生存素反义寡核苷酸对人胃癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用。方法 设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸。胃癌细胞株SGC7901分为4组：空白对照组、单纯脂质体对照组、正义链转染对照组、ASODN转染组。作用48h后收获各组细胞。Westernblot法检测各组细胞生存素表达情况，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，MTT法检测各组细胞的生长抑制率。结果 脂质体介导生存素反义寡核苷酸转染后的胃癌细胞出现生存素蛋白表达明显下降；ASODN转染组细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）；ASODN转染组细胞的抑制率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）。结论 生存素反义寡核苷酸转染胃癌细胞能下凋生存素蛋白表达，诱导胃癌细胞凋亡，抑制细胞增殖，具有明显的抗癌作用。     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌SGC7901细胞株凋亡的实验研究

目的 观察Survivin反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞株（SGC7901）增殖、凋亡的作用。方法 人工合成Survivin硫代ASODN，通过脂质体转染胃癌细胞株（SGC7901）后，用MTT法检测细胞毒作用；用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡；用RT-PCR、免疫组化技术检测SurvivinmRNA及蛋白的表达。结果 （1）Survivin ASODN抑制胃癌SGC7901细胞增殖呈时间和剂量依赖性；（2）Survivin ASODN处理组SGC7901细胞24h后凋亡率为33．6％，正义寡核苷酸（SODN）组为10．7％，2组相比，有显著性差异（P〈0．05）；（3）SurvivinASODN处理组SGC7901细胞Survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降。结论 Survivin ASODN能够抑制增殖、诱导凋亡，推测可能通过下调Survivin mRNA及蛋白表达而起作用。     

VEGF反义寡核苷酸对人胆囊癌细胞VEGF、Flt-1及KDR mRNA和蛋白水平表达的影响

目的 体外研究Oligofectamine介导的血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸（ASODN）转染对人胆囊癌细胞VEGF、Fit-1及KDR在mRNA和蛋白水平的表达及生长增殖和凋亡的影响。方法运用Oligofectamine介导的VEGFASODN和SODN转染人胆囊癌细胞GBC-SD,半定量RT-PCR检测各组细胞VEGF、Fit-1及KDRmRNA转染前后不同时间的表达变化、ELISA测定转染后各组细胞培养上清液VEGF蛋白浓度。结果ASODN组及ASODN＋Oligofectamine组都能显著抑制VEGF、Fit-1及KDRmRNA的表达,且VEGFASODN＋Oligofectamine的抑制作用比ASODN更强（P〉0．05）。ELISA测定结果显示ASODN组及ASODN＋Oligofectamine组均抑制VEGF蛋白的分泌（P〈0．05）,且ASODN＋Oligofectamine组的VEGF蛋白浓度低于ASODN组（P〉0．05）。结论VEGFASODN能抑制人胆囊癌细胞VEGF、Fit-1和KDR在mRNA水平的表达和VEGF蛋白的表达,从而促进GBC-SD细胞的凋亡;Oligofectamine能明显增强VEGFASODN的抑制效果。     

白英提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响

目的：探讨白英提取物（Solanum lyratum Thunb extract，STE）对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及凋亡相关蛋白Survivin和Caspase-3表达的影响。方法：体外培养sGC-7901细胞，以2．5、5、10mg／LSTE处理sGC-7901细胞48小时，并以2．5mg／L顺铂（DDP）作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率，TUNEL法检测凋亡率，二步法免疫组化检测Survivin和Caspase-3表达。结果：与正常对照组相比，STE各浓度组细胞抑制率显著上升（P〈0．001），细胞凋亡率明显升高（P〈0．01），Caspase-3蛋白表达显著上升（P〈0．05或P〈0．01），Survivin蛋白表达明显下降（P〈0．05或P〈0．01）。结论：STE具有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用，其分子机制可能与上调Caspase-3及下调Survivin蛋白熹主夭有姜．     

转染VEGF-ASODN对胃癌细胞Survivin表达的影响

目的了解转染VEGF—ASODN（血管内皮生长因子反义寡核苷酸）对胃癌细胞Survivin（生存素）表达、细胞生长的作用．方法人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染胃癌细胞SGC-7901,用Western-blot法检测细胞Survivin蛋白表达量、用流式细胞仪检测转染后细胞凋亡情况、用MTT检测转染后细胞生存力、细胞生长曲线检测转染后细胞生长情况．结果转染VEGF-ASODN能降低细胞Survivin蛋白,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,转染后细胞凋亡与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,能降低细胞的生存力及抑制细胞生长．结论VEGF-ASODN能抑制Survivin蛋白表达、抑制胃癌细胞生长、增加胃癌细胞的凋亡．     

Survivin Caspase-3 GST Pgp在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义

目的：探讨非小细胞肺癌（non-small-cell lung Cancer，NSCLC）中存活素（survivin）、谷胱甘肽S-转移酶-π（glutathions-transferase-π，GST-π）、P-糖蛋白（P-glycoprotein，Pgp）与半胱氨酸蛋白酶（Caspase-3）之间的关系，以及它们的表达与临床各病理指标之间的关系。方法：采用免疫组织化学法检测117例NSCLC中Survivin、GST-π、Pgp的表达水平，流式细胞术检测Caspase-3的表达FI值；根据肿瘤耐药机制的不同，选择一个凋亡抑制元素、一个凋亡促进元素与两个耐药元素对肿瘤的耐药进行多方面的分析评估。结果：Survivin、GST-π、Pgp的阳性率明显高于对照组（P〈0．01），Survivin、Pgp与肿瘤的分型无关（P〉0．05），二者在分期分化表达中随其恶性程度增加，表达增强，而具有统计学意义（P〈0．05）；Pgp在淋巴结转移中高表达，与肿瘤转移有关；Survivin在淋巴结转移中的表达无显著性差异，与肿瘤转移无关；GST-π与肿瘤的分型、分期、转移均无关（P〉0．05）；在分化表达中与前二者相同。Caspase-3定量分析中，癌组与对照组、鳞癌与腺癌组、高中低分化组、淋巴结转移与无淋巴结转移组之间均有不同程度的统计学意义。结论：Survivin、Pgp高表达时对肿瘤的原发耐药增强，结合Caspase-3定量分析，FI值均有不同程度的衰减。通过生物学行为研究，了解凋亡抑制是肿瘤耐药的主要原因，这有助于临床正确制订初始化疗方案和评估预后。     

存活蛋白反义寡核苷酸诱导食管癌细胞凋亡的研究

目的观察存活蛋白反义寡核苷酸转染对食管癌细胞凋亡、增殖、对化疗药物敏感性的影响。方法设计合成特异性存活蛋白反义寡核苷酸（ASODN）。食管癌EC109细胞系分为6组：空白对照组、空脂质体转染对照组、正义链转染对照组、160、200、240nmol／L ASODN转染组。作用20h后收获各组细胞,Western blot法检测各组细胞生存素表达情况。TUNEL法检测各组细胞的凋亡情况。结果各ASODN转染组细胞存活蛋白表达有不同程度减弱,细胞变圆、折光增强、细胞碎片形成等,而各对照组细胞生长良好。各ASDON转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组（P〈0．05）,以240nmol／L转染组最明显（P〈0．05）。结论封闭食管癌细胞存活蛋白基因,能下调存活蛋白的表达,从而诱导食管癌细胞凋亡,抑制食管癌的发展。     

VEGF—C对胰腺癌细胞凋亡影响的实验研究

目的研究VEGF—C对胰腺癌细胞凋亡的影响。方法建立人胰腺癌细胞株PANC-1裸鼠原位种植瘤模型,原代培养原发和淋巴结转移灶中胰腺癌细胞,通过VEGF—C反义寡核苷酸体外转染抑制其表达,应用RT—PCR及流式细胞术等方法研究对淋巴结转移胰腺癌细胞凋亡及bcl-2的影响。结果体外转染后,原代培养原发和淋巴结转移灶中PANC-1胰腺癌细胞VEGF—C的mRNA表达水平显著降低（P〈0．01）。体外转染VEGF—C反义寡核苷酸抑制其表达后,对照组、SODN组、ASODN组淋巴结转移胰腺癌细胞的凋亡率为（2．83±1．01）％、（4．98±2．05）％、（13．22±2．17）％,ASODN组细胞凋亡率显著提高（P〈0．01）,而原发灶胰腺癌细胞的凋亡率分别为（3．51±1．38）％、（4．79±2．16）％、（5．33±2．18）％,凋亡率无明显影响（P〉0．05）;淋巴结转移胰腺癌细胞的反义组bcl-2表达水平明显下调（P〈0．05）,而原发灶胰腺癌细胞bcl-2表达水平无明显变化（P〉0．05）。结论抑制淋巴结转移灶中胰腺癌细胞VEGF—C的高表达可促进胰腺癌细胞凋亡,这和bcl-2表达下调有关;但对原发灶胰腺癌细胞无明显影响。     

口腔扁平苔藓中Caspase-3, TNF-α和TNFRΙ的表达及与细胞凋亡的关系

目的：探讨口腔扁平苔藓（OLP）中Caspase-3，TNF-α和TNFRI的表达意义及其与细胞凋亡的关系．方法：采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法（TUNEL法）、SP免疫组化方法检测33例OLP及7例正常口腔黏膜（对照组）中Caspase-3，TNF-α和TNFRI的表达及细胞凋亡情况．结果：OLP中上皮细胞凋亡指数（AI）明显高于正常对照组（P〈0．05），而固有层的AI明显低于正常对照组（P〈0．05）．OLP的上皮层和固有层Caspase-3阳性表达明显高于正常对照组（P〈0．025）．OLP中上皮层TNFRI及固有层TNF-α阳性表达明显高于正常对照组（P〈0．025），而上皮层TNF-α及固有层TNFRI阳性表达则明显低于正常对照组（P〈0．025），糜烂型组固有层中TNF-α阳性表达明显高于非糜烂型组（P〈0．05）．OLP上皮层Caspase-3阳性表达与其自身AI呈正相关（r=0．631，P〈0．05），而固有层淋巴细胞Caspase-3阳性表达与自身的AI无相关性（P〉0．05）；TNF-α/TNFRI表达与OLP上皮及固有层细胞的AI密切相关．结论：OLP中同时存在角质细胞凋亡亢进及固有层淋巴细胞凋亡的减少，这种凋亡的异常可能与OLP的发生发展密切相关．     

Survivin ASODN诱导胃癌细胞凋亡并增强OPT化疗敏感性的研究

目的 探讨转染survivin反义寡核苷酸(ASODN)对BGC-823细胞survivin mRNA表达及细胞增殖,凋亡和对羟基喜树碱(OPT)化疗敏感性的影响.方法 脂质体转染survivin ASODN,MTT检测生长抑制率,流式细胞术(FCM)及电镜检测细胞凋亡,RT-PCR检测survivin mRNA表达.结果 Survivin ASODN能抑制BGC-823细胞生长,促进其凋亡,并呈剂量依赖性.电镜下见BCC-823细胞呈早期凋亡改变.OFT处理组survivin mRNA表达明显高于对照组和ASODN OPT组(P<0.05).结论 Survivin ASODN可以抑制BGC-823细胞Survivin表达,诱导癌细胞凋亡并抑制其增殖.Survivin ASODN对OPT化疗有增敏作用,即使是多次给予OFF者仍可增敏.     

反义硫代寡核苷酸对786-O细胞survivin基因的表达及生长抑制作用

目的研究survivin反义寡核苷酸对肾透明细胞癌786O细胞表达survivin蛋白、细胞凋亡、增殖的影响。方法设计并合成特异性靶向survivin的反义寡核苷酸(ASODN)。肾透明细胞癌细胞株786O分为6组:空白对照组、脂质体转染对照组、正义链转染对照组、200、400和600nmol/LASODN转染组。作用24h后收获各组细胞。倒置显微镜及透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况和流式细胞术检测各组细胞周期变化和凋亡指数,MTT法检测survivin反义寡核苷酸对各组细胞的生长抑制率。结果电镜下可以见到典型凋亡样改变,而各对照组细胞生长良好;各ASODN转染组细胞survivin表达有不同程度减弱;各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05),以600nmol/LASODN转染组最为明显(P<0.05),而各对照组间差异无显著性(P>0.05)。结论不同浓度survivinASODN转染后能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786O细胞凋亡,抑制786O细胞增殖。     

胰腺癌细胞放疗抵抗与Survivin表达间的关系

目的观察胰腺癌细胞放疗抵抗与Survivin表达间的关系。方法胰腺癌细胞室温下经不同剂量的X线辐照处理。实验分为A组：对照组，无照射；B组：2Gy照射；C组：半致死量4Gy照射；D组：致死量10Gy照射。RT-PCR法检测各组Survivin mPNA表达量；MTT法检测臆癌细胞增殖活性及流式细胞术检查细胞凋亡。免疫组化法检测38例胰腺癌患者中Survivin蛋白的表迭。结果胰腺癌患者中Survivin蛋白的表达阳性率为79％（30/38）。在X线辐照处理后1～2d，B纽与C组的Survivin表达明显增加，且在4d达到高峰；D组的Survlvin表达显著下降。X线照射后第6天，B组与C组的胰腺癌细胞的增殖朱受抑制，而D组的增殖受到明显抑制。B组的凋亡率为3％；C组的凋亡率为5％；D组的凋亡率为53％，与B组、C组相比，差异有显著性（P〈0.01）。结论放疗后诱导的Survivin表达上调可能是胰腺癌细胞对放疗抵抗的重要原因。     

Survivin反义寡核苷酸诱导肺癌细胞株凋亡的研究

目的: 探讨生存素(Survivin)的反义寡核苷酸(A SO DN)对肺癌细胞株的作用。方法: 在脂质体介导下,分别以100 nmol/L、300 nmol/L和500 nmol/L的Survivin A SO DN作用于小细胞肺癌细胞株NCI-H446和肺腺癌细胞株SPC-A1,于24 h、48 h、72 h用逆转录聚合酶链反应(RT-P CR)检测Survivin mRNA表达,Western blot检测Survivin蛋白,流式细胞仪检测凋亡。结果: NCI-H446和SPC-A1皆表达Survivin基因和蛋白。随着ASODN浓度增加,Survivin mRNA明显下调,其差异有显著性,其中ASODN 500 nmol/L作用72 h时两种细胞Survivin mRNA抑制率分别达62.72%和67.43%;Survivin蛋白表达也有类似的变化;ASODN对两种细胞生长抑制和诱导凋亡作用随浓度增大和作用时间延长而增强。结论: Survivin ASODN能够抑制肺癌细胞株Survivin基因和蛋白表达,呈时间、浓度依赖性,诱导凋亡的效果也呈剂量、时间依赖性,500 nmol/L的浓度作用72 h效果最佳。     

Survivin反义寡核苷酸对人结肠癌细胞的促凋亡作用

目的:探讨Survivin反义寡核苷酸对大肠癌细胞的促凋亡作用。方法:用脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染LS174T细胞,利用RT-PCR检测Survivin mRNA的表达;利用Western blot检测Survivin蛋白的表达;检验寡核苷酸作用前后caspase 3活性的变化及细胞凋亡情况。结果:Survivin-ASODN可使大肠癌细胞中survivin mRNA和蛋白的表达下降;caspase-3活性明显增加(P<0.05);细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:Survivin反义寡核苷酸可以增强caspase-3的活性,有效诱导大肠癌细胞凋亡,反义核酸技术有可能成为临床大肠癌基因治疗的一种新途径。     

汉黄芩素对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡、Survivin及Caspase-3表达的影响

目的探讨汉黄芩素在人胶质瘤患者中对U251细胞的增殖与凋亡及对存活素（Survivin）及半胱天冬酶-3（Caspase-3）表达的影响。方法不同浓度汉黄芩素作用于人胶质瘤96株U251细胞,并与使用替莫唑胺（TMZ）的阳性对照组（48株）及未给予任何药物的空白对照组（48株）对比细胞增殖抑制率、细胞凋亡率及Survivin和Caspase-3蛋白的表达强度。结果各浓度汉黄芩素对细胞增殖抑制率均显著高于空白对照组,且随药物浓度及作用时间的增加呈现出显著增高趋势（P〈0．05）,汉黄芩素组细胞凋亡率显著高于TMZ组（P〈0．01）,TMZ组显著高于空白对照组（P〈0．01）,在汉黄芩素组内,细胞凋亡率随着药物浓度增加显著增加（P〈0．05）;汉黄芩素组Survivin表达强度佩著低于TMZ及空白对照组（P〈0．01）;两药物组Caspase-3表达强度显著高于空白对照组（P〈0．01）。结论汉黄芩素可通过调节Survivin、Caspase-3蛋白的表达对胶质瘤U251细胞起到诱导凋产的作用。     

Synthetic Smac Peptide Enhances Chemo-sensitivity of Bladder Cancer Cells

The effects of synthetic Smac peptide （SmacN7） on chemotherapeutic sensitivity of bladder cancer cells were investigated. SmacN7 penetratin peptide was synthesized and delivered into T24 cells. MTT assay was used to evaluate the viability of T24 cells induced by low-dosage of MMC Flow cytometry was used to analyze the proportions of apoptosis. Western blot was used to detect the expression of XIAP and Caspase-3. The activity of Caspase-3 was measured and the effect of SmacN7 combined with MMC on T24 cell lines was also determined. The results showed that SmacN7 penetratin peptide could successfully interact with endogenous XIAP, increase the proportions of apoptosis of T24 cell lines induced by low-dosage of MMC in a dose-and time-dependent manner. An obvious down-regulation of XIAP expression and up-regulation of Caspase-3 was identi-fied by Western blot. The activity of Caspase-3 in experimental group was significantly increased as compared with that in the control group. As compared with MMC group, the viability of T24 cells in SmacN7 penetratin peptide＋MMC group was markedly decreased to 2.22 and 3.61 folds at 24 h and 48 h respectively. It was concluded that SmacN7 penetratin peptide could act as a cell-permeable IAP inhibitor, inhibit the proliferation, induce apoptosis and enhance the chemo-sensitivity of bladder cancer cells to MMC. These findings indicate that SmacN7 penetratin peptide may be a very promising ageut for bladder cancer treatment when used in combination with chemotherapy.     

Survivin反义寡核苷酸对K562细胞耐药性的影响

目的 探讨Survivin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxg nucleotide,ASODN)与传统化疗药物对白血病K562细胞耐药性的影响.方法 实验分为反义核苷酸组(ASODN)、无义核苷酸组(SODN)、脂质体组(Lip)、空白对照组,以脂质体转染Survivin ASODN,用RT-PCR检验SurvivinmRNA表达;用MTT法检测K562细胞对阿霉素(driacin,ADM)、柔红霉索(daunorubicin.DAM)及联合用ASODN耐药性;用流式细胞仪检测单独用ADM、DAM和联合用ASODN时K562细胞内ADM和DAM的浓度.结果 ASODN组Survivin mRNA表达较对照组降低(P<0.05);ADM和ASODN ADM对K562细胞的半数抑制细胞(IC50)分别为0.5457 mg/L和0.1933 mg/L,DAM和ASODN DAM对K562细胞的IC5.分别为0.5408 mg/L和0.2027 mg/L,联合用药组ICso低于单用药组(P<0.05);用ADM和ASODN ADM时K562细胞内药物的荧光强度分别为51.64、89.92,DAM和ASODN DAM时K562细胞内药物的荧光强度分别为63.71、88.47,联合用药组细胞内药物浓度高于单用药组(P<0.05).结论 Survivin反义寡核苷酸可下调K562细胞Survivin mRNA的表达;Survivin反义寡核苷酸与阿霉素和柔红霉索联合作用可提高K562细胞内药物浓度,降低细胞生存率,降低细胞耐药性.     

骨肉瘤中survivin、Caspase-8的表达及其与凋亡的相关性研究

目的探讨survivin mRNA、Caspase-8蛋白在骨肉瘤中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法分别采用RT-PCR和免疫组化技术检测40例骨肉瘤及正常组织中survivin mRNA和Caspase-8蛋白的表达,运用TUNEL方法检测细胞凋亡。结果77.5%的骨肉瘤组织survivin mRNA呈阳性表达,显著高于正常组织;Caspase-8蛋白在骨肉瘤和正常组织中的阳性表达率分别为27.5%和85%(P<0.05);在骨肉瘤组织中,survivin mRNA和Caspase-8蛋白表达呈负相关;survivin mRNA阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显低于survivin mRNA阴性组(P<0.05);Caspase-8蛋白阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显高于Caspase-8蛋白阴性组(P<0.05)。结论survivin、Caspase-8均参与骨肉瘤的发生、发展变化,survivin是通过抑制Caspase-8的活性而发挥其抑制细胞凋亡作用的。