参术胶囊对脾虚胃癌小鼠细胞凋亡线粒体途径上游基因的影响

<正>前期研究表明,具有健脾功效的中药五类新药参术胶囊对胃癌及癌前病变具有治疗和预防作用[1-3],但其机制尚未完全阐明。目前,用药物治疗肿瘤的重要机制之一就是诱导细胞凋亡[4]。为研究参术胶囊治疗胃癌与诱导细胞凋亡之间的关系,我们采用免疫组化法研究参术胶囊对脾虚胃癌小鼠细胞凋亡线粒体途径上游基因的影响。     

九节龙皂苷对小鼠胰腺癌p53、Bcl-2和Bax表达的影响

目的通过观察九节龙皂苷在胰腺癌发病不同阶段中对凋亡调控基因的影响,初步探讨九节龙皂苷防治肿瘤作用可能存在的分子机制。方法利用二甲基苯并蒽诱发的实验性胰腺癌小鼠模型,采用免疫组化染色的方法,分别标记p53、Bcl-2和Bax阳性细胞,分阶段动态观察九节龙皂苷对各种蛋白表达的影响。结果实验开始,预防组、治疗组的p53阳性率与对照组差别就均有统计学意义(P均<0.01);随实验观察时间延长,p53表达达到高峰,Bax则呈逐渐升高趋势,而Bcl-2和Bcl-2/Bax比值分别在第2和第3阶段达到峰值后呈下降趋势。至实验结束时,预防组p53、Bcl-2以及Bcl-2/Bax比值均低于对照组(除p53外,P均<0.05),而治疗组与对照组仅Bax差别具有统计学意义(P<0.01)。结论九节龙皂苷可能通过抑制突变型p53和Bcl-2的表达,诱导细胞凋亡,从而抑制胰腺癌瘤形成和发展。     

葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制研究

目的观察葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTr比色法和流式细胞术检测葛根素对H446细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用;免疫组化法检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果40、80μg/ml浓度的葛根素体外作用24、48h,对H446细胞有促增殖作用,在160—640μg／ml浓度范围内,葛根素能够抑制H446细胞的生长,并呈现良好的剂量依赖和时间依赖关系。435μg/ml的葛根素可以诱导H446细胞凋亡。检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响显示葛根素能够下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达。结论在一定浓度范围内,葛根素可能通过下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达而诱导H446细胞凋亡。     

雷米普利对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的观察雷米普利对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法大鼠口服雷米普利(1 mg.kg-1)或等剂量生理盐水,24 h后制备心肌缺血30m in再灌注120 m in模型,用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死范围,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测心肌细胞凋亡并用免疫组化方法测定抑凋亡基因(Bc l-2)和促凋亡基因(Bax)的表达。结果与对照组相比,雷米普利组由缺血/再灌注损伤引起的心肌梗死范围缩小,细胞凋亡指数减少且DNA琼脂糖凝胶电泳呈现减弱的DNA梯形图谱,Bc l-2表达增加以及Bc l-2/Bax比值增加。结论雷米普利通过减少/缺血再灌注心肌细胞坏死和凋亡以及上调抑凋亡基因Bc l-2的表达发挥心脏保护作用。     

Cadmium induces apoptotic program imbalance and cell cycle inhibitor expression in cultured human astrocytes

Cadmium is a highly neurotoxic heavy metal impairing neurogenesis and induces neurodegenerative disorders. Toxic concentrations of cadmium induce astrocytic apoptosis by depleting intracellular glutathione levels, elevating intracellular calcium levels, altering mitochondria membrane potentials, and activating JNK and PI3K/Akt signaling pathways. Cadmium suppresses cell proliferation in kidney epithelial cells, lung fibroblasts, and primary myelocytes; however, cadmium’s effects on proteins regulating oxidative stress, apoptosis, and cell proliferation in astrocytes are less known. The present study hypothesized that cadmium alters levels of antioxidant enzymes, apoptotic regulator proteins, and cell cycle inhibitor proteins, resulting in apoptosis and cell cycle arrest. Concentrations ≥20 μM cadmium induced apoptosis and led to intracellular changes including DNA fragmentation, reduced mRNA expression of antioxidant enzymes (i.e., catalase and glutathione S transferase-A4), downregulation of B-cell lymphoma 2 (Bcl-2), and upregulation of Bcl-2-associated X protein (Bax). Moreover, cadmium suppressed astrocytic proliferation by inducing S and G2/M phase cell cycle arrest and promoting p53, p21, and p27 expression. In conclusion, this study provides mechanistic insight into cadmium-induced cytotoxicity of astrocytes and highlights potential targets for prevention of cadmium-induced apoptosis and cell cycle arrest.     

吴茱萸碱部分通过人白介素1所介导的途径诱导人黑色素瘤A375-S2细胞死亡

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)诱导人黑色素瘤A375S2细胞死亡的作用机制及其与细胞因子人白介素1(interleukin1,IL1)信号转导途径之间的关系。方法MTT检测法,DNA凝胶电泳法及Westernblot法。结果IL1受体拮抗因子(IL1receptorantagonist,IL1ra)在24h时能够部分抑制吴茱萸碱诱导的A375S2细胞死亡。吴茱萸碱在诱导A375S2细胞死亡的过程中,Fas配体(Fasligand,FasL)的蛋白表达量升高,激活其下游的caspase8和caspase3,进而引起DNA的损伤并激活p53蛋白,同时Bax/Bcl2的蛋白表达比例被上调。在经过IL1ra预处理后,这些变化均被部分的抑制或逆转。结论吴茱萸碱诱导A375S2细胞死亡的作用是部分通过IL1介导的信号转导途径而实现的。     

告达庭对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖和凋亡的调节作用

目的研究告达庭(caudatin)对SGC-7901胃癌细胞增殖与凋亡的调节作用及可能的分子机制。方法 MTT法检测告达庭对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术分析SGC-7901细胞周期的变化;细胞形态学、琼脂糖凝胶电泳及FITC-AnnexinⅤ/PI双标记检测对胃癌细胞凋亡的影响,免疫印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果可明显抑制SGC-7901细胞的增殖,且抑制作用呈时间和剂量依赖性;SGC-7901细胞经告达庭作用24h后,处于G1期的细胞数目增加,而G2期和S期的细胞数目明显减少,并发生明显的凋亡;调节Bcl-2家族相关因子的表达水平和活化caspase-9、caspase-3与告达庭诱导SGC-7901细胞凋亡相关。结论告达庭可抑制SGC-7901胃癌细胞的增殖并诱发凋亡,其分子机制可能与调节Bcl-2与Bax的平衡以及释放CytC,进而促进caspase-9、caspase-3和PARP的降解密切相关。     

p53、Bcl-2表达与非小细胞肺癌放射治疗预后的相关分析

目的：探讨p53与Bcl-2基因表达与非小细胞肺癌放射治疗预后的关系。方法：回顾性分析58例接受单纯性放射治疗（15mv,dt=66～68Gy／33～34f／45～49d。SSD=100cm,剂量率为2Gy）的非小细胞肺癌肺癌的患者的生存时间与p53、Bcl-2表达的相关关系,应用SPSS10．0软件进行kaplan-meier生存分析,并用log-rank法进行检验,进一步应用COX-regression进行多因素分析。结果：p53、Bcl-2的表达与非小细胞肺癌放疗预后呈负相关关系。结论：p53、Bcl-2是预测非小细胞肺癌患者放射治疗预后有意义的临床指标。     

去甲斑蝥素诱导人肾癌786-0细胞凋亡的体外研究

目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）诱导人肾癌细胞株786—0凋亡的机制。方法实验分NCTD组和对照组．分别应用MTT法、流式细胞术和实时定量PCR检测NCTD对体外培养786—0细胞的生长抑制率、细胞周期和凋亡率以及肿瘤凋亡控制因子Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果NCTD能抑制786—0细胞生长,随着NCTD浓度升高、处理时间延长作用增强,有明显的时间-剂量依赖性。流式分析显示,786—0细胞的S期细胞减少,G2/M期细胞增多,凋亡率上升。实时定量PCR结果表明,在80μmol／L NCTD处理24h后,Bcl-2 mRNA表达量明显减少、Bax mRNA表达水平则升高,Bcl-2／Bax比值明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论NCTD可明显抑制786—0细胞的增殖和生长,诱导其凋亡,其机制可能与干扰786—0细胞生长周期、抑制DNA合成代谢以及影响凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达有关。     

虫草素对人肝癌Bel-7402细胞抑制及作用机制的研究

<正>虫草素是虫草的主要活性成分,具有抗肿瘤、抑菌、抑制病毒、抑制蛋白质激酶活性等作用[1-2]。研究证明虫草素能抑制mRNA的合成,诱导细胞凋亡,促进细胞分化,对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用[1-2]。诱导肿瘤细胞凋亡以及作用靶点已成研究的焦点。为探讨虫草素诱导肿瘤细胞凋亡的新靶点,对虫草素作用人肝癌Bel-7402细胞后的抑制     

五没食子酰基葡萄糖对卵巢癌HO-8910细胞凋亡调控基因表达与胱天蛋白酶凋亡途径的影响

目的探讨五没食子酰基葡萄糖(PGG)诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡的作用及诱导胱天蛋白酶凋亡途径的机制。方法 PGG 10,20,40和80μmol·L-1处理HO-8910细胞48,72和96 h后,MTT法检测细胞存活率;Hoechst 33258染色观察HO-8910细胞核形态改变,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;Western印迹法检测细胞内胱天蛋白酶酶原及活性形式;RT-PCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2、Bcl-XL、凋亡抑制因子1(CIAP-1)、CIAP-2、存活蛋白、神经元凋亡抑制蛋白(NIAP)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和细胞周期蛋白D1 mRNA表达。结果 PGG 10～80μmol·L-1分别作用48,72和96 h,随浓度的增加,细胞存活率明显降低,r分别为0.93,0.95和0.86(P<0.05)。PGG 40μmol·L-1使HO-8910细胞的细胞核染色质固缩,出现凋亡形态学改变,早期凋亡率从正常对照组的(0.6±0.1)%分别增加到(3.4±1.1)%,(9.8±3.7)%和(19±4.5)%,对晚期凋亡率影响不明显。PGG 20～80μmol·L-1使HO-8910细胞内胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶7和胱天蛋白酶9及其底物多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切水平增加,PGG20～80μmol·L-1均抑制死亡受体FAS的蛋白表达水平并使胱天蛋白酶8总剪切水平降低。PGG 20～80μmol·L-1抑制HO-8910细胞中细胞周期蛋白D1,Bcl-2,Bcl-XL和NIAP mRNA的表达,上调CIAP-1 mRNA的表达,对基因Bax,CIAP-2和XIAP mRNA表达影响不明显;PGG 20μmol·L-1抑制存活蛋白基因mRNA的表达,但是增加处理浓度却上调存活蛋白基因mRNA的表达。结论 PGG可能通过抑制凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL的表达从而诱导HO-8910细胞内胱天蛋白酶9依赖的内源性凋亡途径,并诱导细胞凋亡。     

Altered expression of p53, Bcl-2 and Bax induced by microcystin-LR in vivo and in vitro.

It has been reported that MC-LR could induce apoptosis in a variety of cell types. Although the induction of oxidative stress and mitochondrial alteration played critical role in MC-LR induced apoptosis, but the exact mechanisms of MC-LR induced apoptosis are still unknown. In spite of extensive studies on MC-LR mediated cell damages, there is little information on the protein expression of p53 and Bcl-2, Bax in vivo and in vitro, which are vital regulator of apoptosis in response to a variety of stimuli. The present study was undertaken to determine the expression level of p53 and Bcl-2, Bax in cultured hepatocytes and rat liver tissues. The results show that MC-LR can increase the expression of p53 and Bax significantly both in vivo and in vitro, however, MC-LR can only decrease the expression of Bcl-2 significantly in vitro and there is no difference observed in vivo. It can be concluded that the expression of p53, Bcl-2 and Bax are involved in the regulation of MC-LR induced apoptosis.     

镍染毒大鼠睾丸生精细胞凋亡及其对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨硫酸镍诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的类型及其对生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和雌二醇水平的影响。方法健康性成熟Wistar雄性大鼠32只,随机分为4组,正常对照组,硫酸镍1.25、2.5、5.0 mg/kg 3个剂量组。腹腔注射染毒,1次/d,连续30 d。采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡;免疫组化SABC法检测生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达;放射免疫法检测血清雌二醇(E2)水平。结果与对照组比较,各剂量组大鼠睾丸生精细胞凋亡增多(P<0.05),且凋亡细胞主要是生精早期和晚期阶段的精原细胞和精母细胞。各剂量组大鼠生精细胞Bcl-2阳性表达减少而Bax阳性表达增多,且血清E2水平降低(P<0.05)。结论硫酸镍可诱导大鼠睾丸精原细胞和精母细胞凋亡,其机制可能与生精细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调以及雌二醇水平降低有关。     

2-Methoxyestradiol induces cell cycle arrest and apoptosis of nasopharyngeal carcinoma cells

AIM: To investigate 2-methoxyestradiol induced apoptosis and its mechanism of action in CNE2 cell lines.METHODS: CNE2 cells were cultured in RPMI-1640 medium and treated with 2-methoxyestradiol in different concentrations. MTT assay was used to detect growth inhibition. Flow cytometry and DNA ladders were used to detect apoptosis. Western blotting was used to observe the expression of p53, p21WAF1, Bax, and Bcl-2 protein.RESULTS: 2-methoxyestradiol inhibited proliferation of nasopharyngeal carcinoma CNE2 cells with IC50 value of2.82 μmol/L. The results of flow cytometry showed an accumulation of CNE2 cells in G2/M phase in response to 2-methoxyestradiol. Treatment of CNE2 cells with 2-methoxyestradiol resulted in DNA fragmentation. The expression levels of protein p53 and Bcl-2 decreased following 2-methoxyestradiol treatment in CNE2 cells, whereas Bax and p21WAF1 protein expression were unaffected after treatment with 2-methoxyestradiol. CONCLUSION:These results suggest that 2-methoxyestradiol induced cell cycle arrest at G2/M phase and apoptosis of CNE2 cells which was associated to Bcl-2 down-regulation.     

Annosquacin B induces mitochondrial apoptosis in multidrug resistant human breast cancer cell line MCF-7/ADR through selectively modulating MAPKs pathways

Context: Multidrug resistance (MDR) is a major obstacle to efficient therapy of cancers. It is a prime concern for researchers to find compounds with anti-proliferative activity on MDR cell lines. In recent years, annonaceous acetogenins (ACGs) were reported to have anti-proliferative activity. However, the underlying mechanisms are still unknown.

Objective: This study determines the mechanisms of anti-proliferative activity induced by Annosquacin B (AB) against MCF-7/ADR cells.

Material and methods: The cytotoxicity of AB at varying concentrations (0.64, 1.6, 4, 10, 25, 62.5, 156.25?μM) on MCF-7/ADR cells was assessed using the MTT assay. Annexin V-FITC/propidium iodide staining and Acrinidine orange and ethidium bromide (AO/EB) staining were employed to investigate whether AB (14, 7, 3.5?μM) could induce apoptosis in MCF-7/ADR cells. Levels of caspase-3 and caspase-9, Bax, Bcl-2 and MAPKs kinases were evaluated by western blot assay following treatment with various concentrations of AB (3.5, 7, 14?μM) at different time points (0, 0.5, 1, 2, 4, 8, 12?h).

Results and conclusion: MTT assay showed that AB significantly decreased cell viability on MCF-7/ADR (IC₅₀ of 14.69?μM). AB-induced apoptosis in MCF-7/ADR cells through mitochondrial apoptosis pathways. It induced typical apoptosis by morphologic changes; elevate levels of caspase-3, caspase-9 as well as the ratio of Bax/Bcl-2. In addition, AB increased the expression of p-p38 MAPK and decreased the expression of p-JNK, while whether ERK1/2 had an effect on the MCF-7/ADR apoptosis remains to be determined.     

茅莓总皂苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨茅莓总皂苷对缺血性脑损伤的神经保护机制。方法采用大鼠大脑中动脉阻塞造成局灶性脑缺血2h,再灌注24 h模型,以HE染色,TUNEL标记和免疫组化的方法观察茅莓总皂苷5、10、20 mg.kg-1对凋亡细胞数目及相关蛋白Bc l-2,Bax表达的变化。结果3个剂量的茅莓总皂苷治疗组显示神经元形态病理改变明显减轻,降低残存细胞中TUNEL阳性细胞的百分率。增加Bc l-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性细胞的表达,Bc l-2/Bax的表达比例增加。结论茅莓总皂苷有明显的抗凋亡作用,其机制可能与增加Bc l-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性细胞的表达,提高Bc l-2/Bax有关。     

雌激素对大鼠颅脑创伤后脑组织伤区Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨雌激素是否通过影响大鼠颅脑创伤后脑组织伤区Bcl-2和Bax表达,起到脑保护作用。方法采用改良的Feeney自由落体脑损伤模型,将60只Wistar健康雄性大鼠随机分为治疗组、对照组和外伤组,治疗组的大鼠用苯甲酸雌二醇治疗。应用HE染色检测脑组织和应用免疫组织化学方法检测伤区脑组织Bcl-2及Bax的表达变化,并且计算出Bcl-2和Bax表达的比值。结果治疗组Bcl-2表达高于对照组和创伤组（P〈0.05）,创伤组和对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。三组的Bax表达相互比较差异无统计学意义（P〉0.05）。治疗组Bcl-2和Bax表达的比值高于对照组和外伤组。结论雌激素可能是通过促进Bcl-2表达来减少颅脑损伤后神经细胞的凋亡,发挥脑保护作用。     

DIDS对Bcl-2/Bax在staurosporine诱导心肌细胞凋亡中表达的影响

目的探讨氯离子通道阻断剂DIDS(4,4′-diisothiocy-ano-2,2′-stilbene-disulfonic acid)对staurosporine(STS)诱导心肌细胞凋亡的调节蛋白Bcl-2/Bax表达的影响。方法在STS诱导心肌细胞凋亡模型上,观察DIDS对心肌细胞存活率、caspase-3活性、Bcl-2/Bax蛋白表达水平及Bax细胞内分布的影响。实验分组:对照组、STS组、DIDS组。结果与STS组比较,DIDS能够明显抑制STS诱导的心肌细胞凋亡发生,心肌细胞存活率增加,caspase-3活性水平降低(P<0.01)。对照组、STS组和DIDS组在全细胞水平上Bcl-2、Bax表达差异无显著性(P>0.01),在亚细胞水平上发现STS组有明显的Bax蛋白从胞质向线粒体转位,DIDS可以抑制STS诱导的Bax线粒体转位。结论DIDS抑制心肌细胞凋亡可能与抑制促凋亡分子Bax由胞质向线粒体转位有关。     

新型金属铜络合物对SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

目的研究新型金属铜络合物(N-Cu)在体外对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法将不同浓度的N-Cu(0.3～24μmol.L-1)作用于体外培养的SMMC-7721细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR和Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化。结果 N-Cu可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈明显的量效与时效关系。随着药物浓度的增加,G0/G1期的细胞比率上升,G2/M和S期细胞比率下降,并促进凋亡率增加。N-Cu可上调细胞中Bax、Caspase-3基因及蛋白的表达,抑制Bcl-2基因及蛋白的表达,且均呈剂量依赖性。结论一定浓度的N-Cu可抑制SMMC-7721细胞的增殖并诱导其凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。上调Bax、Caspase-3基因及蛋白的表达,降低Bcl-2/Bax比值,可能是其诱导细胞凋亡的重要机制。