早孕期人细胞滋养层细胞的分化及分离、培养、鉴定

目的:分离正常早孕期人细胞滋养层细胞并分析其分化功能。方法:用不同的消化方法分离正常早孕期人细胞滋养层细胞,分别在体外培养24h,用相差显微镜、Giemsa染色、免疫细胞化学法、扫描电镜、Transwell分析其形态及分化功能。结果:①采用低浓度胰酶一次性消化法获得绒毛外滋养层细胞,特异表达细胞角蛋白7,不表达波形蛋白,细胞互相聚集但不聚合,具有高度增殖活性和侵袭能力;②采用高浓度胰酶、长时间连续消化法分离得到绒毛滋养层细胞,具有高度融合、分泌hCG-β的合体滋养层细胞特性;③采用低浓度胰酶连续消化法获得的细胞包含绒毛外滋养层细胞和绒毛滋养层细胞,其共性是表达细胞总角蛋白,不表达波形蛋白。结论:利用不同的分离方法可有效、经济地获得具有不同分化功能的早孕期人细胞滋养层细胞。     

绒毛及合体滋养层细胞吲哚胺2,3-二氧化酶表达与流产的关系

目的:探讨人早孕绒毛组织吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)的表达与流产的关系。方法:RT-PCR测正常妊娠和难免流产绒毛组织及JAR细胞株IDOmRNA表达;免疫组化分析两组绒毛组织IDO蛋白质表达;Westernblot检测体外培养的合体滋养层细胞IDO蛋白质表达;高效液相色谱法检测细胞培养上清液中有无犬尿氨酸。结果:难免流产组绒毛组织IDOmRNA及蛋白质表达均低于正常组;JAR细胞株不表达IDOmRNA;合体滋养层细胞表达IDO蛋白质;合体滋养层细胞培养上清中有犬尿氨酸。结论:绒毛组织IDO正常表达是维持妊娠所必需;体外培养的人早孕绒毛合体滋养层细胞表达的IDO具有活性。     

缺氧对大鼠肺泡上皮细胞凋亡及缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的 探讨氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)化学缺氧对大鼠肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cell,AEC)凋亡的影响及相关凋亡蛋白缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-talpha,HIF-1α)的表达变化及意义.方法 将AEC进行体外培养,分4组,每组6个样本.缺氧4 h组:选用化学缺氧物质CoCl2 500/μmol/L为作用浓度,诱导AEC缺氧,共培养4 h;缺氧24 h组:与CoCl2共培养24 h;缺氧48 h组:与CoCl2共培养48 h;常氧对照组:不做任何特殊处理.利用荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞凋亡率,透射电子显微镜进行细胞凋亡的形态学观察,Western印记法检测HIF-1α蛋白的表达情况.结果 (1)荧光显微镜的结果 显示缺氧4、24、48 h组细胞凋亡率分别为(5.83±0.76)%、(15.00±3.28)%和(51.50±3.00)%,均高于常氧对照组[(1.50±0.50)%](P＜0.05);(2)流式细胞仪的结果 与荧光显微镜的结果一致;(3)透射电子显微镜可以观察到AEC凋亡的形态学改变,缺氧24 h显著;(4)缺氧4、24、48 h组HIF-1α蛋白的表达分别为0.69±0.035、1.02±0.044和0.71±0.046,均高于常氧对照组(0.21±0.026)(P＜0.01);(5)各组HIF-1α蛋白变化与荧光显微镜及流式细胞仪检测的细胞凋亡率变化均呈正相关(r=0.484,P=0.016;r=0.713,P=0.009).结论 缺氧对大鼠AEC的生存有抑制作用,这种抑制作用与缺氧引起的细胞凋亡有关;HIF-1α可能参与了缺氧诱导AEC凋亡的发生,而AEC凋亡可能又参与了缺氧肺损伤的发病.     

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对原代培养的人早孕绒毛细胞滋养细胞凋亡的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对原代培养的人早孕绒毛细胞滋养细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和bax表达的影响.方法 用浓度为0、25、50、100 μmol/L的DEHP作用于原代培养的人早孕绒毛细胞滋养细胞24 h,逆转录(RT)PCR法检测滋养细胞凋亡相关基因Bcl-2和bax的mRNA表达水平;蛋白印迹法检测Bcl-2和bax的蛋白表达水平;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法和双染流式细胞术检测细胞滋养细胞凋亡情况.结果 (1)Bcl-2表达水平:当DEHP浓度为0、25、50、100 μmol/L时,Bcl-2 mRNA表达水平分别为1.00±0.05、1.03±0.04、1.04±0.03、1.04±±0.04,分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05);Bcl-2蛋白表达水平分别为0.11±0.02、0.11±0.04、0.12±0.02、0.12±0.03,分别比较,差异也无统计学意义(P>0.05).(2)bax表达水平:当DEHP浓度为50、100 μmol/L时,bax mRNA表达水平分别为0.96±0.04、1.02±0.04,与DEHP浓度为0 μmol/L时(0.81±0.05)比较,差异有统计学意义(P<0.05),bax蛋白表达水平分别为0.63±0.04、0.81±0.04,与DEHP浓度为0 μmol/L时(0.23±0.05)比较,差异也有统计学意义(P<0.05).(3)细胞凋亡率:浓度为50、100 μmol/L的DEHP作用24 h后,双染流式细胞术检测细胞滋养细胞凋亡率分别为(18.8±2.6)%和(20.3±2.0)%,与DEHP浓度为0 μmol/L时[(10.6±1.4)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL法检测细胞滋养细胞凋亡率为(18.1±4.6)%和(19.5±1.2)%,与DEHP浓度为0 μmol/L时[(11.2±3.1)%]比较,差异也有统计学意义(P<0.05).结论 DEHP可通过增加细胞凋亡相关基因bax的表达,促进细胞滋养细胞凋亡,但对Bcl-2的表达无明显影响.     

缺氧对滋养细胞sFlt-1及VEGF基因及蛋白表达的影响

目的:探讨缺氧对滋养细胞可溶性血管内皮生长因子受体1(soluble fims-like tyrosine kinase receptor-1,sFlt-1)及血管内皮生长因子(vascular epithelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:CoCl2诱导人早孕绒毛滋养细胞系TEV-1化学缺氧,分别于0h、24h、48h、72h、96h、120h用Real-time RT-PCR法检测滋养细胞中sFlt-1及VEGF mRNA表达,ELISA法检测细胞培养上清液中sFlt-1及VEGF蛋白表达。结果:滋养细胞缺氧72h后,胞质内可见明显空泡。滋养细胞sFlt-1mRNA及蛋白表达随缺氧时间的延长逐渐升高,且与缺氧72h、96h、120h间差异有显著性(P<0.05)。而滋养细胞VEGF mRNA及蛋白表达随缺氧时间的延长呈现出先上升后下降的趋势,并于缺氧48h升高达到峰值(P<0.05)。结论:不同的缺氧时间对滋养细胞VEGF及sFlt-1表达具有重要的调控作用。慢性缺氧可能导致滋养细胞sFlt-1及VEGF表达平衡失调,从而参与子痫前期的发生、发展。     

sgp190与白血病抑制因子对滋养层细胞金属蛋白酶-9及抑制因子-1表达的影响

目的:探讨sgp190与白血病抑制因子(LIF)在妊娠维持中的作用。方法:体外培养滋养层细胞,分别施加LIF和/或sgp190处理后,用RT-PCR法检测金属蛋白酶-9(MMP-9)与金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)mRNA表达情况,免疫印迹法检测细胞MMP-9与TIMP-1蛋白表达水平,ELISA法测定培养上清中MMP-9与TIMP-1的浓度。结果:LIF抑制体外培养滋养层细胞中MMP-9与TIMP-1中mRNA和蛋白表达(P<0.05),而sgp190可抑制LIF的这种作用。sgp190促进MMP-9mRNA与蛋白的表达(P<0.05),但对TIMP-1mRNA与蛋白表达无影响。ELISA分析结果基本与RT-PCR和免疫印迹分析结果相同。结论:LIF和sgp190可能通过调节MMPs和TIMPs表达来影响滋养层细胞的侵袭,而sgp190在LIF功能活性调节中扮演着一定角色。     

补肾益气方激活哺乳动物雷帕霉素靶分子(mTOR)通路影响人早孕细胞滋养层细胞生长

目的:研究补肾益气方对人早孕细胞滋养层细胞增殖和早期凋亡的影响及其可能的信号转导通路。方法:体外分离培养人早孕细胞滋养层细胞,并添加不同浓度的喂服3d补肾益气方中药的大鼠血清,培养48h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞的增殖活力,流式细胞术检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达、Annexin Ⅴ FITC/PI双染色法检测细胞早期凋亡。结果:与体积分数20%对照血清组(B2组)比较,体积分数10%(A1组)及20%(A2组)补肾益气方含药血清作用48h,上调细胞滋养层细胞增殖活力、促进PCNA表达、降低凋亡细胞百分率(P<0.05),上述指标均呈剂量-效应关系。哺乳动物雷帕霉素靶分子(mTOR)通路的特异性抑制剂雷帕霉素抑制20%含药血清诱导的细胞增殖活力及PCNA蛋白表达,增加凋亡细胞百分率。结论:补肾益气方对人早孕细胞滋养层细胞的生长具有促进作用,mTOR信号通路可能是中药促进细胞滋养层细胞增殖、减少细胞凋亡的主要信号转导通路之一。     

不明原因早期复发性流产患者蜕膜自然杀伤细胞对滋养层细胞系侵袭功能的影响

目的研究早孕期复发性流产(RSA)患者与正常早孕妇女的蜕膜自然杀伤细胞(d NK)对滋养层细胞系HTR-8/SVneo侵袭能力的影响。方法收集正常早孕人工流产妇女(正常早孕组,n=10)和不明原因RSA患者(RSA组,n=8)的早孕蜕膜组织,用密度梯度离心法分离出蜕膜淋巴细胞,免疫磁珠法进一步分选出CD56+CD16-NK细胞,即蜕膜NK细胞,将蜕膜NK细胞与HTR-8/SVneo共培养24 h后,通过MTT法和Transwell侵袭实验检测蜕膜NK细胞对滋养层细胞系HTR8/SVneo黏附及侵袭能力的影响,用Real-time PCR检测共培养后HTR-8/SVneo细胞的MMP-2和MMP-9 mRNA水平的表达情况。结果与正常早孕妇女相比,不明原因早孕期RSA患者的蜕膜NK细胞对滋养层细胞系HTR8/SVneo侵袭能力有减弱作用,并使HTR-8/SVneo表达促侵袭分子MMP-2和MMP-9表达降低。结论妊娠早期局部母-胎界面d NK细胞的功能异常可能是导致不明原因RSA的一个原因。     

细胞凋亡和PCNA在早孕绒毛滋养细胞及蜕膜中的表达与自然流产的关系

目的 :研究细胞凋亡与细胞增殖在早孕绒毛滋养细胞和蜕膜中的表达及与自然流产的关系。方法 :对孕 3月内 2 0例正常妊娠、2 0例第 1次自然流产 (SA)和 15例反复自然流产 (RSA)的绒毛和蜕膜组织应用TdT介导的dUTP缺口原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡 ,应用免疫组织化学SP法检测增殖细胞核抗原 (PCNA)。结果 :正常早孕绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和蜕膜中的凋亡指数分别为 7.2 1± 1.2 4、8.89±2 .5 2和 7.70± 0 .82 ;SA组为 15 .4 0± 6 .5 9、2 5 .83± 6 .83和 32 .0 3± 3.2 7;RSA组为 18.77±8.2 2、34.0 2± 13.4 9和 34.96± 5 .4 6。增殖指数在正常早孕绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和蜕膜中为 6 4 .13± 5 .90、0和 6 2 .0 8± 4 .76 ;SA组为 6 7.0 2± 6 .79、36 .13± 3.5 6和 6 4 .94± 4 .6 0 ;RSA组为 6 8.6 7± 8.4 5、33.6 7± 4 .0 8和 6 3.99± 5 .5 4。即孕 3月内正常妊娠的绒毛和蜕膜组织中均有一定量的细胞凋亡与细胞增殖存在。SA与正常早孕相比绒毛和蜕膜中的细胞凋亡均明显增加 (P <0 .0 1) ,RSA合体滋养细胞凋亡也较SA明显增加 (P <0 .0 5 ) ;细胞滋养细胞和蜕膜中的细胞增殖在自然流产与正常妊娠间无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :细胞凋亡和增殖的平衡与妊娠维持?     

缺氧对体外培养的早孕期细胞滋养细胞中缺氧适应相关部分基因表达及细胞浸润能力的调控

目的:探讨缺氧对细胞滋养细胞表达缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及氧感受器缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶1、2(HPH/PHD1、2)和抑制缺氧诱导因子-1(FIH-1)的调控,以及缺氧对体外培养的细胞滋养细胞浸润能力的调节。方法:用RT-PCR和Western blot法检测在常氧、缺氧再复氧及持续缺氧等条件下,细胞滋养细胞中HIF-1α、HPH/PHD1、2和FIH-1 mRNA和蛋白表达的变化;并用体外侵袭实验检测缺氧再复氧、持续低氧对细胞滋养细胞浸润能力的影响。结果:(1)持续缺氧条件下培养的细胞滋养细胞HIF-1α和HPH/PHD2 mRNA和蛋白表达显著高于常氧组(P<0.01);HPH/PHD1和FIH-1 mRNA和蛋白表达显著低于常氧组(P<0.01)。缺氧再复氧后培养的细胞滋养细胞HIF-1α和HPH/PHD2 mRNA和蛋白表达显著高于常氧组(P<0.05),但显著低于持续缺氧组(P<0.05);HPH/PHD1和FIH-1 mRNA和蛋白表达均显著低于常氧组(P<0.05),但显著高于持续缺氧组(P<0.05)。(2)持续缺氧显著抑制细胞滋养细胞的浸润能力,与常氧组比较明显降低(P<0.01);缺氧后再复氧细胞滋养细胞的浸润能力居中,与常氧组比较明显降低(P<0.05);与持续缺氧组比较明显升高(P<0.05)。结论:滋养细胞可感受氧分压变化,HIF-1α、HPH/PHD1、HPH/PHD2和FIH-1相互作用与滋养细胞浸润能力调节有关。     

细胞过度凋亡是脂多糖抑制细胞滋养细胞侵入能力的重要机制

目的:探讨脂多糖(LPS)对细胞滋养细胞侵入能力的影响及细胞凋亡在此过程中的作用。方法:对体外培养的早孕细胞滋养细胞,给予不同浓度的LPS(0ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml),采用Transwell检测侵入能力的改变,荧光显微镜、电镜观察凋亡细胞的形态学改变,流式细胞仪定量检测细胞凋亡指数,western blot检测Caspase-3、MMP-2和MMP-9的表达。结果:LPS诱导细胞滋养细胞出现过度凋亡,抑制其侵入能力,促进Caspase-3的表达,抑制MMP-2、MMP-9的表达。以上各指标组间差异显著,P值均＜0．01。细胞凋亡指数与其侵入能力以及MMP-2和MMP一9的表达呈负相关,P值均＜0．01。结论:LPS对细胞滋养细胞的侵入能力有显著的抑制作用,细胞过度凋亡是这一作用发生的重要机制。     

瘦素协同纤连蛋白对早孕绒毛细胞滋养细胞浸润特性的影响

目的:探讨瘦素(leptin)、纤连蛋白(FN)对细胞滋养细胞浸润能力的影响及其协同作用。方法:①取孕6-8周的人工流产妊娠绒毛,分离、培养细胞滋养细胞并经光镜、电镜、免疫细胞化学鉴定。②用RT-PCR方法检测细胞滋养细胞中瘦素的表达。③应用体外培养侵袭模型检测瘦素、FN及二者协同时对细胞滋养细胞浸润能力的影响。结果:①分离、纯化所得细胞滋养细胞有瘦素mRNA表达。②瘦素组、FN组和瘦素与FN协同组浸润穿过matrigel的滋养细胞数均显著多于对照组(P<0.01),其中瘦素与FN协同组滋养细胞浸润能力最强。结论:①瘦素能增强细胞滋养细胞的侵袭能力。②FN对细胞滋养细胞的浸润具有趋化作用。③瘦素与FN对细胞滋养细胞的浸润有正协同作用。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯可抑制人原代培养早孕绒毛滋养细胞浸润能力

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯[di-(2-ethylexyl)phthalate,DEHP]对人原代培养早孕绒毛滋养细胞浸润能力及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-1和TIMP-2表达的影响,探讨DEHP对妊娠的影响及其毒性机制。方法2006年12月于北京军区总医院采用不同浓度DEHP预处理人原代培养早孕绒毛滋养细胞,采用Transwell体外浸润实验检测滋养细胞浸润能力的改变。RT-PCR法检测滋养层细胞侵袭性相关基因MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的mRNA表达,Western blot法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达水平。结果DEHP作用后,滋养细胞浸润能力明显下降。当DEEP为50、100μmol/L时,MMP-2、MMP-9、TIMP-1的mRNA表达量分别为0.35±0.07、0.26±0.03、0.97±0.18和0.30±0.10、0.20±0.05、1.02±0.20,与DEEP为0时MMP-2、MMP-9、TIMP-1的mRNA的表达量(0.77±0.15、0.45±0.04、0.80±0.20)比较P<0.05;当DEEP为50、100μmol/L时,MMP-2、MMP-9、TIMP-1的蛋白表达量分别为0.35±0.03、0.23±0.05、0.69±0.08和0.24±0.02、0.17±0.02、0.86±0.10,与DEEP为0时MMP-2、MMP-9、TIMP-1的mR-NA的表达量(0.69±0.04、0.57±0.03、0.24±0.12)比较P<0.05。可见DEHP剂量≥50μmol/L时,滋养细胞MMP-2和MMP-9表达下降、TIMP-1表达增加,且呈剂量依赖性。结论DEHP可通过抑制MMP-2、MMP-9的表达并促进TIMP-1表达,影响滋养细胞浸润能力。     

曼月乐对子宫内膜异位症患者在位内膜增殖与凋亡的影响

目的:从增殖与凋亡的角度探讨左炔诺孕酮宫内节育系统(曼月乐)防治子宫内膜异位症的作用机理。方法:采集中、重度子宫内膜异位症患者放置曼月乐前后的在位内膜,以透射电镜观察细胞形态,TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫组化法检测Ki-67的表达。结果:放置曼月乐后,在位内膜腺体细胞Ki-67表达为阴性,凋亡率由24.4±35.0%升高至51.0±37.8%(P=0.027);间质细胞Ki-67的免疫组化HSCROE评分由2.0±1.2降至1.5±0.9(P=0.001),凋亡率由35.3±30.2%升高至76.4±11.2%(P=0.008)。结论:曼月乐能显著抑制内异症患者在位内膜的增殖并诱导凋亡,从而减少通过经血逆流进入腹腔的活性细胞数量,达到防止异位种植的效果。     

The Role of Apoptosis on Trophoblast Cell Invasion in the Placental Bed of Normotensive and Preeclamptic Pregnancies

Background. Placental development depends on careful coordination of trophoblast proliferation and apoptosis; however, the synchrony of its effect on trophoblast invasion is unknown. Objective. To examine the relationship between trophoblast apoptosis and proliferation in placental bed tissue of preeclamptic and normotensive pregnancies. Methods. Serial sections from archived placental bed biopsies of 12 normotensive (group 1) and 12 preeclamptic (group 2) were immunolabeled with a rabbit anti-Ki67 antibody, a mouse anti-cytokeratin 18 and its neo-epitope, and a monoclonal cytodeath M30 antibody. Results. The immunoexpression of Ki67 for all trophoblast cell subpopulations within the myometrium was non-reactive in both study groups. Smooth muscle cells of the microvasculature reflected a moderate degree of proliferation in both groups. Morphometric image analysis of the wall of the spiral artery revealed a mean area of 31,1729?±?51,180?µm² compared to 35,795?±?8045?µm² in groups 1 and 2, respectively. An elevation of intramural trophoblast was evident within the spiral artery of group 1 (13%). Comparative analyses of M30 distribution on corresponding serial sections were 0.06% versus 0% in groups 1 and 2, respectively. The mean field area percentage of interstitial trophoblast invasion was 10.79% versus 2.87% with corresponding areas of apoptosis been 0.8 % versus 1.9 % in groups 1 and 2, respectively. Conclusions. This study demonstrates an increased trophoblast apoptosis in placental bed of preeclamptic compared to normotensive pregnancies with concurrent absence of proliferation at term.     

子痫前期血清对滋养-内皮细胞共培养体系滋养细胞侵袭力和内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨子痫前期血清对滋养-内皮细胞共培养体系滋养细胞侵袭力改变及对内皮细胞凋亡的影响.方法:选择正常足月妊娠剖宫产孕妇10例(正常对照组),子痫前期患者20例(子痫前期组).采用组织块贴壁法培养人孕早期细胞滋养细胞(CTB),胰酶消化法培养正常妊娠人脐静脉内皮细胞(HUVEC),传代后建立滋养细胞与脐静脉内皮细胞共培养模型,并分别加入正常对照组和子痫前期组患者静脉血清培养24小时;Transwell小室检测细胞滋养细胞的侵袭能力;流式细胞学检测人脐静脉内皮细胞凋亡率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞滋养细胞MMP-2、MMP-9mRNA及人脐静脉内皮细胞自杀相关因子(Fas)mRNA的表达.结果:子痫前期患者血清共培养体系的细胞滋养细胞的侵袭能力低于正常对照组(P<0.01);人脐静脉内皮细胞凋亡率明显低于正常对照组(P<0.05);MMP-2、MMP-9和FasmRNA的表达明显下降(P<0.05).结论:子痫前期血清可能通过降调细胞滋养细胞MMP-2、MMP-9表达而影响滋养-内皮细胞共培养体系滋养细胞的侵袭能力,并且其滋养-内皮细胞共培养体的内皮细胞Fas的表达异常可能与内皮细胞凋亡下降有关.提示滋养细胞MMP-2、MMP-9、Fas/Fasl的表达异常可能参与了子痫前期子宫螺旋动脉重铸障碍的病理过程.     

不同氧浓度对原代培养人早孕绒毛细胞滋养细胞血管内皮生长因子及其可溶性受体表达的影响

目的:探讨原代培养人早孕绒毛细胞滋养层细胞(CT)在缺氧时血管内皮生长因子(VEGF)和可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)的表达。方法:将经胰蛋白酶/DNA酶Ⅰ联合消化通过Percoll分离纯化得到的细胞滋养层细胞进行原代培养。采用ELISA法测定正常氧浓度(20%O2,A组)、低氧浓度Ⅰ组(8%O2,B组)和Ⅱ组(2%O2,C组)及低氧复氧组(2%O2/20%O2,D组)培养的不同时段细胞上清液中VEGF和sFlt-1蛋白的表达。结果:B组、C组于培养72h、96h、120h、144h时间点测得VEGF、sFlt-1的浓度明显高于A组(P<0.01);D组于培养96h、120h、144h后测得VEGF、sFlt-1的浓度较72h低,且分别与A组同期相比无明显差异(P>0.05)。结论:细胞滋养层细胞在低氧条件下VEGF、sFlt-1分泌增加,低氧复氧后VEGF和sFlt-1表达均恢复正常。     

II型核受体PPARγ和金属蛋白酶MMP-2、MMP-9在早孕胎盘组织中的表达及意义

目的:探讨II型核受体的过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)、金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9与细胞滋养细胞浸润的关系。方法:采用免疫组织化学、实时RT-PCR和免疫印迹技术检测早孕早期(孕6-8周,A组)和早孕晚期(孕11-12周,B组)绒毛组织中PPARγ、MMP-2和MMP-9mRNA及蛋白的表达。结果:PPARγ蛋白主要定位在早孕绒毛细胞滋养细胞核及绒毛外滋养细胞柱和细胞岛的细胞滋养细胞核内,MMP-2和MMP-9蛋白阳性颗粒主要存在于绒毛细胞滋养细胞和合体细胞滋养细胞胞浆内,绒毛间质细胞内亦有阳性染色,且A组绒毛PPARγ表达量高于B组(P<0.05),而MMP-2和MMP-9表达量在B组高于A组(P<0.05),与PPARγ呈负相关(r=-0.74,-0.68,P<0.01);且在A组MMP-2表达量多于MMP-9,而B组则MMP-9多于MMP-2,但无显著性差异。结论:PPARγ在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用,而且其作用可能是通过调节MMP-2和MMP-9的表达实现的,为深入探讨PPARγ及其配体在滋养细胞浸润机制中的作用提供实验基础。