辣根过氧化物酶标记的兔抗鼠IgM抗体的制备

我室制备的数株抗大肠癌单抗已用于大肠癌的免疫组化、血清学检测、放射免疫定位及导向治疗等研究,其中涉及多株IgM单抗。需要使用酶标兔抗鼠IgM抗体,国内尚无酶标抗IgM抗体供应。现以本室制备的鼠IgM单折为免疫原,采用皮内多点注射免疫     

胃癌单克隆抗体-氨甲喋呤交联物的制备及其细胞毒作用的研究

本文用本室已研制出12株鼠抗人胃癌单抗中一株MGb_2制备抗体-BSA-氨甲喋呤结合物,探讨所选单抗在胃癌导向治疗的可行性。 BSA与5倍过量的SPDP反应,每克分子BSA中引入3克分子二硫吡啶基团(PDP)。PDP-BSA通过碳二亚胺与氨甲喋呤连接。PDP-BSA-MTX以二硫代苏糖醇还原得到HS-BSA-MTX。     

识别HIV-1 P_(24)蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以细胞培养的HIV-1全病毒抗原免疫,通过鼠-鼠杂交瘤技术获得3株分泌单克隆抗体(以下简称单抗)的杂交瘤细胞系(21A、51G、47B)。免疫印迹结果显示3株单抗均能识别病毒的核心元原-P_(24)蛋白。ELISA阻断抑制试验提示,3株单抗分别识别两个不同的抗原决定簇。进而为HIV-1病毒抗原的研究和制备以双抗体夹心法检测P_(24)抗原的试剂打下基础。     

适于杂交瘤细胞长期大量繁殖的SCI－8910培基的研制

单抗的免疫导向治疗已成为国内外肿瘤研究的热点之一。目前杂交瘤分泌单抗的来源一部分是小鼠腹水，另一部分培养于含血清的培养基内，这对单抗纯化带来困难，对免疫导向治疗也带来许多不利条件，如牛的ＩｇＧ、鼠的病毒等的污染。因此，我们着手研制一种能适应于杂交瘤长期培养的无血清培基，定名为ＳＣＩ－８９１０。现已进行了９株杂交瘤细胞的长期培养，同时用该培基在１．５Ｌ的Ｃｅｌｌｉｇｅｒ（ＮＢＳＵＳＡ）搅拌生物反应器中长期培养鼠－鼠杂交瘤细胞２Ｆ７（分泌抗人小细胞肺癌单抗）获得成功，经检测单抗纯度达到一定要求，产品在８ｍｇ／Ｌ以上。结果提示，该无血清培基制备的ＭＣＡｂ用于免疫导向治疗的可行性及大规模生产的可能性。     

人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC—1的建立及其在人单克隆抗体制备中的应用

本文报告在国内首次建立的一株能用于制备人源性单克隆抗体(以下简称人单抗)的人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1。FMC-1对8-偶氮鸟嘌呤及鸟本苷具有抵抗性,对HAT培基敏感。细胞倍增时间为24～36小时,无人I_(?)或其轻重链的合成及分泌。目前已传代至136代,细胞中的人染色体稳定。经与人胃痛周围淋巴结的淋巴细胞再次杂交,获得两株人鼠人杂交瘤即HGO_3和HMG_7,在体外传代已6个月,抗体分泌稳定。其中HGO_3分泌抗胃癌的人单抗。HMG_7是经体外致敏人淋巴细胞与FMC-1融合获得的一株杂交瘤,能分泌针对鼠抗人胃癌单抗MG_7的人单抗。两株杂交瘤1×10~6细胞在24小时内的抗体分泌量达25μg～50μg/ml.初步认为FMC-1是一值得推荐用于人单抗制备的种间骨髓瘤细胞系。     

肝癌单克隆抗体导向阿霉素的实验研究

本实验采用间接交联方法,以葡聚糖(DEX)为连接臂,制备了鼠抗人肝癌单抗Hab18-DEX-阿霉素(ADM)结合物。在体外观察该结合物对肿瘤靶细胞和非靶细胞的杀伤效应及在荷人肝癌裸鼠体内的分布情况,并对荷人肝癌裸鼠进行了导向治疗实验。经     

HIM3－4：一个以CD33转染细胞为免疫原制备的CD33单克隆抗体

应用鼠－鼠杂交瘤技术，以ＣＤ３３＋转染细胞为免疫原制备出一株ＣＤ３３单克隆抗体（单抗）命名为ＨＩＭ３－４（ＩｇＧ１）．经第五届国际人类白细胞分化抗原会议进一步正式命名为ＣＤ３３单抗．本文首次在国内报道，以基因转染细胞作为免疫原成功地制备针对其因表达产物的单抗．     

人单克隆抗体研究近况

本文着眼单克隆抗体(单抗)的临床应用,对当今人单抗研究进展概况、技术发展、新出现的问题及解决方案等进行文献复习。一、人单抗研究势在必行研究与制备单抗的主要目的之一在于临床应用单抗诊断与治疗人类疾病。目前,绝大多数单抗都是应用小鼠杂交瘤技术制备的鼠单抗。从临床角度看,人单抗优于鼠单抗。首先,不论诊断还是治疗,患者摄入的     

人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1的建立及在人单抗制备中的应用

本文报告在国内首次建立的一株能用于制备人源性单抗的人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1。FMC-1对8-偶氮鸟嘌呤及鸟本苷具有抗药性,最大耐受剂量分别可达64ng/ml和1×10~(-4)     

4株鼠抗人B7-1分子单抗的制备及其生物学活性的鉴定

目的：制备鼠抗人B7—1分子(mAb)单抗及研究其生物学活性。方法：以人多发性骨髓瘤细胞转人B7-1基因细胞株XG7-B7为免疫原，采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备鼠抗人B7—1分子单抗；以Western blot及间接免疫荧光标记法鉴定其特异性和亲和力；采用^3H—TdR掺入实验和Annexin-Ⅴ染色分析测定该单抗的生物学功能。结果：获得了4株持续分泌抗人B7—1分子的特异性单抗的杂交瘤细胞株，分别命名为1F11、3H8、6H2和7B10，其分泌的单抗类别分属于小鼠IgG1和IgM；4株单抗均具有良好的特异性和亲和力；1F11、3H8和6H2能部分组断B7—1分子基因转导细胞介导的共刺激信号，从而抑制T细胞的增殖效应(抑制率21％—52％)；且能诱导天然表达B7—1分子的人B系淋巴瘤细胞Raji的凋亡。结论：成功研制4株功能性抗人B7—1分子抗体，这些抗体在抗异体组织器官移植排斥反应及在B系淋巴瘤的治疗中具有潜在的应用价值。     

人(人-鼠)及人-鼠杂交瘤中A型逆转录病毒的观察

<正> 由于人单克隆抗体(简称单抗)的同源性,使它在临床应用上比鼠单抗有更大的潜力。我国在《人用鼠源性单抗制备及质量控制考虑要点》中要求检测逆转录病毒,而对人源性单抗的使用迄今尚未有一个完善的质量     

促肾上腺皮质激素单克隆抗体的筛选和鉴定

目的制备促肾上腺皮质激素 ( ACTH)单克隆抗体 ,拟建立高灵敏度 ACTH- IRMA或 EL ISA。方法 ACTH1 - 1 3、ACTH1 - 2 8、ACTH 1 - 39和 ACTH1 8- 39分别与牛血清白蛋白偶联制备免疫原 ,在背部皮下和腹腔注射免疫 BAL B/ c鼠。按常规方法进行细胞融合 ,以 RIA法检测培养上清液 ,阳性孔经亚克隆 ,获得 2株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株 ;瘤细胞种于预致敏的BAL B/ c鼠腹腔 ,批量生产单抗性腹水 ;琼脂扩散法鉴定抗体类型 ;利用标准曲线的参数计算单抗的亲合常数 ;亲合纯化单抗并进行抗体固化试验。结果从 ACTH1 - 2 8免疫鼠获得单抗株为 5 G2 ,从 ACTH1 - 1 3免疫鼠获得单抗株为 D3 ;单抗腹水 5 0 %结合率时腹水最终稀释度分别为 5× 10 3和 2× 10 3;抗体类型均为 Ig G1/λ;5 G2和 D3亲合常数分别为 5 .1× 10 9L M- 1 和 4 .9× 10 7L M- 1 ;抗体包被实验显示 5 G2和 D3的固化抗体量分别为 1.4μg和 8.8μg时结合率达到饱和。结论 5 G2和 D3可以用于构建灵敏的 ACTH- IRMA或 EL ISA。     

一种新的胃癌中性糖脂抗原MG_7-Ag的纯化及分析

本文应用本室制备的一株经免疫病理、细胞学诊断、动物及人体内放射免疫显象均已证实,对胃癌有较好反应性的鼠抗人胃癌单抗MG_3。用电泳纯化单抗MG_735.6mg,制备免疫亲和层析柱,从胃癌组织及胃癌转移性腹水癌细胞中获得一种胃癌相关抗原命名为MG_7-Ag。     

一株鼠抗人TLT-2单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

为了制备鼠抗人TLT-2单克隆抗体(mAb)并对其生物学特性进行初步的研究。以TLT-2基因转染细胞株免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗人TLT-2 mAb,收集腹水,并用ProteinG亲和层析法纯化。以流式细胞术、IP和Western blot等方法鉴定该单抗的特异性。并通过流式细胞术、CCK8和ELISA等方法对单抗的生物学特性进行了初步分析。结果:获得一株持续稳定分泌鼠抗人TLT-2 mAb的杂交瘤细胞株,命名为8C10。杂交瘤细胞分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ)。IP和Western blot分析证明,8C10能特异性识别人TLT-2分子。经8C10荧光染色后流式细胞术的结果表明:TLT-2在T细胞表面呈弱阳性表达,在单核细胞和B细胞表面呈强阳性表达。细胞增殖实验结果显示,该mAb对T细胞的增殖有抑制作用。提示,成功获得了一株特异性鼠抗人TLT-2 mAb,该mAb对T细胞体外增殖及其细胞因子IFN-γ、IL-2、和IL-10的分泌均有明显的抑制作用。     

平榛主要过敏原Corh1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法用重组Cor h 1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选分泌特异性McAb的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水,再用蛋白A亲和层析法纯化抗体。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该McAbs的特性和交叉性。结果获得4株可稳定分泌鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的McAbs,其Ig亚型均为IgG1,均具有良好的效价;ELISA和Western Blotting分析表明该4株单抗均能识别重组Cor h 1蛋白,其中3株单抗能够识别天然平榛提取物。结论成功制备了4株鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体,为建立平榛主要变应原Cor h 1检测及纯化方法奠定了基础。     

抗人肺腺癌单克隆抗体与N-乙酰消瘤芥结合物的制备及其选择性细胞毒的研究

本文报道了鼠抗人肺腺癌单克隆抗体-N-乙酰消瘤芥结合物的制备及其对肿瘤靶细胞的杀伤作用,经化学修饰后的N-乙酰消瘤芥活性酯与抗体偶合,结合物的克分子结合比为1:79,且不影响抗体活力,在相似浓度下比较了单抗结合物、单抗、正常鼠IgG及其结合物与药物对靶细胞的毒性试验。结果表明:单抗结合物能显著抑制[~3H]-胸腺嘧啶核苷参入细胞量,其抑制率分别为92％、60％、40％、45％与15％。提示N-乙酰消瘤芥单抗结合物的抑制作用是由单抗导向的。     

针对不同抗原决定簇的抗甲状腺球蛋白单克隆抗体间存在交叉反应独特型

用鼠抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体(18A1)免疫家兔,取抗血清流穿以正常鼠Ig与无关单抗(MIg-Lp-Sepharose 4B)制备的亲和层析柱,吸除抗同种型及同种异型抗体。经ELISA竞争抑制、中和抑制试验证明制备出了抗TG独特型抗体(TG-Ab2)。用此TG-Ab2包被固相载体,建立了两种竞争ELISA法检测针对不同抗原决定簇的抗TG单抗之间的CRI。实验结果显示,抗TG单抗间存在CRI,从而提示自身抗体的产生可能是受胚系基因所控制。     

小鼠内源性逆转录病毒Gag抗原在胰岛的表达及单克隆抗体的制备

目的 探究一种新发现的与1型糖尿病(T1D)相关的T细胞抗原[内源性逆转录病毒(ERV)的组特异性抗原(Gag)]与T1D发病的关系。方法 首先对一个从非肥胖糖尿病(NOD)模型小鼠胰岛获得的Gag抗原(Gag 194)的氨基酸序列进行分析[多肽位置：193-210(VSRLRGRRDPPAVDSTTS)],确定Gag 194多肽作为靶点，制备单抗；然后，再利用ELISA和Western blot检测单抗的特异性；最后，在免疫组织化学实验中检测不同年龄的T1D敏感的NOD小鼠与抗性的C57BL/6小鼠胰腺Gag抗原表达的差异性。结果 成功制备了5株(1F4C8、2D4C6、3C3B9、4D6B3、5F9E4)IgG2b亚型的小鼠ERV Gag单抗；5株单抗的敏感性及特异性具有差异；其中，生物素化后的3株单抗(1F4C8、2D4C6、5F9E4)能特异识别NOD小鼠胰腺中表达的ERV Gag抗原且该抗原的表达可在3周龄的NOD小鼠检测到，Gag抗原多表达在NOD小鼠胰岛β细胞区域内，而非淋巴细胞浸润的区域。此外，C57BL/6小鼠的胰腺Gag抗原的表达为阴性。结论 在NOD小鼠幼年时期E...     

抗Ⅲ型前胶原肽单克隆抗体的制备及初步应用

制备出两株分泌抗ＰⅢＰ（Ⅲ型前胶原肽）单克隆抗体的杂交瘤细胞株。竞争抑制ＥＬＩＳＡ试验表明：两株单抗与ＰＣＩ（Ⅰ型前胶原）及ＣⅢ（Ⅲ型胶原）无交叉反应。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ示两株单抗钧针对ＰⅢＰ构象决定簇。应用所制备的单抗对人肝细胞癌组织及大鼠、小鼠成纤维母细胞进行免疫定位。结果显示两种成纤维母细胞呈明显膜阳性；肝癌细胞浆内呈粗颗粒状染色，提示肝癌细胞具有合成Ⅲ型前胶原的能力。     

抗SARS病毒N蛋白单克隆抗体的制备和初步应用

目的 制备抗SARS病毒N蛋白的单克隆抗体并研究其初步应用。方法 用基因重组N蛋白免疫小鼠，取免疫后的鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选分泌抗SAPS病毒N蛋白单克隆抗体细胞株。将阳性细胞株接种小鼠腹腔制备单克隆抗体腹水并对抗体进行纯化，分析纯化抗体的相对亲和力。选择亲和力较高的抗体制备检测SARS病毒抗原的酶联免疫诊断试剂，并对其敏感性和特异性进行分析。结果 共获得11株单克隆抗体细胞株，其中3株单抗与N蛋白具有较高的亲和力，4株纯化单抗与N蛋白反应很弱，其余4株单抗介于两者之间。用亲和力较高的单抗制备检测SARS病毒抗原的诊断试剂，其敏感性可达31PFU／ml，而且与其他呼吸道病毒无交叉反应。结论 该试剂特异性较好，可用于SARS病毒抗原的检测，其敏感性仍需用临床急性期样品进行评价。