高压氧结合电针治疗帕金森病大鼠的实验研究

目的 观察高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)结合电针刺激对帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的影响及对行为学的治疗作用.方法 用6-羟基多巴胺毁损单侧黑质建立大鼠向健侧旋转运动的帕金森病动物模型;将造模成功的大鼠随机分为HBO治疗组、电针治疗组、HBO结合电针组、模型未治疗组;通过高效液相电化学法检测各组...     

头穴电针对帕金森大鼠黑质脑源性神经营养因子表达的影响

[目的]通过建立帕金森病大鼠模型,观察头穴电针对帕金森病大鼠行为学的影响,同时检测帕金森病大鼠黑质中脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）及其受体酪氨酸激酶B（Tyrosine kinase-B,TrkB）,以及黑质中cAMP反应元件结合蛋白（cAMP responsive element binding protein,CREB）的变化,以探讨针灸治疗帕金森病的可能机理。[方法]用纹状体内多位点注射6-OHDA建立帕金森病大鼠模型,造模成功者随机分为电针治疗组、模型对照组、假手术组和正常组,分别进行头穴电针治疗。疗程结束后采用免疫组化法检测黑质中BDNF、TrkB、CREB水平。[结果]头穴电针治疗组大鼠治疗后较治疗前旋转次数明显减少（P〈0.05）,模型对照组和电针治疗组黑质内BDNF、TrkB和CREB阳性神经元数量显著低于正常组和假手术组（P〈0.01）,电针治疗组BDNF、TrkB和CREB阳性神经元数量高于模型对照组（P〈0.05）。[结论]头穴电针可明显改善帕金森大鼠的旋转行为,增加黑质中BDNF、TrkB和CREB的阳性细胞数。其机制可能为通过增加黑质中BDNF和TrkB的含量,激活神经元信号保护通路从而使CREB活化,促进了BDNF在黑质内的自分泌,保护DA能神经元。     

抗帕宁汤剂对帕金森病大鼠多巴胺能神经元保护作用

目的 探讨抗帕宁汤剂对于帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用.方法 通过MPTP偏侧纹状两点输注法构建帕金森病模型大鼠,随机将大鼠分成模型组,美多巴组,抗帕宁汤高、中、低剂量组.并将假手术组归为对照组,灌胃治疗1个月.治疗后观察各组大鼠的诱导行为变化和对纹状体单胺类神经递质、中脑酪氨酸羟化酶(TH)的影响.结果 抗...     

阴虚动风证帕金森病异动症模型大鼠氧化应激指标影响的动态变化的研究

[摘要] 目的 探讨阴虚动风证帕金森病异动症（LID）大鼠神经行为学、氧化应激反应及复方地黄方的干预作用。方法 采用6-羟基多巴胺（6-OHDA）偏侧损毁黑质制备帕金森病大鼠模型,进一步腹腔注射左旋多巴 苄丝肼（50mg/kg左旋多巴和12.5mg/kg苄丝肼）制备阴虚动风证帕金森病LID大鼠模型,并随机分为LID组、复方地黄方组,另取正常对照组、假手术组大鼠。每组6只。分别在4周、6周后进行神经行为学检测后,取纹状体,应用比色法分别测定各组大鼠纹状体内SOD、MDA、GSH、GSH-Px的含量。结果 阴虚动风证帕金森病LID模型组AIM评分、L-dopa诱导持续时间随着干预时间的延长均呈增加的趋势,L-dopa诱导启动时间随时间的延长有减少的趋势,且大鼠纹状体内SOD、GSH、GSH-Px的含量均明显的减少,MDA的含量呈增加的趋势;而复方地黄方组AIM评分、剂峰旋转圈、L-dopa诱导持续时间随着治疗时间的延长均呈减少的趋势,L-dopa诱导启动时间随治疗时间的延长有增加的趋势,大鼠纹状体内SOD、GSH、GSH-Px的含量均呈现增加的趋势,且随治疗时间的延长增加趋势更明显,MDA的含量呈现减少的趋势,且随治疗时间的延长减少的趋势更明显。结论 复方地黄方较好地改善阴虚动风证帕金森病LID大鼠的神经行为学表现和氧化应激反应,复方地黄方干预LID模型大鼠可能是通过清除自由基,减轻对细胞的损伤从而缓解帕金森病LID的症状。     

白藜芦醇对帕金森病大鼠的保护作用及机制研究

目的观察白藜芦醇对帕金森病大鼠的保护作用,并探讨其可能机制。方法应用6-OHDA纹状体内注射制作PD模型大鼠,将模型成功大鼠随机分为4组：模型组及白藜芦醇（10,20。40mg/kg/d）治疗组,并设假手术组及正常给药组（白藜芦醇20mg／kg/d）,每日口服给药一次,连续10周,给药过程中每周进行一次行为学检测。电镜下观察黑质神经元超微结构改变,RT—PCR法检测大鼠黑质部caspase－3 mRNA的表达。结果①白藜芦醇能改善大鼠的旋转行为;②白藜芦醇能减轻6-OHDA诱导的帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元的变性;③白藜芦醇抑制大鼠黑质中caspase－3 mRNA的表达。结论白藜芦醇对帕金森病大鼠产生保护作用,其机制可能与caspase-3 mRNA的表达下调有关。     

美多巴对帕金森病大鼠模型脑多巴胺转运体影响的自显影

[目的]研究美多巴对帕金森病大鼠模型脑多巴胺转运体的影响。[方法]立体定位右侧纹状体注射6—羟多巴胺制备偏侧帕金森病大鼠模型，模型成功后给予美多巴灌胃治疗5周。分4组(正常组、帕金森病模型大鼠组、帕金森病模型大鼠经美多巴治疗组、帕金森病模型大鼠未治疗组)行脑多巴胺转运体^99mTc-TRODAT—1放射自显影，每组4只。图像分析得到左、右侧纹状体及小脑的光密度值，计算左、右侧脑多巴胺转运体的特异性放射性摄取比值(纹状体／小脑—1)，比较各时间点(正常、术后4周、术后9周)多巴胺转运体比值的变化。[结果]正常大鼠脑多巴胺转运体对^99mTc—TRODAT—1的特异性摄取比值左、右两侧无显著性差异；术后4周大鼠成为帕金森病模型后，大鼠两侧脑多巴胺转运体的比值较正常均降低，右侧(损毁侧)降低明显。术后9周未治疗组帕金森病模型大鼠双侧脑多巴胺转运体的比值均较4周刚成为模型时明显升高；经美多巴治疗后，双侧的比值均较未服药组明显降低，右侧(损毁侧)降低幅度更大。[结论]长期美多巴治疗可能会使帕金森病模型大鼠脑多巴胺转运体的数量减少。     

疏筋解毒方对中脑黑质肿瘤坏死因子-α含量的影响

本实验采用体定位脑内注射6-OHDA建立大鼠模型,从帕金森病模型大鼠中脑黑质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量变化,探讨疏筋解毒方干预小胶质细胞介导炎症反应的机制.检测结果显示,模型组大鼠黑质纹状体内TNF-α含量增高,与假手术组比较具有显著差异(P＜0.01)；治疗后,中药组、西药组与模型组比较,大鼠黑质纹状体内TNF-α含量均降低,具有统计学意义(P＜0.05)；中药组大鼠不同时间点黑质纹状体内TNF-α含量比较(P＜0.05),各组间有显著性差异.     

不同剂量鱼藤酮对拟帕金森病模型大鼠行为学及纹状体多巴胺

目的 观察不同剂量鱼藤酮皮下注射对大鼠行为学及脑纹状体多巴胺含量的影响,探讨鱼藤酮拟帕金森病大鼠模型的适宜造模条件.方法 Lewis大鼠分别给予鱼藤酮不同剂量(1.0、1.5和2.0 mg/kg/d)皮下注射共28 d.应用旷场实验和斜板实验分别测定大鼠的运动功能和协调性,高效液相色谱-电化学法检测大鼠纹状体内多巴胺含量.结果 模型组大鼠存活率随鱼藤酮注射剂量的升高呈逐渐下降趋势.鱼藤酮2.0 mg/kg组大鼠体重最先明显降低,随着注射时间的延长,各模型组大鼠均出现显著的体重降低.旷场实验结果显示,各剂量鱼藤酮组大鼠跨格次数和站立次数均明显下降.斜板实验结果显示,鱼藤酮1.5 mg/kg组大鼠在斜板的停留角度较对照组显著减小.鱼藤酮1.5 mg/kg组大鼠脑纹状体内多巴胺含量显著降低.结论 鱼藤酮1.5 mg/kg皮下注射28 d,大鼠出现明显的运动功能障碍和脑内多巴胺含量减少,而死亡率相对较低,因此是建立帕金森病大鼠模型的适宜剂量.     

阴虚动风证帕金森病异动症模型大鼠的氧化应激反应及复方地黄方的干预作用

目的 探讨阴虚动风证帕金森病异动症(LID)大鼠氧化应激反应及复方地黄方的干预作用。方法 采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)偏侧损毁黑质制备帕金森病大鼠模型,进一步腹腔注射左旋多巴+苄丝肼(50 mg/kg左旋多巴和12.5 mg/kg苄丝肼)制备阴虚动风证帕金森病LID大鼠模型,并随机分为LID组、复方地黄方组,另取正常对照组、假手术组大鼠。每组6只。分别在4周、6周后进行神经行为学检测后,取纹状体,应用比色法分别测定各组大鼠纹状体内SOD、MDA、GSH、GSH-Px的含量。结果 阴虚动风证帕金森病LID模型组大鼠纹状体内SOD、GSH、GSH-Px的含量均明显的减少,MDA的含量呈增加的趋势;而复方地黄方组大鼠纹状体内SOD、GSH、GSH-Px的含量均呈现增加的趋势,且随治疗时间的延长增加趋势更明显,MDA的含量呈现减少的趋势,且随治疗时间的延长减少的趋势更明显。结论 复方地黄方较好地改善阴虚动风证LID大鼠的氧化应激反应,复方地黄方干预LID模型大鼠可能是通过清除自由基,减轻对细胞的损伤从而缓解帕金森病LID的症状。     

白藜芦醇对帕金森病模型大鼠氧化应激损伤的拮抗效应

目的探讨白藜芦醇对帕金森病（Parkinson’s disease,PD）模型大鼠氧化应激损伤的拮抗效应。方法应用6-OHDA纹状体内注射制作PD模型大鼠,将模型成功大鼠随机分为4组：模型组,白藜芦醇10,20,40mg／kg／d治疗组以及ViLE对照组（50mg／kg／d）,并设假手术组及正常给药组（自藜芦醇20mg／kg／d）,每日口服给药一次,连续10周,给药过程中每周进行一次行为学检测,然后利用化学比色法检测损毁侧脑组织中SOD、GSH—PX活性以及MDA含量。结果1．白藜芦醇治疗组可使大鼠旋转行为明显改善;2．白藜芦醇治疗组可明显增加SOD、GSH—PX活性,降低MDA含量。结论白藜芦醇对帕金森病模型大鼠具有保护作用,其机制与白藜芦醇减轻6-OHDA所致的氧化应激损伤有关。     

震颤宁治疗帕金森病的实验研究

[目的]探讨中药襄颤宁治疗帕金森氏病(PD)的药效机理。[方法]采用6-羟多巴胺(6-OHDA)纹状体两点注射法复制PD模型,观察震颤宁对大鼠旋转行为、纹状体及血液中多巴胺(DA)和高香草酸(HVA)、过氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量的影响。[结果]高剂量震颤宁可改善PD大鼠旋转行为,使旋转圈数较治疗前减少(P<0.05);提高大鼠全血GSH舍量(P<0.05),使GSH-PX活性显著增高(P<0.01),血清MDA含量显著降低:右侧纹状体GSH含量显著增高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01),并可增加纹状体DA含量,降低HVA/DA比值。低剂量震颤宁对PD大鼠旋转行为无明显改善(P>0.05);可降低血清MDA含量(P<0.01),而对GSH-PX活性无明显改善;并可使大鼠纹状体GSH含量增加,而对MDA含量无明显影响,对DA、HVA/DA亦无显著影响。[结论]震颤宁可能通过改善机体及纹状体的氧化应激状态和保护神经元,间接补充纹状体DA含量而改善PD症状,并呈剂量效应关系。     

Experimental Study on Heterograft of Glomus Cells of Carotid Body for Hemiparkinsonian Rats

Parkinson disease(PD) is a neuro- degenerativedisorder commonly found in middle- aged or olderpeople,which ischaracterized by the loss ofmelanin-containing neurons in the substantia nigra pars com-pacta(SNpc) and a reduction in dopamine in stria-tum.After several years of treatment by dopamineprecursor,L- dihydroxyphenylalanine (L - DOPA ) ,and due to the reduced effectof L- DOPA and dyski-nesia,some PD patients need to be switched to othertherapeutic approaches such as neural transplant…     

Experimental Study on Heterograft of Glomus Ccl ls of Carotid Body for Hemioarkinsonian Rats

Summary: To observe the effects of heterograft of glomus cells of carotid body on hemiparkinsonian rat models, rats with unilateral 6-hydroxydopamine (6-OHDA)-induced lesions of the right dopamin ergic neurons of substantia nigra received intrastriatal glomus cells heterograft. Apomorphine-induced rotation was monitored for 30 rmin at various time points after grafting. The striata were cut and ex-amined for dopamine content by HPLC and for immunohistochemical staining of tyrosine hydroxylase positive neurons (TH ) at the end of the experiments. The results showed that apomorphine-induced rotational behavior was significantly reduced for 12 weeks and the dopamine contents were signifi cantly elevated after grafting (P＜0.01), and TH cells survived better. The present study demon strates that intrastriatal heterograft of glomus cells within carotid body in rats with 6-OHDA-elicited lesions could reduce apomorphine-induced rotational behavior and elevate the dopamine contents and numbers of TH cell surviving within striatum, and can serve as a new and effective alternative for Parkinson disease.     

美多巴对帕金森病大鼠模型脑多巴胺转运体影响的自显影

【目的】研究美多巴对帕金森病大鼠模型脑多巴胺转运体的影响。【方法】立体定位右侧纹状体注射6-羟多巴胺制备偏侧帕金森病大鼠模型,模型成功后给予美多巴灌胃治疗5周。分4组(正常组、帕金森病模型大鼠组、帕金森病模型大鼠经美多巴治疗组、帕金森病模型大鼠未治疗组)行脑多巴胺转运体99mTc-TRODAT-1放射自显影,每组4只。图像分析得到左、右侧纹状体及小脑的光密度值,计算左、右侧脑多巴胺转运体的特异性放射性摄取比值(纹状体/小脑-1),比较各时间点(正常、术后4周、术后9周)多巴胺转运体比值的变化。【结果】正常大鼠脑多巴胺转运体对99mTc-TRODAT-1的特异性摄取比值左、右两侧无显著性差异;术后4周大鼠成为帕金森病模型后,大鼠两侧脑多巴胺转运体的比值较正常均降低,右侧(损毁侧)降低明显。术后9周未治疗组帕金森病模型大鼠双侧脑多巴胺转运体的比值均较4周刚成为模型时明显升高;经美多巴治疗后,双侧的比值均较未服药组明显降低,右侧(损毁侧)降低幅度更大。【结论】长期美多巴治疗可能会使帕金森病模型大鼠脑多巴胺转运体的数量减少。     

稳定表达GDNF的MN9D/GDNF工程细胞可明显改善帕金森病模型大鼠的旋转行为

目的：观察稳定表达ＧＤＮＦ的ＭＮ９Ｄ／ＧＤＮＦ工程细胞对６羟基多巴胺损毁所致帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）模型大鼠旋转行为有无治疗作用。方法：用６羟基多巴胺损毁大鼠单侧中脑黑质多巴胺能神经元、２周后腹腔注射阿朴吗啡诱导大鼠出现偏侧旋转行为的方法制备ＰＤ模型大鼠。通过脑立体定位技术，将稳定表达ＧＤＮＦ的ＭＮ９Ｄ／ＧＤＮＦ工程细胞注入模型鼠损毁侧纹状体，１周后观察阿朴吗啡诱导的旋转行为有无改善。结果：稳定表达ＧＤＮＦ的ＭＮ９Ｄ／ＧＤＮＦ工程细胞可明显降低ＰＤ模型大鼠的异常旋转行为，治疗作用达１０周之久。结论：运用ｅｘｖｉｖｏ方法和防治兼顾的策略对于ＰＤ基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。     

帕金森病大鼠颈动脉体球细胞块移植治疗的实验观察

为评估颈动脉体球细胞块移植治疗帕金森病（PD）的疗效。采用立体定位注射6－羟多巴胺（6－OHDA）制备偏侧PD大鼠模型，右侧纹状体内分别移植入自、异体颈动脉体和胚鼠中脑组织块，移植后2、4、8和12周记录阿朴吗啡诱发大鼠的旋转行为，测定移植区谷氨酸（Glu)、甘氨酸（Gly)、天门冬氨酸（Asp)、γ-氨基丁酸（GABA）和多巴胺（DA)的含量变化。结果发现：与对照组比较，PD大鼠阿朴吗啡诱发的旋转行为明显改善达12周之久，DA水平升高显著（P＜0.01)且以自体颈动脉体移植组最佳；自体颈动脉体移植组纹状体内Glu和GABA含量显著降低（P＜0.01)。结果表明：脑内移植颈动脉体球细胞块可明显改善PD大鼠药物诱发的旋转行为，提高纹状体内DA含量并降低Glu和GABA含量，是一种有效治疗PD的方法。     

多巴胺合成酶相关基因治疗帕金森病的实验研究

目的探讨重组多巴胺合成酶基因在体内外的表达、生成蛋白的活性及对帕金森病模型大鼠的治疗作用。方法在腺相关病毒介导下,将多巴胺合成酶相关基因酪氨酸羟化酶(TH)基因、芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)基因与GTP环化水解酶Ⅰ(GCH-Ⅰ)基因导入COS7细胞,分别通过原位杂交与免疫组化的方法检测目的基因的转录与表达,通过高压液相分析检测酶活性。将携带目的基因的运载细胞移植到帕金森病模型大鼠纹状体,每周进行诱发旋转行为的检测。10周后高压液相分析脑内多巴胺含量,以进一步评估复合基因的治疗效果。结果重组多巴胺合成酶基因在体外可以表达并被正确修饰,具有联合酶促催化功能。当把表达TH、AADC与GCH-Ⅰ基因的细胞共培养时,在底物左旋酪氨酸存在的情况下,可以生成大量多巴胺。而且,把携带治疗基因的细胞移植到大脑后,经检测三基因移植组脑内多巴胺的生成量较单基因移植组多,且前者与后者相比,其行为学改善更为明显。但是三基因移植组与双基因组相比,脑内多巴胺生成量差异无显著意义。结论在帕金森病基因治疗策略中,应根据多巴胺能神经元的损伤程度来选择加入基因的组合量。复合基因治疗的效果明显好于单基因。     

大鼠纹状体区多巴胺受体的变化对动物行为的影响

目的 研究大鼠黑质区注射脂多糖(LPS)后,纹状体区多巴胺2型受体(D2R)亚型mRNA含量的变化,初步探讨D2R与帕金森病(PD)发病的关系。方法 利用立体定向技术将LPS注人大鼠单侧黑质区,注射后21 d左右,以阿扑吗啡诱导大鼠旋转,RT-PCR方法半定量检测各组大鼠双侧纹状体区D2R两亚型mRNA的表达量。结果 单侧黑质注射LPS的大鼠经阿扑吗啡诱导后向损毁同侧旋转,实验组大鼠纹状体区DL和DS的mRNA表达量损毁侧较对照侧明显增高(P<0.05,P<0.01)。结论LPS损毁大鼠的纹状体部位D2R mRNA含量的变化,可导致大鼠行为的改变,提示D2R可能与PD的发病有一定关系。     

Therapeutic effect of human amniotic epithelial cell transplantation into the lateral ventricle of hemiparkinsonian rats

Background Human amniotic epithelial cells （HAECs） are able to secrete biologically active neurotrophins such as brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3, both of which exhibit trophic activities on dopamine neurons. Previous study showed that when human amniotic epithelial cells were transplanted into the striatum of 6-hydroxydopamine （6-OHDA）-induced Parkinson disease rats, the cells could survive and exert functional effects. The purpose of this study was to investigate the survival and the differentiation of human amniotic epithelial cells after being transplanted into the lateral ventricle of Parkinson＇s disease （PD） rats, and to investigate the effects of grafts on healing PD in models. Methods The Parkinson＇s model was made with stereotactic microinjection of 6-hydroxydopamine （6-OHDA） into the striatum of a rat. The PD models were divided into two groups： the HAECs group and the normal saline （NS） group. Some untreated rats were taken as the control. The rotational asymmetry induced by apomorphine of the HAECs group and the NS group were measured post cell transplantation. The expression of nestin and vimentin in grafts were determined by immunohistology. Ten weeks after transplantation the density of tyrosine hydroxylase positive cells in the substantia nigra of the HAECs group, NS group and the untreated group was determined. The differentiation of grafts was determined by TH immunohistology. High performance liquid chromatography （HPLC） was used to determine monoamine neurotransmitter levels in the striatum. Results The rotational asymmetry induced by apomorphine of the HAECs group was ameliorated significantly compared to the NS group two weeks after transplantation （P 〈0.01）. The grafts expressed nestin and vimentin five weeks after transplantation. TH immunohistochemistry indicated that the TH positive cells in the substantia nigra of the HAECs group increased significantly compared to the NS group （P 〈0.01）. Tyrosine hydroxylase （TH） positive cells in the substantia nigra of the HAEC group and the NS group were decreased compared to the untreated group （P 〈0.01）. Dopamine and DOPAC levels in the striatum of the HAECs group increased significantly compared to the NS group （P 〈0.05）. Homovanillic acid （HVA） levels in the striatum of the HAECs group increased significantly compared to the NS group （P 〈0.01）. In addition dopamine, DOPAC, and HVA levels in the striatum and dopamine levels in the cerebrospinal fluid of the HAECs group and the NS group were decreased compared to the untreated group （P 〈0.05）. Conclusions Human amniotic epithelial cells could be used to ameliorate the rotational asymmetry induced by apomorphine of the PD models. This could have been due to the increased content of dopamine and its metabolic products, DOPAC and HVA, in the striatum in the PD models.