隐孢子虫卵囊攻击免疫抑制小鼠的剂量反应关系研究

目的求出小鼠尤其是免疫抑制小鼠感染隐孢子虫的ID5、ID50、ID95,为水质原虫卫生标准的制定提供依据。方法用地塞米松饮水喂饲小鼠建立免疫抑制模型,并对攻击剂量和感染率做线性回归分析,计算相应的ID5、ID50、ID95。结果免疫抑制组小鼠的胸腺指数、脾脏指数、血清IgG、IgM含量与相应的非免疫抑制组小鼠比较,均具有统计学差异(P<0.05);免疫抑制组小鼠感染隐孢子虫的ID5、ID50、ID95分别是4、44、445个卵囊,而非免疫抑制小鼠分别是12、360、10580个。免疫抑制条件下,小鼠感染隐孢子虫ID5、ID50、ID95的剂量降低。结论地塞米松使小鼠免疫功能受到抑制后,小鼠对隐孢子虫的易感性增加,制定水质原虫卫生标准时对免疫抑制群体应予以高度重视。     

建立微小隐孢子虫感染小鼠模型方法的研究

目的探索微小隐孢子虫传代和扩增模型小鼠的最佳性别、日龄、免疫抑制时间和免疫抑制剂地塞米松磷酸钠(DEXp)的最佳剂量。方法25、50、75日龄雌性和雄性BALB/c小鼠各3组,免疫抑制3 d后接种卵囊;各剂量组小鼠1 L饮水中含DEXp分别为1 mg、5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、25 mg;各免疫抑制时间组小鼠分别在免疫抑制前6 d、3 d和免疫抑制后0 d、3 d、6 d、9 d感染卵囊。以上各组小鼠经口感染保存时间和方法相同的微小隐孢子虫卵囊的剂量均为2.0×105个,感染后逐日收集鼠粪,用饱和蔗糖漂浮法分离纯化卵囊。结果雌性小鼠排卵囊强度均较同日龄雄性小鼠大,而不同日龄小鼠中又以50日龄(26 g-28g)小鼠排卵囊量最多;各剂量组小鼠中,15 mg/L组排卵囊强度较其他各组大;免疫抑制时间组中,免疫抑制3 d感染组排卵囊强度最大。结论适合于卵囊扩增和传代的最佳鼠模型是50日龄(26-28g)雌性小鼠;DEXp的最佳剂量是15 mg/L;最佳免疫抑制时间是感染前3 d。     

低剂量隐孢子虫感染正常和免疫抑制小鼠的效应研究

目的 研究低剂量隐孢子虫感染正常和免疫抑制小鼠的相关效应指标，了解低剂量隐孢子虫感染的风险及相关效应。方法 采用地塞米松作为免疫抑制剂，建立小鼠的免疫抑制模型，再给予不同剂量的隐孢子虫攻击，比较不同的效应指标。结果 免疫抑制组小鼠脾重指数、胸腺指数与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。免疫抑制小鼠IgG、IgM含量与对照组比较差异亦有显著性（P〈0．05）。免疫抑制情况下粪便白细胞计数与相应的对照组比较，50、100、500个卵囊剂量组之间差异均有显著性（P〈0．05）。免疫抑制组与对照组的腹泻发生率，500个剂量组差异有显著性（P〈0．05）。将剂量对数和腹泻发生率作回归分析，免疫抑制和对照组的剂量对数和腹泻发生率呈现较好的线性关系（P〈0．05）。结论 较低剂量（10～50个卵囊）的隐孢子虫即可引起小鼠感染并出现腹泻症状，且出现粪便白细胞排出增加。在较低剂量条件下，免疫抑制小鼠粪便白细胞、腹泻发生率均高于相应的对照组，且潜伏期缩短，免疫抑制小鼠感染低剂量隐孢子虫发病的风险更大。     

液氮保存微小隐孢子虫卵囊对小鼠感染力的研究

目的 观察两种不同保存方法 对微小隐孢子虫卵囊感染小鼠能力的影响.方法 用PBS稀释纯化的卵囊,加入二甲基亚砜(DMSO),置-40℃ 3h后,放入液氮中保存;或加入2.5%重铬酸钾中,4℃保存.3个月后取出,观察它们的脱囊率;分别感染用地塞米松免疫抑制后的BALB/c小鼠,计数卵囊排出量,计算平均每克粪便中的卵囊数目,同时记录两组小鼠的死亡时间.分别采用t检验和成组设计的两样本秩和检验进行统计学分析.结果液氮中保存3个月的卵囊能够感染免疫抑制的BALB/c小鼠,其脱囊率为7.2%～49.6%、卵囊排出量为(4.7～7.3)×10~5/g,接种后实验小鼠死亡时间为124～351 h,与4℃保存的卵囊差别无统计学意义[8.3%～51.2%,(4.6～6.9)×10~5/g,132～348 h,P均>0.05)].结论 液氮中保存3个月的卵囊与4℃保存的卵囊对免疫抑制的小鼠具有同样的感染力,突破了微小隐孢子虫卵囊只能在4℃保存的传统观念,为隐孢子虫卵囊的长期保存提供了理论和实践依据.     

从感染小鼠获得微小隐孢子虫卵囊方法的改进

目的　建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法　在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、不同纯化方法的卵囊在牛输卵管上皮细胞培养系统的感染情况。结果　地塞米松加入量为 2 0 μg/ml的第 3组获得的卵囊量高达 4 .16× 10 9/ 30个小鼠 ;用饱和盐水漂浮法与用蔗糖密度梯度离心法纯化得到的卵囊具有相同的回收率和纯度 ;从感染小鼠与犊牛中获得的卵囊在感染性上差异不显著。结论　成功地建立了从感染小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法 ,具有简单、方便、快速等优点 ,并且不影响活力。     

当归补血汤预防免疫抑制小鼠隐孢子虫感染及其作用机制的研究

目的探讨当归补血汤预防免疫抑制小鼠隐孢子虫感染的作用及机制。方法将48只BALB/c小鼠随机均分为4组,分别为正常对照组、免疫抑制组、大剂量预防组和小剂量预防组（8只/组）。除正常对照组外,其余3组每鼠每天灌胃醋酸地塞米松0.27mg/kg,连续8d,诱导小鼠免疫抑制。大剂量预防组灌胃当归补血汤2g/kg,小剂量预防组每鼠灌胃当归补血汤1g/kg,连续8d。第9天除正常对照组外,各组均灌胃感染1&#215;10^6个隐孢子虫卵囊。然后每天检查粪便,计数卵囊。于感染后第11天,眼球取血,流式细胞仪检测外周血T细胞亚群变化,ELISA检测血清sIL-2R水平;同时剖杀小鼠取十二指肠和空肠,ELISA检测肠液中sIgA水平,并观察十二指肠组织病理改变。结果与免疫抑制组相比,大剂量预防组小鼠卵囊排出数（35.0&#177;4.21）明显减少（P〈0.01）,肠黏膜损伤明显减轻并出现再生修复的现象,CD4＋T细胞数（47.483&#177;4.082）及CD4＋/CD8＋比值（2.271&#177;0.378）均增高（P〈0.01）,肠液中sIgA含量[（320.19&#177;1.94）ng/ml]明显升高（P〈0.01）,外周血sIL-2R水平[（321.34&#177;6.66）ng/ml]降低（P〈0.01）。小剂量预防组各项指标与免疫抑制组比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论大剂量当归补血汤对免疫抑制小鼠的隐孢子虫感染有明显的预防作用,可提高机体免疫功能。     

3种微小隐孢子虫卵囊检测方法的比较研究

目的比较3种方法检测鼠粪中微小隐孢子虫卵囊的效果。方法应用改良抗酸染色法(MAFS)、免疫荧光单克隆抗体(IFA-McAb)检测法和PCR检测法分别对含有不同数量隐孢子虫卵囊的鼠粪样品、隐孢子虫病模型小鼠的粪样品和奶牛粪样品进行检测。结果MAFS检测法I、FA-McAb检测法和PCR检测法的检测域值分别为10 g鼠粪中含有隐孢子虫卵囊2.0×104、2.0×104、2.0×102个,操作用时分别为35 min6、0 min3、h,检测鼠粪样品的阳性率分别为65.00%、70.00%、85.00%,检测牛粪样品的阳性率分别为21.21%、18.18%、27.27%。3种方法的阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论MAFS检测法简单、快速,费用低,试验条件要求不高,适合对大量样品的检测和流行病学调查;IFA-McAb检测法、PCR检测法更适合用于隐孢子虫的鉴定。     

吸毒人员隐孢子虫感染及其免疫功能状态的研究

目的了解男性静脉吸毒人员隐孢子虫的感染及其免疫功能状态。方法对研究对象进行调查,采用快速改良抗酸染色法检测粪便中隐孢子虫卵囊,用免疫透射比浊法、双抗体夹心ABCELISA法测血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)和白介素-12。结果男性静脉吸毒人员隐孢子虫感染率为19.05%。隐孢子虫阳性组IgM、IgA和阴性组IgG高于对照组(P<0.05);隐孢子虫阳性组和阴性组白介素-12均低于对照组(P<0.05)。结论男性静脉吸毒人员是隐孢子虫感染的高危人群,其免疫功能受到一定程度的抑制,对隐孢子虫易感性增加。     

贝氏隐孢子虫对不同免疫状态雏鸡的致病性比较研究

目的了解贝氏隐孢子虫对不同免疫状态雏鸡的致病特点。方法采用中药黄芪溶液自由饮用(免疫增强组)和醋酸地塞米松片经口灌服(免疫抑制组)2 d龄雏鸡,连用5 d,于3d龄分别接种1×106个卵囊/只,观察其排卵囊情况、症状、组织病理学变化和脾脏及法氏囊指数。实验设感染对照组(不用药)和空白对照组。结果感染对照组、免疫增强组和免疫抑制组雏鸡感染隐孢子虫后的潜隐期均为4 d,开放期分别为24、24和26 d,发病雏鸡分别为10、3和15只,排卵囊(OPG)最大峰值分别为39.4×104、19.4×104和46.0×104;观察期3组雏鸡平均增重274、272和210 g/只,差异无统计学意义(P0.05),脾脏和法氏囊指数免疫抑制组低于其他试验组,免疫增强组与空白对照组基本一致,感染对照组雏鸡脾脏指数与其他试验组比较差异较大。结论贝氏隐孢子虫对不同免疫状态雏鸡的致病性存在差异,中药黄芪对雏鸡感染隐孢子虫具有一定保护作用,免疫抑制剂可导致雏鸡感染隐孢子虫后症状加重。     

当归补血汤对免疫抑制合并隐孢子虫感染小鼠的治疗作用的研究

目的探讨当归补血汤（Angelicae Sinensis Decoction for Supplementing Blood,ASDSB）对免疫抑制合并隐孢子虫感染的小鼠的治疗作用。方法建立免疫抑制合并隐孢子虫感染模型,随后用ASDSB治疗,并设对照组。每日计数小鼠粪便中卵囊数量,测定外周血T细胞亚群、血清可溶性白细胞介素-2受体（SIL-2R）和肠液分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的水平,并进行肠组织病理检测。结果与模型组相比较,大剂量ASDSB组的小鼠粪便卵囊排出数量明显减少（P〈0．01）,肠粘膜损伤较模型组轻,并且可以提高免疫抑制小鼠的CD4^＋T水平,促进肠道粘膜sIgA的产生,降低外周血sIL-2R水平。结论大剂量ASDSB对免疫抑制合并隐孢子虫感染的小鼠的治疗作用是通过提高机体免疫功能发挥的。     

Humoral immune response in IL-12 and IFN-gamma deficient mice after infection with Cryptosporidium parvum

Infection with Cryptosporidium spp. causes diarrhoeal disease and has become an important medical and veterinary problem especially in the immunocompromised host. The importance of the adaptive immune response, with CD4+ T-lymphocytes being the major players, has been clearly demonstrated. The requirement of IL-12 and IFN-gamma identifies this response as a Th1-dominated reaction. IFN-gamma is also important in the early phase of the host-parasite interaction. We analysed the outcome of infection in IL-12p40 (IL-12KO) and IFN-gamma (GKO) deficient C57BL/6 mice after primary and secondary challenge with the parasite and, for the first time, we demonstrate the resulting Ig response in sera and vaginal lavages. Although showing differences in the extent and the time course both strains of mice were able to clear infection and developed an almost complete resistance to re-infection. While GKO mice mounted prolonged parasite-specific IgG and IgA responses after primary infection, in IL-12KO mice IgG and IgA titres dropped over time. Re-challenge of mice 5 weeks after primary infection led to a booster effect in Ig response despite the absence of oocyst shedding. The data from infection and re-challenge experiments suggest that in IL-12- or IFN-gamma-deficient mice the development of resistance involves other protective immune responses.     

微小巴贝虫在不同免疫状态小鼠体内消长规律研究

目的 观察微小巴贝虫感染不同免疫状态小鼠后的消长规律。方法 实验分正常BALB/c小鼠组、免疫抑制BALB/c小鼠组、SCID小鼠组和NOD-SCID小鼠组等,每组5只小鼠。免疫抑制BALB/c小鼠,每只经腹腔注射0.5 mg地塞米松,连续5 d。随后,各组小鼠每只腹腔注射100 μL含微小巴贝虫鼠血(红细胞染虫率约20%)。每组留1只小鼠作未感染对照鼠。自接种当天每d尾部采血涂薄血片,吉姆萨染色,镜检观察红细胞染虫状况。结果 正常BALB/c小鼠感染微小巴贝虫第3 d在红细胞内查见虫体,感染后第7 d染虫率最高为82.4%,染虫率在20%以上约持续7 d;短暂免疫抑制BALB/c小鼠在感染后第5 d染虫率达到高峰为73.18%,染虫率在20%以上约持续14 d,而后染虫率处于0%~2%的较低水平状态。NOD-SCID小鼠组分别于第7 d(72.45%)、第16d(67.4%)、第24 d(58.9%)多次出现染虫率高峰,微小巴贝虫在NOD-SCID小鼠体内不会被大量清除,染虫率一直处于较高状态,平均为41.9%。SCID小鼠组于第8 d出现第1次染虫率高峰,为86.4%,至第18 d出现第2次高峰为62.23%,染虫率也一直处于较高状态,平均为38.2%。在薄血片中观察到小点状体,马耳他十字,小环状体,环状体,长丝状体,以及游离在红细胞外的虫体等多种巴贝虫形态。结论 微小巴贝虫在正常BALB/c小鼠和短期免疫抑制BALB/c小鼠体内虫密度出现先升高又下降的宿主自限性现象;而在SCID小鼠和NOD-SCID小鼠体内虫密度出现多个高峰,且能持续较高水平。     

微小隐孢子虫感染对小鼠肠黏膜Toll样受体的影响

目的 探讨Toll样受体在微小隐孢子虫感染致小鼠肠黏膜损伤中的作用机制。 方法 30只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、感染1周组和感染2周组。用免疫抑制及卵囊灌胃的方法建立微小隐孢子虫肠道感染小鼠模型,感染1周组和2周组分别于感染后7 d和14 d剖杀,正常对照组于感染后14 d剖杀。光镜观察小鼠肠黏膜病理变化,并测量肠绒毛高度、隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度比值;透射电镜观察小鼠肠黏膜超微结构;实时荧光定量PCR（qPCR）、Western blotting技术检测肠黏膜TLR2和TLR4表达情况。结果 光镜下,感染组小鼠肠绒毛水肿,明显萎缩变短,黏膜下层结构水肿,与肌层间形成间隙。与正常对照组比较,感染1周组和感染2周组小鼠空肠绒毛高度及绒毛高度/隐窝深度比值均明显降低（P均[<0.05]）,隐窝深度明显升高（P均 < 0.01）;且感染2周组小鼠空肠的绒毛高度及绒毛高度/隐窝深度比值均明显低于感染1周组（P均 < 0.05）,隐窝深度明显高于感染1周组（P < 0.01）。透射电镜显示,感染组小鼠的空肠可见微小隐孢子虫卵囊,结构完整,卵囊周围的肠绒毛严重脱落,呈火山口状,卵囊壁与上皮细胞膜融合。 qPCR结果显示,与正常对照组相比,感染1周组和感染2周组小鼠肠黏膜TLR2和TLR4 mRNA表达水平明显增高（P均[<0.05]）;且感染2周组小鼠较感染1周组小鼠TLR2和TLR4 mRNA表达水平明显增高（P均[<0.05]）。Western blotting检测结果表明,感染组小鼠肠黏膜TLR2和TLR4蛋白表达量较正常对照组显著增高（P均[<0.05]）,且感染2周组小鼠TLR2和TLR4蛋白较感染1周组小鼠的表达量明显增高 （P均[<0.05]）。结论 TLR2和TLR4参与了肠黏膜对微小隐孢子虫的识别,感染导致的肠黏膜损伤可能与其上调TLR2和TLR4表达相关。     

寄生虫疫苗免疫剂量的研究现状

迄今,寄生虫病仍是全球范围内,特别是发展中国家的重要公共卫生问题之一.随着免疫学和分子生物学技术的发展,寄生虫疫苗已成为防治寄生虫病的重要手段之一.其中疫苗免疫剂量是影响其免疫效果的重要因素之一.疫苗的剂量过低,不能刺激机体产生足够强的免疫反应;剂量过高,则可能引起免疫耐受或毒性反应,因此,确定合适的免疫剂量是疫苗研究的关键.该文就血吸虫、弓形虫和旋毛虫等寄生虫疫苗免疫剂量的研究现状作一综述.     

牦牛隐孢子虫感染调查

为了解牦牛隐孢子虫的感染情况,作者对上海动物园的6份成年牦牛粪便样品和来自青海的396份犊牦牛粪便样品进行隐孢子虫卵囊的检查。饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊。402份样品中,42份阳性,感染率为10.4%。采用饱和蔗糖溶液漂浮法检测:感染率为3.2%(13/402);应用改良抗酸染色法检测:感染率为10.4%(42/402)。成年牦牛无感染,而犊牦牛的感染率为10.6%(42/396)。调查发现犊牦牛感染隐孢子虫的较严重,成年牛均阴性。