人白细胞介素2基因转移表达及抗乙型肝炎病毒和诱导LAK细胞活性…

为了探讨白细胞介素－２转基因表达抗乙型肝炎病毒的作用，应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＳＶ（Ｘ）－包装细胞系ＰＡ３１７基因转移系统，研究了ＩＬ－２ｃＤＮＡ转移和表达，以及抗ＨＢＶ和诱导淋因子激活的杀伤细胞的作用。     

流式细胞术检测LAK细胞的杀伤活性

ＬＡＫ细胞的过继免疫治疗已在国内外广泛开展,并取得了令人瞩目的成就。如今肿瘤的过继免疫治疗已经与手术、化疗、放疗等并列而成为肿瘤治疗的一个模式。为监控ＬＡＫ细胞过继免疫治疗的质量、疗效,ＬＡＫ细胞活性的测定显得十分重要。目前常用的比较经典的ＬＡＫ细胞活性检测方法是同位素检测法,而此法有同位素污染、半衰期限制、操作繁琐、费时较长等缺点。应用流式细胞术（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅ－ｔｒｙ, ＦＣＭ）检测细胞毒细胞的活性,国外已有类似报道,但国内报道甚少。本研究即应用ＦＣＭ检测ＬＡＫ细胞活性,并与’Ｈ－Ｔｄ…     

LAK细胞对直肠腺癌细胞杀伤的观察

采用体外培养方法,在恒温(37℃)和5％CO_2条件下,连续观察LAK细胞对直肠腺癌细胞系(HR8348)的结合率。杀伤活性及杀伤动态。结果表明:HR8348细胞对LAK细胞杀伤较敏感,在相同的效靶比例条件下,4h时效靶细胞结合率为52.0±3.6,LAK细胞杀伤率为49.0±2.3％。效靶细胞结合率及杀伤率呈正相关(P<0.01),LAK细胞的杀伤取决于效靶细胞的稳定结合。LAK细胞杀伤HR8348的动态过程是:效靶细胞主动趋向运动→相互识别→接触与结合→LAK细胞发挥杀伤作用→靶细胞溶解。LAK细胞杀伤作用随效靶共育时间延长乃效靶比例的增高而增强。     

乙型肝炎病毒对肝癌发生的影响

目前原发性肝细胞癌 (HCC)的死亡率已占我国部分农村和城市的第一、二位 ,高发区研究结果表明 90 %有乙肝感染。虽然HCC的发生机制尚不完全明了 ,但一直认为乙肝病毒(HBV)感染是本病发生的最重要的危险因素之一。1　HCC与乙肝抗原抗体系统1 1　HCC与抗 -HBc :据魏志坚等[1] 分析 ,47例肝癌患者中HBV感染者 43例 ,总阳性率为 91 5 % ,而其中抗 -HBc阳性 3 4例 ,占总阳性病例的 79 1%。日本学者小林建一研究表明 ,HBsAg阳性者肝癌发生的相对危险度比HBsAg阴性者高10 0倍 ,同时发现肝癌患者全部抗 -HBc阳性。周佳彦等[2 ] 报道 ,检…     

NK／LAK细胞对人口腔癌耐细胞药株杀伤活性的观察

OBJECTIVE: To understand the relation between cytotoxic activity of immunologic effector cells and multidrug resistance of the tumor cells. METHODS: Continuous observation of the morphological changes and MTT colorimetry were employed to evaluate the cytotoxic activity of lymphokine-activated killer (LAK) cells and natural killer (NK) cells against multidrug-resistant (MDR) human oral carcinoma cell line-KBV200 (before and after reversal of MDR) and parental drug-sensitive cell line KB. The morphologic changes of LAK cells and the 3 target cell lines were observed continuously under inverted microscope 3 h after co-culture of LAK cells with one of three target cell lines respectively. The lysis rates of three tumor cell lines in response to co-culture with LAK or NK cells were determined using MTT colorimetry. RESULTS: In comparison with the parental drug-sensitive cell line KB, both KBV200 and its reserved cell line by verapamil (KBVV) showed earlier adherence and greater number of cells lysed by LAK. In MTT colorimetry assay, the cytotoxicity of both LAK and NK cells against the 3 cell lines was associated with the effector-to-target (E/T) cell ratio; the lysis rates of KBV200 and reversed KBV200 cells by verapamil in response to LAK and NK cells were higher than that of KB cells (P<0.05), but KBV200 and KBVV did not significantly differ (P>0.05). At the same E/T ratio, LAK cells possessed stronger cytotoxicity than NK cells against all the tumor cell lines (P<0.05). CONCLUSIONS: Immunologic effector cells possess strong cytotoxic activity against multidrug-resistant cell line KBV200. Modulation of MDR does not decrease the cytotoxic activity of the immunologic effector cells. The results of this study suggest that adoptive cell immunotherapy with immunologic effector cells may be of value in controlling the progress of MDR tumors.     

胰岛素对LAK细胞活性的影响

在临床对癌症患者的过继免疫治疗中,LAK细胞加白细胞介素2疗法已被证实有其独特的疗效。但有关LAK细胞的基础研究相对落后,有关LAK细胞调节因素的研究对深入研究LAK细胞现象,阐明LAK细胞本质,对临床过继免疫疗法的进一步开展与完善均具有重要意义。本研究着重观察胰岛素对     

LAK疗法治疗肝癌的研究进展

<正>自1980年Rasenberg等首次发现淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞,并应用于临床后,LAK疗法已成为肿瘤治疗的重要部分,在肝细胞癌(HCC)的过继免疫治疗中得到广泛应用,并取得了肯定疗效.本文对近年来HCC患者体内LAK活性、影响因素及治疗方面的研究进展做一介绍.     

人白细胞介素2基因转移表达及抗乙型肝炎病毒和诱导LAK细胞活性的研究

为了探讨白细胞介素（ＩＬ）－２转基因表达抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的作用，应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＳｖ（Ｘ）－包装细胞系ＰＡ３１７基因转移系统，研究了人ＩＬ－２ｃＤＮＡ转移和表达，以及抗ＨＢＶ和诱导淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）的作用。所构建的人ＩＬ－２重组表达载体ｐＺＩＰｈｕＩＬ－２，以ＤＮＡ－磷酸钙共沉淀技术转染ＰＡ３１７细胞，筛选到Ｇ４１８抗性克隆，分泌假病毒颗粒达１０６ＣＦＵ／ｍｌ。以假病毒颗粒感染２．２．１５细胞系及正常人外周血单个核细胞，分泌ＩＬ－２水平可达６ＩＵ／ｍｌ，明显抑制２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ的分泌表达，与１００ＩＵ／ｍｌ重组的ＩＬ－２一样可诱导出相似的ＬＡＫ细胞活性。而不含ＩＬ－２ｃＤＮＡ的ｐＺＩＰＳＶ（Ｘ）的假病毒颗粒则无此作用。提示逆转录病毒载体。包装细胞系可以成功地实现人ＩＬ－２ｃＤＮＡ的转移和低水平的分泌和表达，并可明显抑制２．２．１５细胞分泌ＨＢｓＡｇ及诱导ＬＡＫ细胞活性。     

CD3 AK细胞与LAK细胞的诱导和体外杀伤活性的比较

目的：探讨CD3AK细胞与LAK细胞的诱导、增殖动力学和杀伤活性的变化。方法：采用抗CD3单克隆抗体（anti-CD3McAb)和rIL-2及PHA（植物血凝素）共刺激法诱生扩增CD3AK细胞,用等量rIL-2 t PHA共刺激法诱生LAK细胞。观察它们的增殖动力学变化;用MTT法以K562细胞和H7402细胞为靶细胞,测量CD3AK细胞和LAK细胞的杀伤活性。结果：微量的anti-CD3McAb辅以少量的rIL-2和PHA就能诱导和大量扩增CD3AK细胞,其扩增能力显著高于LAK细胞（P<0.001);CD3AK细胞对K562细胞和H7402细胞的杀伤活性显著高于LAK细胞（P<0.05)。结论：CD3AK细胞的扩增能力及杀伤活性均较LAK细胞为强,是更为有效的杀瘤效应细胞。     

LC-CW对人LAK细胞的影响及其机理的研究

提取干酪乳酸杆菌细胞壁成分(LC-CW),研究其对人外周血LAK细胞的影响及其作用机理。结果表明,1.LC-CW可以单独或与IL-2协同,促进PBL的增殖。2.LC-CW可以增强rIL-2诱导的人外周血LAK细胞杀伤Raji细胞的作用,统计学分析有显著意义。但是单独使用LC-CW不能诱导LAK细胞杀伤活性。3.LC-CW可使PBL的CD_4~+,CD_(16)~+抗原表达增加,与IL-2协同,可增加CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+和CD_(25)~+抗原的表达。4.LC-CW可促进PHA-P诱导的IL-2的产生。本研究结果提示LC-CW是一种重要的LAK细胞活性增强因子。     

脐血LAK细胞生物学特性影响因素的研究

采集２３名产妇的脐带血和８名正常成人的外周血制备ＬＡＫ细胞，随机分为４组，在培养第３，５，７，１４天，分别利用ＭＴＴ法和＾１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法对４组ＬＡＫ细胞的增殖力和杀伤活性进行了测定，同时用细胞毒方法测定培养７天的ＬＡＫ细胞的免疫表型。结果发现，在不同培养时间，脐血来源的ＬＡＫ细胞增殖力显著高于成人血ＬＡＫ细胞（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１），成人血清组，脐血血清组，红细胞组ＬＡＫ细胞增殖力有     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对自体肝癌细胞杀伤活性的研究

目的探讨树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外对自体肝癌细胞杀伤活性.方法从肝癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC来激活TIL,观察TIL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性.结果DC激活的TIL具有很高的对自体肝癌细胞杀伤活性,杀伤率为(89.39±3.05)%,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体肝癌细胞的杀伤率.结论肝癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗肝癌免疫.     

胎脾、胸腺LAK细胞制备及治疗晚期肿瘤患者初试

本文报道了一种从人胎儿脾脏和胸腺细胞制备LAK细胞的方法。经IL-2激活后LAK细胞的NK活性由16.2±6.7％提高到32.4±17.6％。用此LAK细胞治疗了14例患进展期转移癌的患者。每例患者经外周静脉输注LAK细胞4～5次,每次接受的细胞剂量为2～23×10~8LAK细胞。结果表明,这一疗法是安全有效的。14例患者中有11例在治疗后4～23个月病情稳定,其中2例局部转移癌灶完全消失,另1例缩小50％。另外3例治疗期间病情继续进展。     

淋巴因子对人PBMNC的LAK细胞形成、增殖和细胞毒作用的影响

应用乳酸脱氢酶释放法对重组白介素２，粗制天然白介素２，重组肿瘤坏死因子和天然免疫活性肽等淋巴因子诱导人ＰＢＭＮＣ为ＬＡＫ细胞以及ＬＡＫ细胞对靶细胞（人外周血淋巴细胞，人食管癌１０９细胞株和人红白血病细胞株＿（５６２）的细胞毒作用分别于培养的第４ｄ和第７ｄ进行了检测。结果显示：①四个配伍组和一个重组白介素２组的多克隆ＬＡＫ细胞攻击溶解１０９细胞株和Ｋ＿（５６２）细胞株的水平波动子２８％和６６％之间，中位数为４７％，而对正常人外周血淋巴细胞均无细胞毒作用；②重组白介素２和粗制天然白介素２配伍培养ＬＡＫ细胞的增殖协力约高于重组白介素２和重组肿瘤坏死因子组，以及重组白介素２和免疫活性肽组增殖协力的３倍，③在诱导ＬＡＫ细胞的过程中其增殖量和其细胞毒活性可以不同步。建议临床上治疗晚期肿瘤病人除用ＬＡＫ细胞和重组白介素２外，首先选用天然白介素２。     

LAK细胞的抗白血病效应及其影响因素的研究

本实验研究了LAK细胞/IL—2过继输入对L_(615)白血病的治疗作用并用细胞毒试验研究了影响LAK细胞/IL—2临床治疗急性白血病的若干因素。实验结果表明,LAK细胞对急性白血病有治疗作用;急性白血病病人外周血单个核细胞诱生的LAK细胞活性极低,其血清对LAK细胞活性有抑制作用;用同种异体的正常人外周血单个核细胞或胎儿脾脏单个核细胞、胸腺细胞诱生的LAK细胞对急性白血病细胞有较强的杀伤活性,是临床治疗急性白血病的可靠的LAK细胞来源。     

慢性乙型肝炎自体LAK细胞回输前后IL—2变化的意义

目的探讨ＬＡＫ细胞治疗慢性乙型肝炎的机制。方法应用生物学方法检测ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ均阳性慢乙肝患者治疗前后ＩＬ－２水平。结果４０例患者治疗后ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ阴转率分别为４０．４％和６８．６％。治疗前ＩＬ－２水平低于对照组（Ｐ＜０．００１），治疗后有显著提高（Ｐ＜０．００５）。依ＨＢＶ标记阴转情况分组：１组ＨＢｅＡｇ（－）、ＨＢＶＤＮＡ（－）１６例；２组ＨＢｅＡｇ（＋）、ＨＢＶＤＮＡ（－）９例；３组ＨＢｅＡｇ（＋）、ＨＢＶＤＮＡ（＋）１５例。１、２组治疗前ＩＬ－２均低于对照组（Ｐ＜０．００１），治疗后均明显提高（Ｐ＜０．００５，Ｐ＜０．０１）。３组治疗前ＩＬ－２与对照组比较无明显降低（Ｐ＞０．０５），治疗前后无显著差异（Ｐ＞０．０５），治疗后ＩＬ－２比对照组低（Ｐ＜０．０２）。结论ＩＬ－２水平明显降低的慢性乙型肝炎采用ＬＡＫ细胞回输治疗ＨＢＶ标记阴转率高。     

短期培养和长期培养的自体LAK细胞的制备和应用研究

用密度梯度离心法分离单个核细胞,在体外经短期(3~5d)和长期培养(7~15d)后将自体LAK细胞回输给病人。结果显示:长期培养LAK细胞的扩增细胞数明显多于短期培养LAK细胞扩增数(P<0.005);两者在体外均能杀伤人髓样白血病K_562细胞,前者的平均杀伤活性为39.24±2.81%,后者的平均杀伤活性为35.99±1.31%,病人经自体LAK细胞治疗后,共症状和体征均有所改善。     

慢性乙型肝炎患者LAK细胞治疗前后T淋巴细胞亚群的变化

观察４０例慢乙肝用异体淋巴因子激活的杀伤细胞治疗前后外周血Ｔ淋巴细胞亚群的变化，并与肝病对照组，正常对照组比较。结果发现慢乙肝患者ＣＤ＾＋３，ＣＤ＾＋４，ＣＤ＾＋８及ＣＤ＾＋４／ＣＤ＾＋８比值均明显低于正常对照组。用ＬＡＫ细胞治疗后，观察组ＣＤ＾＋３，ＣＤ＾＝４和ＣＤ＾＋４／ＣＤ＾＋８比值比治疗前上升，接近正常对照组，ＣＤ＾＋４／ＣＤ＾＋８比值升高与ＣＤ＾＋４升高有关。