抑癌基因p15对人胆管癌细胞增殖影响与基因治疗适合靶点选择的相关性

背景 对于胆管癌的治疗目前临床缺乏有效的诊治手段,抑癌基因替代疗法正逐步成为一种新型的、重要的抗肿瘤措施. P15作为一种重要的抑癌基因,发现可抑制肝癌细胞生长.但是对于其在胆管癌中的作用的相关研究尚在探索阶段 ,本研究为预防人胆管癌的发生提供一个理论框架. 目的 通过构建稳定高表达抑癌基因 p15的人胆管癌细胞模型,研究 p15对胆管癌细胞增殖的影响. 设计完全随机,设立实验对照组,开放性实验研究. 地点和对象 实验地点在南京医科大学生化与分子生物学研究室 ,研究对象为人胆管癌细胞系. 干预以稳定高表达 p15的人胆管癌细胞模型为实验组,稳定表达空载体的细胞模型为对照组.将抑癌基因 p15的 cDNA构建到高效真核表达的质粒载体 pcDNA3- neo中的 EcoRⅠ / XbaⅠ位点 ,构建成 p15真核表达质粒 pcDNA3p15;通过脂质体法将 pcDNA3p15质粒转染人胆管癌细胞系 QBC939,经 G- 418筛选 ,获得稳定高表达 p15的人胆管癌细胞模型及相应的表达空载体的细胞模型,并经 Western分子杂交分析证实. 主要观察指标观察实验组和对照组细胞增殖速率、细胞克隆形成能力、细胞周期、 c- Fos蛋白表达水平的差异 结果与对照组相比 ,p15高表达的人胆管癌细胞 QBC939的增殖受到明显抑制;克隆形成实验结果表明,高表达 p15人胆管癌细胞所形成的克隆明显少于对照组所形成的克隆 (P< 0.01);流式细胞光度术表明 p15同时阻遏细胞由 G1期向 S期及 G2期向 M期的转换; Western免疫印迹分析结果表明,高表达 p15抑癌基因的细胞癌基因 c- Fos的蛋白水平下降约为对照组的 40%. 结论 p15高表达明显抑制了人胆管癌细胞的生长 ,并且基因 c- myc的蛋白水平表达下降可能是 p15抑制细胞增殖的分子机理之一.     

抑癌基因p15对人胆管癌细胞增殖影响与基因治疗适合靶点选择的相关性(英)

背景:对于胆管癌的治疗目前临床缺乏有效的诊治手段,抑癌基因替代疗法正逐步成为一种新型的、重要的抗肿瘤措施。P15作为一种重要的抑癌基因,发现可抑制肝癌细胞生长。但是对于其在胆管癌中的作用的相关研究尚在探索阶段,本研究为预防人胆管癌的发生提供一个理论框架。目的:通过构建稳定高表达抑癌基因p15的人胆管癌细胞模型,研究p15对胆管癌细胞增殖的影响。设计:完全随机,设立实验对照组,开放性实验研究。地点和对象:实验地点在南京医科大学生化与分子生物学研究室,研究对象为人胆管癌细胞系。干预:以稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型为实验组,稳定表达空载体的细胞模型为对照组。将抑癌基因p15的cDNA构建到高效真核表达的质粒载体pcDNA3-neo中的EcoRⅠ/XbaⅠ位点,构建成p15真核表达质粒pcDNA3p15;通过脂质体法将pcDNA3p15质粒转染人胆管癌细胞系QBC939,经G-418筛选,获得稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型及相应的表达空载体的细胞模型,并经Western分子杂交分析证实。主要观察指标:观察实验组和对照组细胞增殖速率、细胞克隆形成能力、细胞周期、c-Fos蛋白表达水平的差异结果:与对照组相比,p15高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到明显抑制;克隆形成实验结果表明,高表达p15人胆管癌细胞所形成的克隆明     

抑癌基因p15对人胆管癌细胞增殖影响与基因治疗适合靶点选择的相关性

背景：对于胆管癌的治疗目前临床缺乏有效的诊治手段，抑癌基因替代疗法正逐步成为一种新型的、重要的抗肿瘤措施。P15作为一种重要的抑癌基因．发现可抑制肝癌细胞生长。但是对于其在胆管癌中的作用的相关研究尚在探索阶段，本研究为预防人胆管癌的发生提供一个理论框架。目的：通过构建稳定高表达抑癌基因p15的人胆管癌细胞模型，研究p15对胆管癌细胞增殖的影响。设计：完全随机，设立实验对照组，开放性实验研究。地点和对象：实验地点在南京医科大学生化与分子生物学研究室，研究对象为人胆管癌细胞系。干预：以稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型为实验组，稳定表达空载体的细胞模型为对照组。将抑癌基因p15的cDNA构建到高效真核表达的质粒载体pcDNA3-neo中的EcoRI／XbaI位点，构建成p15真核表达质粒pcDNA3p15；通过脂质体法将pcDNA3p15质粒转染人胆管癌细胞系0BC939，经G-418筛选，获得稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型及相应的表达空载体的细胞模型，并经Western分子杂交分析证实。主要观察指标：观察实验组和对照组细胞增殖速率、细胞克隆形成能力、细胞周期、c-Fos蛋白表达水平的差异结果：与对照组相比，p15高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到明显抑制；克隆形成实验结果表明，高表达p15人胆管癌细胞所形成的克隆明显少于对照组所形成的克隆(P&;lt;0．01)；流式细胞光度术表明p15同时阻遏细胞由G。期向s期及G2期向M期的转换；Western免疫印迹分析结果表明，高表达p15抑癌基因的细胞癌基因c-Fos的蛋白水平下降约为对照组的40％。结论：p15高表达明显抑制了人胆管癌细胞的生长，并且基因c-myc的蛋白水平表达下降可能是p15抑制细胞增殖的分子机理之一。     

层黏素受体靶向RNA干扰质粒载体的构建

目的 构建层黏素受体RNA干扰质粒,为探讨抑制层黏素受体过表达在胆管癌免疫逃逸中的作用奠定基础.方法 PCR法获得U6启动子序列以及产生siRNA的相应DNA模板序列,将其克隆入pGenesil-3获得RNA干扰载体pGenesil-shLNR.脂质体法将pGenesil-shLNR导入胆管癌细胞QBC939,免疫组化法检测对胆管癌细胞QBC939LNR表达的抑制情况.结果 所构建的载体pGenesil-shLNR能够干扰QBC939细胞中LNR的表达,并且具有新霉素抗性,能够用G-418筛选稳定转化的细胞株.结论 成功构建了抑制胆管癌细胞QBC939表达LNR的RNA干扰质粒载体.     

人上皮细胞黏附分子的真核表达及鉴定

目的构建人上皮细胞黏附分子(EpCAM)全基因的真核表达质粒,研究其在HepG2细胞中的表达。方法将EpCAM基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-EpCAM,转染人肝癌HepG2细胞。通过免疫荧光、Western Blotting及流式细胞检测对转染后细胞内EpCAM蛋白的表达进行鉴定。结果双酶切鉴定结果表明重组质粒构建成功。免疫荧光、Western Blotting及流式细胞检测结果一致表明,转染后EpCAM基因在HepG2细胞中表达成功。结论成功构建了人EpCAM的真核表达载体,并在HepG2细胞中表达,为研究高表达人EpCAM的肝癌细胞的功能打下基础。     

5-氮-2-脱氧胞苷调控胆管癌p53-Bax线粒体凋亡通路DNA甲基化诱导化疗敏感性的研究

目的探讨甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(DAC)对胆管癌细胞QBC939生长的影响及其机制。方法应用MTT法检测DAC对QBC939细胞存活率的影响,流式细胞仪观察细胞生长周期及凋亡率的变化,光镜及透射电镜观察细胞形态学改变;甲基化聚合酶链式反应检测DAC作用前后p53-Bax凋亡通路DNA甲基化变化;观察经DAC作用后5-氟尿嘧啶(5-Fu)对胆管癌细胞体内、外生长的影响。结果 DAC对QBC939细胞生长有抑制作用,经DAC处理后,电镜下细胞退变,有较多凋亡小体形成;DAC处理后胆管癌细胞凋亡率约43.04%,而未经DAC处理胆管癌细胞凋亡率仅为4.31%;未经DAC作用前p53-Bax凋亡通路中p14、DAPK抑癌基因甲基化,经DAC作用后p14、DAPK抑癌基因脱甲基化;DAC处理后增强了5-Fu对胆管癌细胞的凋亡率,裸鼠体内成瘤率下降,肿瘤体积减小。结论 DAC对胆管癌QBC939细胞的生长具有抑制作用,DAC对胆管癌QBC939细胞p53-Bax线粒体凋亡通路DNA甲基化的影响使细胞凋亡功能得以恢复,增强5-Fu对胆管癌化疗的敏感性并抑制肿瘤生长。     

构建人 COX-2反义核酸真核表达载体对膀胱癌 T24细胞株COX-2表达的作用

【目的】构建人环氧化酶-2（COX-2）反义核酸真核表达载体,探讨其抑制膀胱癌 T24细胞COX-2表达的作用。【方法】经PCR法从含人COX-2基因的质粒中扩增其cDNA ,通过限制性内切酶克隆于 T载体EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ位点之间,并将其反向插入pcDNA3．1中获得重组质粒。应用脂质体介导将其导入T24膀胱癌细胞中,经过G418筛后进行流式细胞术、间接免疫荧光染色和RT-PCR鉴定。【结果】核酸测序和限制性内切酶消化证实重组COX-2反义核酸真核表达质粒 pcDNA3．1/COX-2 as是正确的,经鉴定转导 pcD-NA3/COX-2 as的T24细胞中环氧化酶-2的表达明显抑制。【结论】成功构建人COX-2反义核酸真核表达载体并获得环氧化酶-2基因表达持续下调的膀胱癌细胞株T24-AS。     

过表达PTEN基因对甲状腺髓样癌细胞生长及细胞周期的影响

目的:探讨PTEN基因对甲状腺髓样癌(medullary thyroid carcinoma,MTC)细胞生长、周期的影响以及作用机制。方法:使用酶切酶连的方法构建真核表达载体pcDNA3.1-PTEN,采用脂质体转染法将其转入pA10RP8细胞中。实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测细胞内PTEN表达水平的变化,Western印迹法检测PTEN,Ki-67,p21,cyclinD1蛋白表达水平的变化;CCK-8法和平板克隆试验检测PTEN对pA10RP8细胞增殖的影响;细胞流式术检测pA10RP8细胞周期的变化。结果:成功构建了PTEN真核表达载体。转染pcDNA3.1-PTEN质粒的pA10RP8细胞PTEN和p21表达上调,Ki-67和cyclin D1蛋白表达下调;转染pcDNA3.1-PTEN质粒的pA10RP8细胞生长增殖受到抑制;细胞在G0/G1期比例增加,发生周期阻滞。结论:过表达PTEN能够抑制pA10RP8细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞,其机制可能与周期蛋白p21上调和cyclin D1下调表达有关。     

NOR1基因真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的影响

目的NOR1基因真核表达载体pcDNA3．1（＋）的构建并了解其对肝癌细胞系HepG2生长的影响。方法将NOR；cDNA亚克隆至pcDNA3．1（＋）真核表达载体上，并把重组质粒pcDNA3．1（＋）／NOR，经脂质体转染至HepG2细胞中，运用MTT法、台盼蓝排斥等试验、流式细胞仪等分析NOR，基因对肝癌细胞HepG2生物学活性的影响。结果成功构建了NOR。基因真核表达体pcDNA3．1（＋）／NORl，经pcDNA3．1（＋）／NOR1转染后的HepG2细胞生长速度明显抑制（P〈0．05），且细胞从G0／G1期进入S期明显延缓。结论重组质粒pcDNA3．1（＋）／NOR1能在HepG2细胞内表达，且能影响HepG2细胞的生长。     

苦参碱抗人肝癌细胞株HepG2的作用及其机制研究

苦参碱是中药苦参的主要抗肿瘤活性成分 ,体外实验研究表明 :苦参碱可抑制肝癌细胞增殖 ,其抑制方式与药物剂量和作用时间有关。一定浓度苦参碱诱导HepG2在细胞水平、代谢水平和基因水平均发生了不同程度的分化。苦参碱可诱导HepG2细胞凋亡。苦参碱抑制HepG2细胞增殖是通过激活G1期抑癌基因 p5 3、Rb、p2 1、p2 7、p16和促凋亡基因Bax的表达 ,抑制癌基因c myc和抗凋亡基因Bcl 2的表达 ,从而诱导细胞分化、凋亡 ,其中起主导作用的可能是Wp5 3和Rb基因。     

真核表达质粒pcDNA3.1-tau的构建及在HEK293细胞中的稳定表达

背景：阿尔茨海默病患者的痴呆症状严重程度与脑组织中的神经原纤维缠结数量呈正相关,神经原纤维缠结的主要蛋白成分为过度磷酸化的蛋白tau,tau蛋白的病理改变出现在痴呆症状之前并独立于β-淀粉样多肽的异常。目的：构建tau基因的真核表达质粒,建立稳定表达tau的稳转细胞株。方法：采用反转录-聚合酶链反应方法,从反转录反应合成的人成神经瘤细胞（SH-SY5Y）的总cDNA中,扩增出约1.0kb的tau cDNA片段,用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;用脂质体介导法将质粒转染入培养的人胚肾细胞,并利用G418进行稳定表达tau的稳转细胞株的筛选,免疫印迹和免疫荧光细胞化学方法检测tau基因的表达。结果与结论：人tau cDNA已克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中;免疫印迹和免疫荧光细胞化学结果显示人tau基因在人胚肾细胞中获得表达,tau蛋白表达的阳性信号主要位于细胞胞质,说明成功构建了pcDNA3.1-tau的真核表达质粒,建立了稳定表达tau的稳转细胞株。     

Livin基因在人胆管癌组织及胆管癌细胞系中的表达和意义

目的：探讨Livin基因在人胆管癌组织及胆管癌细胞系中的表达情况及其与胆管癌发生发展之间的关系。方法：采用免疫组织化学技术（SP法）检测Livin基因蛋白在45例人胆管癌标本及及40例癌旁胆管组织、20例正常胆管组织标本中的表达;同时采用RT-PCR法及SP法检测了Livin基因mRNA和蛋白在人胆管癌细胞系QBC939及非肿瘤细胞系HT-1080中表达。结果：Livin在胆管癌组织中表达阳性率为57．8％,而癌旁胆管组织、非癌胆管组织中未能检测到Livin表达。Livin表达与性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关。在有淋巴结转组中,Livin阳性表达率（70．4％）明显高于无淋巴结转移组（38．9％）。在人胆管癌细胞QBC939中,LivinmRNA及蛋白均特异性表达,而非肿瘤细胞系HT-1080未见Livin表达。结论：Livin基因在人类胆管癌组织和细胞系中选择性高表达,其可能与胆管癌发生、发展及预后密切相关。     

转染脂联素cDNA对骨骼肌细胞株C2C12肌小管葡萄糖氧化和糖原合成的影响

背景:脂联素具有降低血脂、血糖,改善胰岛素敏感性的作用,但脂联素对骨骼肌糖代谢的影响尚无定论。目的:通过转染带小鼠脂联素基因的质粒,观察真核表达的脂联素对骨骼肌细胞株C2C12肌小管葡萄糖氧化和糖原合成的影响。设计:对照实验。单位:中山大学附属第二医院。材料:带小鼠脂联素cDNA的pcDNA3.0质粒,即pcDNA3.0-mad(由Dr.Da-WeiGong惠赠,University of Maryland),C2C12细胞株(ATCC,CRL-1722),rabbit anti-mouse脂联素IgG(ACRP303-A,Al-pha Diagnostic International),SABC即用型免疫组化试剂盒(博士德),D-[U-14C]葡萄糖(放射比活度9.25～13.32GBq/mmol,NEC),闪烁液POP,POPOP(Sigma),液体闪烁计数器(LS3801,Beckman,USA)。方法:实验于2003-03/08在中山大学附属第二医院中心实验室完成。①pcDNA3.0-mad质粒抽提后采用XhoⅠ和XbaⅠ双酶切,及HindⅢ单酶切鉴定。②用阳离子脂质体介导分别将pcDNA3.0-mad和pcD-NA3.0空载质粒转染至C2C12细胞,并通过G418(500mg/L)筛选3周,收集G418抗性的转染后C2C12细胞,分别建立稳定转染pcD-NA3.0-mad和pcDNA3.0的C2C12细胞株。③通过Westernblot和免疫组化,鉴定C2C12细胞组、稳定转染pcDNA3.0和pcDNA3.0-mad的C2C12细胞组中有无脂联素蛋白表达。④C2C12肌细胞糖代谢实验分对照组、载体组和pcDNA3.0-mad组3组进行,每组又分别加入0,0.5,5,100nmol/L胰岛素刺激4个浓度进行观察。在加入含D-[U-14C]葡萄糖的MEM培养液孵育一定时间后,通过液闪测定细胞株C2C12肌小管糖原合成和葡萄糖氧化情况。主要观察指标:稳定转染带小鼠脂联素基因的质粒后,骨骼肌细胞株C2C12肌小管葡萄糖氧化和糖原合成量的变化。结果:①质粒转化及酶切鉴定结果:pcDNA3.0-mad质粒抽提后采用XbaⅠ和XhoⅠ双酶切,及HindⅢ单酶切鉴定。得到的质粒酶切片段与预期相符,脂联素cDNA片段长度为781bp,质粒片段长度为5446bp,脂联素cDNA被插入在真核表达载体pcDNA3.0的酶切位点XhoⅠ和XbaⅠ之间。②质粒转染C2C12细胞及阳性克隆的筛选:转染后用含G418的培养基筛选第10天,C2C12细胞绝大多数已死亡,第2周出现阳性克隆,于转染筛选后第3周收集对G418产生抗性的C2C12细胞集落。③Westernblot和免疫组化检测结果:两种检测方法均证实只有稳定转染了pcDNA3.0-mad组的细胞能表达脂联素蛋白。④稳定转染脂联素基因对肌细胞糖代谢的影响:肌细胞的糖原合成和葡萄糖氧化量随着胰岛素浓度增加而逐渐增高。线性回归分析结果为对照组、载体组和pcDNA3.0-mad组回归系数分别为23.34,23.23和26.06,即pcDNA3.0-mad组随着胰岛素浓度的增强,葡萄糖氧化量增加的速率比其他两组快;pcDNA3.0-mad组C2C12肌细胞基础状态下和胰岛素刺激下的葡萄糖氧化和糖原合成量与其他2组相近(P>0.05)。结论:①成功建立了稳定转染脂联素基因并能表达脂联素蛋白的C2C12细胞株。②转染脂联素基因对C2C12肌细胞葡萄糖氧化和糖原合成无显著性影响。③肌细胞的糖原合成和葡萄糖氧化量随着胰岛素浓度增加而逐渐增高。④脂联素可能协同胰岛素促进肌细胞葡萄糖氧化而使肌细胞摄取葡萄糖增加。     

The Combined Effects of Hematoporphyrin Monomethyl Ether-SDT and Doxorubicin on the Proliferation of QBC939 Cell Lines

It is well established that both hematoporphyrin monomethyl ether-sonodynamic therapy (HMME-SDT) and doxorubicin (DOX) can induce cell apoptosis but each alone has its own limitations. To date, the combined effects of HMME-SDT and DOX on inducing cell apoptosis are little known and the mechanism for the combined effects remains poorly understood. In the present study, we reported the synergistic effects of HMME-SDT and DOX on inhibiting the proliferation of human cholangiocarcinoma QBC939 cells and investigated the mechanism of this synergy. The data from MTT assay, flow cytometer, Hoechst staining and cell arrest analysis showed that the combination of HMME-SDT and DOX exhibited higher inhibiting effects on proliferation of QBC939 cells than the sole application of HMME-SDT or DOX. In addition, the synergistic effects were shown to result from the DNA damage as demonstrated by single cell gel electrophoresis and DNA fragmentation. Furthermore, the expression of p53, Fas, Bax and activated caspase-3 protein was significantly upregulated in cells treated with HMME-SDT and DOX, whereas Bcl-2 protein was downregulated. Taken together, our data suggested that the application of HMME-SDT combined with DOX had better inhibiting effects on QBC939 cells and the effects were caused mainly by DNA damage.     

外源性子宫珠蛋白基因对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨人子宫珠蛋白（UG）基因对宫颈癌Hela细胞系细胞增殖及凋亡的影响。方法构建真核细胞表达载体pcDNA3．1-UG（＋），以脂质体介导法稳定转染体外培养的人宫颈癌Hela细胞，同时转染空载体pcDNA3．1质粒，以未转染细胞为对照，转染成功后分别命名为pcDNA3．1-UG（＋）／Hela组、pcDNA3．1／Hela组、Hela组。应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、Western blot方法分析目的基因表达，并采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞凋亡。结果pcDNA3，1-UG（＋）／Hela组UGmRNA及UG蛋白出现明显的高表达，与对照组细胞相比差异有统计学意义（P〈0．05）；pcDNA3．1UG（＋）／Hela组细胞生长速度明显慢于未转染Hela细胞，其细胞凋亡率与未转染Hela细胞相比差异也有统计学意义；然而pcDNA3．1／Hela组细胞生长速度和凋亡率均无明显变化。结论转染UG基因能诱导Hela细胞凋亡及抑制Hela细胞生长。     

抑制层黏素受体过表达在胆管癌细胞免疫逃逸中的作用

目的 探讨抑制层黏素受体(LNR)过表达下调Fas配体基因表达在胆管癌免疫逃逸中的作用.方法 采用流式细胞仪分选出过表达层黏素受体的胆管癌细胞QBC939,用脂质体转染法转染层黏素受体RNA干扰质粒和阴性对照质粒各6 μg至过表达层黏素受体的胆管癌细胞QBC939中,用实时荧光定量PCR法检测未转染组、阴性组和阳性组QBC939细胞Fas配体基因的表达情况.结果 分选后的QBC939细胞层黏素受体的表达率高达95%,继续转染层黏素受体RNA干扰质粒后,其FasL基因表达水平较未转染组和转染阴性对照质粒组明显降低.结论 LNR过表达在胆管癌免疫逃逸中的作用可能是通过Fas-FasL信号通路实现的.     

EBV-LMP1 cDNA克隆与真核表达载体的构建及体外表达

目的：从鼻咽癌组织中克隆EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）cDNA,构建真核表达质粒pIRES-LMP1,并检测其在体外的表达。方法：利用分子生物学技术,提取鼻咽癌总RNA,逆转录PCR获得LMP1 cDAN,克隆人pDrive Cloning Vector并测序,利用引物上设计的酶切位点Nhel和EcoRI将LMP1插入真核表达质粒pIRES中,测定序列后,用脂质体包裹转梁COS细胞,采用RT-PCR和Westrn blot 检测LMP1的表达。结果：扩增的LMP1 cDNA为1301bp,核酸序列测定证实本实验所构建的质粒正确,该表达质粒在体外转梁COS细胞后可表达LMP1分子。结论：实验所构建的pIRES-LMP1表达质粒能在体外表达LMP1分子。     

重组pcDNA3.1-hBMP-2转染兔脂肪干细胞体外诱导的成骨分化

背景：骨形态发生蛋白2具有很强的诱导干细胞成骨活性。目的：构建人骨形态发生蛋白2基因真核表达载体,探讨其转染脂肪干细胞后的成骨效果。方法：通过噬菌斑原位杂交筛选人混合细胞cDNA文库获得人骨形态发生蛋白2基因,与真核表达载体pcDNA3.1-连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2。利用脂质体LipofectamineTM2000分别介导人骨形态发生蛋白2基因、EGFP基因转染第4代脂肪干细胞,并经G418进行筛选。结果与结论：酶切鉴定及DNA测序结果证实重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2构建成功。经计算脂质体介导的脂肪干细胞瞬时转染率为（18.0±0.42）%,并经过G418筛选后获得了稳定转染的细胞。细胞生长曲线表明转染后对脂肪干细胞生长、增殖无明显影响。ELISA检测发现人骨形态发生蛋白2组的人骨形态发生蛋白2因子表达量均高于EGFP组及未转染组,且能够稳定表达。经人骨形态发生蛋白2基因转染的脂肪干细胞的Ⅰ型胶原含量、碱性磷酸酶活性以及钙结节数目均比EGFP组及未转染组有明显升高。