与肺癌和胃癌转移可能相关的RAB5A基因

目的 研究和分离肿瘤转移相关基因,探讨肺癌及胃癌转移发生的分子基础。方法 应用细胞培养、ｍＲＮＡ差异显示技术、ｃＤＮＡ克隆、测序技术、ＲＴ－ＰＣＲ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术以及免疫组化技术,分析比较了细胞来源相同,但转移能力不同的人肺腺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３和ＡＧＺＹ８３－ａ基因差异表达及其差异表达基因ＲＡＢ５Ａ在临床胃癌和肺癌标本中存在的实际意义。结果 在两细胞系之间确有明显的差异表达基因存     

胃癌组织中RAB5A蛋白的表达及其与转移的关系

目的检测ＲＡＢ５Ａ蛋白在胃癌组织 的表达及其与转移的关系。方法应用免疫组化ＳＰ方法检测４７例胃癌石蜡包埋标本及７例正常胃组织中ＲＡＢ５Ａ蛋白的表达情况。结果 正常胃组织中ＲＡＢ５Ａ蛋白表达的阳性率为０;胃癌组织中ＲＡＢ５Ａ蛋白表达的阳性率为９１．４９％,两者的阳性率有显著性差异。有无淋巴结转移者的ＲＡＢ５Ａ蛋白表达的阳民生率分别为９１．８９％和９０％,无显著性差异,但两者ＲＡＢ５Ａ蛋白的表达程度有     

E1A基因对人肺腺癌细胞增殖和转移的影响

目的　探讨腺病毒 5型早期区 1A(Ad5E1A)基因对人肺腺癌细胞增殖和转移的影响 ,为人肺腺癌E1A基因治疗的可行性提供实验依据。方法　用本室构建的真核表达重组质粒pcDNA3 E1A ,通过脂质体介导将E1A基因转入人肺腺癌细胞系 (Anip 973) ,经G418筛选获得稳定表达E1A基因的转染细胞 (Anip 973 E1A)。通过体内、外实验 (生长速度、倍增时间、软琼脂集落形成、裸鼠致瘤性及转移能力等 ) ,观察E1A基因对人肺腺癌细胞增殖和转移的影响。结果　体外实验显示 ,Anip 973 E1A细胞生长速度减慢 ,倍增时间延长 ;软琼脂集落形成能力显著降低 ,亲本Anip 973、Anip 973 vect和Anip 973 E1A细胞集落形成率分别为 19.7%、17.2 %和 2 .3% ,集落形成抑制率为 86 .6 %。体内实验显示 ,Anip 973 E1A细胞组出瘤时间晚 ,肿瘤体积小 ,有 2只裸小鼠至实验结束未触及肿瘤 (2 /6 ) ,抑瘤率为 6 0 .1%。第 2 1天计数肺转移灶 ,亲本Anip 973、Anip 973 vect和Anip 973 E1A细胞组肺转移灶数目分别为 16 .1± 3.2、15 .4± 3.8和 7.3± 2 .3个 ,转移抑制率为 5 2 .6 %。结论　E1A基因能显著抑制人肺腺癌细胞的恶性表型 ,降低裸鼠致瘤性 ,减少肺转移灶形成 ,为人肺腺癌E1A基因治疗提供了实验依据。     

survivin反义寡核苷酸提高人肺腺癌A549耐药细胞系对顺铂敏感性的研究

目的探讨存活素反义寡核苷酸(ASODN)体外转染对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/ CDDP凋亡及其对顺铂(CDDP)敏感性的影响。方法常规体外培养A549/CDDP细胞,以脂质体包裹的survivin ASODN转染细胞,采用RT-PCR法和免疫细胞化学法检测survivin mRNA及蛋白表达。通过形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、caspase-3酶活性及细胞凋亡率(AI)的测定,评价细胞凋亡程度。采用MTT法测定细胞存活率和生长抑制率,计算半效抑制浓度(IC_(50))及耐药倍数(RI)。结果转染组survivin mRNA及蛋白表达下调明显,分别达41．56%和0．864±0．045,与其他各组比较,差异均有统计学意义(P＜0．05)。细胞形态学显示有细胞凋亡改变,表现为细胞核固缩、核边集和核碎裂等;DNA凝胶电泳可见DNA梯形条带;ASODN转染组细胞凋亡率和caspase-3相对活性分别增高至34．03%和1．1298±0．2502,而ASODN+CDDP组增高更为明显,分别达65．85%和1．6805±0．2758,与其他各组比较,差异均有统计学意义(P＜0．05)。ASODN转染组和ASODN+CDDP组生长抑制率分别增高至59．3%和83．7%(P＜0．05);而ASODN转染组细胞对CDDP的IC_(50)由对照组的(225．03±10．59)μmol/L减低至(158．84±4．26)μmol/L,RI由11．9减至8．4。结论survivin ASODN通过下调survivin的表达,自身诱导了细胞凋亡,并逆转细胞对CDDP诱导的细胞凋亡的耐受,降低凋亡阈值,从而增强了人肺腺癌细胞对CDDP的敏感性。     

苯丁酸钠对体外人肺腺癌细胞A549的影响

目的观察苯丁酸钠（PB）对体外人肺腺癌细胞A549的影响。方法采用MTT法观察不同浓度PB对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用,流式细胞术分析不同浓度PB对生长期人肺腺癌细胞A549的细胞周期及凋亡情况的影响。结果 PB作用后人肺腺癌细胞A549的生长缓慢,细胞阻滞于G0/G1期（P〈0.05）,凋亡增加（P〈0.05）,其抑制作用呈时间和浓度依赖性。结论 PB能抑制人肺腺癌细胞A549的生长,促进其凋亡。     

circTADA2A在肺腺癌组织和细胞中的表达及其对A549细胞迁移及侵袭影响的实验研究

目的:研究环状RNA TADA2A(circular RNA TADA2A,circTADA2A)在肺腺癌(lung adenocarcinoma,LAD)组织和细胞中的表达及其对A549细胞迁移及侵袭的影响.方法:在Gene Expression Omnibus(GEO)数据库中下载非编码RNA阵列分析文件GSE10...     

人肺低分化腺癌细胞系SPC—L1

来源于人肺低分化腺癌的细胞系ＳＰＣ－Ｌ１初代培养始于１９８４年７月１２日。细胞贴壁生长，呈类多边形。群体培增时间为３２小时，克隆形成率１５．７％，染色体众数范围为５１－６１，４０％中期分裂相丢失Ｙ染色体，核型为６１，ＸＹ，＋３Ｂ，＋５Ｃ，＋２Ｄ，＋１Ｅ，＋４Ｇ。ＤＮＡ指数（ＤＩ）为１．５３。ＳＰＣ－Ｌ１细胞移植于裸鼠皮下可形成移植瘤，并可在裸鼠间传代移植，移植瘤组织结构与原代培养材料相似，呈低分化     

羟基喜树碱联合放射对人肺腺癌细胞协同杀伤作用的实验研究

目的 研究羟基喜树碱联合放射对人肺腺癌细胞的协同杀伤作用。方法 应用四唑盐比色试验（ＭＴＴ）检测细胞抑制百分比,ＤＮＡ琼脂糖电泳检测ＤＮＡ“Ｌａｄｄｅｒ”及流式细胞术检测细胞周期及凋亡峰的比例。结果 羟基喜树碱对该细胞的抑制呈剂量及时间依赖关系,且明显阻滞细胞于Ｓ期,低浓度的羟基喜树碱（１μｇ／ｍｌ）作用４８小时,细胞开始出现凋亡小峰,高浓度的羟基喜树碱（５０μｇ／ｍｌ）作用２４小时就出现明显的凋     

RAB1A在肿瘤发生发展中的作用研究进展

RAB1A是一种小三磷酸鸟苷(guanosine triphosphate, GTP)酶,是内质网和高尔基体之间囊泡转运的重要调节成分,可以在非活性GDP结合形式和活性GTP结合形式之间转化。RAB1A除了在囊泡转运中的作用外,还参与营养感应、信号转导、细胞迁移和自噬调节。RAB1A更多是作为癌基因发挥作用,主要通过激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1)信号通路,调节肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和转移。研究表明,RAB1A的异常激活与结直肠癌、HCC、乳腺癌、胃癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。本文主要就RAB1A的结构与功能、在肿瘤发生发展中的作用及相关信号通路进行综述。     

聚多曲霉菌提取液对培养人肺腺癌细胞增殖作用的实验研究

目的：了解聚多曲霉菌粗提液对人肺腺癌细胞（A549）增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测不同剂量霉菌提取液作用后A549细胞增殖情况。利用琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪（FCM）进行细胞周期分析,并检测细胞凋亡率。结果：MTT法结果显示,大剂量霉菌提取液可显著抑制A549细胞的增殖,并呈剂量依赖效应;小剂量可促进细胞增殖。FCM检测结果显示,大剂量干预组G0/G1期细胞显著增加,S期细胞显著减少,并在G1期前出现细胞凋亡图像;小剂量干预组G0/G1期细胞显著减少,S期细胞显著增加;G2期细胞均无明显改变。结论：聚多曲霉菌提取液对A549细胞的增殖呈双向作用;除诱导细胞凋亡外,聚多曲霉菌产物的细胞毒性或其他生物学效应可能是其发挥抑制A549细胞增殖作用的更主要途径。     

RhoA在胃癌细胞中的表达及其作用

目的 探讨RhoA在胃癌细胞系中的表达及其作用。方法 Westem blot方法检测RhoA在多株人消化道肿瘤细胞系中的表达;构建RhoA反义核酸真核表达载体,脂质体法转染至高表达RhoA的人胃癌细胞系AGS,MTT比色法观察细胞生长,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果 10株肿瘤细胞系中RhoA蛋白表达均显著高于永生化正常人肠黏膜细胞系HIEC。转染RhoA反义核酸真核载体后,AGS细胞中RhoA蛋白表达降低,细胞生长受到抑制,细胞周期分析显示聚集在S期的细胞明显增多。结论 RhoA蛋白在消化道肿瘤细胞系中表达明显增高,降低RhoA表达能部分逆转胃癌细胞的恶性表型。     

eIF5A1对非小细胞肺癌细胞系化疗药物敏感性的影响

目的:探讨eIF5A1对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系化疗药物敏感性的影响及可能的机制。方法:应用RT-PCR法检测不同NSCLC细胞系eIF5A1 mRNA表达水平。MTT法检测其对吉西他滨的敏感性,并分析二者的关系。构建真核表达载体pEGFP-C1-eIF5A1并通过脂质体介导法转染肺腺癌LTEP-a-2 细胞。荧光显微镜、RT-PCR和Western blot方法评估转染效率。MTT法检测转染后细胞化疗药物敏感性变化。流式细胞仪检测转染后细胞周期及凋亡变化。结果:肺鳞癌细胞系eIF5A1 mRNA表达水平及对吉西他滨的敏感性均显著高于肺腺癌细胞系（P<0.001）。pEGFP-C1-eIF5A1转染eIF5A1表达水平最低的LTEP-a-2细胞后eIF5A1 mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.001）。与对照组细胞比较,eIF5A1转染组细胞对吉西他滨、顺铂、紫杉醇、多西紫杉醇的敏感性显著增加（P<0.001）。S期和G2/M期细胞比例显著增加（P<0.001）。在化疗药物作用下,细胞凋亡率显著增加（P<0.001）。结论:在非小细胞肺癌中上调eIF5A1的表达可能增加细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与eIF5A1高表达增强化疗药物的促凋亡作用及影响细胞周期分布有关。     

不同分化程度大肠癌组织RAB5A和CD44v9的表达及其相关性分析

目的　检测RAB5A蛋白在高低不同分化程度大肠癌组织中的表达及其与CD4 4v9的相关性。方法　分别应用二步免疫组化和原位杂交法对 4 3例高低不同分化程度的大肠癌石蜡包埋标本进行检测。结果　 4 3例大肠癌组织中 ,RAB5A蛋白表达阳性率达 10 0 % (4 3/ 4 3) ,阳性表达位于胞质和胞膜 ;CD4 4v9表达阳性率为 81.4 % (35 / 4 3) ,阳性表达位于胞质。高低分化程度不同者RAB5A和CD4 4v9的表达程度差异有显著性 (P <0 .0 1) ,随着大肠癌分化程度的降低 ,表达明显增高。两者表达呈正相关性 (P <0 .0 1)。结论　RAB5A蛋白和CD4 4v9在大肠癌进展和分化过程中起着共同调节作用 ,可作为预测肿瘤分化程度和预后的客观指标。     

Aurora A反义寡核苷酸对人肺癌细胞系A549细胞生长与细胞周期的影响

目的：探讨Aurora A基因表达的下调对肺癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法：用脂质体瞬时转染法介导Aurora A反义硫代磷酸寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides,ASODN）处理肺腺癌A549细胞,RT-PCR及Western-blot方法检测Aurora A mRNA和蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期分布的变化,四氮唑盐法（MTT）检测转染前后细胞生长抑制率变化。结果：Aurora A反义寡核苷酸作用于A549细胞后,细胞的生长抑制率在一定范围内呈剂量和时间依赖性,其中48h的IC50值约为300nmol/L,在此浓度和时间下,Aurora A反义寡核苷酸可明显降低Aurora A mRNA和蛋白的表达,且细胞周期阻滞于G2/M期和S期。结论：下调Aurora A表达可抑制肺腺癌细胞系A549的增殖,同时导致细胞阻滞于G2/M期及S期。     

Rb94对人肺腺癌细胞系A549放射增敏作用的实验研究

目的 构建人视网膜母细胞瘤基因(Rb94)真核表达载体,观察其对人肺腺癌细胞系A549的放射增敏作用并探讨其机制.方法 构建重组表达质粒pIPES-Rb94,经脂质体转染A549细胞、G418筛选获得稳定转染的细胞系.细胞计数法绘制生长曲线、计算细胞倍增时间;实时RT-PCR检测hTERT、Bcl-2mRNA的表达;成克隆实验检测pIRES-Rb94对A549细胞放射敏感性影响,计算放射增敏比(SER);流式细胞仪分析细胞周期.结果 成功构建pIRES-Rb94质粒,转染A549细胞后获得稳定转染细胞系pIRES-Rb94-A549.与A549细胞相比,pIRES-Rb94-A549细胞倍增时间延长(31.5h:39.5 h;t=5.15,P<0.01);hTERT、Bcl-2 mRNA表达下降(0.02:1.00;t=18.99,P<0.01;0.01:1.00;t=13.73,P<0.01);G2+M期细胞增加(35.91%:4.53%;t=36.78,P=0.00),G0+G1期和S期细胞减少(47.02%:74.07%;t=11.71,P=0.00和17.07%:22.32%;t=2.30,P<0.05);由D0值计算的SER为1.30.结论 Rb94对A549细胞具有明显放射增敏作用,其机制可能是G2+M期阻滞作用以及下调hTERT、Bcl-2 mRNA表达,并可能通过调节细胞周期来影响细胞增殖.