血小板源生长因子B及其受体β与支气管哮喘血管再生与重塑

目的 进一步明确支气管哮喘时血管相关因子血小板源生长因子B(PDGFB)和血小板源生长因子受体β(PDGFRβ)在支气管哮喘小鼠模型气管及肺组织中的变化和作用.方法 在建立小鼠支气管哮喘模型的基础上,应用免疫荧光染色和HE染色计数血管平滑肌细胞数量变化,应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测气管和肺组织PDGFB及其受体(PDGFB/PDGFRβ)mRNA表达情况,应用Western blot方法检测PDGFB/PDGFRβ蛋白水平.结果 ①血管平滑肌细胞数量在支气管哮喘急性期减少,在慢性期又恢复正常;②应用RT-PCR技术及琼脂糖凝胶电泳,PDGFB mRNA及PDGFRβ mRNA在正常气管未检测到,而在慢性延长期哮喘小鼠气管组织PDGFB mRNA显示出清晰的条带.周围肺组织在正常小鼠也表达PDGFB mRNA,哮喘小鼠肺组织表达增强,在慢性延长期表达明显增加.应用Western blot蛋白检测技术,哮喘小鼠气管及肺组织PDGFB及PDGFRβ蛋白表达情况与基因检测结果相一致.结论 PDGFB和PDGFRβ基因与蛋白表达水平在支气管哮喘气管及肺组织均增加,特别在慢性延长期,PDGFB和PDGFRβ表达改变是血管平滑肌细胞数量变化的重要因素.PDGFB和PDGFRβ系统在支气管哮喘气道血管再生和重塑过程中可能起着重要的作用.     

树舌多糖抑制胃癌MGC-803细胞增殖及对酪氨酸激酶活性的影响

目的探讨树舌多糖对人胃癌MGC-803细胞增殖、细胞周期分布及其对酪氨酸激酶表皮生长因子受体(EGFR)、血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)表达的影响。方法 MTT法检测树舌多糖对胃癌细胞MGC-803增殖抑制;流式细胞仪检测树舌多糖作用后MGC-803细胞的周期分布、EGFR及PDGFRβ表达变化;荧光显微镜下观察细胞EGFR、PDGFRβ表达情况。结果树舌多糖对胃癌MGC-803细胞增殖具有抑制作用,并呈时间及剂量依赖性。2mg/ml树舌多糖作用MGC-803细胞2h后,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少,与对照组细胞比较有差异(P0.05)。树舌多糖下调MGC-803细胞EGFR、PDGFRβ的表达,与对照组细胞比较有差异(P0.05);荧光显微镜和流式细胞仪检测结果一致。结论树舌多糖抑制胃癌MGC-803细胞增殖,下调酪氨酸激酶EGFR、PDGFRβ表达和阻止胃癌细胞由G1期进入S期,延缓细胞周期进程。     

Notch1表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的探讨Notch1表达对肾癌细胞生物学行为的影响。方法通过Western印迹检测Notch1在人正常肾小管上皮细胞HK-2,人肾癌细胞786-O,Caki-1,769-P,GRC-1及ACHN中的表达;siRNA Notch1及siRNA NC转染肾癌细胞48 h后,Western印迹及RT-PCR检测转染情况,MTT法及Hoechst染色检测细胞活力及凋亡情况,Transwell法检测细胞迁移侵袭能力,Western印迹检测Bax,Bcl-2,基质金属蛋白酶(MMP)2,MMP9蛋白表达。结果 HK-2细胞中Notch1蛋白表达量显著低于5株肾癌细胞786-O,769-P,GRC-1,Caki-1及ACHN,且在Caki-1中Notch1表达量最高,因此作为后续实验的细胞株。siRNA Notch1及siRNA NC转染肾癌细胞48 h后,与siRNA NC组比较,siRNA Notch1组Notch1蛋白及mRNA表达量下调,细胞活力降低,细胞凋亡率提高,细胞侵袭数目减少,Bax表达量上调,Bcl-2、MMP2及MMP9表达量下调(P<0.01)。结论 Notch1低表达能显著抑制肾癌细胞Caki-1的恶性生物学行为,可能与调控细胞凋亡蛋白及下调MMPs表达有关。     

miR-425对胶质瘤细胞迁移与侵袭的影响

目的探讨miR-425对人胶质细胞瘤U87细胞迁移与侵袭能力的影响。方法利用Lipo2000转染试剂体外瞬时转染人胶质细胞瘤U87,将细胞分为实验组(转染miR-425 mimics)、抑制组(转染miR-425 inhibitors)、空白组(无转染)。Real-time PCR检测细胞中miR-425表达;划痕实验检测细胞的迁移距离,Transwell实验检测细胞的迁移以及侵袭能力,Western印迹检测基质金属蛋白(MMP)2、MMP9的表达水平。结果与空白组相比,miR-425 mimics组miR-425表达明显上调,约为空白组的8倍,细胞侵袭与迁移能力下降,MMP2、MMP9表达下降,miR-425 inhibitors组miR-425表达明显下调,约为空白组的0.14倍,细胞侵袭与迁移能力显著增强,MMP2、MMP9表达增强。结论 miR-425的表达水平与胶质瘤U87细胞的迁移与侵袭能力密切相关。     

人参皂甙Rg3对喉癌细胞迁移能力的影响

目的探讨人参皂甙Rg3对喉癌细胞株Hep2迁移能力的影响。方法人参皂甙Rg3作用于Hep2细胞后,利用划痕实验比较各组间细胞迁移能力的区别;同时检测基质金属蛋白酶(MMP2)的表达情况。结果用药组较对照组迁移能力下降,且RT-PCR检测结果显示用药组MMP2 mRNA的表达下调。结论人参皂甙Rg3能抑制Hep2的迁移能力,对肿瘤的浸润、转移有一定的抑制作用。     

RNA干扰基质金属蛋白酶-9对骨肉瘤MG-63细胞侵袭、迁移的影响

目的探讨RNA干扰基质金属蛋白酶(MMP)-9基因对人骨肉瘤MG-63细胞体外侵袭和迁移能力的影响。方法通过慢病毒载体介导shRNA-MMP-9转染MG-63细胞,实验分为:转染组(转染shRNA-MMP-9序列)、对照组(转染shRNA-MMP-9-NC序列)、空白组(磷酸盐缓冲液);RT-PCR检测各组MMP-9和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达;Western印迹检测各组MMP-9和VEGF蛋白的表达;Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力;细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果转染组MMP-9和VEGF的mRNA和蛋白表达量显著低对照组和空白组(P0.05);转染组穿膜细胞数[(56.37±3.29)个/视野]显著低于对照组和空白组[(92.06±3.56)个/视野、(93.05±1.52)个/视野](P0.05);转染组划痕愈合率(23.63%±1.47%)显著低于对照组和空白组(57.17%±3.86%、58.13%±2.35%)(P0.05)。结论 RNA干扰沉默骨肉瘤MG-63细胞的MMP-9基因表达,通过作用于VEGF靶基因,抑制其细胞侵袭及迁移能力。     

氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血小板源性生长因子B mRNA表达的影响

目的 观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA表达的影响,从一个新的角度探讨氨氯地平的抗动脉粥样硬化作用机制.方法 预实验筛选出氧化型低密度脂蛋白对血小板源性生长因子B表达适宜的处理浓度(50 mg/L)与时间(24 h).实验分为5组:对照组、氧化型低密度脂蛋白组和三个不同剂量(0.1、1.0和10.0 μmol/L)氨氯地平组,用RT-PCR检测血小板源性生长因子B mRNA的表达.结果 以50 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激HUVEC-12内皮细胞24 h.随着预处理氨氯地平浓度增加,细胞血小板源性生长因子B mRNA的表达逐渐降低,并呈现浓度依赖性,当浓度为10.0 μmol/L时作用更明显.结论 氧化型低密度脂蛋白可影响HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA的表达,氨氯地平可下调氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA的表达.     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8在肺癌组织中的表达及对肺癌细胞增殖、迁移能力的影响

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)α诱导蛋白(TNFAIP)8在非小细胞肺癌组织中的表达情况及其对肺癌A549细胞增殖和迁移能力的影响。方法用RT-PCR和Western印迹检测非小细胞肺癌组织与癌旁组织中TNFAIP8 mRNA和蛋白表达的差异。合成TNFAIP8特异性siRNA,转染肺癌A549细胞,RT-PCR和Western印迹检测TNFAIP8-siRNA对细胞中TNFAIP8 mRNA和蛋白表达的影响,MTT检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达情况。结果非小细胞肺癌组织中TNFAIP8 mRNA和蛋白表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01)。与空白对照组相比,转染TNFAIP8-siRNA的肺癌A549细胞TNFAIP8 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01),细胞增殖和迁移能力显著降低(P<0.01),细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。阴性对照组与空白对照组之间各项检测指标无显著差异(P>0.05)。结论 TNFAIP8高表达与非小细胞肺癌的发生密切相关,沉默TNFAIP8的表达能够抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移能力。     

外源性骨形态发生蛋白9转入肺鳞癌细胞对其活性的影响及作用机制

目的观察骨形态发生蛋白(BMP)9对人肺鳞癌细胞株YTMLC-90迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法 RT-PCR和Western印迹法检测YTMLC-90细胞和正常人支气管上皮细胞(NHBE)中BMP9 mRNA和蛋白表达水平;以转染重组腺病毒Ad-BMP9的YTMLC-90细胞为研究组,转染Ad-GFP为阴性对照组,未转染为空白对照组;采用划痕愈合实验检测3组细胞迁移能力,Transwell实验检测迁移和侵袭能力,同时检测迁移相关因子基质金属蛋白酶(MMP)2 mRNA和蛋白表达情况;Western印迹法检测3组细胞BMP-Smad信号通路中Smad 1/5磷酸化水平。结果YTMLC-90细胞中BMP9 mRNA和蛋白表达量均明显低于NHBE细胞(P<0.05)。Ad-BMP9转染YTMLC-90细胞后胞内BMP9蛋白表达量明显高于阴性对照组(P<0.01)。空白对照组48 h的细胞划痕愈合率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);研究组细胞划痕愈合率明显低于阴性对照组和空白对照组,穿过小室膜和基质胶的YTMLC-90细胞数均明显少于阴性对照组和空白对照组,MMP2表达量明显低于阴性对照组,MMP2mRNA和蛋白表达量均明显低于阴性对照组(均P<0.05)。YTMLC-90细胞高表达BMP9后其p-Smad 1/5表达量明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。结论外源性BMP9转入人肺鳞癌细胞株YTMLC-90可有效抑制其迁移和侵袭能力,激活BMP-Smad信号通路是该抑制作用的机制之一。     

沉默GRP78基因对人卵巢癌SKOV3细胞侵袭力的抑制作用

目的 探讨RNA干涉技术(RNAi)沉默葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因对人卵巢癌SKOV3细胞侵袭力的影响,阐明GRP78基因沉默对SKOV3细胞侵袭力抑制作用的生物学机制.方法 设计并构建pSilencerTM3.0-H1-GRP78 siRNA重组质粒,脂质体介导转染至SKOV3细胞.RT-PCR和Western印迹法检测GRP78基因表达;RT-PCR检测MMP-2、MMP-9 mRNA表达;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭力;Transwell小室迁移实验检测细胞迁移率.结果 RT-PCR及Western印迹检测转染GRP78 siRNA重组质粒SKOV3细胞GRP78基因表达抑制;RT-PCR结果显示与对照组相比转染GRP78 siRNA重组质粒SKOV3细胞MMP-2、MMP-9 mRNA表达降低;Transwell小室侵袭实验和迁移实验结果显示转染GRP78 siRNA重组质粒SKOV3细胞穿透细胞数(P＜0.05)和迁移率均明显降低(P＜0.05).结论 ①转染GRP78 siRNA重组质粒有效抑制SKOV3细胞GRP78基因表达;②抑制GRP78基因表达能降低SKOV3细胞的侵袭力和迁移力,有望为抑制卵巢癌转移基因治疗提供新的靶点.     

血小板源生长因子对大鼠血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的影响

目的本实验研究血小板源生长因子对血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的影响以及对血管平滑肌细胞与单核细胞粘附的作用。方法利用基因芯片和RT-PCR技术检测鼠主动脉血管平滑肌细胞经血小板源生长因子处理0min、20min、6h后血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的mRNA表达变化;细胞粘附实验观察血管平滑肌细胞经血小板源生长因子分别处理0min、20min、6h后与单核细胞粘附情况。结果血小板源生长因子对鼠血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的表达有显著的诱导作用,其诱导作用在20min即已出现(P<0.05),6h时明显增强(P<0.01)。细胞粘附实验显示随着血小板源生长因子的作用时间的延长,血管平滑肌细胞与单核细胞的粘附率增高,血小板源生长因子处理20min和6h后粘附率是对照组的1.92倍和3.04倍(P<0.05)。结论血小板源生长因子明显诱导血管平滑肌细胞中血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的表达,促进血管平滑肌细胞与单核细胞的粘附,从而参与了损伤早期,白细胞向内膜下迁移的炎症反应。     

siRNA干扰缺氧诱导因子2α对乳腺癌细胞侵袭能力的影响及相关机制

目的探讨缺氧诱导因子(HIF)-2αsiRNA对乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力的影响及相关机制。方法采用RNA干扰(RNAi)技术沉默已建立的缺氧细胞模型MCF-7细胞中HIF-2α的表达;RT-PCR方法检测转染后MCF-7细胞中HIF-2αmRNA的表达;采用划痕实验和侵袭实验探讨细胞侵袭能力的变化;采用Western印迹和RT-PCR方法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达。结果 RNAi结果显示,缺氧+siRNA组HIF-2αmRNA的表达与单纯缺氧组相比均明显降低(P<0.05);转染后划痕实验结果显示,缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比细胞伤口愈合速度明显减慢。Transwell侵袭实验显示,缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比穿膜细胞数显著减少(P<0.05);Western印迹和RT-PCR结果显示,缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比,MMP-2蛋白及mRNA表达均下调(P<0.05)。结论 HIF-2αsiRNA抑制乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的机制之一可能与MMP-2基因的表达下调有关。     

血小板源生长因子B及其受体β与支气管哮喘血管再生与重塑

目的进一步明确支气管哮喘时血管相关因子血小板源生长因子B（PDGFB）和血小板源生长因子受体β（PDGFRβ）在支气管哮喘小鼠模型气管及肺组织中的变化和作用。方法在建立小鼠支气管哮喘模型的基础上,应用免疫荧光染色和HE染色计数血管平滑肌细胞数量变化,应用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）方法检测气管和肺组织PDGFB及其受体（PDGFB／PDGFRβ）mRNA表达情况,应用Westernblot方法检测PDGFB／PDGFRβ蛋白水平。结果①血管平滑肌细胞数量在支气管哮喘急性期减少,在慢性期又恢复正常;②应用RT—PCR技术及琼脂糖凝胶电泳,PDGFBmRNA及PDGFRβmRNA在正常气管未检测到,而在慢性延长期哮喘小鼠气管组织PDGFBmRNA显示出清晰的条带。周围肺组织在正常小鼠也表达PDGFBmRNA,哮喘小鼠肺组织表达增强,在慢性延长期表达明显增加。应用Westernblot蛋白检测技术,哮喘小鼠气管及肺组织PDGFB及PDGFRβ蛋白表达情况与基因检测结果相一致。结论PDGFB和PDGFRβ基因与蛋白表达水平在支气管哮喘气管及肺组织均增加,特别在慢性延长期,PDGFB和PDGFRβ表达改变是血管平滑肌细胞数量变化的重要因素。PDGFB和PDGFRβ系统在支气管哮喘气道血管再生和重塑过程中可能起着重要的作用。     

抑制COX-2/PGE2通路对胶质瘤细胞免疫抑制因子表达的影响

目的 探讨celecoxib对脑胶质瘤细胞环氧化酶(COX)-2表达的影响,以及对免疫抑制因子前列环素E2( PGE2)、转化生长因子(TGF)-B、血管内皮生长因子(VEGF)等的影响.方法 利用Western印迹检测不同浓度celecoxib作用后,C6细胞COX-2蛋白表达水平;RT-PCR检测celecoxib对C6细胞TGF-β、VEGF mRNA表达的影响;酶联免疫法(ELISA)检测celecoxib作用后C6细胞上清PGE2、TGF-β、VEGF分泌水平.结果 celecoxib可呈浓度依赖性下调C6细胞COX-2蛋白表达水平;celecoxib作用后,C6细胞TGF-β、VEGF mRNA的表达水平明显下调(P＜0.01),相应细胞上清中PGE2、TGF-β、VEGF分泌水平亦明显下降(P＜0.01).结论 celecoxib可通过抑制COX-2蛋白活性,降低肿瘤局部微环境中的PGE2水平,并进一步下调TGF-β、VEGF的表达,从而改善胶质瘤微环境中免疫抑制状态.     

SRPX2对肝癌细胞侵袭与迁移能力的影响及作用机制

目的探讨sushi重复蛋白X连锁2(SRPX2)对人肝癌细胞MHCC97H侵袭与迁移能力的影响及作用机制。方法体外培养人肝癌细胞MHCC97H,用Lipofectamine法将阴性对照和SRPX2特异性siRNA转染到人肝细胞癌MHCC97H,继续培养48 h收获细胞,用Transwell检测细胞体外侵袭和迁移能力;实时荧光RT-PCR法检测人肝癌细胞MHCC97H内SRPX2和基质金属蛋白酶(MMP2)mRNA表达的影响;Western Blot法检测人肝癌细胞MHCC97H内SRPX2和MMP2蛋白水平的影响。结果与阴性对照组比较,干扰SRPX2组人肝癌细胞MHCC97H侵袭、迁移能力、SRPX2 mRNA、MMP-2 mRNA、SRPX2蛋白和MMP-2蛋白降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 SRPX2可能通过调节MMP2而影响人肝癌细胞MHCC97H侵袭和迁移。     

血小板源生长因子对大鼠血管平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶2的影响

目的研究血小板源生长因子对血管平滑肌细胞迁移的影响和细胞产生基质金属蛋白酶2的变化。方法体外培养的血管平滑肌细胞经血小板源生长因子处理0 min、20 min和6 h后进行如下检测:迁移实验观察细胞在盖玻片上的迁移情况;明胶酶谱检测血管平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶2活性;基因芯片和逆转录-聚合酶链反应技术检测血管平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶2 mRNA的变化。结果细胞迁移实验显示随着作用时间的延长,血小板源生长因子明显促进细胞的迁移,血小板源生长因子处理20 min和6 h后迁移距离(分别为4.9±0.5、7.1±1.2μm)是对照组(2.3±0.15μm)的2.13倍和3.09倍,差异有显著性(P<0.05);明胶酶谱测定表明:血小板源生长因子显著提高血管平滑肌细胞分泌的基质金属蛋白酶2的活性,作用20 min与6 h后(分别为480.7±27.3和851.5±56.4)是对照组(296.7±15.8)的1.62倍和2.87倍(P<0.01);血小板源生长因子对血管平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶2有明显的诱导作用,作用20 min与6 h后的表达(分别为0.54±0.09和0.77±0.04)是对照组(0.3...     

gax基因转染对血管平滑肌细胞中基质金属蛋白酶2和骨桥蛋白转录的影响

目的:探讨腺病毒介导gax基因转染血管平滑肌细胞(VSMC)后,VSMC中基质金属蛋白酶2(MMP2)和骨桥蛋白基因转录的变化。方法:以携带大鼠gax基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(AdCMV-gax)转染VSMC后,应用免疫细胞化学染色检NGax蛋白表达的变化,以RT-PCR技术检测VSMC中MMP2 mRNA和骨桥蛋白mRNA的变化。结果:AdCMV-gax转染后:(1)VSMC中Gax蛋白的表达比转染前显著增高(P<0.01); (2)VSMC中MMP2 mRNA和骨桥蛋白mRNA 比未转染组均显著降低(P<0.05)。结论:增强gax基因表达可抑制MMP2和骨桥蛋白的转录。     

JDP2在TGF-β1诱导的人胰腺癌细胞系Panc-1上皮向间质转化中的作用

目的:研究JDP2与TGF-β1诱导的人胰腺癌细胞系Panc-1上皮向间质转化之间的关系.方法:实验分为空白对照组、JDP2转染组、空质粒转染组3组,并分别用P、P-J-T、P-V-T缩写代表.用pCEFL-HA-JDP2质粒和pCEFL空质粒瞬时转染人胰腺癌细胞系Panc-1,48h之后应用TGF-β1分别刺激JDP2转染和空质粒转染组细胞48h.以正常的Panc-1细胞为空白对照组,仅加等量的PSB.倒置显微镜下观察各组细胞的形态学变化的差异;应用RT-PCR及Westernblot的方法检测E-cadherin及vimentin的蛋白及mRNA表达变化;应用Transwell侵袭实验观察各组细胞的迁移能力.结果:P-J-T组能够明显抑制由TGF-β1诱导产生的EMT.与P组相比,P-J-T组大部分细胞没有明确的形态学上的变化,E-cadherin及vimentin蛋白及mRNA表达变化不明显,迁移能力亦无明确差异(48.0±5.3vs52.0±7.2),未成功诱导EMT;而P-V-T组Panc-1细胞大多数变成长梭形,细胞间紧密连接丢失,E-cadherin表达明显降低(mRNA表达:P<0.01;蛋白...     

阿齐沙坦对转化生长因子诱导的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及迁移的影响

目的探讨阿齐沙坦对转化生长因子-β（TGF-β）诱导的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖及迁移的影响。方法采用组织块贴壁培养法进行血管平滑肌细胞的原代培养,取3～5代细胞用于实验。用MTT法测定细胞增殖情况,用Boyden小室测试细胞迁移情况。采用10ng/ml TGF-β刺激VSMCs,并用阿齐沙坦干预,24h后用Western blot和RT-PCR检测VSMCs中MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白和mRNA的表达。结果 TGF-β可促进大鼠VSMCs的增殖及迁移,并增加大鼠VSMCs的MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表达。阿齐沙坦则可抑制TGF-β诱导的大鼠VSMCs的增殖和迁移,并降低大鼠VSMCs的MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达。结论阿齐沙坦可能通过下调MMP-2、MMP-9及TIMP-1的表达来抑制TGF-β诱导的自发性高血压血管平滑肌细胞的增殖及迁移。     

亚砷酸钠对上皮细胞向间充质细胞转变过程的影响

目的研究亚砷酸钠(NaAsO2)对上皮细胞向间质细胞的转变(epithelial to mesenchymal transition,EMT)过程的影响。方法①EMT模型的建立:培养小鼠乳腺上皮细胞(NMuMG),当细胞大约融合50%时,换成3%血清的培养基,24h后加入5ng/ml TGF-β,作用24 h后,观察NMuMG形态,细胞染色检测E-ca、Vimentin表达、实时定量RT-PCR检测E-ca,Vimentin mRNAs表达水平,是否成功的由上皮细胞转变成间质细胞。②加入NaAsO2:以5 ng/ml TGF-β作为阴性对照组,观察组5ng/ml TGF-β+5μmol/ml NaAsO2、5ng/ml TGF-β+10μmol/ml NaAsO2,再次检测上述指标。结果①成功建立EMT模型:细胞形态由立方形的上皮细胞转变成长梭形间质细胞;细胞染色显示,与未诱导组相比,E-ca表达呈阴性,Vim-entin表达明显呈阳性;E-ca基因表达水平显著下降,Vimentin基因表达水平显著上调。②NaAsO2对EMT过程的影响:一定浓度范围内,随NaAsO2浓度升高,明显增强了Vimentin表达;...