哇巴因对大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨哇巴因对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）内Ca2+浓度的影响。方法用组织
块贴壁法进行大鼠胸主动脉VSMCs原代培养,用免疫组织化学方法进行细胞鉴定,采用放射自显影术检测哇巴因对大鼠胸主动
脉VSMCs的结合能力,采用Fluo 3-AM（钙离子荧光探针）法研究哇巴因在短时间内对VSMCs细胞内Ca2+浓度的影响,探讨不同
浓度的钠泵α2亚单位截断性片段的拮抗作用。结果（1）放射自显影术检测结果显示,哇巴因与VSMCs间有一定的结合能力。
在0.1~100 nmol/L浓度范围,随着哇巴因浓度的增加,VSMCs与哇巴因的结合能力增加;（2）Fluo 3-AM检测VSMCs内Ca2+浓度
结果显示：不同浓度的哇巴因在短时间内能够引起VSMCs内Ca2+浓度的变化。在0~3200 nmol/L浓度范围,细胞内Ca2+离子浓
度会随着哇巴因浓度的增加呈现出逐渐升高的趋势;（3）不同浓度的钠泵α2亚单位截断性片段可以拮抗哇巴因引起的VSMCs内
Ca2+浓度的升高作用。结论哇巴因引起的细胞内高钙是高哇巴因高血压发生的细胞学基础,钠泵α2亚单位截断性片段可以拮
抗哇巴因引起的VSMCs内Ca2+浓度的升高作用,为进一步探讨哇巴因的作用机制结高血压的治疗提供了实验依据。
     

二步酶消化法分离大鼠主动脉血管平滑肌细胞及活性鉴定

目的:建立一种有效、方便的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的酶解分离方法.方法:采用二步酶消化法分离VSM-Cs,显微镜下观察细胞形态,锥虫蓝染色观察细胞成活率,荧光显微镜检测细胞内钙荧光强度(FI)在KCl激下的变化,全细胞膜片钳记录电压-依赖性钾电流.结果:分离的VSMCs镜下呈典型的梭状或长条状,成活率达68.0％;VSMCs内钙FI在KCl刺激下可增高;并可记录到稳定的电压-依赖性钾电流.结论:本法可获得大量形态和结构良好的VSMCs,且胞膜离子通道功能良好.     

心脉通胶囊对离体大鼠胸主动脉条的作用及机制

目的 探讨心脉通胶囊(XMT)对离体大鼠胸主动脉舒张作用的影响及机制。方法 采用大鼠胸主动脉环张力测定法,观察不同浓度XMT (200、400及800 g/L)对去甲肾上腺素(NE)和氯化钾(KCl)预收缩胸主动脉环的舒张作用及量效曲线的影响;以NE作为血管收缩刺激剂,观察XMT对内钙释放与外钙内流的影响。结果 XMT使NE和KCl的量效曲线向右下移动,最大反应性降低;在无钙Kerbs液中,XMT抑制NE诱导内钙释放所诱导的血管收缩反应,对复钙后NE所致的血管持续收缩具有抑制趋势。结论 XMT可使离体大鼠胸主动脉条舒张,该作用可能与钙离子拮抗有关。     

TRPV4对高血压小鼠胸主动脉内皮细胞钙离子稳态的调节作用

目的:探讨瞬时受体电位香草素亚型4（transient receptor potential vanilloid type 4,TRPV4）在高血压小鼠胸主动脉内皮细胞中对于钙离子稳态的调节作用。方法:通过高盐饮食诱导小鼠高血压模型,分别在细胞和组织水平上使用钙离子荧光探针Flou-4/AM标记胸主动脉内皮细胞内钙,测定在TRPV4特异性激动剂GSK1016790A刺激下高盐饮食组和普通饮食组中细胞的钙离子浓度变化。结果:在胸主动脉内皮细胞的细胞和组织水平上通过使用GSK1016790A特异性激活TRPV4通道,普通饮食组和高盐饮食组细胞内钙离子浓度均增高（P<0.05）,但和普通饮食组相比较,高盐饮食组在GSK1016790A刺激下钙离子荧光强度增幅低于普通饮食组（P<0.05）。结论:TRPV4参与了小鼠胸主动脉内皮细胞钙稳态的调节,通过激活TRPV4,促进内皮细胞外钙离子内流进入胞内,从而维持细胞内钙离子的稳态,而在病理模型,高盐饮食诱导的高血压状态下,TRPV4调节小鼠胸主动脉内皮细胞钙内流的作用受损。     

谷氨酸影响培养的海马神经元内钙变化机制

目的:研究谷氨酸对培养的大鼠海马神经元内钙信号的影响及作用机制。方法:用显微荧光测量技术监测神经元内钙信号的动态变化和谷氨酸对其的影响;阻断NMDA、AMPA受体后,观察谷氨酸对神经元内钙信号影响的变化。结果:谷氨酸使神经元内游离钙浓度明显升高,NMDA和AMPA受体拮抗剂、胞外钙离子浓度的降低均可不同程度地降低胞内游离钙离子升高幅度。结论:谷氨酸通过多种途径影响大鼠海马神经元内钙信号,激活NMDA和AMPA受体是其中的重要机制之一。     

Ox-LDL对大鼠血管平滑肌细胞OPG及RANKL表达的影响

目的：观察氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）骨保护素（OPG）及核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）表达的影响。方法：体外培养大鼠VSMCs细胞株（A7r5）,采用不同浓度Ox-LDL（75、150、300μg/mL）或不同时间（4、12、24h）处理构建VSMCs损伤模型,分别采用定量PCR、Western blot方法检测大鼠主动脉OPG、RANKL表达情况。结果：经过oxLDL干预后,VSMCs高表达OPG而低表达RANKL,且呈现浓度和时间的依赖性。结论：ox-LDL能够促进大鼠VSMCs OPG表达,并同时抑制RANKL表达。     

葡萄糖对大鼠血管平滑肌细胞的增殖与Ca^2＋水平的关系

目的研究葡萄糖对大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用与Ca^2＋水平的关系。方法取SD大鼠胸主动脉,用组织贴壁法原代培养血管平滑肌细胞,实验使用第4-8代细胞,荧光酶标仪的方法检测细胞内游离Ca^2＋水平。结果葡萄糖对大鼠VSMCs的增殖具有一定的浓度效应;随着葡萄糖浓度的增加,在一定范围内胞内Ca^2＋浓度也相应增加;随着时间的延长,细胞内的Ca^2＋浓度也逐渐升高。结论葡萄糖引起大鼠血管平滑肌细胞的增殖可能与其引起细胞内的Ca^2＋浓度的升高有关。     

N-苄基氟哌啶醇氯化物对大鼠血管平滑肌细胞内钙离子的影响

目的:动态观察N_苄基氟哌啶醇氯化物(F3)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞内Ca2+的影响。方法:用Ca2+荧光染料Fluo_3_AM负载大鼠胸主动脉平滑肌细胞,在激光扫描共聚焦显微镜上测定细胞内游离钙的变化。结果:在含CaCl2(1.26mmol/L)的细胞外液中,30 mmol/L KCl使细胞内钙荧光强度(FI)迅速增强,F3可以拮抗KCl诱导钙FI增强作用,并呈量效依赖和时间依赖关系。4种浓度F3(0.01、0.1、1.0、10μmol/L)作用3 min时,使KCl诱导细胞内钙FI从(81±4)%分别降至(71±18)%(n=20,P<0.05)、(51±12)%(n=20,P<0.01)、(39±14)%(n=20,P<0.01)、(28±14)%(n=20,P<0.01)。钙FI变化最快的时程是在给药后的0~30 s。结论:F3通过阻断细胞膜电压依赖性钙通道降低平滑肌细胞内钙浓度,这可能是其扩张血管,改善心肌缺血的机制。     

藏药7号水提液对大鼠离体胸主动脉条收缩作用的影响

目的通过观察藏药7号水提液对大鼠离体胸动脉条收缩作用的影响,研究藏药7号的降压机制.方法以生理盐水作为对照组,观察藏药7号水提液(6 g/L)和维拉帕米(Ver 0.013 g/L)对高K 液引起的主动脉条收缩的时效影响,观察对KCl、NE及CaCl2引起的大鼠主动脉条收缩的量效曲线的影响,以及对NE引起的依赖于细胞内钙及细胞外钙收缩的影响.结果藏药7号水提液抑制高K 液引起的主动脉收缩(P<0.001);而且可以使KCl、NE及CaCl2引起的大鼠主动脉条收缩的量效曲线非平行右移,最大效应降低,呈非竞争性拮抗作用(P<0.05);与维拉帕米相似,并且对NE引起的依赖于细胞内钙及细胞外钙的收缩均有抑制作用(P<0.05).结论提示藏药7号的降压机制与钙离子通道拮抗剂一致,而且其作用效果比Ver平稳,其最大作用与Ver相近.     

依托咪酯对大脑皮质突触体钙离子通道亚型的作用

目的　研究依托咪酯对大鼠大脑皮质突触体上不同钙通道的作用 ,探讨其抑制突触体内钙离子浓度升高可能涉及的钙离子通道亚型。方法　利用SD大鼠新鲜分离的大脑皮质突触体为研究对象 ,以KCl作为化学刺激剂去极化 ,采用荧光分光光度法测定依托咪酯 10 0mmol/L单用或与钙通道阻断剂合用的情况下对KCl诱发的突触体内钙离子浓度升高的影响。结果　P/Q型钙通道约占突触体钙内流的 5 0 % ,N型钙通道约占 2 0 % ,而L型钙通道不影响KCl诱发的突触体内钙离子浓度的升高。P/Q型钙通道阻断剂ω agatoxinIVA在单用或及与加入依托咪酯 10 0 μmol/L合用后对钙内流抑制作用没有差异 ,而L或N型钙通道阻断剂在加入依托咪酯后抑制钙内流作用增加。结论　P、N型钙通道在神经末梢去极化后钙离子内流中起主要作用。依托咪酯抑制高浓度KCl刺激引起的突触体内钙离子浓度升高可能与阻断P型 (可能还包括Q型 )钙离子通道有关。     

萹蓄黄酮苷对大鼠离体胸主动脉的舒张作用与机制

目的 探讨萹蓄黄酮苷(FP)对大鼠离体胸主动脉的舒张作用与机制.方法 以大鼠胸主动脉为标本,观察FP对去氧肾上腺素(PE)预收缩血管的舒张作用及其在血管内皮、平滑肌细胞中的作用.结果 在内皮完整血管上,FP能浓度依赖性地降低去氧肾上腺素(PE 1.0×10-5 mol/L)或氯化钾(KCl 6.0×10-2 mol/L)预收缩血管的张力;去内皮、加入一氧化氮合酶抑制剂L-N-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、 亚甲蓝(MB)及ODQ(GC阻断剂)对FP的舒血管作用没有影响;并且不受吲哚美辛、格列苯脲、四乙基铵、阿托品和普萘洛尔等药物的影响;在无钙K-H灌流液(含10-4 mol/L EGTA)中,FP可明显抑制PE引起的血管环收缩作用,而且可使CaCl2量效曲线下移.与控制组相比差异有显著性,P<0.01.结论 FP能够舒张由PE和KCl引起的血管收缩.舒张血管作用可能是抑制胞外Ca2+经血管平滑肌上的电压依赖性钙通道内流及胞内内质网Ca2+释放,从而抑制细胞内钙离子浓度升高.     

柴芩承气汤对急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞的保护作用及其机制

目的：探讨柴芩承气汤（Chaiqing Chengqi Decoction,CQCQD）对急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）大鼠胰腺腺泡细胞的保护作用及其机制。方法：SD大鼠以CQCQD灌喂,制备柴芩承气汤含药血清（CQCQserum,CQCQS）;SD大鼠分为AP组和假手术组,分离胰腺腺泡细胞并与CQCQS共同孵育,采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测不同浓度CQCQS对腺泡细胞存活力的影响,并用钙荧光指示剂Fluo-3-AM加载腺泡细胞,激光共聚焦显微镜直接观测腺泡细胞内钙荧光强度（fluorescent intensity,FI）,定量分析FI并以此表示[Ca^2＋]i。结果：5%和10%CQCQS均可提高AP大鼠胰腺腺泡细胞存活力（P〈0.05）,且10%CQCQS提高细胞存活力的作用比5%CQCQS更为显著（P〈0.05）;[Ca^2＋]i随AP病程延长而升高（P〈0.05）,CQCQS可抑制AP大鼠胰腺腺泡细胞内[Ca^2＋]i升高（P〈0.05）。结论：CQCQD对AP时的胰腺细胞有保护作用,其机制可能与抑制胰腺腺泡细胞内钙超载有关。     

辣椒素通过钙信号抑制感觉神经元的电压门控性钙离子通道

目的 研究辣椒素对大鼠背根神经节神经元的电压门控性钙离子通道的抑制效应及其信号机制.方法 在急性分离的大鼠背根神经节(DRG)神经元上,应用全细胞膜片钳技术记录电压激活性钙离子通道电流以及辣椒素诱导的电流,应用钙离子成像技术检测Ca2+浓度的变化.结果 辣椒素能够抑制大鼠DRG神经元的电压激活性钙离子通道电流.细胞外钾离子浓度显著升高引起细胞去极化并打开膜上电压门控性钙离子通道引起胞外Ca2+内流,辣椒素只在引起胞内Ca2+浓度显著升高的情况下才能抑制高钾诱导的电压门控性Ca2+内流.用咖啡因耗竭细胞内Ryanodine敏感性钙库以后,辣椒素引发的胞内钙浓度升高的效应被显著抑制,说明辣椒素可诱导胞内Ryanodine敏感性钙库释放Ca2+.结论 在辣椒素敏感性的大鼠DRG神经元中,辣椒索通过胞内钙信号抑制电压门控性钙离子通道.Ca2+信号部分来源于Ryanodine敏感性钙库.     

维拉帕米通过阻断钙离子内流抑制血管平滑肌细胞钙化研究

目的 探讨维拉帕米抑制高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的作用及可能机制。方法 2014年12月-2015年6月选取5～8周龄清洁级健康雄性SD大鼠6只,体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫组化法鉴定。将对数期VSMCs随机分为正常对照组〔含10%胎牛血清（FBS）培养基〕、高磷组（高磷培养基,含10 mml/L β-甘油磷酸）、维拉帕米干预组（在高磷培养基的基础上加入维拉帕米至浓度为20 mmol/L）。细胞接受2、4、6 d干预后,检测VSMCs内钙离子水平,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测VSMCs内目的基因（smad1、runx2 mRNA）表达水平。细胞接受14 d干预后进行钙化检测,包括钙水平测定和茜素红染色情况。结果 高磷组、维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内钙离子水平均高于正常对照组（P＜0.05）;维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内钙离子水平均低于高磷组（P＜0.05）。高磷组、维拉帕米干预组4、6 d后VSMCs内钙离子水平分别高于2 d后（P＜0.05）;高磷组6 d后VSMCs内钙离子水平高于4 d后（P＜0.05）;维拉帕米干预组6 d后VSMCs内钙离子水平低于4 d后（P＜0.05）。高磷组、维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平均高于正常对照组（P＜0.05）;维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平均低于高磷组（P＜0.05）。高磷组4、6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平分别高于2 d后,6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平分别高于4 d后（P＜0.05）;维拉帕米干预组4 d后VSMCs内smad1 mRNA表达水平高于2 d后,runx2 mRNA表达水平低于2 d后,6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平均高于2、4 d后（P<0.05）。高磷组、维拉帕米干预组VSMCs钙水平均高于正常对照组（P＜0.05）;维拉帕米干预组VSMCs钙水平低于高磷组（P＜0.05）。高磷组、维拉帕米干预组橘红色钙化结节较正常对照组多,维拉帕米干预组橘红色钙化结节较高磷组少。结论 维拉帕米在高磷诱导的VSMCs钙化中起抑制作用,其可能是通过抑制钙离子内流进而抑制smad1表达,进一步抑制runx2表达,进而抑制VSMCs发生表型转化来实现的。     

痛泻要方抑制大鼠离体结肠平滑肌收缩的钙动员机制

目的：从影响钙动员角度,探讨痛泻要方抑制大鼠结肠平滑肌收缩的作用机制。 方法：应用离体平滑肌张力测定方法,观察痛泻要方对乙酰胆碱（acetylcholine, ACh）、氯化钾（KCl）和细胞内钙库耗竭后细胞外Ca^2＋内流引起的大鼠结肠平滑肌收缩的影响。 结果：痛泻要方能够抑制KCl和细胞内钙库耗竭后细胞外Ca^2＋内流引起的大鼠结肠平滑肌收缩,并呈浓度依赖性。3 000 μg/mL 痛泻要方还能抑制ACh引起的第二收缩时相张力,与不加药的对照组（Krebs液）比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;痛泻要方对ACh引起的第一收缩时相张力无明显影响。 结论：痛泻要方主要通过抑制胞外Ca^2＋内流来抑制大鼠结肠平滑肌的收缩,可能涉及到阻断电压门控钙通道、钙库调控性钙通道和受体操纵性钙通道,但不影响ACh引起的胞内Ca^2＋释放。     

蛋白激酶C调节的1,4,5-三磷酸肌醇受体磷酸化在胆囊收缩素介导的胃窦平滑肌细胞钙动员中的作用

目的研究八肽胆囊收缩素（CCK-8）对大鼠胃窦平滑肌细胞（SMC）胞内钙释放和胞外钙内流的作用及对其具体相关机制的探讨。方法（1）多导生理记录仪记录大鼠离体胃窦肌条在不同条件下的收缩活动;（2）免疫印迹法和免疫沉淀法检测胃窦SMC的三型1,4,5-三磷酸肌醇受体（InsP3113）及其磷酸化水平;（3）Fura-2／AM标记胃窦SMC,观察CCK-8S对胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响;（4）全细胞膜片钳检测胃窦SMC的L-型电压门控钙通道电流（ICa-L）的变化情况。结果（1）CCK-8S作用下胃窦肌条收缩幅值和频率改变明显[增长率分别为（62±13）％和（58±17）％,均P〈0．01],可被CCK-A受体拮抗剂和钙泵抑制剂所阻断;（2）蛋白激酶C（PKC）上调InsP3R3磷酸化水平,抑制CCK-8S介导的内钙释放;（3）CCK-8S引起的[Ca^2＋]i显著升高[从（69±7）mol／L升至（472±36）nmol／L,P〈0．01]分别可被CCK-A受体或胞内钙泵抑制剂和PKC激动剂所阻断;去除外钙或给予L-型钙通道阻滞剂时CCK-8S仍可引起[Ca^2＋]i升高;（4）CCK-8S显著增强胃窦SMC的IICa-t。[从（-56±7）pA升至（-89±6）pA,P〈0．01],可分别被ICa-L阻滞剂、胞内钙泵抑制剂和钙依赖性氯通道阻滞剂所阻断。结论CCK-8S引起的大鼠胃窦SMC的[Ca^2＋]i升高依赖于PKC介导的InsP3R3磷酸化作用调节下的细胞内钙离子释放。胞内钙释放可激活ICl-Ca,引起细胞膜去极化而活化ICa-L引起胞外钙内流,最终引起SMC收缩效应。     

左甲状腺素连续给予大鼠血管平滑肌反应性的变化及其机制

目的观察甲状腺素连续给予对大鼠胸主动脉收缩性能的影响以及相关机制。方法大鼠ig左甲状腺素（Levo—thyroxine，L—thy）40天，观察给药10天和40天大鼠离体胸主动脉环对去甲肾上腺素（NE）、乙酰胆碱（Ach）反应性的改变。在无钙K—H液中观察血管由NE引起内钙释放及外钙内流所致收缩的改变。结果甲状腺素给药10天，大鼠胸主动脉对Ach反应性增强，连续给药40天，血管对Ach的敏感性降低，血管舒张功能明显低于10天组。N-硝基-L-精氨酸（t-NAME）实验证明，Ach诱导的血管舒张反应完全由内皮一氧化氮（NO）系统介导。结论给药后血管平滑肌对NE的收缩反应下降呈时间依赖性。这种收缩反应下降早期与血管内皮NO系统功能亢进有关，而后期主要与血管收缩过程中内钙释放途径受损有关。     

亮啡肽对离体大鼠心室肌细胞膜功能的抑制作用

本实验采用分离ＳＤ大鼠心室肌细胞，以Ｆｕｒａ－２ＡＭ负载，荧光分光光度计测试心室肌细胞内游离钙浓度的变化，观察亮啡肽对心室肌细胞内游离钙浓度的变化影响，实验结果表明：（１）亮啡中抑制同ＫＣｌ引起的心室肌细胞膜上膜电压依赖性钙通通道开放；（２）亮啡肽可抑制由去甲肾上腺素（ＮＥ）引起的心室肌细胞膜上受体依赖性钙道开放；（３）亮啡肽可抑制心室肌细胞膜上钙泵的活动，使由咖啡因引起的内钙释放不能及时地排出。     

卡托普利对自发性高血压大鼠胸主动脉缝隙连接蛋白43表达的影响

目的:通过比较Cx43在正常大鼠和自发性高血压大鼠胸主动脉表达的差异,以及经卡托普利干预后的变化,来阐明卡托普利抗高血压血管重构的分子机制。方法:12周龄自发性高血压大鼠(SHRs)16只随机分为对照组和卡托普利干预组,以年龄和体重匹配的Wistar-Kyoto大鼠(WKYs)为正常空白对照组。干预组,灌胃法给予卡托普利[12.5mg·d)],8周后,采用无创血压测定仪测量3组大鼠尾动脉收缩压;用酶联免疫吸附法测量血浆和胸主动脉组织血管紧张素Ⅱ(AngII)浓度。采用实时定量RT-PCR和Western blot分析,检测3组大鼠胸主动脉组织内Cx43的mRNA及蛋白表达。结果:SHR组的血浆、动脉组织AngII浓度较WKY大鼠组明显升高,而卡托普利干预组的血浆、组织AngII浓度则较SHR组明显降低。SHR组胸主动脉的Cx43的mRNA表达高于WKY组(P<0.01),卡托普利降低Cx43mRNA的表达(P<0.01)。蛋白印迹法显示,SHR组大鼠胸主动脉中,Cx43蛋白表达高于WKY大鼠组(P<0.01)。卡托普利降低组织主动脉内Cx43的蛋白表达(P<0.01)。结论:自发性高血压大鼠主动脉Cx43表达增强,卡托普利能够降低胸主动脉Cx43的表达。     

山核桃叶不同萃取物及DHMC对大鼠胸主动脉条收缩功能的影响

目的：研究山核桃叶95％醇提物不同萃取层和黄酮单体2,6＇-二羟基-4＇-甲氧基查耳酮（DHMC）对大鼠胸主动脉条收缩功能的影响并探讨DHMC的作用机理.方法：采用离体血管环灌流装置,观察不同受试药物对大鼠胸主动脉条收功能的影响判断其舒张血管的作用.结果：山核桃叶各萃取层对去甲肾上腺素（NE） 100 nmol/L预收缩的大鼠离体胸主动脉条的影响作用各不相同：水层和正丁醇层基本无作用,石油醚和氯仿层具有一定舒张动脉条作用且氯仿层作用较强,而乙酸乙酯层具有加强血管收缩作用;DHMC对NE和KCl预收缩的动脉条都有明显的舒张血管作用.结论：山核桃叶中同时具有收缩和舒张血管的化学成分,其中山核桃叶中含量较高的黄酮类化合物DHMC舒张血管效应明显,其作用机制可能与抑制细胞外钙内流及抑制细胞内储存钙的释放有关.