中国狂犬病固定毒aG株N,NS和M蛋白基因的核苷酸序…

报告了中国狂犬病固定毒ａＧ株核衣壳蛋白（Ｎ蛋白），核蛋白壳磷酸蛋白（ＮＳ蛋白，又称Ｍ１蛋白）和基质蛋白（Ｍ蛋白，又称Ｍ２蛋白）蛋白基因的核苷酸序列和氨基酸推导序列。各基因编码区的全长分别是：Ｎ基因１３５２，ＮＳ基因８９４和Ｍ基因６０９个核苷酸。ａＧ和ＣＶＳ株的Ｎ，ＮＳ的Ｍ基因的核苷酸序列都具有高的同源性，别为９１．９５％，９０．２７％和９０．８０％。     

中国广西狂犬病毒野毒株（CGX89－1株）糖蛋白基因核酸序列测定和分析

本文报告了中国广西狂犬病毒野毒株（ＣＧＸ８９－１株）糖蛋白基因ｃＤＮＡ的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因从起始密码ＡＴＧ到终止密码ＴＡＡ共有１５７５个核苷酸残基，可编码形成５２４个氨基酸残基的多肽链，经修饰后形成具有５０５个氨基酸残基构成的狂犬病毒糖蛋白。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因和核苷酸组成分别为：Ａ占２７．１１％，Ｔ占２６．２９％，Ｃ占２１．９７％和Ｇ占２４．６３％。核苷酸序列和巴斯德株（ＰＶ株），国际标准攻击毒株（ＣＶＳ株），中国狂犬病毒疫苗株（３ａＧ株）相比，同源性分别为８４．１％，８３．１％和８４．５％。其推导的氨基酸序列和ＰＶ株、ＣＶＳ株和３ａＧ株相比其同源性分别为９２．４％，８９．７％和８９．５％。ＣＧＸ８９－１株也具有３个Ｎ－糖基化位点，分别位于第３７位、１５７位和３１９位的氨基酸残基上。糖蛋白的膜外区部分重要抗原位点和ＰＶ株、ＣＶＳ株及３ａＧ株具有较高的一致性。     

狂犬病毒5aG株核蛋白基因的克隆及序列分析

用ＲＴ、ＲＡＣＥ、ＰＣＲ等方法，从中国狂犬疫苗株（５ａＧ）病毒感染的鼠脑组织中扩增病毒核蛋白基因，用双链测序法进行了全基因核酸序列分析。结果表明：该基因开放阅读框架全长１３５３ｂｐ，编码４５０个氨基酸。与其它３株狂犬病毒核蛋白相比，核酸序列同源性为９０％～９６％，氨基酸序列同源性为９５％～９６％。表明核蛋白保守性较好。     

甲型肝炎病毒龙甲株结构蛋白基因cDNA序列与国外毒…

将甲型肝炎病毒龙甲株（ＬＪ）结构蛋白基因（包括部分５端非编码基因ｎｔ６３０－３０４９）ｃＤＮＡ序徇与国外ＨＭ１７５、ＭＢＢ和ＬＡ三个母株相应区域相比较，结果显示，ＬＪ株结构蛋白基因与ＭＢＢ株的同源性最高，为９６．７％，与ＨＭ１７５和ＬＡ的同源率分别为９５．４％和９１．４％。推导的氨基酸变异率分别为０．９１％，０．９１％和２．９８％。ＬＪ与ＬＪ株氨基酸差异在整个结构蛋白区均有分布，而与ＨＭ１７５和Ｍ     

中国广西狂犬病毒野毒株（CGX89—1株）糖蛋白基因核…

本报告了中国广西狂犬病毒野毒株（ＣＧＸ８９－１株）糖蛋白基因ｃＤＮＡ的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因从起始密码ＡＴＧ到终止密码ＴＡＡ共有１５７５个核苷酸残基，可编码形成５２４个氨基酸残基的多肽链，经修饰后形成具有５０５个氨基酸残基构成的狂犬病毒糖蛋白。ＣＧＸ８９－１株的糖蛋白基因和核苷酸组成分别为：Ａ占２７．１１％，Ｔ占２６．２９％，Ｃ占２１．９７％和Ｇ占２４．６３％     

麻疹病毒CC-47株非编码区核苷酸序列测定与比较

目的 测定麻疹病毒疫苗株长－47（CC－47）的非编码区核苷酸序列,并和其他麻疹病毒比较,为利用疫苗株病毒进一步研究奠定基础。方法 用RT－PCR分段扩增并克隆麻病毒CC－47株基因组全序列,用基因特异引物测定非编码区的核苷酸序列。结果 CC－47疫苗株非编码区在基因级上为7个不连续的片段,总计1791个核苷酸。与其他野毒株及Edmonston衍生5株疫苗株非编码区序列比较发现,CC－47疫苗株具有Edmonston凤苗株系列相同的4个特殊性的核苷酸替代位点,分别位于基因组3′末端第26位（U→A）、42位（U→G）和M／F基因间隔区FmRNA5′非翻译区的4978位（A→G）、5349位（A→G）,这些位点的改变可能会影响病毒mRNA的合成、加工和翻译次效率以及基因组的复制和包装。结论 不同基因型麻疹病毒具有同样的位点改变可能与病毒在半许可细胞中适应或减毒有关,多区域的核苷酸改变参与病毒的减毒过程。     

我国登革2型病毒43株非结构蛋白NS1基因的特征

对我国１９８７年从广西分离的登革２型病毒４３株非结构蛋白ＮＳ１基因的核苷酸序列进行了分析，结果表明登革２型病毒４３株非结构蛋白ＮＳ１基因含有１０５６核苷酸编码３５２个氨基酸，并就其核苷酸序列及其相应的氨基酸序列与我国１９８５年海南流行高峰期分离的Ｄ２－０４株、国际参考株新几内亚Ｃ株（ＮＧＣ）、牙买加株（ＪＡＭ）、候选疫苗株（Ｓ１）和马来西亚流行株Ｍ１（登革出血热）、Ｍ２（登革休克综合征）、Ｍ３（登革热）进行比较，发现核苷酸序列的同源性分别为９２．２％，９３．７％，９３．３％，９０．７％，８９．９％，８９．５％，８９．３％，氨基酸的类似性分别为８９．８％，９２．６％，９３．３％，９１．２％，９０．６％，９０．１％，８９；９％，推断的氨基酸序列含有两个糖基化位点，分别位于氨基酸残基的１３０和２０７位，一个可能的蛋白裂解位点３５０～３５２和１０个保守的半胱氨酸残基。     

汉坦病毒A9株M基因片段核苷酸序列的测定及分析

采用反转录-ＰＣＲ方法，分节段扩增汉坦病毒Ａ９株Ｍ基因片段ｃＤＮＡ，并克隆入ｐＧＥＭＴ载体中，用双脱氧末端终止法直接测定序列。结果表明，Ａ９株Ｍ片段ｃＤＮＡ由３６１８个碱基组成，编码１１３５个氨基酸，　　核苷酸序列及由其推导的氨基酸序列同７６／１１８株的同源性分别为９４．３３％和９７．８０％，说明汉坦病毒Ａ９株与７６／１１８株在糖蛋白的结构上高度保守。同７６／１１８株比较，在３'末端非编码区变异极大，变异率为２０％，且多了２个核苷酸。Ａ９株Ｍ基因片段核苷酸序列的获得，为利用该ｃＤＮＡ进行基因工程疫苗的研制创造了条件。     

甲型肝炎病毒中国流行株5′ NCR核苷酸序列异质性研究

目的 了解甲型肝炎病毒中国流行株5′非编码区（5′NCR）核苷酸序列的异质性。方法 选择浙江、江苏、安徽、云南等地的甲肝病人粪便或血清标本,以逆转录-套式聚合酶链反应（RT-nPCR),扩增合成5′NCR高变区基因片段,并进行直接核苷酸序列分析和差异比较。结果 所有甲型肝炎病毒株间5′NCR高变区核苷酸差异≤3nt;与美国株LA差异≥4nt;与澳大利亚株HM175差异≥11nt;差异的大小与基因型无关。结论 甲肝病毒基因结构非常稳定,变异率极低。     

不同毒株制备的人用狂犬病疫苗免疫原性比较

目的:比较3种毒株(aG、CTN、CaG)制备疫苗的免疫原性及抗狂犬病毒攻击的能力。方法:应用ELISA法测定3种毒株制备的疫苗免疫家兔、豚鼠、地鼠所获的免疫血清效价;并通过用上述的地鼠免疫血清中和3种病毒后进行小鼠的中和试验。结果:在家兔、豚鼠两组内,细胞适应株毒种制备的疫苗(CaG和CTN株)血清免疫效价明显高于豚鼠脑毒种(aG株)。细胞适应株毒种制备的疫苗免疫地鼠所获得的免疫血清中和3株病毒的能力高于豚鼠脑毒种。结论:使用细胞适应株毒种生产狂犬病疫苗较豚鼠脑毒种具有更好的免疫原性。     

小鼠对表达狂犬病毒3aG株糖蛋白的重组复制缺陷型腺病毒的免疫应答

目的研究表达狂犬病毒3aG株糖蛋白(GP)的重组复制缺陷型腺病毒Ad/GP＇及Ad/GP免疫小鼠后所产生的特异性体液免疫应答,体外脾细胞增殖反应,及免疫小鼠对狂犬病毒致死性颅内攻击的保护力。方法1×10     

狂犬病毒糖蛋白及核蛋白在非复制型痘苗病毒天坛株中的共同表达

目的　提高重组痘苗病毒狂犬疫苗的有效性和安全性。方法　利用TK区表达狂犬病毒糖蛋白 (RG)的重组痘苗病毒作为亲本株 ,通过两步同源重组 ,删除痘苗病毒基因组CK片段间与毒力和宿主范围相关的核酸片段 ,同时将狂犬病毒核蛋白 (RN)基因插入C K片段之间 ,获得了含有RG基因和RN基因的非复制型重组痘苗病毒VTKRGΔCKLacZRN。结果　经PCR鉴定 ,RN基因已插入CK区 ;Westernblot结果显示 ,该株病毒能同时表达RG和RN ,相对分子质量 (Mr)分别为 6 5× 10 3 和 5 0 5× 10 3。VTKRGΔCKLacZRN在人源细胞如TK 143细胞中不能正常繁殖 ,在鸡胚成纤维细胞 (CEF)中能正常复制。与非复制型重组病毒VTKRGΔCK相比 ,VTKRGΔCKLacZRN免疫小鼠后能更快地诱生较高滴度的中和抗体 ,效果相当于复制型重组病毒VTKRG免疫组 ;它们均能保护小鼠针对致死剂量狂犬病毒国际标准攻击毒株 (CVS)的攻击。结论　VTKRGΔCKLacZRN具有良好的免疫效果和安全性     

A/鹅/广东/2/96(H5N1)流感毒株7和8 RNA节段核苷酸序列测定

目的　弄清A鹅广东296(H5N1)毒株RNA7和8核苷酸全序列及它们与AHK15697(H5N1)毒株RNA7和8之间的内在关系,并为今后流感病毒M和NS基因研究打下基础。方法　病毒粒RNA经逆转录合成cDNA,经聚合酶链反应(PCR)扩增,产物纯化,采用双脱氧链末端终止法进行核苷酸序列测定。结果　A鹅广东296(H5N1)毒株RNA7长度为1027个核苷酸,编码M1(含252个氨基酸)和M2(含97个氨基酸)的蛋白。其RNA8长度为890个核苷酸,编码NS1(含230个氨基酸)和NS2(含121个氨基酸)非结构蛋白。其M1,M2,NS1和NS2蛋白分子上氨基酸序列与AHK15697(H5N1)毒株间同源性分别为976%,928%,657%和769%。结论　A鹅广东296(H5N1)毒株RNA7和8长度分别为1027和890个核苷酸,此两节段RNA均属禽类毒株。AHK15697(H5N1)毒株的RNA7和8不是来自A鹅广东296(H5N1)毒株。     

狂犬病毒CTN株糖蛋白重组鸡痘病毒与核酸疫苗的联合免疫

目的 构建狂犬病毒糖蛋白重组鸡痘病毒，研究联合运用重组病毒与同一抗原核酸疫苗对小鼠的免疫效果，为狂犬病疫苗的研究提供基础。方法 以中国鸡痘病毒疫苗株282E4为基础构建的表达载体pUTA-2的ATI-P7．5复合启动子下游，插入狂犬病毒CTN-18l株糖蛋白基因，构建了重组转移载体pUTA-RgC。以脂质体转染法将pUTA-RgC转染至已感染鸡痘病毒282E4株(FPV)2～3h的鸡胚成纤维(CEF)细胞中。待细胞出现明显病变后收获病毒，用BrdU进行连续3次加压筛选，挑取蚀斑毒株、纯化、扩增，间接免疫荧光鉴定。用重组鸡痘病毒vUTA-RgC单独及与核酸疫苗联合免疫小鼠，在细胞及体液免疫，攻毒保护水平评价所构建的重组病毒及联合免疫效果。结果 间接免疫荧光结果表明已成功构建重组鸡痘病毒，免疫后能诱导机体产生细胞与体液免疫，并能抵抗标准攻毒株的攻击，联合免疫效果较为理想。结论 获得一株能够表达狂犬病毒糖蛋白的vUTA．RgC，并证明有一定的免疫原性，与核酸疫苗联合应用能够克服各自的缺点。     

Nucleotide sequence of the nucleoprotein gene of the RC·HL strain of rabies virus,a seed strain used for animal vaccine production in Japan

By using a phage vector (lambda ZAP II) and the mRNA extracted from IMR-32 cells infected with the RC·HL strain of rabies virus, we constructed a cDNA library from which four nucleoprotein (N)-specific cDNA clones were obtained by Southern blot hybridization. These clones contained a cDNA insert of about 1.4 kb, in which the longest open reading frame was the same length as that reported for the N cDNA of three fixed strains, CVS, PV, and SAD B19. When the nucleotide and deduced amino acid sequences were compared between the RC·HL and the three strains, homology was within the range of 91.5–91.8% and 95.1–96.0%, respectively. Of 183 nucleotides of the RC·HL N-cDNA that were not identical to that of the corresponding site of at least one of the three strains, 41 were shared with the CVS strain, whereas only three were shared with either of the other two strains. In the amino acid sequence, we found 29 residues that were not shared in common with all of the four strains, 11 of which were the substitutions with radically different amino acids that might cause conformational changes of the protein, and, in addition, five of which were located in the region close to the C terminus. The number of such amino acid substitutions between the RC·HL and CVS strains was smaller than that of the other three strains. These results are not inconsistent with the presumption that the RC·HL and CVS strains originated from the same laboratory strain of the Pasteur viruses.     

中国狂犬病毒疫苗株（5aG株）糖蛋白基因的克隆与序列分析

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法从中国狂犬疫苗株（５ａＧ株）病毒感染细胞中扩增得到该株病毒糖蛋白基因，并进行序列测定。结果表明该基因开放阅读框架全长１５７５ｂｐ，编码５０５个氨基酸的成熟糖蛋白及Ｎ－端１９个氨基酸的信号肽，该基因与其他株系相应基因比较，核酸序列同源性为８８％～９１％，氨基酸序列同源性为８７％～９０％，其中膜外区同源性高于膜内区及跨膜区同源性。糖蛋白中重要功能区段嗜乙酰胆碱受体区段、抗原位点３等在个株系间高度保守。     

从人群中分离到1株A／PR／8／34（H1N1）类病毒

１９９１年５月从１名上呼吸道感染的儿童患者中分离出１株流感病毒。经血清学鉴定和分析，分离物为Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）类似毒株。病毒ＨＡ１区基因经核苷酸序列分析，分离物与Ａ／ＰＲ／８／３４毒株间有１２个位点不同，导致了ＨＡ１区蛋白分子上４个氨基酸的替换。在病毒基因组寡核苷酸指纹图分析中发现，分离物与Ａ／ＰＲ／８／３４毒株相比较丢失了２个点，而插入了９个点。因此，Ａ／广东／６／９１（Ｈ１Ｎ１）毒株不是由Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）通过实验室污染而来。