NS-398对宫颈癌细胞系的增殖抑制作用及对survivin基因表达的影响

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对宫颈癌HeLa,SiHa细胞系的增殖、凋亡作用及其对凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法:体外培养宫颈癌HeLa,SiHa细胞系,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析不同浓度的NS-398分别作用于HeLa,SiHa细胞系24h、48h后对细胞增殖的作用;流式细胞仪(FCM)检测对细胞凋亡的作用;RT-PCR分析对凋亡抑制基因survivin表达的影响。结果:MTT检测显示,NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞系增殖,并有浓度时间依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测提示,NS-398可诱导HeLa,SiHa细胞系凋亡,有浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR分析表明,NS-398可抑制HeLa,SiHa细胞系凋亡抑制基因survivinmRNA表达,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞增殖,诱导凋亡,其机制与抑制凋亡抑制基因survivin mRNA表达有关,为宫颈癌治疗提供了新的靶点和理论依据。     

环氧合酶-2抑制剂诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡及相关分子机制的研究

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的作用机制。方法:用不同浓度(100-400μmol/L)的NS-398,以不同时间段(12-72h)处理宫颈癌Hela细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定Hela细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测Hela细胞凋亡率;Western blot检测COX-2蛋白的表达;放射免疫法检测Hela细胞PGE2释放水平。结果:不同浓度的NS-398(100-400μmol/L)对Hela细胞的增殖具有抑制作用,并呈明显的时效和量效关系,与对照组相比,差异有极显著性(P<0.01)。200-400μmol/L的NS-398诱导Hela细胞的凋亡率,与对照组比较,差异有极显著性(P<0.01),并呈浓度依赖性。NS-398能明显抑制Hela细胞COX-2的活性和表达,随着浓度的增加,其COX-2蛋白表达逐渐降低,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。不同浓度的NS-398(100-400μmol/L)可明显抑制Hela细胞PGE2释放水平,呈浓度依赖性,与对照组比较,差异有极显著性(P<0.01)。结论:NS-398对宫颈癌Hela细胞生长具有抑制作用,并促进其凋亡,其作用可能与抑制COX-2活性表达及抑制细胞PGE2释放水平有关。     

青蒿素衍生物对宫颈癌HeLa细胞体外增殖及凋亡能力的影响及其分子机制研究

目的:观察青蒿素衍生物(双氢青蒿素和青蒿琥酯)对宫颈癌细胞体外增殖及凋亡能力的影响,并探讨其对有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平的影响。方法:以未加药的He La细胞作对照,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测加青蒿素衍生物前后两种细胞的体外增殖效应的差异,Western blot法检测两种细胞MAPK[即细胞外信号调节激酶(ERK)1/2和p38蛋白激酶]磷酸化水平。结果:双氢青蒿素和青蒿琥酯对He La细胞48h的IC50分别为(8.9±1.1)μmol/L和(10.5±1.2)μmol/L。双氢青蒿素和青蒿琥酯导致He La细胞ERK1/2磷酸化水平分别降低(70.5±2.6)%(P0.05)和(65.8±2.9)%(P0.05),p38磷酸化水平分别升高(57.3±2.4)%(P0.05)和(47.0±3.0)%(P0.05)。加入双氢青蒿素和青蒿琥酯12h后,He La细胞的凋亡指数分别增加(51.0±3.6)%(P0.05)和(38.4±3.2)%(P0.05)。结论:青蒿素衍生物可抑制宫颈癌细胞的体外增殖,促进癌细胞的早期凋亡,这可能分别与下调癌细胞内ERK1/2磷酸化水平和上调癌细胞内p38磷酸化水平相关。     

紫杉醇诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的研究紫杉醇对人宫颈癌Hela细胞的作用。方法将紫杉醇处理Hela细胞后，用MTT法测定宫颈癌Hela细胞的生长抑制率。光镜下观察细胞凋亡形态的改变。流式细胞仪和原位末端标记技术检测细胞周期及细胞凋亡率，流式细胞仪检测bcl-2水平，TRAP法测定端粒酶活性的变化。结果0．01—1μmol/L的紫杉醇能引起Hela细胞的凋亡。表现为Cz／M期阻滞，且呈时间依赖性及剂量依赖性。紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调和bcl-2表达水平下降。结论紫杉醇诱导宫颈癌Hela细胞凋亡，并抑制端粒酶活性，bcl-2参与了紫杉醇诱导的宫颈癌细胞凋亡过程中端粒酶活性的调控。这一机制将为临床治疗提供理论依据。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对人宫颈癌HeLa细胞的凋亡作用

目的 现察不同浓度肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对宫颈癌HeLa细胞的凋亡作用.方法 2006年于重庆医科大学,采用不同浓度的TRAIL作用于HeLa细胞,采用MTT(噻唑蓝)法检测细胞存活分数AO/EB(丫碇橙/嗅乙啶)双重荧光染色观察凋亡细胞结构;流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率.结果 TRAIL作用于HeLa细胞24 h后,TRAIL对细胞生长抑制率及细胞凋亡率具有量效关系;AO/EB双重荧光染色可见到早期、晚期凋亡细胞;流式细胞仅检测有王二倍峰出现;细胞周期发生改变.结论 TRAIL对HeLa细胞生长有抑制作用,并可诱导其凋亡.     

COX-2特异性SiRNA联合卡铂促进HeLa细胞增殖及凋亡

目的:研究环氧合酶-2(COX-2)特异性小干扰RNA(SiRNA)联合卡铂对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:COX-2 SiRNA转染HeLa细胞并联合卡铂进行药物干预,以荧光定量PCR和W estern blot检测COX-2 mRNA和蛋白表达,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡。结果:COX-2靶向SiRNA能有效沉默HeLa细胞COX-2基因,降低COX-2 mRNA及蛋白表达水平,并有效的抑制HeLa细胞增殖并促进细胞凋亡,SiRNA联合卡铂干预能进一步抑制细胞增殖且具有时间-效应关系。结论:COX-2靶向SiRNA联合卡铂在抑制HeLa细胞增殖过程中具有协同放大效应。     

黄芩素诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:探讨黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:MTT法测定黄芩素作用后人子宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率;Hoechst 33258荧光染色法和Annexin-V/PI双染流式细胞术检测黄芩素诱导HeLa细胞凋亡的作用;Westernblot观察黄芩素对HeLa细胞bcl-2、Bax、caspase 3及p53表达的影响。结果:(1)不同浓度黄芩素作用24h后均可抑制HeLa细胞生长(P<0.05);(2)黄芩素作用24h后,HeLa细胞呈典型的凋亡形态学改变,凋亡率亦显著增加(P<0.01);(3)细胞内Bax、p53和caspase 3表达显著上调,bcl-2表达明显下调(P<0.05)。结论:黄芩素通过调控凋亡相关基因的表达,诱导HeLa细胞凋亡。     

雌、孕激素对人宫颈癌HeLa细胞体外生长影响的研究

目的 :探讨雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖及凋亡的影响。方法 :体外培养人宫颈癌HeLa细胞 ,免疫组化方法 ,测定其雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)的表达 ;不同浓度的E2 、P和E2 +P作用于HeLa细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观测HeLa细胞的增殖 ;流式细胞仪 (FCM)检测细胞周期、细胞凋亡率及细胞内bcl 2蛋白的表达 ;光学、电子显微镜检测其形态学和超微结构变化。结果 :HeLa细胞PR表达明显高于ER(P <0 .0 1)。E2 对HeLa细胞有明显促生长作用 (P <0 .0 1) ,P和E2 +P对细胞生长有明显的抑制作用 (P <0 .0 1) ,增殖抑制率与浓度呈正相关 (P <0 .0 5 )。FCM显示E2 组细胞周期S期比例上升 ,凋亡率下降 ,细胞内bcl 2蛋白表达上升 ;P组和E2 +P组G0 /G1期细胞比例上升 ,S期细胞比例下降 ,凋亡率上升 ,细胞内bcl 2蛋白表达下降 (P <0 .0 1)。光镜和电镜可见E2 组细胞生长良好 ,P组和E2 +P组可见细胞凋亡的形态学改变。结论 :E2 对宫颈癌HeLa细胞具有促进增殖、抗凋亡作用 ;P则抑制HeLa细胞增殖 ,并诱导其凋亡 ;E2 +P显示了抑制增殖、诱导凋亡的增强作用。足量的P可拮抗E2 对宫颈癌细胞的促增殖作用。     

microRNA-99b表达调控对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨上调microRNA-99b(miR-99b)表达对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的作用及可能的机制。方法:利用转染试剂将Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor转染宫颈癌HeLa细胞,荧光实时定量PCR方法检测miR-99b表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测其靶基因CDC-25A蛋白的表达。结果:转染Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor的HeLa细胞,miR-99b表达增高86.45倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,同时细胞CDC-25A蛋白表达降低。结论:上调miR-99b表达可通过降低靶基因CDC-25A表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-99b可能成为治疗宫颈癌的靶基因。     

IL-24对宫颈癌细胞株Siha细胞生长和凋亡的影响

目的:利用穿梭质粒pAd track CMV,探讨抑癌基因IL-24对宫颈癌细胞株Siha细胞生长和凋亡的影响。方法:将携带目的基因IL-24的穿梭质粒pAd track CMV转染入体外培养的宫颈癌细胞株Siha细胞,用MTT法检测细胞的生长增殖,用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率。结果:经MTT法测定,3组Siha细胞OD值的总体差异有统计学意义(P<0.001),两两比较,IL-24组Siha细胞OD值明显低于空质粒组和阴性对照组(P<0.001),空质粒组和阴性对照组Siha细胞OD值则无明显差异(P=0.100);经流式细胞术测定,3组Siha细胞早期凋亡率的总体差异有统计学意义(P<0.05),两两比较,IL-24组Siha细胞早期凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组(P<0.05),空质粒组和阴性对照组Siha细胞的早期凋亡率无明显差异(P>0.05);与空质粒组和阴性对照组Siha细胞相比,IL-24组Siha细胞G0/G1期细胞增多(P<0.05),S期细胞减少(P<0.05),G2/M期细胞减少(P<0.05),空质粒组和阴性对照组则无明显差异(P>0.05)。结论:IL-24对宫颈癌细胞有抑制生长、诱导凋亡的作用。     

选择性环氧合酶抑制剂NS398对子宫内膜癌细胞株的影响

目的探讨环氧合酶抑制剂NS398对子宫内膜癌细胞株的生物学行为的影响。方法2005年9月至2006年11月于华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科实验室用MTT、DNA梯度降解试验及流式细胞仪等方法,研究NS398体外对子宫内膜癌细胞系Ishikawa的抑制增殖、促进凋亡作用。结果NS398对Ishikawa细胞产生明显的生长抑制作用,且表现为剂量依赖性(F=36.598,P<0.01);DNA梯度降解试验、流式细胞仪分析NS398浓度依赖性地诱导了Ishikawa细胞凋亡(F=11.342,P<0.01),且凋亡与细胞周期受阻有关(F=22.445,P<0.01)、主要阻止在G1/S期即DNA合成期。结论NS398对Ishikawa细胞具有显著浓度依赖性的体外生长抑制、诱导凋亡、阻滞DNA合成作用。     

氯化镧对子宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的影响

目的 探讨氯化镧对宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的影响,为寻找新的有效治疗宫颈癌的药物提供实验依据.方法 宫颈癌细胞株HeLa细胞经培养、传代后分为两组,即实验组(加入5、50、100 μmol/L的氯化镧)和对照组(未加入氯化镧).倒置显微镜下观察两组细胞的生长情况,激光共聚焦显微镜观察两组细胞核的形态变化.采用四甲基偶氮唑蓝(MTF)比色法检测两组细胞的增殖情况,双染色流式细胞仪检测两组细胞的凋亡率,体外迁移实验检测两组细胞迁移能力的变化,逆转录(RT)-PCR技术检测两组细胞中增殖、抗凋亡和迁移相关基因细胞周期蛋白(cyclinD1)、锌指蛋白(A20)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表达.结果 倒置显微镜下观察:实验组细胞随着氯化镧浓度的升高,细胞密度逐渐降低,细胞质内颗粒逐渐增多,颜色加深,细胞间隙增大,少量细胞变圆漂浮,脱落细胞也逐渐增多;而对照组细胞贴壁生长密集,形态清晰,胞质饱满,相邻细胞生长融合成片.激光共聚焦显微镜观察:实验组细胞核染色质浓聚边集,核体积变小,随着氯化镧浓度的升高,核染色质崩解,核膜破裂、核碎裂,直至细胞核完全碎裂;而对照组细胞核饱满,核膜完整.实验组细胞经不同浓度(5、50、100 μmol/L)的氯化镧作用后,细胞生长抑制率分别为24%、51%、78%,高于对照组(0),差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率分别为(4.91±0.39)%、(7.30±0.71)%、(13.48±0.92)%,高于对照组的(0.89±0.11)%,差异有统计学意义(P<0.01);穿膜细胞数分别为(22.2±4.3)、(12.0±3.2)、(7.8±2.6)个,低于对照组的(41.2±5.4)个,差异有统计学意义(P<0.01).实验组细胞中cyclinD1、A20及MMP-9 mRNA的表达强度随氯化镧浓度(5、50、100 μmol/L)的升高逐渐减弱.结论 氯化镧通过下调宫颈癌细胞中增殖、抗凋亡和迁移相关基因cyclinD1、A20及MMP-9 mRNA的表达,抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移并诱导其凋亡.     

胰岛素对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨胰岛素对子宫内膜癌细胞系Ishikawa3-H-12细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法 应用免疫细胞化学方法和RT-PCR技术检测Ishikawa3-H-12细胞胰岛素受体（INSR）蛋白和mRNA的表达。以不同浓度胰岛素作用Ishikawa3-H-12细胞不同时间,采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡和细胞周期。结果 （1）Ishikawa3-H-12细胞INSR蛋白呈棕黄色阳性表达,并可见INSR基因的表达。（2）胰岛素以浓度和时间依赖的方式促进子宫内膜癌细胞增殖,1×10^-4mol／L胰岛素作用48h时促增殖作用最显著,增殖率为（340．2±15．9）％,与对照细胞（以胰岛素浓度为0作为对照,为100％）比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）胰岛素以浓度和时间依赖的方式使Ishikawa3-H-12细胞中G0／G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,1×10^-4mol／L胰岛素作用72h时最显著,G0／G1期细胞比例为（27．7±2．5）％,S期细胞为（55．2±1．4）％,分别与对照细胞[分别为（67．6±1．5）％、（15．7±1．0）％]比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）;胰岛素对G2／M期细胞无影响（P〉0．05）。（4）随着胰岛素浓度的增加,Ishikawa3-H-12细胞凋亡率逐渐下降。1×10^-4mol／L胰岛素作用最显著,作用24、48、72、96h时的细胞凋亡率分别为（1．76±0．16）％、（1．70±0．15）％、（1．56±0．20）％、（1．31±0．24）％,分别与对照细[分别为（9．81±0．61）％、（9．93±1．44）％、（9．10±0．66）％、（10．30±1．20）％]比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论 胰岛素对子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞具有促进增殖、抑制凋亡的作用。     

抑制mdr1基因对人宫颈癌细胞放射敏感性影响的实验研究

目的:探讨用反义技术抑制癌基因mdr1对宫颈癌细胞(HeLa)放射敏感性的影响。方法:设空白组、mdr1正义寡核苷酸组和脂质体组(仅加入等量的脂质体)为对照组以及mdr1反义寡核苷酸组,用RT-PCR检测宫颈癌细胞处理前后mdr1表达水平的变化。用集落形成试验检测各实验组照射后人宫颈癌HeLa细胞株集落形成率,AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡率的变化,流式细胞仪测定Bcl-2蛋白的表达。结果:mdr1反义寡核苷酸能有效地抑制mdr1癌基因的表达,经脂质体介导的mdr1反义寡核苷酸作用的宫颈癌细胞经60Coγ射线照射后其集落形成率较正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降,而凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白表达显著下调,与对照各组比较有显著差异(P<0.05)。结论:mdr1反义寡核苷酸通过抑制mdr1基因降低人宫颈癌HeLa细胞放射抗性。其辐射增敏作用可能与mdr1反义寡核苷酸增加照射后肿瘤细胞的凋亡率有关。     

Genistein对人卵巢癌细胞系TC-1增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的:研究植物雌激素染料木黄酮(genistein)对人卵巢癌细胞系TC-1细胞增殖的抑制作用和凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用的机制。方法:应用MTT法检测不同浓度genistein对TC-1细胞的生长抑制作用,电镜观察药物作用后细胞超微结构的改变,流式细胞仪检测细胞周期、定量分析凋亡,DNA琼脂糖凝胶电泳法确定凋亡。结果:TC-1细胞经不同浓度genistein处理后,细胞生长明显受到抑制,且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性,5mg/L和10mg/L genistein作用72h后,抑制率分别达到89·84%和97·99%。genistein阻断TC-1细胞生长于G2/M期,在G0/G1前出现典型的亚二倍体凋亡峰,且凋亡呈时间依赖性。电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。DNA凝胶电泳可观察到细胞凋亡特异的DNA梯形带。结论:genistein对TC-1细胞生长的抑制作用呈明显的时间及浓度依赖性,并诱导其发生凋亡。     

拓扑替康对宫颈癌细胞系HeLa放射增敏作用的研究

目的:探讨拓扑替康对宫颈癌细胞系HeLa的放射增敏作用及其作用机制。方法:用MTT法和克隆形成分析实验检测拓扑替康对HeLa细胞放射增敏的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。结果:放疗同时给予0.1、0.5、1.0、5.0μg/m l拓扑替康的放射增敏比分别为1.21、1.40、1.66、1.96;放疗同时及放疗后3h给予拓扑替康组增敏效果最佳,放疗前和放疗后6h以后给予拓扑替康组细胞生存分数与此差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测单化组、单放组和增敏组放疗后24h和48h细胞凋亡率分别为:12.30%和17.00%,16.13%和21.90%,25.13%和34.43%;单放组和不同剂量拓扑替康增敏组G2/M期细胞比例增加。结论:拓扑替康对宫颈癌细胞系HeLa有放射增敏作用,且有剂量依赖性和用药时间选择性,其放射增敏机制可能与HeLa细胞放射后损伤性修复、细胞凋亡及G2/M期阻滞相关。     

VEGF-C对宫颈癌细胞增殖和凋亡信号传导通路的影响

目的:研究VEGF-C对体外培养的宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响;研究VEGF-C受体KDR、信号通路PI3K、MAPK在VEGF-C对宫颈癌增殖和凋亡调控中的作用。方法:应用重组人VEGF-C蛋白体外刺激宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,Western blot检测增殖与凋亡相关基因Bcl-2、CyclinD1蛋白表达;应用KDR-Ab、信号通路PI3K抑制剂LY294002、信号通路MAPK抑制剂PD98059预处理HeLa细胞,再进行VEGF-C刺激,观察上述指标的变化。结果:重组VEGF-C(50ng/μl)刺激HeLa细胞后增殖指数增加(2.13 vs 1),细胞周期S期比率增多[(64.26±0.20)%vs(30.91±0.09)%,P<0.05],细胞凋亡率降低(3.29±0.35 vs 7.44±0.55,P<0.05);Bcl-2、Cyclin D1表达增加(P<0.05)。KDR-Ab、LY294002预处理后与VEGF-C组相比增殖指数降低,细胞周期S期比率下降,凋亡指数升高,Bcl-2、Cyclin D1表达降低。PD98059预处理后,与VEGF-C组相比增殖指数降低、细胞周期S期比率下降、Bcl-2、Cyclin D1表达降低,但对VEGF-C诱导的凋亡无明显影响。结论:外源性VEGF-C作用于肿瘤细胞自身的KDR受体,激活细胞内信号传导通路MAPK途径和(或)PI3K途径诱导Cyclin D1表达,使肿瘤细胞S期加快,促进细胞周期的进程,进而促进He-La细胞增殖;通过PI3K途径诱导Bcl-2表达,抑制凋亡。