雌激素对血清饥饿诱导成骨细胞凋亡基因表达的影响

目的探讨雌激素对血清饥饿诱导的体外培养大鼠成骨细胞凋亡基因bcl-2、bax、fas表达的影响，为明确雌激素抑制由血清饥饿诱导的大鼠成骨细胞凋亡的机理提供依据。方法新生SD大鼠颅骨第2、3代成骨细胞随机分为对照组、血清饥饿组、血清饥饿＋雌激素组3组，每组细胞分别培养1d、2d、3d、5d、7d、14d后做免疫组化染色，计数各组Bcl-2、Bax、Fas阳性细胞率。结果对照组成骨细胞有少量Bcl-2、Bax、Fas表达；与对照组比较，血清饥饿组细胞Bax和Fas表达升高（P〈0．05），高峰期为14d，Bcl-2的表达无明显变化（P〉0．05）；与血清饥饿组比较，血清饥饿＋雌激素组细胞Bax和Fas表达降低（P〈0．05），高峰期仍为14d，Bcl-2的表达升高（P〈0．05）。结论血清饥饿使成骨细胞Bax和Fas表达增强，而对Bcl-2的表达无明显影响；雌激素能抑制血清饥饿增强成骨细胞Bax和Fas表达的作用，并使Bcl-2的表达增加，从而抑制血清饥饿诱导的大鼠成骨细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子α诱导大鼠成骨细胞凋亡与中药骨康的干预效应——形态学观察

目的：观察能诱导体外培养的破骨细胞凋亡的骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞凋亡的抑制作用。方法：实验于2003-01／2003-06在广州中医药大学第一附属医院骨科实验室完成。①选用1d龄雌性SD大鼠3只，用于分离原代成骨细胞；6月龄SD雌性大鼠24只用于制备含药血清。②6月龄SD雌性大鼠随机分成3组，每组8只，分别为骨康方组、罗盖全组和空白对照组(蒸馏水灌胃)。骨康方由淫羊藿、补骨脂、黄芪、熟地、白芍等药物组成，为中药煎剂，含生药量1．43kg／L，按4．8g/kg生药灌胃，相当于临床剂量的10倍。罗盖全(活性维生素D3)按0．084μg／kg灌胃，相当于临床剂量的10倍。各组大鼠分别用上述物质灌胃，每次17．5mL／kg，2次／d，间隔5h，连续灌胃3d，最后1次灌胃后2h腹主动脉取血，离心获取含药血清。将传代的成骨细胞分别加入含药血清培养7d时，加入肿瘤坏死因子α，剂量为30μg/L，分别于12和24h后取出长有成骨细胞的盖玻片，经吖啶橙染色，置Nikon荧光显微镜下直接观察拍照。③成骨细胞的鉴定，包括形态学观察和碱性磷酸酶染色和矿化结节茜紊红染色观察。结果：①在用空白血清培养7d的成骨细胞中加入肿瘤坏死因子α，12h时可见到成骨细胞出现凋亡征象，24h时出现典型的细胞凋亡形态。②在用骨康血清和罗盖全血清培养7d的成骨细胞可部分对抗肿瘤坏死因子α所致的成骨细胞凋亡作用，中药骨康血清和罗盖全血清对成骨细胞凋亡的抑制作用相似。结论：①肿瘤坏死因子α可诱导成骨细胞凋亡。②用中药骨康含药血清培养7d的成骨细胞可部分对抗肿瘤坏死因子α对其的损伤，提示中药骨康可通过阻滞肿瘤坏死因子α诱导的成骨细胞凋亡，发挥防治骨质疏松的作用。     

肿瘤坏死因子α诱导大鼠成骨细胞凋亡与中药骨康的干预效应形态学观察

目的:观察能诱导体外培养的破骨细胞凋亡的骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞凋亡的抑制作用。方法:实验于2003-01/2003-06在广州中医药大学第一附属医院骨科实验室完成。①选用1d龄雌性SD大鼠3只,用于分离原代成骨细胞;6月龄SD雌性大鼠24只用于制备含药血清。②6月龄SD雌性大鼠随机分成3组,每组8只,分别为骨康方组、罗盖全组和空白对照组(蒸馏水灌胃)。骨康方由淫羊藿、补骨脂、黄芪、熟地、白芍等药物组成,为中药煎剂,含生药量1.43kg/L,按4.8g/kg生药灌胃,相当于临床剂量的10倍。罗盖全(活性维生素D3)按0.084μg/kg灌胃,相当于临床剂量的10倍。各组大鼠分别用上述物质灌胃,每次17.5mL/kg,2次/d,间隔5h,连续灌胃3d,最后1次灌胃后2h腹主动脉取血,离心获取含药血清。将传代的成骨细胞分别加入含药血清培养7d时,加入肿瘤坏死因子α,剂量为30μg/L,分别于12和24h后取出长有成骨细胞的盖玻片,经吖啶橙染色,置Nikon荧光显微镜下直接观察拍照。③成骨细胞的鉴定,包括形态学观察和碱性磷酸酶染色和矿化结节茜素红染色观察。结果:①在用空白血清培养7d的成骨细胞中加入肿瘤坏死因子α,12h时可见到成骨细胞出现凋亡征象,24h时出现典型的细胞凋亡形态。②在用骨康血清和罗盖全血清培养7d的成骨细胞可部分对抗肿瘤坏死因子α所致的成骨细胞凋亡作用,中药骨康血清和罗盖全血清对成骨细胞凋亡的抑制作用相似。结论:①肿瘤坏死因子α可诱导成骨细胞凋亡。②用中药骨康含药血清培养7d的成骨细胞可部分对抗肿瘤坏死因子α对其的损伤,提示中药骨康可通过阻滞肿瘤坏死因子α诱导的成骨细胞凋亡,发挥防治骨质疏松的作用。     

健骨颗粒含药血清对肿瘤坏死因子α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响

背景:成骨细胞数量减少或凋亡进程加速,使骨形成少于骨吸收可导致骨质疏松的发生.肿瘤坏死因子а在去势大鼠或绝经后骨质疏松患者骨组织中呈高表达,在体外可刺激成骨细胞凋亡.健骨颗粒可降低骨质疏松模型鼠血清肿瘤坏死因子а水平.目的:验证健骨颗粒含药血清对肿瘤坏死因子а诱导的鼠成骨细胞凋亡的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-07/2006-12在福建巾医学院骨伤系分子生物学实验室完成.材料:3月龄SD雌性大鼠40只用于制备含药血清,24 h SD乳鼠5只用于培养成骨细胞.健骨颗粒由煅狗骨、淫羊藿、山茱萸、党参等药味组成,原约材由福建省药材公司提供,福建中医药研究院中试车间加工制备,每克颗粒含原生药2.9 g.方法:用酶消化法培养成骨细胞.随机将40只SD大鼠分为高、中、低剂量含药血清组和生理盐水对照组,每组10只,分别将健骨颗粒按4,2,1 g/(kg·d)的药量灌服,对照组每天灌服2 mL生理盐水.连续给药7 d后腹主动脉取血得到健骨颗粒含药血清,将含药血清作用于成骨细胞48h后,再用肿瘤坏死因子а诱导24 h.运用TUNEL技术、流式细胞术、免疫细胞化学结合图像分析方法,检测成骨细胞凋亡情况.主要观察指标:①成骨细胞凋亡指数.②成骨细胞凋亡峰.③成骨细胞Bcl-2、Bax表达.结果:用肿瘤坏死因子а诱导的各组成骨细胞均出现凋亡现象,其中中、高剂量含药血清组的细胞凋亡指数和凋亡率明显低于其他组,而Bcl-2/Bax灰度比值却较其他组高(P<0.05),Bcl-2/Bax灰度比值与凋亡指数呈负相关(r=-0.757,P<0.01).结论:健骨颗粒对肿瘤坏死因子Q诱导的成骨细胞凋亡有一定的保护作用,可能通过提高Bcl-2的表达来实现.     

姜黄素对大鼠肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响

摘要 目的：探讨姜黄素对肺纤维化大鼠肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响。方法：将体外培养的正常组大鼠肺成纤维细胞(NLF)和博来霉素诱导肺纤维化模型组大鼠肺成纤维细胞(MLF)分别与不同浓度的姜黄素孵育；观察细胞生长状态变化；MTT法检测吸光值，计算细胞抑制率；流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果: 姜黄素作用MLF6h、12h、24h后，各浓度组OD值较对照组显著降低（P<0.01），并呈时间－剂量效应关系。流式细胞分析显示，姜黄素处理组MLF凋亡率较对照组显著升高（P <0.01）,呈药物浓度依赖性。姜黄素不能抑制NLF增殖，对其凋亡无显著影响。结论：姜黄素在体外对MLF具抑制增殖，诱导凋亡作用；而对NLF无明显影响。提示姜黄素可以通过诱导肌成纤维细胞的凋亡而起到抗纤维化的作用。     

同种异基因成骨细胞对混合淋巴细胞反应体系中T细胞的免疫抑制

背景：由同种异基因骨髓间充质干细胞诱导的成骨细胞移植免疫反应各家报道不一致,差别明显。目的：体外观察由骨髓间充质干细胞诱导而成的成骨细胞对T细胞的免疫调节作用及特点。方法：用Ficoll-Hypaque梯度密度离心法分离出兔骨髓单个核细胞,体外扩增,获取第3代细胞,经典化学方法诱导为成骨细胞,将其按照不同的比例加入到T细胞形成双向混合淋巴细胞培养体系中,在第3,5,7天,用MTT比色法检测各组混合淋巴细胞培养体系中的T细胞增殖情况,24h后用流式细胞仪分析各组T细胞亚群凋亡情况。结果与结论：诱导后成骨细胞混合淋巴细胞培养体系中,成骨细胞对T细胞的增殖有抑制作用,在一定范围内,抑制作用具有量效关系。诱导后成骨细胞剂量大,时间延长,抑制程度增强;3次平均抑制率相比：1：20组低于1：80组（P〈0.01）;1：40组低于1：80组（P〈0.05）;诱导后成骨细胞能引起T细胞亚群凋亡,其中CD4＋（凋亡率8.57%）亚群不如CD8＋（凋亡率15.31%）细胞亚群凋亡显著（P〈0.01）。结果显示诱导的成骨细胞在体外能够通过细胞凋亡途径抑制T细胞的增殖,特别是CD8＋。但这种抑制不是特别强,表明诱导的成骨细胞虽有一定的免疫性,但其免疫性较低。     

诊断超声对大鼠输卵管组织细胞凋亡的影响

目的：检测诊断超声对大鼠输卵管组织细胞凋亡状况的影响，探讨诊断超声的安全性。方法：应用超声诊断仪，采用不同超声输出功率，对SD大鼠输卵管持续辐照30min。结果：对照组和各照射组大鼠输卵管组织细胞凋亡率有显著差异（P＜0．01），12h细胞凋亡率增加，24h增加最多，48h细胞凋亡率下降。光学显著镜观察到细胞凋亡的形态学改变：染色质致密固缩聚集于细胞核核膜，细胞核裂解。结论：诊断超声辐照大鼠输卵管可诱导细胞凋亡增加，但存在一定的可复性，且细胞凋亡率与超声输出功率呈正相关。     

脉冲电磁场对去卵巢骨质疏松症大鼠成骨细胞和破骨细胞凋亡的影响

目的观察脉冲电磁场（PEMF）对去卵巢骨质疏松症（OVX-OP）大鼠成骨细胞、破骨细胞凋亡的影响，并探讨PEMF治疗OVX-OP的作用机制。方法取6月龄雌性未孕Wistar大鼠40只，随机分为假手术组、卵巢切除组（模型组）、卵巢切除＋雌激素替代治疗组（雌激素组）和卵巢切除＋PEMF治疗组（电磁场组）。模型组、电磁场组和雌激素组均行双侧卵巢切除术，假手术组不切除卵巢。术后第9周开始治疗：雌激素组采用苯甲酸雌二醇肌肉注射，剂量为0．5mg／kg体重，每2周注射1次；电磁场组大鼠暴露于PEMF中，每日1次，每次1h。模型组和假手术组动物不予以任何治疗。治疗10周后处死各组实验动物，取左侧胫骨上1／3进行骨形态计量学检查。采用原位DNA末端标记染色法（TUNEL法）和透射电镜检测L6椎体成骨细胞、破骨细胞的凋亡情况。采用免疫组织化学法检测k椎体成骨细胞、破骨细胞中Fas、Bax和Bcl-2的表达。结果①透射电镜观察显示，电磁场组成骨细胞活性增强，无明显凋亡征象；而破骨细胞活性减弱，可见典型细胞凋亡征象。②电磁场组的成骨细胞凋亡指数明显低于模型组（P〈0．05），而破骨细胞凋亡指数明显高于模型组（P〈0．05）。③电磁场组Fas阳性成骨细胞数明显少于模型组，Fas阳性破骨细胞数明显多于模型组（P〈0．05），成骨细胞Bax／Bcl-2显著降低（P〈0．05），破骨细胞Bax／Bcl-2显著增高（P〈0．05）。④电磁场组OVX-OP大鼠骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁数量明显高于模型组，而骨小梁分离度明显低于模型组（P〈0．05）。结论PEMF对OVX-OP大鼠成骨细胞凋亡具有抑制作用，对破骨细胞凋亡具有促进作用，汶可能县苴治疗OVX-0P的机制之一。     

续断含药血清对成骨细胞增殖的影响及其细胞毒性检测

目的：观察不同浓度续断含药血清的细胞毒性及其对成骨细胞增殖的影响。方法：实验于2001-01／07在中山医科大学附属第二医院脐血库、医学研究中心以及中山医科大学放免检测中心完成。①制备大鼠含药血清：取雌性SD大鼠18只，随机分为3组，续断组6只，空白对照组8只，雌激素组4只，按体质量分别给予续断生药、生理盐水、雌激素灌胃3d后取血，离心后取上清液。②根据文献方法分离、培养人的原代成骨细胞。③含药血清细胞毒性的观察：成骨细胞按1．0&;#215;10^8L^-1密度接种培养24h，换成无血清培养液24h后，用含不同续断浓度（100％，50％。25％，12．5％，6．25％，3％）的大鼠血清处理细胞。采用直接计数法和四氮唑蓝法观察不同浓度续断含药血清的细胞毒性。④细胞增殖的定量分析：将培养人成骨样细胞用不同组大鼠血清稀释，分为5％，10％和20％续断组，5％，lO％和20％雌激素1组，5％，10％和20％空白对照组，5％，10％和20％雌激素2组。采用氚-胸腺嘧啶和四氮唑蓝法检测细胞增殖能力。结果：①续断含药血清细胞毒性的观察结果：直接计数表明含续断血清浓度12．5％和25％时，细胞生长数量最多，四氮唑蓝法测定A值最高。②续断对成骨细胞增殖的影响：氚-胸腺嘧啶掺入法显示10％续断组，10％，20％雌激素1组，各浓度雌激素2组细胞增殖显著高于空白对照组、5％雌激素1组和5％续断组（P〈0．01）；四氮唑蓝法显示10％，20％续断组，10％，20％雌激素1组，10％，20％雌激素2组细胞增殖显著高于空白对照组、5％雌激素1组和5％续断组（P〈0.01）。结论：高剂量续断对成骨细胞增殖产生抑制作用，低剂量无明显影响，中剂量续断对细胞增殖的刺激作用最强。     

雌激素、促性腺激素与大鼠成骨细胞雌激素受体β的表达

目的：观察不同剂量雌激素，卵泡雌激素及黄体生成素对大鼠成骨细胞雌激素受体β表达的影响。方法：实验于2004-02／08在哈尔滨医科大学第二临床医学院科研中心完成。①取三四个月龄雌性Wistar大鼠28只用于大鼠成骨细胞体外培养。采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞。观察其形态、改良钙钴法碱性磷酸酶染色，培养上清碱性磷酸酶、骨钙素测定来鉴定成骨细胞。②取2代培养的成骨细胞用无血清培养基培养24h，分为10组：对照组，1&;#215;10^10，1&;#215;10^-8，1&;#215;10^-6mol/L 17β-雌二醇组，10，100，1000U／L黄体生成素组，1&;#215;10^-7,1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5g／L卵泡刺激素组。每组3个孔。对照组加入基础培养基，其他各组分别加入相应终浓度药物，培养24-48h。大鼠成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测应用免疫组织化学法测定，以细胞浆有棕黄色颗粒沉积为阳性。成骨细胞雌激素受体β表达检测应用半定量免疫印渍酶促底物染色法以及化学发光法，以A值越高，说明雌激素受体β表达越多。结果：①成骨细胞形态及特征性鉴定：成骨细胞随培养时间的延长，细胞呈指数增长，分泌碱性磷酸酶和骨钙素，碱性磷酸酶染色阳性率为90％，表现出旺盛的分泌功能。②成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测结果：不同剂量卵泡刺激素组和黄体生成素组对雌激素受体表达无明显影响；雌激素1&;#215;10^-8mol／L组和1&;#215;10^-6mol/L组显著高于对照组[(90．95&;#177;5．89)，(95．12&;#177;6．17)，(81．44&;#177;5.37)个数／100个细胞，τ=2．95，P&;lt;0．05；τ=3．50,P&;lt;0．01]。③成骨细胞雌激素受体β表达结果：不同剂量卵泡刺激素及黄体生成素对雌激素受体β的表达无明显影响；随雌激素浓度的增加成骨细胞雌激素受体β表达呈上升趋势。结论：雌激素能促进成骨细胞雌激素受体β的表达，且表现出剂量依赖性。而黄体生成素、卵泡刺激素对雌激素受体β表达无直接影响。     

表柔比星对乳腺癌细胞c-FLIP表达的影响

目的:探讨表柔比星对乳腺痛细胞中c-FLIP表达的影响.方法:以MCF-7及MDA-MB-231乳腺癌细胞株为对象分两组:处理组中加入2 mg/L的表柔比星分别作用24 h、48 h和72 h,对照组加入等量生理盐水.采用RT-PCR技术检测两组细胞株中c-FLIP的表达,漉式细胞仪检测细胞凋亡百分率.结果:MCF-7及MDA-MB-231乳腺癌细胞中有c-FLIP的表达;与对照组相比,表柔比星作用24 h,乳腺癌细胞中c-FLIP的表达明显下降,48 h时c-FLIP表达有所升高,72 h时表达最低.随着表柔比星作用时间延长,细胞凋亡率逐渐增加,72 h达到最高.结论:表柔比星通过抑制c-FLIP的表达促进乳腺癌细胞的凋亡.     

缺氧诱导离体心肌细胞凋亡的动物实验研究

目的：建立一种新的SD乳鼠心肌细胞的缺氧模型,以探讨心肌细胞缺氧损伤后的细胞凋亡及其时序分布特点。方法：SD乳鼠的培养心肌细胞随机分为5组：对照组,缺氧12h组(112h)、缺氧24h组(14h),缺氧48h组(148h)以及缺氧72h组(172h)。应用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳、透射电镜等多种手段检测心肌细胞凋亡的改变。结果：在本实验的心肌细胞缺氧模型中,流式细胞仪检测发现,心肌细胞缺氧后的细胞凋亡百分率迅速增高。琼脂糖凝胶电泳分析。心肌细胞在缺氧48h、72h时均出现了凋亡特异性的“梯状”电泳带。结论：本实验培养乳鼠心肌细胞缺氧模型可导致心肌细胞凋亡,凋亡程度和心肌细胞缺氧时间有关,并可导致和在体心肌缺血相似的心肌损伤。细胞凋亡在心肌缺氧心肌细胞死亡中起重要作用。     

BHRF1基因对丝裂霉素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡影响

目的探讨EB病毒早期基因BHRF1的表达对丝裂霉素诱发胃癌细胞SGC7901凋亡的影响。方法构建pcDNA3.1-BHRF1表达载体,应用脂质体转染法将BHRF1表达载体转染胃癌细胞系SGC7901,MTT法检测细胞生长情况。实验分为细胞对照组、空载体对照组和目的基因转染组,细胞对照组仅接种SGC7901细胞,空载体对照组将pcDNA3.1空载体转染入SGC7901细胞中,目的基因转染组将重组质粒pcDNA3.1-BHRF1转染入SGC7901细胞中。分别培养24、48和72 h后,用浓度为30 mg/L的丝裂霉素处理,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色方法检测凋亡小体。结果 pcDNA3.1-BHRF1重组质粒构建成功。MTT实验显示目的基因转染能明显拮抗由于丝裂霉素作用导致的细胞生长抑制;BHRF1转染＋丝裂霉素处理组凋亡小体明显少于对照组,细胞凋亡率明显低于对照组,差异均有统计学意义（F=6 250.510,q=56.992、51.613,P〈0.01）。结论 BHRF1基因具有明显拮抗丝裂霉素诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的作用。     

Toll样受体2在分枝杆菌诱导巨噬细胞凋亡中的作用

目的建立分枝杆菌感染巨噬细胞的模型,探讨Toll样受体2(TLR2)在分枝杆菌诱导巨噬细胞凋亡中的作用。方法使用豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)诱导U937细胞分化使之具有吞噬能力,分别用胞内分枝杆菌(M.intracellulare)、结核分枝杆菌(MTB)、脓肿分枝杆菌(M.abscessus)感染已分化的U937细胞,于感染后0、4、8、24、48和72h提取细胞,用流式细胞仪检测u937细胞凋亡率及细胞膜TLR2的表达,Western blot检测U937细胞感染后72 h时细胞内总TLR2的含量,并观察阻断TLR2后U937细胞感染分枝杆菌后的凋亡变化。结果 M.intracellulare M.abscessus感染U937细胞后的细胞凋亡率随时间的推移逐渐升高,4h后凋亡率已显著高于正常对照组,而MTB感染后的细胞凋亡率也有升高但与正常对照组差异无统计学意义;3种分枝杆菌感染U937细胞后的细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.05),由高到低的排列依次为M.abscessus、M.intracellulare和MTB。U937细胞的TLR2表达量在分枝杆菌感染后4 h内迅速升高,8 h后TLR2的含量稳定下来,不同分枝杆菌感染U937细胞后TLR2的表达并不相同(P<0.05),由高到低的排列依次为MTB、M.intracellulare和M.abscessus。阻断U937细胞的TLR2可以明显降低感染分枝杆菌后细胞的凋亡率。结论 TLR2并不直接引起巨噬细胞的凋亡,但TLR2在分枝杆菌诱导巨噬细胞凋亡中有重要作用。     

青藤碱对THP-1细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察中药单体青藤碱(SIN)对脂多糖(LPS)刺激的THP-1细胞增殖、凋亡的影响。方法:培养的THP-1细胞经LPS1mg/L刺激2h后,分为SIN高(0.3mmol/L)、中(0.15mmol/L)、低(0.075mmol/L)剂量组及空白对照组,干预24h。采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增殖情况,碘化丙啶染色流式细胞检测凋亡指数,吖啶橙(AO)/溴乙锭(EB)荧光显微镜观察细胞凋亡水平。结果:与空白对照组相比,SIN高(P<0.01)、中(P<0.05)剂量组细胞增殖明显降低,流式细胞检测SIN3个剂量组细胞凋亡率增高,AO/EB染色示SIN处理的细胞出现不同程度的核裂解和胞膜受损等凋亡现象。结论:SIN可能通过抑制单核细胞的增殖,促进其凋亡来达到免疫抑制和治疗类风湿关节炎的作用。     

维生素K2对NB4细胞生长、凋亡、周期阻滞及分化的诱导作用

目的研究维生素K2(VK2)对NB4细胞生长、凋亡、周期阻滞及分化的诱导作用。方法通过四唑盐比色法、形态学观察、流式细胞仪检测细胞早期凋亡率、细胞周期分析、NBT还原法和流式检测CD14、CD11b阳性率研究维生素K2对NB4细胞的影响。结果NB4细胞经VK2作用后增殖受到抑制;VK2作用NB4细胞72h后,细胞形态呈现凋亡特征,细胞早期凋亡率随浓度升高而升高,与对照组比较及两两比较P<0.01;各药加组G0/G1期细胞均较空白对照组升高,各加药组与空白对照组比较P<0.01,但各加药组之间两两比较无统计学意义;各加药组NBT阳性率、CD14、CD11b表达均较空白对照组无统计学意义。结论VK2对NB4细胞有生长抑制作用,且具有时间及剂量依赖性;VK2可诱导NB4细胞凋亡,且呈剂量依赖性;VK2可诱导NB4细胞周期受阻于G0/G1期,但细胞周期阻滞作用无量效关系;VK2无单独诱导NB4细胞分化作用。     

脯氨酸羟化酶抑制剂可抑制小鼠骨髓间充质干细胞凋亡*☆

背景:脯氨酸羟化酶抑制剂能够通过稳定低氧诱导因子使其下游基因表达上调,进而对细胞凋亡发挥调控作用。目的:观察脯氨酸羟化酶抑制剂二甲基乙二酰基甘氨酸对无血清培养引起的小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法:分离传代培养并鉴定小鼠骨髓间充质干细胞。分别应用无血清(无血清对照组)及含体积分数10%胎牛血清(正常对照组)的DMEM培养基培养小鼠骨髓间充质干细胞24,48,72h,实验组在无血清对照组的基础上给予1mmol/L的二甲基乙二酰基甘氨酸。结果与结论:实验所获的细胞通过流式细胞仪细胞表型鉴定和三系分化鉴定证实为骨髓间充质干细胞。流式细胞仪检测结果显示,与无血清对照组比较,实验组骨髓间充质干细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。说明脯氨酸羟化酶抑制剂二甲基乙二酰基甘氨酸可拮抗血清剥夺引起的骨髓间充质干细胞凋亡。     

创伤性脑损伤后细胞凋亡的时相性研究

目的探讨创伤性脑损伤中细胞凋亡的发生发展过程,为脑损伤后的神经系统保护提供实验资料以及为法医学损伤经过时间推断提供帮助。方法以Feeney自由落体脑损伤大鼠模型为对象,采用DNA缺口末端标记法（TUNEL）染色观察不同损伤时间时脑损伤组脑组织、假手术对照组脑组织和正常对照组脑组织中细胞凋亡的情况。结果创伤性脑损伤后2h即可在伤侧皮层以及同侧的海马区可见细胞凋亡发生,随着损伤经过时间的延长,凋亡细胞逐渐增多,在48~72h凋亡达到高峰,随之逐渐减少,至7d时凋亡数仍显著高于正常对照组和假手术组,正常对照组和假手术组在伤侧对应区和海马区仅偶见凋亡细胞。结论检测损伤区凋亡细胞数对损伤经过时间的推断有重要价值,为法医学损伤诊断起重要作用。     

二硫化二砷诱导T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的机制研究

目的探讨二硫化二砷诱导T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的分子机制。方法将不同浓度的二硫化二砷与T淋巴细胞白血病细胞株共培养。采用CCK-8方法测定细胞活性;AnnexinⅤ-PI方法测定细胞凋亡率,采用实时定量PCR在基因水平测定凋亡相关因子Bcl-2和Bax的表达。结果随着二硫化二砷药物浓度的增高,细胞活性减低,随着药物作用时间的延长,细胞活性逐渐减弱。其差异均有统计学意义。细胞凋亡结果显示：二硫化二砷药物浓度越高,细胞凋亡率越高,随着药物作用时间的延长,细胞凋亡率也越高。其差异均有统计学意义。实时荧光定量结果显示：与对照组比较,10μmol/L二硫化二砷与CEM细胞共孵育48 h,Bax/Bcl-2的比例升高（P〈0.05）。结论二硫化二砷以时间和剂量依赖的方式抑制CEM细胞生长和诱导凋亡,诱导凋亡的机制与Bax/Bcl-2的比率增加有关。