骨连结蛋白在大鼠正常牙髓和牙髓修复中的基因表达

目的 :利用原位杂交技术 ,观察骨连结蛋白 (osteonectin ,ON)在大鼠正常牙髓和牙髓修复过程中的基因表达特征。方法 :在Wistar大鼠上下颌第一磨牙近中面制备一单面洞。分别观察 3d和 15d后处死动物。组织学处理后切片。体外转录合成单链RNA探针并标记地高辛 (Digoxigenin)。将标记探针与标本进行原位杂交。利用生物素标记的抗地高辛抗体和SABC标记 ,DAB显示杂交信号。苏木素复染。结果 :正常牙髓组织中 ,ON基因表达于牙髓成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞内。ON在备洞 3d后的成牙本质细胞和成牙本质细胞层下方的牙髓细胞内表达强阳性。 15d后 ,可见修复性牙本质形成。修复性牙本质下方的成牙本质细胞样细胞表达ON。结论 :在牙髓修复过程中 ,ON在牙髓修复过程中通过自分泌途径 ,参与了修复性牙本质的形成和矿化     

热休克蛋白27在大鼠牙髓炎中的免疫组化研究

目的：研究内毒素（LPS）诱导大鼠牙髓炎模型中HSP27在不同时间的动态表达及定位情况，观察HSP27在牙髓炎中的表达特点，推测它在牙髓炎发生、发展中的意义。方法：通过对LPS诱导的大鼠磨牙实验性牙髓炎组织连续进行切片，同时超敏免疫组化分析。结果：1d组HSP27在成牙本质细胞呈中度阳性表达，成纤维细胞、血管壁及内皮细胞中均呈阳性表达，3、5、7d组中HSP27在成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞及内皮细胞表达减少，2周以后，成牙本质细胞、成牙本质细胞突、修复性牙本质和牙髓成纤维细胞可见HSP27阳性表达，3、4周以后，成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞、修复性牙本质呈弱阳性表达，5周以后，牙髓组织变性、坏死，呈均质弱阳性染色。结论：HSP27在牙髓炎早期能够保护牙髓细胞，限制炎症发展，在损伤晚期则可能参与牙齿矿化修复过程。     

Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的促进作用

目的：研究Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的作用,探讨其作为新型盖髓剂的可能性。方法：28只雄性Wistar大鼠,在大鼠的双侧上颌第一磨牙牙合面备洞至露髓后,左侧用含Matrilin-4的胶原蛋白海绵盖髓（Matrilin-4组）,右侧用含磷酸盐缓冲溶液（PBS）的胶原蛋白海绵盖髓（PBS组）,双侧均用玻璃离子封洞。分别于3、7、14和28 d灌流固定处死大鼠并取上颌双侧第一磨牙标本,HE染色和免疫组织化学染色观察分析各组大鼠修复性牙本质形成及成牙本质细胞中牙本质涎蛋白（DSP）的表达情况。结果：HE染色,3 d时与PBS组比较,Matrilin-4组穿髓孔下方较少量炎症细胞聚集,并可见明显的血管扩张;7 d时2组穿髓孔下方炎症反应加重,但Matrilin-4组明显轻于PBS组,且可见前期牙本质形成;14 d时Matrilin-4组露髓区域可被较连续完整的修复性牙本质桥覆盖;28d时,与PBS组比较,Matrilin-4组穿髓孔下方可见厚而完整的修复性牙本质桥,牙本质桥下面有重组的成牙本质细胞层。免疫组织化学染色,2组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度在术后3、7和14 d呈逐渐增强趋势,28 d时减弱;盖髓后各时间点Matrilin-4组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度均强于PBS组,且14 d时阳性表达达高峰。与PBS组比较,3、7和14 d时Matrilin-4组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度明显升高（P<0.01）。结论：Matrilin-4对牙髓损伤后修复性牙本质的形成具有促进作用。     

转化生长因子-β受体Ⅰ型及Ⅱ型在大鼠牙髓炎中的表达

目的研究转化生长因子-β受体Ⅰ型及Ⅱ型（TGF—βSRⅠ、Ⅱ）在大鼠牙髓炎模型中在不同时间动态表达及定位情况；观察转化生长因子-β受体Ⅰ型及Ⅱ型在牙髓炎中表达特点，推测它在牙髓炎发生、发展中的意义．方法通过对内毒素（LPS）诱导的大鼠磨牙实验性牙髓炎组织连续进行切片，同时超敏免疫组化分析．结果1d组、3d组，TGF-βRⅠ、Ⅱ在成纤维细胞中均呈弱阳性表达，成牙本质细胞呈强阳性表达，至2周修复期为阳性表达．2周以后，成牙本质细胞，前期牙本质细胞呈阳性表达减弱．3周、4周以后，成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞、修复性牙本质呈弱阳性表达．5周以后，牙髓组织变性、坏死，呈阴性染色．结论TGF—βRⅠ、Ⅱ在大鼠牙髓炎的损伤修复过程中具有重要作用．     

在大鼠牙髓炎中的八聚体结合转录因子4B免疫组化研究

目的研究内毒素(LPS)诱导大鼠牙髓炎模型中八聚体结合转录因子4B(Oct-4B)在不同时间的表达特点及定位情况,以探讨Oct-4B在牙髓炎症中的可能作用,推测它在牙髓炎发生、发展中的意义.方法通过对LPS诱导的大鼠磨牙牙髓炎进行连续组织切片,同时采用免疫组织化学检测大鼠牙髓炎中Oct-4B的表达情况.结果 1 d组:成牙本质细胞呈中度阳性表达,牙髓成纤维细胞为中度至强阳性表达;3、5、7 d组:成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞阳性表达减弱.2周组:坏死区扩大呈均质弱阳性表达,成牙本质细胞、牙髓成维维细胞及内皮细胞减少,呈阳性,修复牙本质呈弱阳性表达;3周组:大部分坏死牙髓组织呈均质弱阳性表达.结论 Oct-4B在大鼠牙髓炎发生、发展呈动态表达,Oct-4B可能参与调节牙髓炎发生、发展及修复过程.     

双黄补缓释药条直接盖髓的动物实验研究

目的 探讨双黄补缓释药条作为盖髓剂用于牙髓修复的影响.方法 将4只Beagle狗的64颗恒牙人工穿髓,分为实验组(双黄补缓释药盖髓)、阳性对照组(氢氧化钙盖髓)、阴性对照组(氧化锌丁香油粘固粉盖髓),分别于盖髓后第14 d和第28 d处死动物取出牙齿,观察修复性牙本质形成及牙髓组织学变化,免疫组织化学检测骨形成蛋白2( bone morphogenetic protein,BMP2)表达情况.结果 实验组14 d后牙髓组织产生基质样牙本质,28 d后产生牙本质桥,BMP2蛋白呈阳性表达.结论 双黄补缓释药条可早期诱导牙髓产生修复性牙本质,促进牙髓创伤修复.     

HSP27在大鼠磨牙钻磨后牙髓的表达

目的 研究热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)在成年大鼠磨牙受到钻磨刺激后不同时间牙髓组织中的表达特点及定位情况. 方法 建立大鼠牙髓炎模型,用免疫组织化学方法检测热休克蛋白27在大鼠上颌磨牙钻磨后3 d,6d,9 d的表达. 结果 热休克蛋白27在牙髓炎晚期成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞、血管壁及内皮细胞中表达逐渐减弱.结论 热休克蛋白27的表达与牙髓炎症发生发展的程度有关,提示热休克蛋白27在牙髓损伤修复期可能是参与牙髓损伤修复的细胞因子之一.     

重组人骨形成蛋白用于狗直接盖髓的实验研究

目的观察重组人骨形成蛋白-2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)对修复性牙本质形成的诱导作用.方法用rhBMP-2与羟基磷灰石(HA)复合,用于狗恒牙人为穿髓后直接盖髓,并与氢氧化钙直接盖髓对照,通过组织病理观察修复性牙本质的形成.结果 rhBMP-2-HA盖髓术后3周,穿髓孔下方可见形成的修复性牙本质团块,团块周围有类造牙本质细胞;术后6周,穿髓孔下方可见完整的修复性牙本质桥;术后1 2周,修复性牙本质桥增厚而且致密,牙本质桥近髓可见排列规则的成牙本质细胞.氢氧化钙盖髓对照组,术后3周,穿髓孔下方可见钙质团块形成,有炎症细胞浸润;术后6周,可见有修复性牙本质形成,但不连续;术后12周,修复性牙本质形成但较rhBMP-2-HA盖髓后形成的修复性牙本质桥薄而且疏松.结论 rhBMP-2-HA可以直接诱导牙髓细胞分化为成牙本质细胞,形成修复性牙本质.     

几种生物活性分子作为盖髓剂在修复性牙本质形成中的作用

牙髓组织具有一定的修复潜能,当受到外界刺激时,牙髓细胞能分化为成牙本质细胞,并形成修复性牙本质,以隔绝刺激.因此,在临床上我们常使用盖髓剂以帮助牙髓组织修复.许多口腔医务工作者及研究人员一直致力于寻找一种具有抗炎,抗微生物和诱导修复性牙本质形成作用的理想的盖髓剂.     

过量氟对大鼠牙髓成牙本质细胞显微和亚显微结构的影响

目的:观察过量氟作用下大鼠牙髓成牙本质细胞显微、亚显微结构的改变。方法:选择30只Wister大鼠,随机分为两组,每组15只。Ⅰ组为对照组,蒸馏水灌胃。Ⅱ组为实验组,20 mg/(kg.d)氟化钠水灌胃。8周后处死动物,利用磨片、HE染色、透射电镜技术观察过量氟对大鼠切牙形态、成牙本质细胞显微和亚显微结构的影响。结果:实验组切牙牙釉质牙本质厚度明显变薄,髓腔内侧前期牙本质宽于对照组,球间牙本质增多。釉质生长线、釉柱横纹明显,牙本质生长线明显。透射电镜观察实验组大鼠牙髓成牙本质细胞体积较小,细胞器减少,一些细胞呈现凋亡迹象。结论:过量的氟作用下大鼠牙髓成牙本质细胞分化和分泌基质都受一定程度的阻遏,成牙本质细胞细胞器减少,细胞凋亡。     

兔实验性脊髓空洞前状态水通道蛋白4表达的变化

目的:探讨水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)在实验性脊髓空洞前状态的表达变化.方法:56只新西兰白兔被随机分为高岭土(Kaolin)组(40只)、生理盐水组(8只)和假手术组(8只).经枕大池注入Kaolin建立新西兰白兔脊髓空洞症模型,注入后1,3,7,14,21 d用干湿重法测定脊髓含水量、用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR技术检测脊髓空洞前状态脊髓含水量、AQP4及其mRNA表达变化.结果:Kaolin组动物于术后第3天脊髓含水量即有明显增加(68.35%±0.70%),第7天达到高峰(72.92%±0.86%),第21天稍有缓解(70.03%±0.77%),但仍高于对照组;AQP-4于术后第3天开始减弱[积分光密度(integral optical density,IOD)320.5±44.2],第7～14天达到最低水平(IOD 258.7±26.5),到21天时回升(IOD 321.5±46.1),但仍低于对照组;而AQP4mRNA表达变化趋势与其蛋白含量变化相一致.线性回归分析发现, AQP4及其mRNA表达变化与脊髓含水量之间存在负相关(r=-0.769,P＜0.01;r=-0.955,P＜0.01).结论:脊髓空洞前状态中出现了AQP4及其mRNA表达减少,可能参与了缺血、缺氧性脊髓水肿的形成.     

Sonic Hedgehog信号通路在大鼠牙髓炎中的作用

目的:观察Sonic Hedgehog(Shh)信号分子在大鼠牙髓炎中的免疫定位,探讨Shh信号通路在牙髓防御和修复中所起的作用。方法:将15只SD大鼠随机分成1d、3d和7d组,每组5只,用穿髓开放法建立大鼠牙髓炎模型,3组大鼠分别于术后1,3,7d处死,取出下颌磨牙,常规组织学处理,免疫组化方法检测Shh,Smo,Ptc,Gli1的表达,并对Shh信号通路在大鼠牙髓炎中的表达进行半定量分析,对照组为大鼠正常牙髓。结果:大鼠牙髓炎模型1,3,7dShh广泛表达于穿髓孔下方牙髓间充质细胞及远离穿髓孔的根髓细胞中,表达量随炎症的进展无显著性提高(P>0.05)。Ptc、Smo、Gli1在大鼠牙髓损伤后1d未见阳性表达,3d和7d均表达于穿髓孔下方牙髓间充质细胞中,且表达量均有显著性提高(P<0.05)。空白对照组中Shh信号通路阴性表达。结论:Shh信号通路在牙髓炎过程中表达,提示其可能被激活,参与牙髓炎症反应。     

增殖细胞核抗原在急性肝功能衰竭大鼠肝组织中的动态变化

目的:观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在急性肝功能衰竭大鼠肝组织中的动态变化及促肝细胞生长素(hepatocyte growth-promotingfactors,HGF)对PCNA表达的影响.方法:SD大鼠随机分为三组,即:正常对照组、D-氨基半乳糖(D-Galactosamine,D-GalN)组和D-GalN HGF组,以D-GalN1.2g/kg腹腔注射制备大鼠急性肝功能衰竭模型,2h后D-GalN HGF组大鼠每24h腹腔注射HGF 2mg/kg,分别于第1天、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天、第13天、第15天用S-P免疫组织化学技术检测肝组织中PCNA的表达.结果:D-GalN组大鼠肝组织PCNA标记指数(PCNAlabelingindex,PCNA-LI)在模型建立成功后第5天达峰值,以后急剧下降,在第15天时达到正常对照组水平(P＞0.05).D-GalN HGF组大鼠PC-NA-LI峰值于第3天出现,比D-GalN组早,持续时间长,且各时间点的PCNA-LI均明显高于D-GalN组(p＜0.01).结论:急性肝功能衰竭时,残存肝细胞仍有再生能力,但其再生过程受到抑制.HGF可以提高PCNA的表达,从而促进肝细胞的再生.     

重组人骨形成蛋白-2复合材料间接盖髓的组织学研究

目的通过动物实验观察重组人骨形成蛋白-2复合材料的盖髓效果。方法用重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)氧化锌复合材料(A组)、rhBMP-2(B组)、氢氧化钙(C组),将其分别衬洞于已备V类洞底的狗牙上,在规定的时间内给狗口服四环素,四环素的沉积物作为新形成修复性牙本质的标记物。在第95天拔除实验牙,制作横切磨片,在荧光显微镜下观察修复性牙本质形成情况。冠髓制作成常规切片,在光学显微镜下观察。结果三组材料盖髓后形成修复性牙本质的量A组明显高于B组和C组(P<0.05);在实验第60天时,形成修复性牙本质的总量A组为0.668mm,B组为0.487mm,C组为0.224mm。在第90天时,A组为0.834mm,B组为0.609mm,C组为0.255mm。结论rhBMP-2复合材料具有良好的可操作性,能有效地诱导修复性牙本质的形成,且对牙髓的刺激性小。     

结缔组织生长因子盖髓剂对牙髓组织形态学的影响及其意义

目的: 研究大鼠牙髓机械损伤经结缔组织生长因子(CTGF/CCN2)覆盖于损伤牙髓处后不同时间点大鼠牙髓的组织形态学变化,阐明其作用机制。方法: 选择20只Wistar大鼠,平均分为5组,随机选取一组为正常组(不做任何处理),其余4组(3、7、14和28 d组)每只大鼠在双侧上颌第一磨牙备洞,左侧为CCN2盖髓剂的实验组,右侧为PBS对照组。分别于3、7、14和28 d处死大鼠并取其牙齿标本,经固定、脱钙、切片和HE染色,观察各标本中牙髓组织的形态学变化。结果: 对照组大鼠3 和7 d时穿髓孔下方炎症较实验组明显;14 d时炎症反应减轻,有散在的修复性牙本质形成;28 d时形成坏死病灶。实验组大鼠3 d时穿髓孔下方聚集大量炎细胞,血管扩张明显;7 d时炎症减轻,淋巴细胞相对于对照组少;14 d时已无明显炎细胞存在,并形成连续完整的钙化桥;28 d时形成大量修复性牙本质。结论: 牙髓组织损伤后,CCN2参与了组织结构的重建,提示CCN2是一种良好的盖髓剂。     

牙科电子麻醉在窝洞制备和开髓治疗中的应用

目的：评价牙科电子麻醉在窝洞制备和开髓过程中的镇痛效果。方法：对60例窝洞制备患者和15例开髓患者应用电子麻醉进行局部镇痛，另对60例窝洞制备患者和15例开髓患者应用传统局部麻醉作为对照，计算有效率，并对所得数值进行统计学处理（x^2检验）。结果：窝洞制备组中，电子麻醉有效率为93．33％，局部麻醉有效率为98．33％，二者差异不显著（P＞0．05）；开髓治疗组中，电子麻醉有效率为26．67％，局部麻醉有效率为93．33％，二者差异显著（P＜0．01）。结论：电子麻醉在窝洞制备时有良好的镇痛效果，但对开髓的镇痛效果并不理想。     

Inductive effect of bovinc bone morphogenetic protein on human dental pulp tissue in vitro

Ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆｂｏｖｉｎｃｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｏｎｈｕｍａｎｄｅｎｔａｌｐｕｌｐｔｉｓｓｕｅｉｎｖｉｔｒｏ￥ＦｕｍｉｈｉｋｏＳＵＷＡ；ＧａｏＹｕｈａｏ（高玉好）；ＹｏｓｈｉｋｕｎｉＯＨＴＡ；ＦａｎｇＹｉ...     

siRNA特异性抑制卵巢癌细胞生长因子受体-2基因表达及其意义的研究

目的探讨RNA干扰(RNAi)抑制卵巢癌细胞表皮生长因子受体-2(HER-2)基因的表达及其细胞效应。方法实验分为以下3组空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV-3细胞)、转染非特异性的siRNA组及转染特异性的siRNA组。干涉后5d加顺铂。采用半定量PCR技术(RT-PCR)和Western印迹法检测HER-2mRNA和蛋白的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞对顺铂的化学敏感性的变化,分析观察细胞生物学特性的改变。结果HER-2siRNA对HER-2mRNA表达明显抑制,作用能持续10d左右;干涉第7天后开始出现蛋白质表达的明显减弱,转染特异性siRNA组的蛋白质阳性表达率为(25·5±0·8)%,非特异性siRNA组为(95·7±0·8)%,空白对照组为(96·6±1·2)%,前组与后两组比较差异有统计学意义(均P<0·001)。干涉后随着HER-2mRNA表达下降,细胞凋亡增加,第6天凋亡率最高,达(53·2±1·0)%,转染非特异性siRNA组为(4·1±0·3)%,空白对照组为(4·1±0·3)%,差异有统计学意义(P<0·001);干涉后,转染特异性siRNA组的细胞存活率为(58·4±0·8)%,转染非特异性siRNA组为(68·0±0·6)%,空白对照组为(67·0±0·3)%,前组与后两组比较差异有统计学意义(均P<0·001)。结论体外合成的siRNA能有效抑制SKOV-3细胞中HER-2表达,促进细胞的凋亡,提高细胞对顺铂的敏感性,RNAi为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略。