hTERT基因反义核酸对8910卵巢癌细胞端粒酶活性的影响

目的　研究人类端粒酶催化亚单位 (h TERT)基因的反义寡核苷酸对卵巢癌细胞的影响 .方法　采用 TRAP-EL ISA检测 8910卵巢癌细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化 .结果　 h TERT基义反义核酸能有效抑制 8910细胞端粒酶活性 .结论　 h TERT基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 ,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径     

端粒酶hTERT基因反义核酸对膀胱癌细胞T24端粒酶活性的影响

目的 探讨hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)对膀胱癌细胞T24端粒酶活性的影响.方法 采用TRAP-PCR-ELISA法检测膀胱癌细胞的端粒酶活性;采用RT-PCR方法检测hTERT基因mRNA的表达水平;以免疫组化通过流式细胞仪检测hTERT基因蛋白水平的变化.结果 hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(ASPS-ODN)作用于T24细胞48h,其端粒酶活性下降,作用72h,其端粒酶活性受到抑制.结论 通过hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(ASPS-ODN)特异性抑制hTERT基因mRNA的表达降低膀胱癌细胞T24端粒酶活性.     

hTERT基因反义核酸对8910卵巢癌细胞端粒酶活的影响

研究人类端粒酶催化亚单位基因的反义寡核苷酸对卵巢癌细胞的影响。方法采用ＴＲＡＰ－ＥＬＩＳＡ检测８９１０卵巢癌细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化。结果ｈＴＥＲＴ基义反义核酸能有核酸显抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。     

5-ALA治疗和hTERT mRNA的反义寡核苷酸联合应用对人卵巢癌细胞的杀伤作用及其机制

目的：观察5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）光动力治疗（PDT）和人端粒酶催化亚单位 (hTERT) mRNA的反义寡核苷酸（ASODN)联合应用对人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制及促凋亡作用,探讨两种方法联合应用协同促进对人卵巢癌3AO细胞的杀伤作用机制。方法：采用MTT法筛选不同浓度5-ALA 和激光能量照射对人卵巢癌3AO细胞增殖抑制作用的最佳组合参数; RT-PCR法检测hTERT ASODN和SODN转染后hTERT mRNA表达水平的变化。将人卵巢癌3AO细胞分为空白
对照组、hTERT ASODN转染组、hTERT SODN转染组、5-ALA PDT组、hTERT ASODN转染+5-ALA PDT组和hTERT SODN转染+5-ALA PDT组,应用MTT法检测各组人卵巢癌3AO细胞增殖抑制率;应用膜联蛋白V-硫氰酸荧光素(AnnexinV-FITC)/碘化丙啶(PI)双染色结合流式细胞术检测
各组人卵巢癌3AO细胞凋亡率。结果：5-ALA PDT对人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制作用随着光敏剂浓度的增加和激光能量的增大而增加(P<0.05);不同浓度hTERT ASODN转染人卵巢癌3AO细胞24 h后,hTERT mRNA表达水平呈浓度依赖性下调(P<0.05),而hTERT-SODN对人卵巢癌3AO细胞hTERT mRNA表达无显著影响(P>0.05)。hTERT ASODN转染+5-ALA PDT (5-ALA浓度为0.5 mmol•L-1,激光能量密度为2.50 J•cm-2)组人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制率高于5-ALA PDT组和hTERT ASODN组(P<0.05)。hTERT ASODN转染+5-ALA PDT组人卵巢癌3AO细胞的凋亡率为29.28％,显著高于hTERT ASODN 转染组（12.79％）和5-ALA PDT组（21.19％)(P<0.05）。结论：hTERT ASODN转染与5-ALA PDT联合治疗可协同增强对人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制作用,其机制可能与联合作用促进细胞凋亡有关联。     

hTERT反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞体外增殖的影响

目的观察人类端粒酶催化亚基(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)对Hela细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ASODN对Hela细胞增值能力及细胞生长的影响，用流式细胞仪检测细胞周期和细胞增殖指数。结果不同浓度的ASODN转染细胞后，均不同程度地影响细胞的生长。ASODN作用细胞后，使细胞周期发生变化，表现为G0／G1期细胞增多，S期细胞减少，细胞增殖指数下降。结论以hTERT基因为靶点的反义寡核苷酸能抑制Hela细胞的体外生长，使细胞阻滞于G0／G1期。     

hTERT反义寡核苷酸对乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨hTERT反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对乳腺癌细胞增殖的影响。方法用脂质体介导反义寡核苷酸转染MCF-7乳腺癌细胞株,采用TRAP-ELISA法检测转染后细胞端粒酶的活性,观察其前后的变化。MTT法检测细胞活性,流式细胞仪观察细胞周期及细胞凋亡率变化。结果转染细胞的端粒酶活性及细胞生长都明显受到抑制。流式细胞仪检测到细胞凋亡峰,细胞阻滞于S期,正义寡核苷酸则无此作用。结论端粒酶hTERT为靶点的反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞的增殖,且具有促凋亡作用。     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞癌细胞表达的影响

目的 探讨针对端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞端粒酶活性的抑制及对P53和PCNA基因表达的影响。方法 用PCR－ELISA法检测喉癌细胞株Hep-2细胞内端粒酶的活性，用免疫组化的方法检测喉癌细胞P53和PCNA基因的表达。结果 该反义寡核苷酸可抑制喉癌细胞端粒酶活性，此作用有序列特性性和浓度依赖性。40μM反义核苷酸抑制了喉癌细胞PC－NA的表达，而对P53表达无明显影响。结论 靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞Hep-2PCNA基因的表达。     

hTERT基因转染对人胚胎成纤维细胞表型的影响

目的 探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)基因转染人胚胎成纤维细胞(hEFs)后细胞是否存在恶性表型。方法 应用脂质体法将pIRES2-EGFP-hTERT正义重组质粒及pIRES2-EGFP空载质粒分别导入原代培养hEFs，Western blot分别检测hTERT mRNA和蛋白质的表达。采用染色体核型分析、裸鼠皮下致瘤性实验、DNA倍体实验分析转染细胞是否存在恶性表型。结果 原代培养hEFs中存在较弱水平的hTERT基因mRNA及蛋白质表达，但外源性hTERT基因转染的胚胎成纤维细胞hTERT mRNA及蛋白表达显著增加。hTERT转染后细胞染色体仍为23对，且均为正常二倍体细胞；裸鼠皮下不具有成瘤的能力。结论 外源性hTERT基因转染的胎儿成纤维细胞不具有恶性表型。     

hTERT基因反义核酸诱导红白血病细胞凋亡的研究

目的 研究人类端粒酶反义核酸对K-562细胞增殖的影响.方法 采用脂质体介导的基因转染的方法将端粒酶反义核酸导入K-562细胞,用荧光染色观察端粒酶反义核酸诱导K-562细胞凋亡的量效和时效关系,用电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡.结果 端粒酶反义核酸对K-562生长有抑制作用,细胞凋亡率呈剂量和时间依赖性.正义核酸元此效应.结论 端粒酶反义核酸可诱导K-562细胞凋亡,它有可能成为白血病治疗的新靶点.     

Effects of multiple tumor suppressor 1 on the proliferation of human ovarian cancer HO-8910 cells

In1994,tworesearchteams,oneinSaltLakeCity[']andtheotherinSanDiego['jfirstreportedanewinhibitorofcancercells,whichencodedapro-tein,ofl6kDandsowasnamedp16gene.Previousresearchesindicatedthatthepl6genewasdeletedormutatedin75%celllinesderivedfromawidevarietyofcancers.Wehavesuccessfullytransfectedthewildtypepl6geneintohumanovariancancerHO-891Ocellsandproveditsgeneexpression.Inthepresentstudy,theeffectsofMTSlonthepro-liferationofovariancancerHO-89lOcellswerefur-therinvestigated.MATERIALSAN…     

染料木黄酮对卵巢癌HO-8910PM裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：观察植物雌激素染料木黄酮（GEN）与顺铂（DDP）联合应用治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的效应及其机制．方法：建立20只人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,随机分成4组,分别为对照组、GEN组、DDP组及GEN＋DDP组．4wk后处死裸鼠,计算抑瘤率,用Ⅷ因子抗原多克隆抗体测定肿瘤内微血管密度（MVD）,用细胞增殖指数（PI）反映细胞增殖状态,并进行形态学观察．结果：DDP组及GEN组均可有效抑制卵巢癌移植瘤生长,二者联合应用有协同作用．GEN＋DDP组MVD和PI低于GEN组和DDP组（P〈0．01）,3组均显著低于对照组（P〈0．01）．形态学观察可见GEN组和GEN＋DDP组细胞凋亡、凋亡小体及变性坏死增多,而对照组少见．结论：GEN对人卵巢癌HO-8910PM细胞裸鼠移植瘤有明显抑制作用,且与DDP有协同作用;GEN对肿瘤细胞的作用,与抑制肿瘤细胞的增殖和肿瘤区新生血管的生长、阻断肿瘤血供有关．     

Liposome-C-erbB2 antisense oligodoxynucleotides in human ovarian cancer cells

目的　探讨脂质体—硫代磷酸化修饰的C erbB2 反义脱氧寡核苷酸 (C erbB2 antisensephosphorothioatedoligodeoxynucleotides ,C erbB2 S ODNs)对卵巢癌细胞系C erbB2 癌基因表达及细胞增殖的影响。方法　采用流式细胞仪技术 ,3 H TdR掺入方法了解脂质体—C erbB2 S ODNs对卵巢癌细胞系SKOV3 C erbB2 癌基因表达及细胞生长 ,细胞周期的作用。结果　脂质体—C erbB2 S ODNs能降低C erbB2 的表达 ,并抑制细胞生长达 30 % ;脂质体—C erbB2 S ODNs较单用C erbB2 S ODNs的作用效率增强约 4 0倍。结论　C erbB2 癌基因的反义调控可能在卵巢癌基因治疗中有一定作用 ;脂质体能够有效地增强C erbB2 S ODNs的作用效率。     

姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的：探讨姜黄素(cureumin)对体外培养人卵巢癌细胞株HO-8910细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡的影响.方法：选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养,以1．25—20μg/ml姜黄素分别处理HO-8910细胞6-24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,SABC免疫组化检测细胞凋亡相关蛋白Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax的表达。结果：姜黄素对HO-8910生长有抑制作用,并呈剂量时间依赖性。流式细胞仪分析证实姜黄素能使HO-8910细胞积聚在S和G2／M期,并出现亚二倍体凋亡峰。Fas、Fas-L、Bcl-2表达均上调,Bax加药前后均为阳性。结论：姜黄素对人卵巢癌细胞株H0．8910的增殖具有显著的抑制作用;Fas、Fas-L、Bcl-2的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

拓扑替康对人卵巢癌细胞株端粒酶活性表达的影响

目的 :探讨拓扑替康对卵巢癌细胞端粒酶活性表达的影响。方法 :用TRAP ELISA法检测浓度为 2 60 0 0 μg·L-1 的盐酸拓扑替康 (和美新 )作用于卵巢癌HO 8910细胞株不同时间后端粒酶活性的改变 ,并以流式细胞检测法同步检测细胞凋亡及细胞周期改变。结果 :随着拓扑替康作用时间的延长 ,HO -8910细胞株的凋亡率逐渐增加 ,而端粒酶活性逐渐降低。当作用达 60h后 ,细胞凋亡达 47.62 %时端粒酶活性呈阴性。结论 :端粒酶活性抑制不是拓扑替康诱导卵巢癌细胞凋亡的直接原因 ,但临床监测端粒酶活性表达有助于对盐酸拓扑替康抗卵巢癌的疗效进行客观评价。     

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞周期的影响

目的:观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞HO-8910细胞周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将1×10-7mol/L地塞米松(dexamethasone,Dex)和1×10-6mol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486分别单用或合用处理HO-8910细胞,采用流式细胞术测定细胞周期,核素掺入半定量RT-PCR检测细胞周期蛋白激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果:Dex诱导HO-8910细胞发生G0/G1期停滞,并使p21/WAF1 mRNA表达上调;RU486可逆转Dex引起的p21/WAF1表达的变化。结论:p21/WAF1的表达上调可能参与糖皮质激素引起的HO-8910细胞G0/G1期停滞作用。     

CD147反义核酸对卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的：研究经CD147反义RNA表达质粒载体转染建株的卵巢癌细胞系8910的生物学行为变化。方法：用CD147反义RNA表达质粒PCDNAasCD147转染人卵巢癌细胞系8910，克隆经筛选、鉴定后进行凝胶酶谱实验、肿瘤细胞侵袭力实验及动物实验。结果：CD147反义核酸转染的8910与空载体转染组相比，刺激成纤维细胞产生基质金属蛋白酶的能力下降，细胞侵袭力下降，荷瘤裸鼠成瘤力下降（P＜0．01）。结论：CD147反义核酸能抑制卵巢癌的转移和成瘤，因而有可能成为卵巢癌的治疗的药物靶点。     

RNA干扰survivin对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响

目的 探讨RNA干扰survivin基因对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响.方法 实验分3个组：siR-NA组,采用脂质体法将靶向survivin siRNA荧光真核表达质粒载体pGPU6-GFP-survivin-shRNA转染卵巢癌HO-8910PM细胞;空白对照组,单纯细胞培养;阴性对照组,用表达与survivin序列无同源性的siRNA片段质粒pGPU6-GFP-NC转染细胞.于转染后48 h和72 h,用PI单染法流式细胞术检测各组HO-8910PM细胞周期的变化以及Western blot检测survivin蛋白的表达情况.结果 PI单染流式细胞仪检测细胞周期结果表明,与空白对照组和阴性对照组相比较,2个时间点siRNA组转染后的G0/G1期细胞比例明显增加,而G2/M期细胞比例均下降（P＜ 0.05）;Western blot结果证实,siRNA组的HO-8910PM细胞survivin蛋白的表达量明显下调.结论 导入survivin基因特异性的siRNA可导致卵巢癌HO-8910PM细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞增殖受阻,且细胞sur-vivin蛋白表达量下降.     

端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸抑制膀胱癌细胞生长的机制

目的 :探讨端粒酶逆转录酶基因 (hTERT)反义寡核苷酸 (ASODN)对T2 4膀胱癌细胞生长的影响及作用机制 .方法 :采用脂质体介导技术 ,将hTERT基因ASODN转染入T2 4膀胱癌细胞中 ,应用端粒酶PCR ELISA法检测端粒酶活性变化 ,MTT法测定细胞生长变化 ,流式细胞术观察对细胞周期影响 .结果 :hTERT基因ASODN作用T2 4膀胱癌细胞后显著地抑制膀胱癌细胞端粒酶活性 ,吸光度A值降为 0 .4 5 .癌细胞生长增殖受限 ,抑制作用具有序列特异性和剂量依赖性 ,并出现细胞凋亡现象 ,凋亡率为 14 .8%,与SODN转染组及空白对照组进行比较 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) .结论 :hTERT基因ASODN能特异性抑制T2 4膀胱癌细胞生长 ,下调端粒酶活性 ,促进细胞凋亡 .为膀胱肿瘤基因治疗的临床应用提供新靶点