树突状细胞疫苗对人肺腺癌GLC-82细胞体外杀伤作用的实验观察

目的 通过建立负载人肺腺癌细胞株GLC-82可溶性抗原的树突状细胞(DC)疫苗,探讨应用DC疫苗的致敏特异性杀伤性T细胞(CTL)体外杀瘤细胞的可行性和实验条件,为后期l临床应用提供实验依据.方法 通过用定量摩尔氯化钾提取法获得人肺腺癌细胞GLC-82的可溶性抗原多肽(TSA),从人外周血单核细胞(PBMC)中用GM-CSF、白细胞介素-4和肿瘤坏死因子-α体外诱导扩增并鉴定获取DC,构建DC疫苗;利用DC疫苗刺激同种异体外周血T淋巴细胞活化增殖,诱导产生具有识别肺癌细胞抗原的特异性CTL的可行性及MTT法检测该CTL对GLC-82、肺癌CALU-6和人红白血病K 562细胞的体外杀伤效应.结果 人PBMC体外经7d诱导出的DC,经形态学、免疫组化证实具有典型的树突状细胞特性;负载GLC-82抗原的DC疫苗能有效诱导同种异体T淋巴细胞活化增殖产生CTL,最适浓度为1:10;诱导活化的CTL对靶细胞的杀伤活性明显高于未经肿瘤抗原致敏的组.结论 诱导培养人外周血PBMC中的Mo可获取大量DC,诱导出的DC功能较强,适宜临床应用;DC疫苗能强烈刺激初始型同种异体T淋巴细胞增殖产生CD 8+表达增加的CTL;激活的CTL对肺癌靶细胞发挥高效而特异的细胞毒效应,对非肺组织瘤靶细胞也具有非特异性杀伤效应.     

K562白血病株树突状细胞诱导及其抗肿瘤功能的体外研究

目的将K562细胞诱导分化为树状突细胞(DC),并以K562-DC作为刺激细胞诱导细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应,观察其体外特异性抗肿瘤效应,对白血病细胞来源DC用于白血病免疫治疗进行初步探讨。方法(1)低浓度丙戊酸钠将K562细胞诱导分化为DC(K562-DC)。(2)DC的鉴定:①形态学:倒置显微镜(Olympus)下观察细胞形态并摄相。②免疫表型:PE结合的鼠抗人CD1a、HLADR、CD83、CD80及CD86单抗用流式细胞仪分析检测细胞表面标志。③功能鉴定:采用同种异体混合淋巴细胞反应。(3)MTT杀伤实验检测DC诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞的杀伤活性。结果(1)丙戊酸钠(VPA)培养第7天时,细胞均匀分散,变形,体积增大,数量增多,细胞表面可见多个突起,且具有刺状突起的细胞数量较前增多。(2)通过流式细胞术检测诱导的K562DC表面分子的表达,结果发现丙戊酸钠(VPA)诱导的K562DC各表面标志的表达,与K562细胞相比均明显上调(P<0.05)。(3)丙戊酸钠(VPA)诱导的K562DC具有较强的诱导CTL杀伤肿瘤细胞的能力且随效靶比例增高而增强,并显著高于未负载肿瘤可溶性抗原的DC及单纯T细胞组(P<0.05)。结论以K562细胞为靶细胞,观察VPA对K562细胞诱导向树突状细胞分化作用。进一步的实验证实,VPA可以诱导K562细胞向树突状细胞分化,而且诱导的树突状细胞具有较强的抗原呈递功能和诱导特异性细胞毒性T淋巴细杀伤活性作用。     

急性粒细胞白血病可溶性蛋白抗原诱导细胞毒性T淋巴细胞抗白血病作用

目的探索纳米粒包裹白血病可溶性蛋白抗原致敏树突状细胞介导的细胞毒性T淋巴细胞对白血病细胞的抑制作用。方法体外培养树突状细胞。冻融法制备白血病细胞可溶性蛋白抗原．用自制的纳米粒包裹抗原并致敏DC,在体外诱导出特异性CTL．采用MTT法测定CTL活性。结果用人骨髓单个核细胞诱生树突细胞,通过形态、表型及功能进行综合鉴定。利用去溶剂化法制备出白蛋白纳米粒并包裹抗原。体纳米粒包裹抗原组CTL活性强于未包裹组,两者有明显差异（P〈0．05）。结论用白血病细胞可溶性蛋白抗原及纳米粒包裹的抗原均可诱导特异性的抗自血病CTL作用．后者的CTL活性明显高于前者。通过DC介导特异性CTL可有效地抑制白血病细胞,是一种实用而可行的治疗方法。具有良好的临床应用前景。     

胎儿来源的树突状细胞诱导抗膀胱癌效应的研究

目的：研究胎儿来源的树突状细胞（DC）体外诱导抗膀胱癌的特异性细胞免疫的效果.方法：从胎儿骨髓获得单个核细胞,经粒细胞-单核细胞集落刺激因子（GM-CSF）、IL-4和TNF-α诱导产生DC.利用50%～70%硫酸铵饱和沉淀法获取膀胱癌细胞系EJ含热休克蛋白（HSP）成分的细胞溶解物,以该抗原负载DC,激活胎脾细胞产生肿瘤特异性的细胞杀伤性T淋巴细胞（CTL）.利用IL-2刺激胎脾细胞产生LAK细胞.应用MTF法分别检测CTL和LAK细胞对EJ细胞的杀伤效应.结果：胎儿骨髓可诱导出功能成熟的DC,高表达CD1a、CD86、HLA-DR和CD83.负载EJ抗原的DC可诱导产生CD8＋CTL.其对EJ细胞的杀伤作用明显强于LAK细胞.结论：含HSP成分的肿瘤细胞溶解物负载胎儿来源的DC,体外可诱导出更强的特异性抗肿瘤免疫应答.     

灵芝多糖对体外树突状细胞诱导细胞毒性T-淋巴细胞的调节作用(英文)

目的:研究灵芝多糖(Gl-PS)在抗原提呈阶段对体外培养树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T-淋巴细胞(CTL)功能的调节及其机制。方法:体外培养小鼠骨髓来源DC经P815肿瘤细胞冻融抗原冲击致敏,并与不同浓度Gl-PS(0.8,3.2,或12.8 mg/L)共培养。成熟DC与脾淋巴细胞共培养诱导P815特异性CTL生成。第5天收集各组悬浮细胞及培养上清,采用乳酸脱氢酶法比较CTL特异性杀伤活性;RT-PCR法测定T扰素γ(IFNγ)及颗粒酶B mRNA在CTL的表达;ELISA或Western blot法检测IFNγ或颗粒酶B蛋白的表达。结果:3种浓度的Gl-PS均可增高培养上清中释放的LDH活性(P<0.01);增加CTL表达IFN7及颗粒酶B mRNA(IFNγ:Gl-PS 12.8 mg/L组与RPMI-1640组,P<0.05;颗粒酶B:P<0.01);促进CTL培养上清中IFNγ蛋白生成(P<0.05)以及CTL表达颗粒酶B蛋白(Gl-PS 12.8 mg/L组与RPMI-1640组,P<0.05)。结论:Gl-PS可在抗原提呈阶段促进P815肿瘤冻融抗原冲击致敏DC所诱导的特异性CTL的杀伤活性,其机制可能是通过IFNγ及颗粒酶B途径的调节。     

恶性腹腔积液来源的树突状细胞与CIK共培养后对结肠癌细胞体外杀伤作用的研究

目的探讨恶性腹腔积液来源的树突状细胞（DC）与CIK细胞共培养后对SW620结肠腺癌细胞的体外杀伤作用。方法分离15例结肠癌患者的腹腔积液培养获得成熟DC,分离健康人外周血培养获得CIK细胞,DC细胞与CIK细胞共培养,流式细胞仪鉴定表型,MTT法检测各组对结肠癌细胞的体外杀伤作用。结果恶性腹腔积液中存在DC前体细胞,经体外细胞因子诱导培养后可获得成熟的DC细胞,高表达HLA—DR、CD80、CD83、CD86分子。DC与CIK共培养对SW620结肠腺癌细胞的杀伤作用较单独CIK组有明显差异（P〈0．05）。结论腹腔积液中存在DC前体细胞在体外诱导培养可获得功能正常的成熟DC细胞,与CIK共培养后可增强其体外杀伤毒性。     

树突状细胞/肿瘤细胞融合诱导的抗肺癌CTL作用的初步究

目的探讨人源树突状细胞/肿瘤细胞融合诱导的抗肺癌CTL作用。方法培养体系中加入rhGM-CSFrhIL-4rhTNF-α等细胞因子诱导人骨髓来源树突状细胞,并与原代培养的人肺癌细胞融合;以融合细胞诱导外周血产生CTL并测定其细胞毒性。结果骨髓单个核细胞在rhGM-CSFrhIL-4rhTNF-α等细胞因子存在下培养10～12d,出现典型的成熟树突状细胞。体外诱导的人骨髓来源树突状细胞（DC）表达较高水平HLA-DR、CD86。对照DC和肿瘤细胞表达相应检测的单种抗原,而融合细胞两种抗原的表达水平均较高。DC/肺癌细胞融合在体外能有效诱导CTL产生,后者对靶细胞产生较强的细胞毒作用。结论通过本课题的研究证实DC与肿瘤细胞融合技术制备的肿瘤疫苗代表一类更为有效的抗肿瘤免疫策略。     

树突状细胞介导的CTL在裸鼠体内外抑制白血病细胞生长的研究

目的研究白血病细胞可溶性蛋白抗原（SPA）致敏树突状细胞（DC）介导的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应在裸鼠体内、外抑制白血病细胞生长的效应,为白血病DC免疫治疗提供理论依据。方法利用人骨髓单个核细胞（MNC）体外培养DC,经形态、表型及功能综合鉴定。用纳米粒包裹白血病细胞SPA并致敏DC,在体外诱导出特异性CTL,用MTT法测定其活性。另分别将HL-60细胞与淋巴细胞（LC）或与CTL同时注入裸鼠体内,通过肿瘤体积、成瘤时间、肿瘤抑制率等对比各组抑制肿瘤生长的效果。结果（1）培养的DC具有DC的形态特征并高表达CD1a、CD83。（2）MTT法测定各组CTL活性,发现A1组较A2组和A3组、B1组较B2组和B3组有明显差异（均P〈0.05）。A3组及B3组CTL活性最高,A2组及B2组活性次之。（3）在裸鼠体内实验中,1组与2组、3组的肿瘤体积及成瘤天数比较均有明显统计学差异（P〈0.05）,而2组与3组比较却无显著性差异（P〉0.05）;2组与3组肿瘤抑制率分别为（50.70±13.74）%和（52.29±13.68）%。结论在体外实验用白血病细胞SPA及纳米粒包裹的SPA致敏DC,均能可介导较强的CTL作用,且纳米粒包裹SPA组的CTL活性更高。用白血病细胞SPA及纳米粒包裹的SPA致敏的DC在裸鼠体内同样可诱导出较强的CTL作用,表现为肿瘤体积明显小于对照组,成瘤天数也明显晚于对照组,但纳米粒包裹SPA致敏DC组在体内试验中未显示出更强的抑瘤活性。通过DC介导特异性的CTL可有效的抑制白血病细胞,是一种有良好临床应用前景的细胞免疫治疗方法。     

人树突状细胞融合肝癌细胞体外诱导特异性抗肿瘤免疫

目的探讨人树突状细胞（DC）融合肝癌细胞（HCC）体外诱导T淋巴细胞产生特异性抗肝癌免疫的作用。方法应用人重组粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（rhGM—CSF）和重组人白细胞介素4（rhIL-4）对人外周血单个核细胞进行体外诱导产生树突状细胞,流式细胞仪检测DC表面标志物表达水平,聚乙二醇融合DC与肝癌细胞HerG2,MTT法测定融合细胞（HerG2／DC）刺激T淋巴细胞增生、分化能力,细胞毒性实验检测HerG2／DC诱导的细胞毒T淋巴细胞（CTL）对HerG2的特异性杀伤作用。结果融合细胞HerG2／DC刺激T淋巴细胞增值能力明显提高,HerG2／DC活化的CTL对HerG2具有明显的特异性杀伤作用。结论人树突状细胞融合肝癌细胞可有效诱导T淋巴细胞产生特异性的抗肝癌肿瘤免疫。     

来源于干细胞的树突细胞激活免疫细胞对同源白血病干细胞的杀伤作用

目的:探讨白血病干细胞(LSC)来源的树突细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共同培养对自身LSC的杀伤作用.方法:提取慢性粒细胞白血病加速期(CML-AP)患者的骨髓单个核细胞(BMMC),再应用CD34+CD38CD44+标记BMMC,流式分选仪分选出LSC并扩增、诱导出DC.取同源的单个核细胞诱导出CIK.用流式细胞技术检测DC和CIK细胞免疫表型、DC的p-糖蛋白(P-gp)耐药蛋白表达.荧光原位杂交(FISH)技术检测BCR/ABL融合基因在LSC及DC中的表达,乳酸脱氢酶释放法测定效应细胞对靶细胞的杀伤效应.结果:CIK与DC共培养后,CD40、CD80、CD83及人类白细胞抗原(HLA-DR)的构成均高于共培养前;CD3、CD3CD8、CD3CD56的成熟表型表达率高于共培养前,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01).干细胞来源DC的P-gp表达阳性率为(60.61±12.38)％.3种效靶比对应的杀伤率差异有统计学意义(P＜0.01),随着效靶比的增加,细胞杀伤作用增强.结论:白血病干细胞来源DC功能正常,与CIK共培养对自身LSC有杀伤作用.     

Blood substitutes

Red cell substitutes are a group of oxygen carriers designed to temporarily replace transfused blood. Each product is unique in its limitations and advantages. Research and development has been slow because of the far-reaching consequences of replacing an oxygen carrier outside of the red cell. Nevertheless, a number of products are in advanced clinical trials and nearing the market. When they are available for use it is likely that development will accelerate and even better products will substantially alleviate the world-wide shortage of blood for transfusion and enable the delivery of medical care to underserved populations. An important consequence of the development of these products has been a better understanding of how oxygen is delivered to tissues.     

血库在安全输血中的重要性

为了全面发展安全输血事业，除了血液中心或血站与此有非常重要的关系外，血库也是一个极其重要的环节。本文从配血样本的严格把关；技术操作的规范化；科学合理用血；记录与核对；输血前的病毒检验几术方面阐述了安全血液与血库的关系，强调血库的重要性，以全方位保证临床输血安全。     

德阳市中心血站无偿献血血液报废原因及预防对策

目的探讨德阳市中心血站无偿献血血液报废原因及预防对策。方法按卫生部要求对2005至2007年德阳市中心血站无偿献血血液进行血液各种检测项目的初、复检并且进行物理外观检查,对血液报废的原因进行分类、统计。结果2005至2007年度德阳市参加无偿献血者共72150人,其中2005年20892人,2006年23656人,2007年27602人;各年血液报废情况分别为7.53%、6.91%、6.39%,总报废率逐渐降低,实验室检测不合格以ALT为主要因素,其次是梅毒、HbsAg、抗-HCV;HbsAg、抗-HCV呈逐年下降趋势。物理外观检查不合格中以乳糜血和过期为主要原因。结论为减少血液报废,节约血源,针对血液报废的各种因素,采取针对性措施以有效降低血液报废:加强献血知识和献血注意事项的宣传、加强献血者咨询体检工作、规范血液采集、分离、运输等各环节操作和质量管理体系的建设和实施,加强血液库存调控策略的实施。     

有机硒降小鼠血糖和血脂作用的实验研究

目的:探讨有机硒对糖尿病小鼠血糖和高脂血症小鼠血脂的影响。方法:小鼠180只随机分为6组,对照1组、糖尿病模型组、治疗1组、对照2组、高脂模型组和治疗2组,每组30例,雌雄各半。治疗组给予有机硒蛋白粉,对照组和疾病模型组给予等容积的自来水,末次给药后取血,测定空腹血糖、血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。结果:治疗结束时糖尿病模型组和治疗1组小鼠血糖均高于对照1组;治疗1组小鼠血糖低于糖尿病模型组。高脂模型组TC、TG、LDL-C和HDL-C均显著高于治疗2组和对照2组;治疗2组血清TC、TG、LDL-C和HDL-C均高于对照2组。结论:有机硒蛋白粉具有显著降低高脂血症小鼠血脂和糖尿病小鼠血糖的作用。