益气解毒方抑制鼻咽癌CNE2细胞转移潜能的细胞迁徙干预机制

目的 观察益气解毒方原方及其拆方对人鼻咽癌细胞CNE2 nm23-H1表达活性及运动潜能的影响,分析nm23-H1活性与瘤细胞迁徙潜能的关系,从细胞迁徙干预机制探讨其对鼻咽癌细胞转移潜能的抑制效应.方法 制备益气解毒方原方及其拆方的大鼠药物血浆,MTT法确定药物血浆的IC50浓度,分别作用于体外培养的CNE2细胞;划痕试验检测细胞迁徙潜能,免疫细胞化学法检测nm23-H1基因表达活性,比较分析各项检测指标的组间差异.结果 与正常大鼠血浆组比较,益气解毒方原方及其拆方药物血浆分别作用24h后,细胞迂徙数和迁移距离均显著降低(P<0.05);各组药物血浆分别作用12h、24h后,CNE2细胞nm23-H1表达水平显著升高(P<0.05),尤以原方和解毒组分作用明显,而益气组分和养阴组分则否.结论 益气解毒方促进抑癌基因nm23-H1的表达活性并进而影响瘤细胞迁徙运动能力的生物力学机制,可能是该方抑制鼻咽癌细胞转移潜能的药理效应机制之一. 徙潜能,免疫细胞化学法检测nm23-H1基因表达活性,比较分析各项检测指标的组间差异.结果 与正常大鼠血浆组比较,益气解毒方原方及其拆方药物血浆分别作用24h后,细胞迁徙数和迁移 离均显著降低(P<0.05);各组药物血浆分别作用12h、24h后,CNE2细胞nm23-H1表达水平显著升高(P<0.05),尤以原方和解毒组分作用明显,而益气组分和养阴组分则否.结论 益气解毒方促进抑癌基因nm23-H1的表达活性并进而影响瘤细胞迁徙运动能力的生物力学机制,可能是该方抑制鼻咽癌细胞转移潜能的药理效应机制之一. 徙潜能,免疫细胞化学法检测nm23-H1基因表达活性,比较分析各项检测指标的组间差异.结果 与正常大鼠血浆组比较,益气解毒方原     

益气解毒法不同组方对鼻咽癌细胞迁徙运动潜能及细胞伪足的影响

目的 研究益气解毒法不同组方对鼻咽癌细胞迁徙运动潜能及其细胞伪足的影响.方法 以正常大鼠血浆为对照,分别应用益气解毒方原方及其改方大鼠药物血浆对CNE2Z细胞进行干预,采用划痕实验法评价不同组方药物对靶细胞迁徙运动潜能的影响,以扫描电镜观察细胞伪足形态特征,分析靶细胞的反应特性.结果 益气解毒原方对CNE2Z细胞的迁徙运动潜能显示抑制效应,细胞迁徙能力较差,伪足伸展不明显;益气解毒改方则对靶细胞迁徙运动潜能显示为促进效应,细胞伪足伸展长度较长.结论 同为益气解毒法的组方,由于剂量构成比不同,各方对鼻咽癌细胞迁徙运动潜能的药效学差异巨大.这样的药理效应特点,对中药复方的合理组方提出了严格要求.     

益气解毒颗粒影响鼻咽癌细胞HNE1增殖活力的实验研究

目的：探讨不同中医疗法对HNE1细胞增殖的影响。方法：采用MTT法观察含益气解毒颗粒原方及其拆方药物血清对体外培养的人鼻咽癌细胞株HNE1增殖的影响。结果：原方组和解毒组分组药物血清作用48h时,细胞增殖活性最低;而益气组分组、养阴组分组和其他组分组药物血清作用72h时细胞增殖活性最低。15％原方组药物血清对HNE1细胞增殖活性的抑制率达到67．68％。结论：原方及其拆方组药物血清对HNE1细胞具有增殖抑制作用,以原方效应最为明显,且具有时间和浓度依赖性。     

益气解毒方干预鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤肿瘤微环境细胞免疫耐受现象的初步研究

目的通过观察益气解毒方对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的干预效应,探讨调节性T细胞诱导的鼻咽癌肿瘤微环境免疫耐受性特征及其对干预药物的反应性。方法人鼻咽癌细胞株CNE2细胞建立裸鼠移植瘤模型,然后随机分为模型组、益气解毒方治疗组、顺铂阳性对照组、益气解毒方与顺铂联合治疗组,每组8只动物,分别给予相应处理药物,系统观察各组裸鼠移植瘤生长情况及体积变化。观察期满后处死动物,取瘤体称重,分别计算抑瘤率,并切取瘤体组织标本,观察比较各组移植瘤的病理组织学变化,免疫组化法检测各组标本CD4、CD8、Foxp3表达活性,比较其组间差异。结果各组检测结果比较显示,益气解毒方处理后,移植瘤组织中的CD4、FoxP3表达活性受到明显抑制,CD8表达则明显提高,尤以联合治疗组表现明显,与模型组比较,组间差异具有显著性统计学意义。结论益气解毒方能有效改善鼻咽癌裸鼠移植瘤肿瘤微环境的免疫耐受现象而抑制肿瘤生长速度;联合应用化学药物后,该一效应尤为明显。     

益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞株HNE1凋亡诱导活力的研究

目的 从益气解毒颗粒对体外培养的人鼻咽癌细胞株HNE1的细胞凋亡诱导活力角度探讨该方的抑癌机制.方法 采用流式细胞术和免疫细胞化学法比较观察益气解毒颗粒原方及其拆方药物血清对体外培养的HNE1细胞凋亡诱导活力差异.结果 益气解毒颗粒原方15%药物血清对HNE1的细胞凋亡诱导效应最为明显,48小时显示细胞凋亡指数13.69±0.26,且具有时间和药物浓度双重依赖性的特点,而在增强p53表达效应上,则以原方和益气组最为明显.结论益气解毒颗粒诱导鼻咽癌细胞凋亡主要是通过其益气组的功效而得以发挥,其机制之一可能是通过对p53的表达上调而实现的.     

益气解毒颗粒干预鼻咽癌细胞HNE1蛋白质表达的研究

目的探讨中药复方益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞杀伤作用的分子机制.方法筛选益气解毒颗粒药液对鼻咽癌杀伤的半抑制浓度(IC50),用0.1倍半抑制浓度(0.1×IC50)的益气解毒颗粒作用鼻咽癌细胞HNEl 96h,用固相pH梯度双向凝胶电泳分离益气解毒颗粒处理和未处理的鼻咽癌细胞HNE1的总蛋白质,银染显色,PDQuest 2-de软件分析差异蛋白质点.结果益气解毒颗粒药液杀伤鼻咽癌细胞HNE1的半抑制浓度为6.25mg/ml;双向电泳图像分析益气解毒颗粒药物处理组图像的平均蛋白质数为1120±89,未处理组的平均蛋白质数为1281±102;差异蛋白质有673个,其中有218个表达增强,有455个蛋白质表达下降.结论益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞的杀伤作用这些差异表达蛋白质有关,这些差异蛋白质有待质谱分析鉴定,为中药作用的分子机理研究提供了新的思路.     

靶向c-myc基因的siRNA抑制喉癌细胞系Hep-2的研究

目的:探讨siRNA靶向人c-myc基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生长增殖的抑制作用.方法:根据人c-myc基因设计和合成siRNA和随机的siN.C作为阴性对照,通过转染载体Lipofectamine 2000脂质体转染Hep-2细胞,进行MTT、形态学和实时PCR法检测,观察其干扰效果.结果:①MTT结果显示人端粒酶siRNA能有效抑制Hep-2细胞增殖;②实时PCR结果显示转染组与阴性对照组和空白对照组相比,c-myc mRNA表达明显减弱,转染组S3 c-myc mRNA 抑制率达到94%;③形态学结果显示人c-myc siRNA能有效抑制Hep-2细胞增殖,肿瘤细胞异形性减小.结论:靶向c-myc的siRNA能显著抑制喉鳞状细胞癌生长增殖.     

短发夹RNA抑制hTERT基因对鼻咽癌细胞端粒酶活性及PCNA和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:研究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA(shRNA)对鼻咽癌细胞系(CNE)端粒酶活性及PCNA、Caspase-3蛋白表达的影响.方法:构建表达靶向hTERT mRNA特异的shRNA的质粒pEGFP-shTERT.将pEGFP-shTERT转染CNE细胞,TRAP PCR-ELISA法检测端粒酶活性,MTT法测定细胞增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测蛋白表达.结果:pEGFP-shTERT成功转染入CNE细胞后, 端粒酶活性显著下降;细胞增殖活性明显受抑制;大量细胞凋亡;处理后24及48 h,PCNA蛋白下调至64.41%、58.67%(P<0.05),Caspase-3上调到1.55、1.60倍(P<0.05).结论:shRNA靶向抑制hTERT基因在鼻咽癌CNE细胞系中的表达,能显著地抑制细胞的端粒酶活性,调节PCNA和Caspase-3蛋白表达,从而抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡.端粒酶、PCNA和Caspase-3共同参与了鼻咽癌的发生、发展过程.     

人喉鳞癌组织中c-myc蛋白的表达及c-myc siRNA下调喉癌Hep-2细胞中c-myc的表达对细胞增殖的影响

目的:检测喉鳞状细胞癌组织中c-myc的表达及利用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制喉癌Hew2细胞中c-myc的表达对细胞增殖及抗凋亡的影响,探讨在喉癌治疗中将c-myc作为基因治疗靶点的价值.方法:免疫组织化学法检测80例喉鳞状细胞癌和30例声带息肉组织中的c-myc和Rb蛋白的表达;利用RNAi技术将c-myc siRNA转染到喉癌Hep-2细胞中,Western Blotting法检测c-myc蛋白的表达,RT-PCR法检测c-myc mRNA的表达;MTT法检测转染c-myc siRNA 24、48、72 h后,或转染不同浓度的c-myc siRNA(25、50、75 nmol/L)培养72 h,或在转染后加入不同浓度的5-Fu培养48 h,细胞增殖情况;流式细胞仪检测c-myc siRNA与5-Fu联合应用对喉癌细胞凋亡的影响.结果:免疫组织化学结果显示c-myc蛋白在喉鳞状细胞癌组织中表达增强,Rb蛋白表达下降,二者存在负相关;Hep-2细胞转染c-myc siRNA后,c-myc蛋白和tuRNA的表达水平逐渐下调;MTT结果显示随着转染c-myc siRNA浓度的增加,Hep-2细胞的存活率受到明显的抑制,具有浓度依赖性;当转染c-myc siRNA(50 nmol/L)后Hep-2细胞的抑制效率随时间的延长而增加,具有时间依赖性;当联合使用5-Fu时,在同一浓度5-Fu作用下,转染c-myc siRNA组细胞的增殖活性明显受到抑制;凋亡检测结果显示,当c-myc siRNA与5-Fu联合使用时,可明显提高Hep-2细胞对5-Fu的敏感性,在较低剂量时凋亡细胞显著增加,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:喉鳞状细胞癌组织中存在c-myc的高表达,c-myc siRNA可以特异性地下调Hew-2细胞中c-myc的表达,抑制喉癌细胞的增殖,增加细胞对5-Fu的敏感性,表明c-myc或许可以成为喉癌基因治疗中一个重要的分子靶点.     

严重颈部闭合性损伤致喉气管断裂的救治体会(附8例报告)

从1976年12月到1996年9月,我们救治了8例严重闭合性损伤致喉气管断裂的患者,男6例,女2例,年龄13～36岁,平均24岁。结果2例死亡,1例死于出血窒息,另1例尚未来得及手术而死亡;1例因救治不当发生喉气管狭窄而需进一步整复,其余5例恢复了喉的功能。强调在修复术中应最大限度地保留破碎的软骨膜、软骨和粘膜。本文重点讨论严重颈部闭合性损伤致喉气管断裂的发病机理、临床特点及急救原则。     

慢性鼻窦炎鼻息肉临床分型分期与疾病分类的标准化

中华医学会耳鼻咽喉科学分会和中华耳鼻咽喉科杂志编辑委员会于1997年在海口制订了“慢性鼻窦炎鼻息肉临床分型分期及内窥镜鼻窦手术疗效评定标准”（简称海口标准）。通过近10年来的临床实践，“海口标准”对规范慢性鼻窦炎、鼻息肉的临床分型，鼻内镜手术疗效的评价，以及在学术交流和临床科研等方面产生了巨大的影响。然而随着医疗卫生信息化的发展，“海口标准”的部分内容已不能完全适应临床工作和医疗卫生信息化的需求。     

Evaluation and treatment of complications of thyroid and parathyroid surgery

The major complications of thyroid and parathyroid surgery include hemorrhage, respiratory obstruction, hyperthyroid storm, hypoparathyroidism, and laryngeal nerve injury. In this article, the incidence, diagnosis, and treatment of various complications are reviewed, with emphasis on hypoparathyroidism and vocal cord paralysis, either bilateral or unilateral. Thyroplastic phonosurgery and carbon dioxide laser arytenoidectomy, two recent surgical additions to the rehabilitation of vocal cord paralysis, are described in depth.     

Factors affecting local and regional control and survival of carcinomas of the tongue and floor of mouth

A retrospective study of 142 patients that had previous surgery for carcinoma of the tongue or floor of mouth looking into the factors that affect significantly the evolution of our patients and in which circumstances we could benefit from new therapeutic techniques. Cause specific survival at 3 and 5 years was 63.4% and 56.9% respectively. Recurrences were found locally in 32 patients (22.5%), regional in 32 (22.5%) and metastasis in 11 (7.4%). T staging had no did impact on local recurrence, but the presence of positive margins (p = 0.0323). Regional control for N0/N1 was 85% (90/106) versus 55.5% (20/36) for N2/N3 (p = 0.001). Regional control by N staging was 84.5% (73/86) for N0, 85% (17/20) for N1, 57% (30/35) for N2 and 0% for N3 (0/1). Both, N staging and number of positive nodes had a significant impact in specific survival. Positive margins and the presence of positive nodes have the greatest impact on survival and regional control. Adjuvant postoperative radiotherapy did not increase survival, but not prospective random selection was performed. To evaluate this.     

Validity and reliability of judgments of authentic and simulated stuttering

This exploratory study was undertaken to determine if the concept has merit that the information by which a stutterer identifies stuttering at time of occurrence is qualitatively different from that by which listeners identify stuttering. If it is not the same, then perceptually equivalent stuttered and nonstuttered speech disruptions should be experienced by the stutterer as qualitatively different, even though recordings of these disruptions would sound alike to listeners. To test this hypothesis a criterion was developed to validate a stutterer's ability to accurately identify her stuttering at time of occurrence. She simulated her own stuttering and then judged acoustical recordings of authentic and simulated samples at five intervals following occurrence. Listener judgments were also obtained. Listeners were able to distinguish simulated and authentic samples with 57% accuracy. The stutterer's judgments were never inaccurate at time of occurrence of a speech disruption, but her accuracy decreased rapidly following occurrence, plateauing at 54%. These results supported the concepts that the production of stuttered and nonstuttered speech disruptions are experienced as being qualitatively different, that the difference is involuntary blockage, that only stutterers can validly recognize this difference, and only when it occurs, and that stuttering is a speaker/production rather than a listener/perceptual disorder.     

闭合性喉气管损伤诊断与治疗探讨

目的探讨进一步提高闭合性喉气管损伤诊断与治疗水平的措施。方法分析32例闭合性喉气管损伤患者的临床资料,对相关问题进行讨论。结果32例闭合性喉气管损伤病例,2例死亡,1例因救治不当发生喉气管狭窄而需进一步整复,其余29例恢复了喉的功能。结论对喉气管外伤准确分度,在修复术中最大限度地保留破碎的软骨膜、软骨和粘膜是提高近期疗效、预防后期喉狭窄的关键。