应用多重聚合酶链反应检测结核杆菌

作者合成两对引物，建立结核杆菌ＤＮＡ多重ＰｃＲ法，用以检测分枝杆菌标准菌株，仅人型和牛型结核杆菌呈阳性，灵敏度≥７ｃｆｕ结核杆菌呈阳性。４０例肺结核患者痰，经多重ＰＣＲ法检测２７例呈阳性，而采用Ｂａｃｔｃｃ４６０ＴＢ系统快速培养法培养仅１９例阳性；多重ＰＣＲ法栓出率较一对引物ＰＣＲ法高１５％～１７．５％，具有较好的敏感性和林异性。     

大肠杆菌asd基因PCR引物设计及其长模板PCR扩增

目的 获得大肠杆菌全长ａｓｄ基因，方法 采用计算机引物设计软件，长模板ＰＣＲ扩增法及限制性内切酶切分析。结果 设计一对Ｅ．ｃｏｌｉａｓｄ基因ＰＣＲ引物，经长模板ＰＣＲ扩增获得１５１０ｂｐＰＣＲ扩增片段，经限制性内切酶酶切分析，证明该片段与电脑查询的Ｅ．ｃｏｌｉａｓｄ基因酶切谱相同。结论 本文设计的引物用长模板ＰＣＲ扩增法得到的片段初步确认为Ｅ．ｃｏｌｉａｓｄ基因。     

结核性脑膜炎不同时期应用PCR和ELISA比较

结核性脑膜炎不同时期应用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ比较ＡｃｏｎｔｒｏｌｓｔｕｄｙｂｅｔｗｅｅｎＰＣＲａｎｄＥＬＩＳＡｕｓｅｄｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅｏｆｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ￥／／侯景玉，李彤，苏夏鹏关键词ＰＣＲ；ＥＬＩＳＡ；结核性脑...     

PCR测定在医学中的应用

ＰＣＲ测定在医学中的应用江苏镇江医学院生物化学教研室龚志明江苏省镇江市第一人民医院杨兆生聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃ－ｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术是用ＤＮＡ聚合酶在体外条件下，模仿天然ＤＮＡ的复制过程．ＰＣＲ测定的样品量是微量的，只...     

PCR法检测乙肝病毒－DNA的几种血清预处理方法比较

ＰＣＲ法检测乙肝病毒－ＤＮＡ的几种血清预处理方法比较陈捷平，朱丽杰（临床医学研究所免疫室）目前聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术已广泛用于遗传病的诊断、传染性病源体的检测、癌基因的研究等诸多方面。ＰＣＲ方法具有...     

用尿嘧啶－DNA－糖基化酶控制聚合酶链反应的产物污染

聚合酶链反应（ＰＣＲ）灵敏度极高，痕量的ＰＣＲ产物能污染新的ＰＣＲ体系（称为产物污染）导致假阳性结果，我们通过在所有的ＰＣＲ扩增中掺入ｄＵＴＰ使ＰＣＲ产物含“ｄＵ”，在以后的ＰＣＲ扩增前用尿嘧啶－ＤＮＡ糖基化酶（Ｕｒａｃｉｌ－ＤＮＡ－Ｇｌｙｃｏｌａｓｅ，ＵＤＧ）处理，然后加热去除ＵＤＧ活性防止了产物污染。ＵＤＧ切割磷酸糖骨架上的尿嘧啶，可阴止ＤＮＡ聚合酶对它的复制，而对普通ＤＮＡ（即含”ｄＴ”）无影响。因为ＵＤＧ不与ｄＵＴＰ反应，而且在ＰＣＲ扩增前加热变性失活，使含尿嘧啶的污染物的污染得到很好控制。     

PCR法鉴定bcl-2与pBluescript Ⅱ SK~+载体的连接方向

ＰＣＲ法鉴定ｂｃｌ－２与ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＋载体的连接方向①唐振旺刘革修②曹仁贤文格波（衡阳医学院第一附属医院，衡阳，４２１００１）ＰＣＲ在分子生物领域中作用愈来愈大，而且操作越来越简单，准确性亦日益提高。本文介绍ＰＣＲ法鉴定重组质粒ｐＢｌ...     

RT－PCR制备人IL－3 cDNA的改进

ＲＴ－ＰＣＲ制备人ＩＬ－３ｃＤＮＡ的改进Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｉｎｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｈ－ＩＬ－３ｃＤＮＡｂｙＲＴ－ＰＣＲ￥／／陈鸿书，曹廷兵，姚家慧，陈嵩（重庆第三军医大学基础部基因工程实验室）重庆，６３００３８人白细胞介素－３（ｈ－Ｉ...     

两种PCR技术在GDNF基因克隆中的应用

聚合酶链式反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）自１９８５年问世以来在分子生物学领域得到了极其广泛的应用,包括从基因组中大量地扩增单拷贝基因［１,２］,扩增ｍＲＮＡ的ＲＴＰＣＲ［３］,ＰＣＲ测序,ＰＣＲ标记探针,定量ＰＣＲ［...     

HCV 定量 RT-PCR 竞争性参比标准的构建

将克隆的ＨＣＶ５’ＮＣＲ序列反向插入ｐＳＰ７２的ＥｃｏＲＶ切点，构建一种能转录ＨＣＶ－ＲＮＡ的质粒ｐＳｎｃ－２。以ＲＴ－ＰＣＲ从抗ＨＥＶＩｇＭ阳性病人血浆中扩增一段２３８ｂｐ的ＨＣＶ－ｃＤＮＡ，反向插入ｐＳｎｃ－２中克隆的５’ＮＣＲ序列的ＮｃｏⅠ切点，构建插入突变型ＨＣＶ－ｃＤＮＡ重组体ｐＳｎｃ－ｅ。应用限制性酶切和ＰＣＲ对这两种重组质粒进行了鉴定，为ＨＣＶ－ＲＮＡ的定量ＰＣＲ提供有用的内参照模板。     

应用PCR和RT-PCR检测猪内源性逆转录病毒及其意义

目的 观察猪内源性逆转录病毒（Porcine endogenous retrovirus,PERV)在中国实验小型猪的感染情况。方法 针对PREV gag区的序列，选用特异性引物，采用PCR方法检测猪肝脏、皮肤前病毒序列；以及RT－PCR方法检测血清中PERV－RNA序列。结果 该法在猪肝脏组织中可检测出PERV前病毒序列；此外，在猪血清标本亦检测出病毒序列，而其它2份HBV、HCV阳性血清及2份其它动物血清（大鼠、兔）检测结果均为阴性，说明该方法特异性较高。结论 中国实验小型猪均携带该病毒，并可以释放到血清中；采用该法具有特异、简便的特点，为进一步研究PERV感染及生物安全性奠定了基础。     

Molecular diagnosis of genital Chlamydia trachomatis infection by polymerase chain reaction

The present study was carried to diagnose genital Chlamydia trachomatis infection among women of reproductive age, attending Mymensingh Medical College Hospital, during July 2009 to June 2010 by Polymerase chain reaction (PCR). A total of 70 females were investigated including 56 symptomatic and 14 asymptomatic cases. Endocervical swabs were collected and dipped in 500μl Tris buffer. Polymerase chain reaction (PCR) amplification was done for detection of endogenous plasmid-based nucleic acid. A total 17 out of 56 of the symptomatic cases (30.4%) were positive for C. trachomatis and none were found positive among the 14 asymptomatic cases. These findings suggest high prevalence of C. trachomatis infection among this group of population.     

应用PCR方法扩增IS6110保守片段快速鉴定结核分支杆菌

目的：了解PCR方法快速鉴定结核分支杆菌的可靠性，探索快速诊断结核病的实验方法。方法：应用PCR方法扩增149株结核分支杆菌临床分离株的IS6110保守片段，并与结核分支杆菌H37Rv标准株进行比较。结果：149株临床分离株中，140株可以扩增出与结核分支杆菌H37Rv标准株相同的123bp DNA片段(敏感性达93．9％)，而阴性对照均不能扩增出该片段。结论：应用PCR方法扩增IS6110保守片段来鉴定结核分支杆菌，结果准确可靠，且具有方便和快速等优点，有较大的临床应用价值。     

Detection of toxigenic Clostridium difficile by polymerase chain reaction

ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｏｘｉｇｅｎｉｃＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅｂｙｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＣｈｅｎＣｕｎｌｏｎｇ（陈村龙）；ＺｈｏｕＤｉａｎｙｕａｎ（周殿元）；ＰａｎＬｉｎｇｊｉａ（潘令嘉）；ＷａｎｇＪｉｄｅ（...     

聚合酶链反应在结核病诊断中的临床价值探讨

目的：探讨聚合酶链反应对结核诊断的临床价值。方法：采用聚合酶链反应检测痰，纤维支气管镜抽吸物，胸水和血液标本中结核杆菌DNA。结果：聚合酶链反应检测法的敏感性为40．1％，特异性为92．9％，总的阳性预测值，阴性预测值和诊断效率分别为87．2％，60．78％和67％；不同标本敏感性有较大的差异。结论：聚合酶链反应不失为结核病快速诊断的方法，但其敏感性，特异性尚不能完全满足临床的需要，有待进一步完善。     

聚合酶链反应技术快速诊断淋病

作者采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）诊断女性淋病５０例，并将ＰＣＲ与淋菌分离培养比较，结果５０例宫颈分泌物ＰＣＲ检测获得阳性３５例，其中２０例与常规分离培养法一致，另外１５例ＰＣＲ阳性而分离培养为阴性，此１５例临床诊断为淋病，在检测中未见培养阳性而ＰＣＲ检测阴性者，用ＰＣＲ全部实验过程可在５ｈ内完成，较目前分离培养法鉴定淋球菌在时间上明显缩短，所以作者认为ＰＣＲ检测淋菌优于淋菌分离培养，具有简便快速、     

MecA、femB基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的了解mecA、femB多重聚合酶链反应（PCR）法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检出效率。方法对临床分离的71株非重复的金黄色葡萄球菌,采用多重PCR进行检测。结果 mecA、femB多重聚合酶链反应对MRSA的检测的特异性为100%,敏感性为97.87%。结论 mecA、femB多重PCR法可以对临床分离的金黄色葡萄球菌的甲氧西林耐药作出判断,是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

多重聚合酶链反应检测麻疹和风疹病毒感染的研究

用多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测２１份临床疑似麻疹患者的血清和咽拭子标本中麻疹病毒和风疹病毒,其中麻疹阳性９份,风疹阳性６份,ＩｇＭ－ＥＬＩＳＡ检测麻疹ＩｇＭ抗体阳性３份,麻疹ＰＣＲ检测阴性,而风疹ＰＣＲ检测证实为风疹病毒,该法不仅简便,敏感,特异的区别麻疹和风疹病毒感染,而且为消灭麻疹野病毒监测提供了检测手段。     

应用聚合酶链反应对病毒性心肌炎病毒学诊断的意义

为探讨聚合酶链反应在柯萨基Ｂ组病毒对病毒性心肌炎病原学的诊断意义。对４１例诊断为急性病毒性心肌炎的住院病，用ＰＣＲ方法检测基血中的柯萨基Ｂ组病毒，并对 中２９例病人进行了潘生丁＾９９ｍＴ２ＭＩＢＩ心肌灌注显像。     

应用荧光PCR技术对单个体细胞进行多囊肾病的基因诊断

目的建立单细胞水平的荧光PCR技术,探讨该技术对临床开展着床前遗传学诊断的可行性。方法分离单个颊黏膜细胞,利用荧光PCR技术扩增微卫星D16S423位点,扩增产物在ABI3730上电泳,结果用Genemarker软件分析。结果单个颊黏膜细胞的PCR扩增成功率为93.3%,等位基因脱扣率为10.7%,诊断正确率为89.3%。结论利用单细胞荧光PCR技术进行着床前遗传学诊断是可行的。