受体配体(receptor activatorof NFκB ligand,RANKL)诱导的小鼠破骨细胞分化.方法 体外培养小鼠RAW264.7细胞,在诱导组分别加入不同浓度的RANKL(0、20、50、70、100ng/mL),并另设抑...     

黄芪多糖对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出及PPARγ表达的影响

目的 以RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,观察不同浓度黄芪多糖（APS）对细胞内胆固醇流出及PPARγ表达的影响,探讨可能作用机制.方法 将RAW264.7细胞诱导分化为泡沫细胞,用油红O染色法鉴定.不同浓度APS作用泡沫细胞48 h后,液体闪烁计数仪检测胆固醇的流出率,并用RTPCR及ELISA测定PPARγ的基因及蛋白表达.结果 ①巨噬细胞经氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导48 h后转化为泡沫细胞.②与对照组相比,不同浓度APS干预组泡沫细胞的胆固醇流出率上升（P＜0.01）,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性.③与对照组相比,不同浓度APS干预组泡沫细胞内PPARγ的基因表达上调（P＜0.01）,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性.④与对照组相比,20、50、100 mg/L浓度APS干预组泡沫细胞内PPARγ的蛋白表达增加（P＜0.01）.结论 ①经ox-LDL诱导后,巨噬细胞分化为泡沫细胞,细胞内脂质大量增加.②APS促进巨噬细胞内胆固醇流出,可能与上调细胞内PPARγ的表达有关.     

右归饮对类固醇激素性股骨头坏死大鼠成骨-破骨体外共育体系中破骨细胞分化的影响

目的 探讨右归饮对激素性股骨头坏死（SINFH）大鼠成骨-破骨体外共育体系中破骨细胞（osteoclast,OC）生长分化的影响.方法 雄性SD大鼠70只,体重（100±20）g,用随机数字表法取30只用醋酸泼尼松龙49 mg/kg·d肌内注射造模,1周后随机抽取2只造模大鼠进行组织病理观察确定造模成功.40只正常大鼠随机分为高、中、低右归饮给药组及蒸馏水组.从造模大鼠股骨、胫骨分离培养成骨细胞（osteoblast,OB）和OC诱导5 d,将OB以1×105/mL密度接种于成骨-破骨细胞共育体系中,分别以蒸馏水血清（对照组）、低（0.5 mL/100 g）、中（1.0 mL/100 g）、高（2.0 mL/100 g）浓度右归饮含药血清作用于OB-OC共育体系.用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）鉴定OC和阳性多核细胞计数,用RT-PCR方法测定RANKL mRNA表达水平变化.结果 与蒸馏水组比较,高、中浓度右归饮组TRAP染色阳性破骨细胞数量均显著减少（P＜0.01）;RANKL基因表达水平明显降低（P＜0.01）,高浓度右归饮组与低、中浓度组比较RANKL基因表达水平显著降低（P＜0.01、P＜0.05）.结论 一定浓度的右归饮对SINFH大鼠体外成骨-破骨共育体系破骨细胞形成、分化有抑制作用,以高浓度右归饮作用最强.     

PPARs激动剂对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 探讨PPARs激动剂吡格列酮对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响.方法 首先用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）将体外培养的RAW264.7巨噬细胞诱导分化为泡沫细胞,然后进行油红O染色,并在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化;再以不同浓度吡格列酮（0 μmol/L、5 μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L）作用泡沫细胞24h,以30 μmol/L的吡格列酮作用0h、6h、12h、24 h、48 h;最后酶法检测泡沫细胞内胆固醇的含量.结果 ①50 mg/Lox-LDL诱导巨噬细胞48 h后分化为泡沫细胞.②与对照组相比,不同浓度吡格列酮作用后泡沫细胞内胆固醇含量均减少,差异有统计学意义（P＜0.01）,且呈剂量依赖性.③与对照组相比,30 μmol/L的吡格列酮作用6h、12 h、24 h、48 h后,泡沫细胞内胆固醇含量均减少,差异有统计学意义（P＜0.01）,且呈时间依赖性.结论 PPARs激动剂吡格列酮能够减少泡沫细胞内胆固醇含量,且呈剂量和时间依赖性。     

黄芪多糖对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 探讨黄芪多糖(APS)对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响.方法采用体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导,建立泡沫细胞模型.用油红O染色在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化.再以不同浓度APS(0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)作用泡沫细胞24 h;以100 mg/L APS作用泡沫细胞不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h、48 h)后,酶比色法检测泡沫细胞内胆固醇的含量.结果①巨噬细胞经ox-LDL诱导48 h后转化为泡沫细胞.②与对照组相比,10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L的APS作用于巨噬细胞源性泡沫细胞24 h后,细胞内胆固醇含量均明显减少(P＜0.01).③与对照组相比,100 mg/L的APS作用于巨噬细胞源性泡沫细胞6 h、12 h、24 h、48 h,细胞内胆固醇含量均明显减少(P＜0.01).结论①巨噬细胞经ox-LDL诱导后,有大量泡沫细胞形成.②APS可减少RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量.     

CCN 3对骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化的影响

目的：探讨肾母细胞瘤过度表达基因（CCN3）对骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）向内皮细胞分化的影响。方法：以含50ng/ml血管内皮生长因子培养基诱导 BM-MSCs向内皮细胞分化作为阳性对照组,以含100ng/ml重组CCN3蛋白并50ng/ml血管内皮生长因子培养基诱导BM-MSCs向内皮细胞分化作为CCN3组,并以单纯完全培养基培养BM-MSCs为阴性对照组,采用细胞免疫荧光化学法和半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检查诱导16 d后假性血友病因子（vWF）表达以评价内皮细胞分化,以半定量 RT-PCR法检测 BM-MSCs 诱导分化前后Notch1基因mRNA表达。结果：BM-MSCs 诱导分化16d 后,阳性对照组可见部分细胞 vWF 荧光染色阳性, CCN3组阳性染色细胞明显多于阳性对照组,且 vWF mRNA 表达明显强于阳性对照组[吸光度（OD）值比：（0.550±0.090）比（0.358±0.080）,P＜0.01],阴性对照组未见阳性染色细胞;此外,诱导分化前,三组Notch1基因mRNA均呈低表达,组间两两比较无明显差异（P 均＞0.05）,诱导分化16d后阳性对照组和 CCN3组 Notch1基因 mRNA表达明显强于阴性对照组[OD值比：（0.232±0.047）、（0.352±0.029）比（0.132±0.033）,P均＜0.01],但与阳性对照组相比,CCN3组 Notch1基因 mRNA表达明显更高（P＜0.01）。结论：肾母细胞瘤过度表达基因通过激活 Notch1信号通路可增强骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化的能力。     

压力 - 容积曲线低位转折点选择呼气末正压在 ARDS 应用价值简

目的 探讨根据压力-容积曲线低位转折点选择相同呼气末正压在ARDS的临床应用价值.方法 选择急性呼吸窘迫综合征患者49例,分为两组,其中观察组25例通过呼气末正压等于压力-容积曲线低位转折点值,对照组24例,则不使用呼气末正压处理,比较两组患者血流动力学变化、血气结果及肺呼吸力学特征.结果 观察组平均动脉压高于对照组（P〈0.05）,中心静脉压低于对照组（P〈0.05）,肺动脉楔压低于对照组（P〈0.05）,pH高于对照组（P〈0.05）,PaO2和PaO2/FiO2高于对照组（P〈0.05）,且PaCO2低于对照组（P〈0.05）,吸气峰压和平均气道压均低于对照组（P〈0.05）,且肺顺应性小于对照组（P〈0.05）.结论 根据压力-容积曲线低位转折点选择相当的呼气末正压水平能有效改善患者肺功能,维持循环功能稳定,值得临床重视.     

氨氯地平联合厄贝沙坦治疗老年(≥80岁)高血压的临床疗效观察

目的观察氨氯地平联合厄贝沙坦治疗老年(≥80岁)高血压的临床疗效。方法选择2012年6月—2013年12月我院内科门急诊收治的老年(≥80岁)高血压患者66例,将其随机分为观察组34例和对照组32例。对照组给予氨氯地平治疗,观察组给予氨氯地平联合厄贝沙坦治疗。4周为1个疗程,比较两组患者治疗前后血压变化、临床疗效及治疗期间不良反应情况。结果观察组总有效率为94.1%,高于对照组的71.9%(P0.05)。治疗前两组患者舒张压和收缩压比较,差异无统计学意义(P0.05);治疗后观察组患者舒张压和收缩压低于对照组(P0.05);观察组不良反应发生率为11.8%,对照组为12.5%,差异无统计学意义(P0.05)。结论氨氯地平联合厄贝沙坦治疗老年(≥80岁)高血压安全有效。     

进展性脑卒中的影响因素研究

目的探讨进展性脑卒中的影响因素,为临床提供参考。方法选择2011年1月—2013年6月在我科住院的进展性脑卒中患者27例作为研究组,非进展性脑卒中患者49例作为对照组。回顾性分析两组患者的既往史和个人史,生化指标,发热情况及颈动脉狭窄程度、斑块情况,同时分析研究组患者颅脑MRI和/或MRA检查结果。结果研究组患者糖尿病病史阳性率高于对照组(P0.05);两组患者高血压、脑卒中、冠心病病史及吸烟、饮酒史阳性率比较,差异均无统计学意义(P0.05)。研究组患者空腹血糖高于对照组,高密度脂蛋白胆固醇低于对照组(P0.05);两组患者总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、同型半胱氨酸、纤维蛋白原、血尿酸比较,差异均无统计学意义(P0.05)。研究组患者颈动脉不稳定斑块检出率高于对照组(P0.05);两组患者发热率、颈动脉狭窄率比较,差异均无统计学意义(P0.05)。颅脑MRI检查结果示,研究组患者梗死灶多位于基底核区,其中前循环梗死18例、后循环梗死4例、多发腔隙性梗死5例;8例患者颅脑MRA检查示血管狭窄,其中大脑中动脉狭窄5例、大脑前动脉狭窄2例、大脑后动脉狭窄1例。结论有糖尿病病史、空腹血糖升高、高密度脂蛋白胆固醇降低及颈动脉不稳定斑块是进展性脑卒中的主要影响因素,临床上应重视合并上述影响因素的脑卒中患者。     

厄贝沙坦氢氯噻嗪联合瑞舒伐他汀治疗原发性高血压伴左心室肥厚的疗效研究

目的观察厄贝沙坦氢氯噻嗪(安博诺)联合瑞舒伐他汀治疗原发性高血压(EH)伴左室肥厚(LVH)的疗效。方法选取2011年2月—2012年12月我院收治的EH伴LVH患者95例,将其随机分为对照组47例和治疗组48例。对照组常规服用安博诺治疗,治疗组在对照组基础上加用瑞舒伐他汀治疗,两组均治疗6个月。观察治疗前后两组舒张末期室间隔厚度(IVST)、舒张末期左室后壁厚度(PWT)、舒张末期左室内径(LVDd)、左心室质量指数(LVMI)等的变化,并比较不良反应发生情况。结果治疗前两组LVDd、IVST、PWT、LVMI比较,差异均无统计学意义(P0.05);治疗后治疗组LVDd、IVST、PWT、LVMI均低于对照组(P0.05)。对照组不良反应发生率为6.4%(3/47),治疗组为4.2%(2/48),两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论安博诺联合瑞舒伐他汀能有效逆转EH患者的LVH,改善左心室功能,较单一用药疗效显著。