电脉冲与恶性淋巴瘤细胞p53和bcl-2基因表达

目的: 探讨电化学疗法(ECT)与肿瘤细胞基因表达的关系。方法: 采用Tunel法和免疫组化S-P法, 分别检测肿瘤未治疗对照组和ECT组B细胞淋巴瘤组织的细胞凋亡率和p53、bcl-2基因的表达。结果: ECT组肿瘤细胞凋亡率(5.18)显著高于对照组(1.05), p53、bcl-2在ECT组表达分别为80%、25%, 对照组表达分别为15%、90%。ECT组中p53表达与癌细胞凋亡率呈正相关, 而bcl-2则与癌细胞凋亡率呈负相关。结论: ECT可诱导癌细胞凋亡, 其发生可能与p53和bcl-2基因调控有关。     

bcl—2／bax对不同乳腺癌细胞凋亡的调节作用

目的：了解bcl-2/bax在乳腺癌细胞的p53依赖性凋亡和p53非依赖性凋亡中的作用。方法：用原位杂交的方法检测化疗药物VM-26诱导入乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S凋亡前后bcl-2和bax的mRNA表达情况。结果：与MDA-MB-435S细胞相比,MCF-7细胞的bcl-2 mRNA水平较高。两株细胞均能在VM-26的作用下发生凋亡。药物诱导后,MCF-7细胞的bcl-2 mRNA表达下降,bax mRNA表达增加;MDA-MB-435S细胞bax mRNA表达增加,bcl-2、mRNA无明显变化。结论：wt p53可在转录水平调节bcl-2/bax的表达,从而介导凋亡作用;bax在p53非依赖性凋亡中也发挥一定作用;bcl-2的高表达可能与肿瘤耐药性有关。     

细胞凋亡及其相关基因在冷灌注保存大鼠肝脏组织中的作用

目的通过检测凋亡细胞计数及凋亡相关基因bax和Fas的表达。探讨细胞凋亡及其相关基因在冷灌注保存大鼠肝脏组织中的作用。方法本研究采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的末端标记法（TUNEL法）及RT-PCR．按照供肝保存时间30、60、90、120、180、300min分为6组进行凋亡细胞计数及其相关基因的检测。结果不同保存时间大鼠肝脏组织中均有凋亡细胞发生。随着时间延长，凋亡细胞计数呈进行性增加趋势；未检测到bcl-2的表达．但可明显检测到bax和Fas基因的表达。结论在冷灌注保存肝组织中，细胞凋亡是早期细胞死亡的主要原因之一。细胞凋亡的发生可能与bax和Fas的高表达以及bcl-2的低表达有关。     

妇科肿瘤组织中细胞凋亡相关基因表达及其与mtDNA突变相关性的研究

目的 研究妇科肿瘤患者原发性肿瘤组织细胞凋亡相关基因bcl-2,bax,caspase3的表达及其与mtDNA突变的相关性。方法 取32例妇科恶性肿瘤组织进行研究。应用RT-PCR方法检测bcl-2,bax,caspase3基因的表达。采用PCR-SS-CP及DNA测序检测mtDNA突变。结果 在妇科恶性肿瘤组织中，bcl-2,bax,caspase3基因的表达率分别为78.1%,43.8%及34.4%,bcl-2与caspase3,bax表达之间呈明显的负相关，Caspase3与Bax基因表达的共同阳性率和共同阴性率分别为71.4%及94.4%。在mtDNA突变的22例中，20例（90.9%)同时检测到bcl-2的表达，Bax及caspase3基因在mtDNA突变组的表达率分别为27.3%和13.6%。明显低于非突变组。结论 在妇科恶性肿瘤组织中存在bcl-2基因的高表达和bax,cas-case3基因的低表达，bcl-2与aspase3,bax表达之间呈明显的负相关，caspase3与bax基因存在共表达关系。细胞凋亡相关基因表达与mtDNA突变亦存在一定的相关性。     

白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡通路的探究

目的：探讨白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡的通路。方法：经小鼠尾静脉注射白色念珠菌后，用ELISA检测小鼠血清TNF-α水平；采用荧光分光光度计检测小鼠胸腺凋亡细胞caspase-3在不同时问组的活性变化；流式细胞仪检测小鼠胸腺细胞hax、p53、bcl-2基因产物水平。结果：TNF-α水平显著升高，caspase-3的活性明显增强，bax、p53基因表达上调。结论：白色念珠菌可能通过刺激机体TNF-α水平升高进而激活caspase-3，同时白色念珠菌上调bax、p53基因表达协同激活caspase-3，从而导致小鼠胸腺细胞凋亡。     

凋亡相关基因p53、bcl-2、bax在前列腺组织中的相关性

目的　探讨细胞凋亡相关基因p53、bcl-2、bax在前列腺组织中的相关性。 方法　收集36例前列腺癌(prostate caner, PCa)、20例前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)和11例正常前列腺(normal prostatic, NP),应用免疫组织化学S-P法检测凋亡相关基因p53、bcl-2、bax蛋白的表达。 结果　①PCa和BPH组bcl-2蛋白阳性表达率明显高于NP组（P<0.05）,而PCa组与BPH组阳性率差异无显著性。PCa组p53蛋白阳性表达率明显高于BPH组和NP组（P<0.01）,而BPH组与NP组阳性率无显著性差异（P>0.05）。②p53与PCa分级有关,随着肿瘤分级增高而呈正相关（P<0.05）;bcl-2与PCa分级有关,随着肿瘤分级增高而呈正相关（P<0.01）,显示bcl-2、p53蛋白表达随着病理分级的增高而增高。PCa、BPH和NP中bax阳性表达率差异无显著性。③p53蛋白表达阳性率≤5年生存组明显高于>5年生存组,呈负相关（P<0.05）;bcl-2、bax蛋白表达与生存期无关（P>0.05）。 结论 细胞凋亡相关基因 p53、bcl-2、bax蛋白的异常表达与PCa的发生和发展、病理分级和预后有相关性。     

同型半胱氨酸诱导PC12细胞凋亡的研究

目的：研究同型半胱氨酸（Hcy）在生理浓度铜离子（10 μmol/L Cu²⁺）作用下能否诱导PC12细胞凋亡及对bcl-2、bax基因表达的影响。 方法: 将细胞随机分成对照组和处理组，采用MTT法检测细胞活力；倒置相差显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡；半定量RT-PCR分析bcl-2和bax mRNA的表达水平。 结果: 0.125-1.0 mmol/L Hcy在Cu²⁺的作用下可以导致PC12细胞凋亡，具有明显的剂量-效应关系；bcl-2 mRNA表达降低，bax mRNA表达升高，且效应与Hcy浓度相关。 结论: 高浓度Hcy在生理浓度Cu²⁺作用下可诱导PC12细胞凋亡，且凋亡作用与Hcy浓度相关。其机制可能是通过调节bcl-2和bax mRNA的比值起作用的。     

全国第六届组织学与胚胎学青年学术研讨会论文摘要(续)

73.NO诱导血管平滑肌细胞凋亡原癌基因调控的初步研 究田雪梅李进第一军医大学组织学胚胎学教研室 广州 510515 血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖引起的 细胞数量过度增加是动脉粥样硬化发生发展的一个主要病 理特征,而VSMC凋亡又在其中起着重要作用.引起细胞凋 亡的因素有多种,近期发现,广泛存在于心血管系统的一氧 化氮(NO)除已知的多种生物作用外,还具有诱导巨噬细胞、 VSMC凋亡的功能.但是,NO诱导VSMC凋亡的调控机制 尚不十分明确.而bcl-2、p53、bax、c-myc、fas等都是参与细 胞凋亡调控的原癌基因.鉴此,本实验探讨NO诱导VSMC 凋亡与bcl-2、p53、bax之间的关系.方法:采用贴块法培养大 鼠主动脉VSMC,3～8代细胞用于实验.以亚硝基乙酰青霉 胺(SNAP)作为NO供体.构建逆转录病毒载体,将bcl-2基 因转入VSMC,使VSMC中bcl-2蛋白过量表达,通过原位 末端标记和流式细胞术检测VSMC在SNAP作用下的凋 亡.并采用免疫荧光染色,借助粘附式细胞仪(ACAS507)检 测细胞中bcl-2、p53、bax原癌蛋白表达的变化.结果:通过转 染bcl-2基因能使VSMC中bcl-2蛋白过量表达,且能使 SNAP作用下VSMC的凋亡率减少,而细胞中p53、bax蛋 白表达在转染和未转染bcl-2的VSMC中无明显差异.结 论:bcl-2过量表达阻止NO诱导的VSMC凋亡,但此作用 不是通过减少细胞中p53、bax蛋白的表达,而可能是通过增 加Bcl-2/bax比例的方式实现的.     

过氧化物酶体增生物激活物受体γ诱导的平滑肌细胞凋亡过程中相关基因p53和bcl-2表达的变化

目的：观察氧化修饰的低密度脂蛋白（ox-LDL）、过氧化物酶体增生物激活物受体γ（PPARγ）的两种激动剂噻唑烷二酮类（TZDs）的药物ciglitazone和15脱氧-前列腺素J₂（15d-PGJ₂）、PPARγ抑制剂PGF_2α诱导血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡过程中，对凋亡相关基因p53和bcl-2表达的影响。方法：将不同浓度ox-LDL、ciglitazone和15d-PGJ₂与原代培养的SD大鼠VSMC孵育。加入PPARγ的抑制剂PGF_2α，用流式细胞仪测定细胞凋亡率。用免疫组织化学方法观察凋亡相关基因蛋白P53和Bcl-2的表达。结果：ox-LDL和ciglitazone、15d-PGJ₂可诱导VSMC凋亡，PPARγ的抑制剂PGF_2α抑制其凋亡。此过程中，P53表达随诱导剂浓度的增加而表达增加，加入PGF_2α后，P53蛋白的表达又降低，差异有显著性（P<0.05）；凋亡相关基因bcl-2的变化也有显著意义。结论：PPARγ的活性改变了凋亡相关基因的表达；凋亡相关基因p53和bcl-2参与了PPARγ诱导的平滑肌细胞凋亡过程。     

肝胆管癌中bcl-2、bax基因表达和细胞凋亡的研究

目的　探索细胞凋亡及相关基因在体内肝胆管癌发生中所起的作用。　方法　用mRNA原位杂交技术和免疫组织化学方法 ,检测了肝胆管癌中bcl 2和bax基因表达 ;利用TUNEL法检测其细胞凋亡 ;　结果　肿瘤中bcl 2表达增强 ,癌旁组织中bax表达增强 ,癌旁组织中凋亡细胞增加 ;　结论　bcl 2基因激活后 ,抑制bax的作用及基因表达 ,可能使细胞的增殖加快 ,肿瘤发生 ;而bax的表达可能引起癌旁组织的细胞凋亡加剧     

大豆异黄酮诱导裸鼠人胃癌移植瘤凋亡（英文）

目的：探讨大豆异黄酮诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的机制。方法： 建立人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤模型并测定移植瘤的生长曲线；25只BALB/C裸鼠接种胃癌原代细胞悬液生成移植瘤后，不同剂量的大豆异黄酮进行瘤旁注射，透射电镜和TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况，免疫组化法和RT-PCR法检测肿瘤组织的凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况。结果： 大豆异黄酮对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用，在剂量为0.5 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg时，其抑制率分别为10.6%、29.7%和39.1%；透射电镜发现大豆异黄酮导致移植瘤内大量细胞发生调亡；TUNEL染色法发现大豆异黄酮注射组瘤细胞的凋亡指数是随剂量递增（28.7%±1.1%、33.4%±1.4%和37.1%±1.0%）。免疫组织化学法发现大豆异黄酮注射组的Bcl-2蛋白阳性细胞率随剂量递减（11.8%±0.9%、5.7%±0.8%和4.0%±0.8%），而Bax蛋白阳性细胞率随剂量递增（20.0％±±1.2%、24.7％±0.9%和29.3%±1.6%）；RT-PCR法发现,大豆异黄酮注射组的〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗 mRNA条带强度随剂量的增大而递减，并明显低于对照组P<0.05）；而bax mRNA条带强度递增，并明显低于对照组（P<0.05），而2对照组bcl-2，bax之间差异无统计学意义（P>0.05）。结论： 大豆异黄酮对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用，通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导胃癌裸鼠移植瘤细胞发生凋亡，是其抗胃癌作用的机制之一。     

Bcl-2、Bax在NHE-1抑制导致的大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨Bcl-2、Bax蛋白表达在Na⁺/H⁺交换器-1(NHE-1)抑制而诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)凋亡中的作用。方法: 荧光指示剂(Fura-2/AM)测定法检测转染NHE-1特异性核酶基因的大鼠PASMC内Ca²⁺(i)变化;RT-PCR方法检测细胞内bcl-2和baxmRNA表达变化, 免疫组化法检测细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达变化。 结果:转染NHE-1特异性核酶基因后, 大鼠PASMC内i显著升高, bcl-2mRNA及蛋白表达显著降低, baxmRNA和蛋白表达显著增加。结论: NHE-1抑制诱导的PASMC凋亡与i增加、bcl-2表达降低及bax表达增加有关。     

L-精氨酸对肺缺血/再灌注损伤时bcl-2、bax基因表达的影响

目的： 探讨L-精氨酸对肺缺血-再灌注损伤（PIRI）时bcl-2、bax基因表达的影响。方法： 采用在体兔单肺原位缺血-再灌注模型。实验兔36只，随机分为假手术对照组（sham，12只）、肺缺血-再灌注组（I/R，12只）和肺缺血-再灌注加L-精氨酸组（L-Arg，12只）。分别于再灌注5 h取左肺组织，观察bcl-2、bax mRNA定位表达、凋亡指数（AI）、肺组织湿干重比（W/D）、肺损伤组织学定量评价指标（IQA）及光镜、电镜下的组织形态学改变。结果： 在肺小动脉内（外）膜、肺小静脉内膜、肺泡上皮及细支气管上皮，L-Arg组bcl-2 mRNA的表达及bcl-2/bax mRNA的比值显著高于I/R组（均P<0.01），bax mRNA的表达明显低于I/R组（P<0.01）；AI、W/D和IQA值显著低于I/R组（P<0.01和P<0.05）；肺组织形态学异常改变不同程度减轻。结论： L-精氨酸可上调肺组织bcl-2 mRNA的表达、下调肺组织bax mRNA的表达、调控bcl-2/bax mRNA 之间的平衡而减轻细胞凋亡，对PIRI发挥积极的防治作用。     

c-fos反义寡聚核苷酸对亚硒酸钠引起的皮质神经元凋亡的保护作用(英文)

本文利用 c-fos ASO(反义链全部硫代磷酸化修饰 )技术阻断 c-fos的表达 ,观察此项处理对亚硒酸钠在体外培养皮质神经细胞致凋亡作用和相关基因表达改变的影响。结果显示 :( 1) c-fos ASO可阻断亚硒酸钠的致凋亡作用 ,且有一定的剂量和时间依赖性 ;用琼脂糖凝胶电泳分析由各个时间点提取的 DNA片段 ,与对照组比较 ,c-fos ASO能明显阻断亚硒酸钠诱导的典型的 DNA梯型 ;用流式细胞仪检测得到的 DNA含量直方图也显示 ,在 c-fos ASO处理后 ,与对照组比较 ,亚硒酸钠引起的亚二倍体峰变小 ;( 2 )用 RT-PCR法检测表明 ,在用 c-fos ASO和亚硒酸钠处理皮质神经细胞后 ,不仅阻断了 c-fos表达的上调 ,对其它几种基因表达的改变也有不同的影响 ,与对照组比较 ,c-fosm RNA在各个时间点 ( 0 .5、1、2、4和 2 4h)不再上升 ,bcl-2 m RNA则不再下降 ,bax m RNA和 ACh E m RNA都不再上升 ;唯一不同的是 ,p5 3m RNA的变化趋势则与未经 c-fos ASO预处理时基本相同 ,在多数时间点两组 p-5 3m RNA水平之间无显著性差异 ( P>0 .0 5 ) ,说明此基因的表达基本不受 c-fos ASO作用的影响。上述结果提示 ,亚硒酸钠诱导的神经元凋亡可能是一组级联式基因表达更变的结果 ,c-fos是其中的一个组成成员 ,它的表达改变被阻断后 ,处于它下游?     

硼替佐米上调fas、bcl2l12、caspase-9和caspase-3基因表达

目的： 探讨硼替佐米诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡及新基因bcl2l12在其中的作用。方法: MTT比色法观察硼替佐米对K562细胞的生长抑制作用;Annexin-V标记和线粒体跨膜电位（Δψm）分析细胞凋亡;RT-PCR方法检测0、6、12和24 h fas、bcl2l12、bcl-2、 bim、bax、caspase-3和caspase-9基因表达变化。结果: 硼替佐米抑制K562细胞生长呈时间和剂量依赖性,24 h和48 h半数抑制浓度分别为161.41 nmol/L和96.33 nmol/L;硼替佐米诱导K562细胞凋亡,12 h Annexin-V阳性细胞就开始增高,并呈时间依赖性,Δψm减低;RT-PCR显示fas、bcl2l12、caspase-3和caspase-9表达增高,但bcl-2、bim和bax表达无明显改变。结论: 硼替佐米可以抑制K562生长并诱导凋亡,上调fas、bcl2l12,使线粒体膜电位下降,激活caspase-9和caspase-3基因,促使DNA发生断裂可能是其诱导凋亡的机制之一。     

Temporal events in skin injury and the early adaptive responses in ultraviolet-irradiated mouse skin

We examined the effects of ultraviolet (UV) radiation on the time course for induction of sunburn (apoptotic) cells and expression of proteins known to be associated with growth arrest and apoptosis in SKH-hr1 mouse skin. Mice were irradiated with a single dose (2.5 kJ/m(2)) of UV from Kodacel-filtered (290-400 nm) FS40 sunlamps and the skin tissues were analyzed at various times after irradiation for the presence of apoptotic cells and expression of p53, p21(Waf-1/Cip1), bcl-2, bax, and proliferating cell nuclear antigen. The results indicated that p53 expression was induced early in the epidermis, reaching maximum levels 12 hours after irradiaton, and p21(Waf-1/Cip1) expression in the epidermis peaked at 24 hours after irradiation. In contrast, UV radiation induced high levels of bax at 24 to 72 hours after irradiation with a concomitant decrease in bcl-2 expression. Coinciding with these changes, apoptotic cells began to appear 6 hours after irradiation and reached a maximum at 24 hours after irradiation. Interestingly, proliferating cell nuclear antigen expression, which was initially confined to the basal layer, became dispersed throughout the basal and suprabasal layers of the skin at 48 hours and paralleled marked hyperplasia. These results suggest that UV irradiation of mouse skin induces apoptosis mediated by the p53/p21/bax/bcl-2 pathway and that the dead cells are replaced by hyperproliferative cells, leading to epidermal hyperplasia. This implies that UV-induced apoptosis and hyperplasia are closely linked and tightly regulated and that dysregulation of these two events may lead to skin cancer development.     

Survivin expression in ovarian carcinoma: correlation with apoptotic markers and prognosis.

Survivin is a novel inhibitor of apoptosis commonly detected in tissues during fetal development and in cancer, but not usually in normal tissues. Expression of this protein may be of prognostic significance and therapeutically relevant in many cancers. We assessed survivin expression in ovarian carcinoma, correlating results with expression of other anti-apoptotic (bcl-2, bcl-x, mutant p53) and pro-apoptotic (bax) markers, with prognostic parameters, and prognosis. Paraffin-embedded sections of 49 ovarian carcinoma were immunostained for survivin, bcl-2, bcl-x, bax, and p53. Expression was evaluated in nuclei and cytoplasm, as intensity (0-3+), and percentage of positive cells was scored on a four-tiered system with <10% as negative. Frequency of survivin, bcl-2, bcl-x, bax, and p53 was 73.5%, 36.7%, 93.9%, 77.6%, and 60.4%, respectively. There was significant correlation between nuclear survivin expression and grade (P =.0014), histologic type (P =.0376), and mutant p53 (P =.0414). Survivin expression did not correlate with bcl-2, bcl-x, or bax expression, stage, or overall or disease-free survival. The majority (74%) of ovarian carcinoma show survivin expression, which correlates with poor prognostic parameters (high grade, histologic type, p53 mutation) but not with survival. Therapeutic targeting of survivin in ovarian carcinoma is a future possibility.