丝素蛋白-丹参多功能生物敷料的制备及其组织相容性研究

目的:以丝素蛋白?丹参为主要原料研制一种新型的创伤敷料,评价其作为医用生物材料的安全性?方法:制备丝素蛋白三维材料,载入丹参,制得丝素蛋白-丹参多功能生物敷料,进行组织相容性试验,包括细胞毒性试验?刺激性试验?过敏性试验和遗传毒性试验?结果:制备的丝素蛋白-丹参多功能生物敷料的细胞毒性试验?刺激性试验?过敏性试验和遗传毒性试验结果呈阴性?结论:丝素蛋白-丹参多功能生物敷料具有良好的生物相容性,无不良反应,是可以安全使用的医用生物材料?     

丝素蛋白支架材料生物可控降解性的研究进展

 丝素蛋白是目前组织工程领域研究较为广泛的生物支架材料之一,其降解速率受许多因素的影响,通过控制这些影响因素,有望对丝素蛋白的降解速率进行更可靠的控制。本文通过查阅国内外关于丝素蛋白生物材料降解性的研究文献,对丝素蛋白支架材料生物学可控降解性的研究进展作一综述。     

Ⅰ型胶原在丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料修复兔股骨缺损中的表达

目的 通过检测Ⅰ型胶原蛋白的表达,评价丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料的体内成骨性能. 方法 将丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料(实验组)和羟基磷灰石(对照组)分别植入新西兰大白兔股骨髓腔内,分别在4周、8周、12周时取出标本,采用免疫组织化学染色方法进行Ⅰ型胶原染色,应用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统进行Ⅰ型胶原蛋白积分光密度测量,评价其成骨特性. 结果 显微镜观察及Ⅰ型胶原蛋白积分光密度测量结果显示,在同一时间点,丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料成骨性能均高于对照组(P＜0.05). 结论 丝素蛋白-羟基磷灰石类骨质复合生物材料可以增强成骨细胞基质分泌,有效促进新骨形成,具有良好的体内成骨性能.     

蚕丝丝素膜AFP免疫传感器的研究

目的:探索用新型生物材料蚕丝丝素膜制备免疫传感器实现对样本中抗原或抗体的检测.方法:以蚕丝丝素蛋白作为电极敏感膜载体制成抗体膜电极,再以蚕丝丝素空白膜电极作为外参比电极,两者与离子计一起共同组成膜电位测定体系,对AFP进行直接电位法测定,并与电化学发光免疫法比较.结果:家蚕丝素经高浓度中性盐氯化钙溶解后制备的蚕丝丝素膜光亮透明,厚薄均匀,机械性能好,生物大分子经丝素膜固定后,活性较高、性能稳定、能长期存放.该方法简单快速、不需标记、无污染、成本低.灵敏度达到μg/L数量级,线性范围为10～400 μg/L,线性相关系数r=0.987.结论:由蚕丝丝素膜制备的电化学免疫传感器有一定的研究应用价值,但其响应低的问题还有待进一步改进.     

星点设计-效应面法优化丝素蛋白微球的制备工艺

目的:以丝素蛋白为原料制备丝素蛋白微球,并以均匀度(Y)为指标筛选出丝素蛋白微球的最佳制备工艺。方法:以丝素蛋白溶液为水相,以液体石蜡为油相,以戊二醛为交联剂,以Span80为乳化剂,应用乳化-化学交联法制备丝素蛋白微球;用星点设计对丝素蛋白微球的制备工艺进行优化。结果:制得的丝素蛋白微球圆整,其粒径在常规粒径范围1~250μm内;用星点设计优化后的方案为:液体石蜡与丝素蛋白溶液的比例为10∶1,液体石蜡与乳化剂的比例为10%,液体石蜡与戊二醛的比例为33.34∶1。结论:以丝素蛋白为原料,制得了丝素蛋白微球,为后期将丝素蛋白微球作为药物载体的研究奠定基础。     

丝素蛋白作为生物材料的基础研究

研究丝素蛋白作为动物细胞生长基质和生物材料对于细胞生长的促进作用,探索丝素薄膜性能的进一步优化。通过细胞计数和噻唑蓝(MTT)法实验表明,丝素薄膜上猪髋动脉内皮细胞生长的密度是普通细胞培养基质上的242.01%,细胞在薄膜上的贴壁率为在普通基质上的238%。经由酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)处理后,薄膜上的细胞生长密度是未经处理薄膜上的115.98%,细胞的贴壁率为在普通细胞培养基质上的269%。因此,丝素蛋白薄膜可作为动物细胞生长基质,经aFGF处理的薄膜显示更优越的细胞亲和性。     

丝素蛋白在组织工程中的应用和降解性研究

丝素蛋白在生物医学广为应用。经过几十年的研究应用,人们发现丝纤维在许多临床应用当中都有应用价值。然而与此同时,这种蛋白会引起一些生物反应,这就对其生物相容性提出了质疑。经过大量的研究,明确认识到蚕丝表面的丝胶蛋白是在蚕丝的生物相容性和超敏反应中引起不良反应的主要因素。如果将蚕丝外层的丝胶蛋白去掉,机体对剩余的丝素蛋白(丝心蛋白)的生物反应就与其他大部分常用的生物材料相似。另外,有学者认为蚕丝不能降解。但     

丝素蛋白壳聚糖三维支架的构建及其生物相容性

目的: 筛选出最适合用于骨组织工程的丝素蛋白壳聚糖三维支架比例。方法: 将提取的丝素蛋白溶液与壳聚糖溶液以不同质量比混合,冷冻干燥后构建以下各组丝素蛋白壳聚糖三维多孔支架：20%丝素蛋白 ∶80%壳聚糖（20%丝素蛋白组）、30%丝素蛋白 ∶70%壳聚糖（30%丝素蛋白组）、40%丝素蛋白 ∶60%壳聚糖（40%丝素蛋白组）、50%丝素蛋白 ∶50%壳聚糖（50%丝素蛋白组）、纯丝素蛋白组、纯壳聚糖组。采用扫描电镜观察各组三维支架表面形态;将MG-63细胞与丝素蛋白/壳聚糖三维支架共培养（对照组采用盖玻片培养MG-63细胞）,通过细胞计数计算细胞黏附率,通过MTT检测细胞增殖;通过扫描电镜观察MG-63细胞在40%丝素蛋白、50%丝素蛋白三维支架中的形态分布;采用pNPP显色液检测40%丝素蛋白、50%丝素蛋白三维支架中MG-63细胞碱性磷酸酶（ALP）含量。结果： 不同比例丝素蛋白/壳聚糖三维支架中,50%丝素蛋白、40%丝素蛋白支架表面孔隙结构相对规则;黏附率结果显示,三维支架中丝素蛋白含量最少时,支架的细胞黏附率也最低;MTT显示50%丝素蛋白组细胞增殖能力强于其他组支架;MG-63细胞与支架共培养时,50%丝素蛋白支架中细胞量多于40%丝素蛋白组;在共培养第5天,50%丝素蛋白组细胞分泌的ALP含量高于40%丝素蛋白组。结论： 质量比为1 ∶1的丝素蛋白壳聚糖支架孔隙结构规则,最适合成骨细胞MG-63的黏附、增殖。     

丝素蛋白生物支架在皮肤组织工程中的研究进展

丝素蛋白具有良好的生物相容性和独特的力学性能,已广泛应用于生物医学领域。丝素蛋白经加工处理可制备成丝素蛋白膜、丝素蛋白水凝胶、丝素蛋白多孔三维支架、丝素蛋白纳米纤维等多种形态。当皮肤受到严重损伤时,临床通常采用皮肤移植的方法对损伤进行修复,皮肤组织工程为皮肤移植提供了新方向。丝素蛋白生物支架能为创面皮肤的细胞增殖和迁移提供有序的三维空间结构,促进皮肤组织再生,有助于创面愈合。丝素蛋白生物支架有望有成为理想的皮肤三维仿生支架。     

生物材料在核酸疫苗中的应用

核酸疫苗具有很多传统疫苗不能比拟的优势,是现代疫苗研发的新热点。然而,与传统疫苗相比,裸露的核酸疫苗最大的缺陷是不能引发足够强的免疫应答。因此,科学家们利用生物材料作为核酸疫苗的载体,以颗粒或非颗粒的形式帮助它克服各种人体障碍进入细胞,并保护其活性,从而提高核酸疫苗的免疫应答强度和效率。设计高效、低毒的疫苗载体有众多因素需要考虑,如疫苗的制备方法和配方比例、生物材料与疫苗之间的相互作用、生物材料的化学和物理性能、材料的微观和宏观形态等。本文就以上因素进行概括总结,以使读者了解生物材料在核酸疫苗方面的研究现状。     

单宁酶粉剂的制备工艺研究

目的制备单宁酶粉剂,为单宁酶的广泛应用奠定基础。方法通过五倍子生料固体发酵产单宁酶,提取酶液利用冷冻干燥法制备单宁酶粉剂。结果冷冻干燥8h后酶液脱水率达到94％,比较酶活力后发现加入1％聚乙二醇为保护剂的固体酶粉剂表现出良好的稳定性,一个月后仍能保持91％的活性。结论冷冻干燥法是一种制备单宁酶粉剂的简便有效的方法。     

端粒酶在宫颈癌中的表达及意义

目的　探讨端粒酶与宫颈癌及与淋巴结转移的关系。方法　采用银染色端粒酶重复扩增法(TRAP)检测各类宫颈组织中端粒酶活性。结果　正常宫颈、慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变组织端粒酶的阳性表达率分别为 6 .6 7%、8.5 7%、2 6 .32 % ,与宫颈癌组织阳性表达率 (78.85 % )比较具有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ;宫颈癌组织无或有淋巴结转移其端粒酶活性阳性表达率分别为 6 9.70 %、94 .74 % ,两者之间比较亦有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　端粒酶活性在宫颈癌组织中增高且与淋巴结转移相关     

壳聚糖修饰L-天门冬酰胺酶对酶活及抗原的影响

采用水溶性壳聚糖对L－天门冬酶胺酶进行化学修饰，修饰后的酶活回收率高达705，修饰酶的比活为每毫克蛋白质121.79U，pH值为7.4，更接近于人体血浆pH值(7.2-7.4），对底物的亲和力有所提高，稳定性增加，抗原性仅为自然酶的1／3，增加了临床使用的安全性。     

叶下珠属4种植物花粉形态学、酶组分及应用的研究

目的研究叶下珠属4种植物花粉的形态、酶组分含量及药效作用.方法在光学显微镜和扫描电镜下观测花粉形态,用生化仪测定其所含8种酶组分含量,以花粉提取液来做小白鼠肝细胞损伤后的药效试验.结果4种植物花粉形态不同、酶组分含量各异,其花粉提取液有不同程度的降酶作用.结论形态结构及酶组分有差异的叶下珠花粉液均有降酶保肝作用,显示了叶下珠花粉是一种有开发前景的粉源植物药.     

麻疹患者心肌酶临床特点与分析

目的：通过对137例麻疹病人心肌酶进行临床分析，探讨麻疹患者心肌酶变化情况。方法：对麻疹患者，其中成人57例，儿童80例进行心肌酶检测，并分析结果。结果：麻疹患者常出现心酶升高，其中AST升高成人占80．7％，儿童占100％；CK升高成人占38．5％，儿童占38．75％；CKMB升高成人占3．5％，儿童占38．75％，HBDH升高成人占45．6％，儿童占97．5％，LDH升高成人占71．9％，儿童占100％。结论：麻疹患者常伴有心肌酶升高，且儿童较成人更常见。故对于麻疹患者，特别儿童患者须注意检测心肌酶谱，注意合并心肌炎的防治。     

69例新生儿败血症心肌酶测定的临床分析

目的 :探讨新生儿败血症治疗前后心肌酶值变化的临床意义 ,以指导临床治疗。方法 :6 9例新生儿败血症 ,分别在治病前及治疗后 2周测定心肌酶值 ,5 3例作心电图检查。结果 :①新生儿败血症治疗前心肌酶值 1 0 0 %增高 :治疗后心肌酶值全部下降 ,治疗前后对比 ,有显著差异 (P <0 .0 5 )。②同时查心电图治疗前后对比 ,有显著性差异 (p <0 .0 5 )。③心肌酶增高与胎龄无关 ,足月儿与早产儿败血症患儿心肌酶值经统计学处理无显著差异 (p >0 .0 5 )。结论 :新生儿败血症有心肌细胞的损害 ,经积极抗感染和营养心肌治疗 2周后复查 ,心肌酶值全部下降 ,心电图恢复正常 ,考虑心肌损害为可逆性。     

盐胁迫下白花前胡香豆素合成途径关键酶基因生物信息学分析

目的 系统研究白花前胡香豆素合成途径关键酶基因的蛋白结构特征,并明确关键酶基因在盐胁迫下的表达模式。方法 通过白花前胡前期转录组测序,确定前胡香豆素生物合成关键酶基因的序列,利用蛋白质结构分析预测软件对关键酶蛋白进行系统预测分析,并通过qRT-PCR分析盐胁迫下关键酶基因的变化规律。结果 关键酶基因编码蛋白都有着各自特殊的保守结构域和三级结构;0.15 mol/L NaCl处理4 h对PAL和4CL基因的表达水平影响最高,比对照组上调1倍;而COMT-S和GXM在不同处理时间下,基因表达水平均明显下降。结论 受盐胁迫后上调表达的香豆素合成途径关键酶基因,可以提高植物对逆境胁迫的耐受性。     

The purification of nucleoside diphosphate kinase from rat brain.

Nucleoside diphosphate kinase from the cytosol of rat brain was purified to electrophoretic homogeneity through a series of chromatography columns, including DE-52, AcA-34 Ultrogel, phenyl-Sepharose and Q-Sepharose. The molecular weight of the enzyme was 64,000 as estimated by gel filtration, and it consisted of 3 identical 19,000 subunits. [35S]-GTP gamma S binding and autophosphorylation of the enzyme, and inhibition of the GTPase activity of G-protein were used to screen for the enzyme. These methods were shown to be useful for purifying and assaying the enzyme.     

胆红素氧化酶及其变异体在胆红素血症评价中的应用

目的 探讨胆红素氧化酶中配位氨基酸对保持酶活性的重要性和酶促反应的动力学,并评价胆红素氧化酶突变体能否作为一种更好的高胆红素血症的诊断试剂。方法 胆红素氧化酶突变体I402G和C457S通过聚合酶链反应获得,并经氨基酸序列测定加以证实。钌搀杂的突变体C457S通过变异体与钌配合物的直接反应得到。研究了重组胆红素氧化酶及其变异体的光谱学性质,以及重组胆红素氧化酶和变异体I402G的酶促反应的动力学。结果 变异体I402G和C457S被成功的表达和纯化。变异体I402G表现出较低的活性(1.67U/mg),C457S则完全失去了活性(0U/mg),但是钌搀杂的突变体C457S表现出较高的活性(5.50和6.42U/mg)。光谱学实验结果表明I402G突变体在较低的pH时第一类铜呈+1价态,即还原态;突变体C457S中失去第一类铜,使得突变体无法保持完整的活性中心,从而失去了酶活性。酶促反应的动力学实验显示重组胆红素氧化酶和变异体I402G动力学参数k_cat分别为235.8min^-1和6.9min^-1,说明重组胆红素氧化酶具有很高的催化能力。结论 配位的氨基酸对保持重组胆红素氧化酶及其变异体活性中心的完整性和酶活性具有重要的意义。重组胆红素氧化酶远比突变体I402G和C457S的活性高,说明突变体I402G和C457S不适合作为诊断试剂。钌搀杂有助于在突变体C457S中形成新的完整的活性中心,从而产生酶活性。     

胆红素氧化酶及其变异体在胆红素血症评价中的应用

目的探讨胆红素氧化酶巾配位氨基酸对保持酶活性的重要性和酶促反应的动力学，并评价胆红素氧化酶突变体能否作为一种更好的高胆红素血症的诊断试剂方法胆红素氧化酶突变体1402G和C457S通过聚合酶链反应获得，并经氨基酸序列测定加以证实.钌搀杂的突变体C457S通过变异体与钌配合物的直接反应得到。研究了重组胆红素氧化酶及其变异体的光谱学性质，以及重组胆红素氧化酶和变异体1402G的酶促反应的动力学：结果变异体1402G和C457S被成功的表达和纯化变异体1402G表现出较低的活性（1．67U／mg），C457S则完全失去了活性（0U／mg），但是钌搀杂的突变体C457S表现出较高的活性（5．50和6．42U／mg）.光谱学实验结果表明1402G突变体在较低的pH时第一类铜呈＋1价态，即还原态：突变体C457S中失去第一类铜，使得突变体无法保持完整的活性中心，从而失去了酶活性．酶促反应的动力学实验显示重组胆红素氧化酶和变异体1402G动力学参数kca.分别为235．8min^-1。和6．9min^-1，说明重组胆红素氧化酶具有很高的催化能力结论配位的氨基酸对保持重组胆红素氧化酶及其变异体活性中心的完整性和酶活性具有重要的意义：重组胆红素氧化酶远比突变体1402G和C457S的活性高，说明突变体1402G和C457S不适合作为诊断试剂.钌搀杂有助于在突变体C457S中形成新的完整的活性中心，从而产生酶活性。