结核菌特异性IFN-γ检测在骨关节结核诊断中的初步应用

目的探讨酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测结核特异性IFN-γ在骨关节结核病患者中的诊断价值。方法收集2009年5月至2011年5月期间,深圳市第三人民医院收治并确诊为骨关节结核病患者及其临床资料,共90例,比较分析ELISPOT检测、涂片染色镜检、结核菌培养、聚合酶链反应（PCR）检测结核菌DNA以及病理检查诊断在骨关节结核病中的阳性率。结果 90例临床确诊骨关节结核患者中,ELISPOT检测阳性率为75.6%,涂片染色法（27.9%）,结核菌培养法（51.7%）,聚合酶链反应PCR（53.0%）,病理诊断（39.1%）,ELISPOT阳性率显著高于其它临床常用检测方法,差异有统计学意义（P〈0.05）;ELISPOT联合涂片染色法、结核菌培养法及PCR检测法,阳性率分别达到80.9%、88.3%、87.9%,当ELISPOT、结核菌培养法和PCR检测法三者联合应用时,阳性率高达90.7%。结论 ELISPOT检测方法在骨关节结核患者中有一定辅助诊断价值,与临床常规检测方法相结合有助于提高诊断率。     

结核分枝杆菌检测方法临床应用的对比研究

目的用涂片、聚合酶链反应(PCR)法检测结核分枝杆菌,探讨其临床应用价值。方法对169例临床确诊的肺结核患者、可疑肺结核患者和非结核患者痰标本用涂片、PCR两种方法进行检测,对结果进行对比分析。结果 169例痰标本中,痰涂片检查阳性率为7.1%(12/169),PCR检测阳性率为32.54%(55/169);痰涂片、PCR法检测42例临床确诊的肺结核患者痰标本阳性率分别为11.9%(5/42)、57.1%(24/42);检测82例临床可疑肺结核患者痰标本阳性率分别为8.54%(7/82)、37.8%(31/82)。比较两种方法的阳性检测率,差异有统计学意义(χ2=19.729,P<0.01),检测45例非结核患者痰标本,涂片及PCR检测均为阴性。结论 PCR法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核病检测诊断的有效方法之一。     

PCR—微孔板反向杂交法在结核分枝杆菌检测中的应用

目的　评价PCR 微孔板反向杂交法检测临床标本中结核分枝杆菌 (MTB)的应用价值。方法　应用集菌涂片镜检法、培养法、PCR法、PCR 微孔板反向杂交法分别对 5 5份肺结核病患者和 30份非结核呼吸系统病患者痰标本平行检测。结果　涂片法对结核病患者临床标本中MTB检出率为 2 1.82 % ,培养法检出率为2 5 .4 6 % ,PCR法检出率 36 .36 % ,PCR 微孔板反向杂交法检出率 4 7.2 7%。对 30例非结核呼吸系统疾病患者检测MTB ,PCR法出现 2例假阳性 ,其余 3种方法均阴性 ,PCR 微孔板反向杂交法比单纯PCR法灵敏度高、特异性强。结论　PCR 微孔板反向杂交法具有简便、快速、抗污染、灵敏度高、特异性强的优点 ,缺点是存在假阴性 ,应改进标本前处理方法 ,在对结核病的辅助诊断中应与细菌学方法相结合 ,以提高检出率     

PCR-微孔板反向杂交法在结核分枝杆菌检测中的应用

目的评价PCR-微孔板反向杂交法检测临床标本中结核分枝杆菌(MTB)的应用价值.方法应用集菌涂片镜检法、培养法、PCR法、PCR-微孔板反向杂交法分别对55份肺结核病患者和30份非结核呼吸系统病患者痰标本平行检测.结果涂片法对结核病患者临床标本中MTB检出率为21.82%,培养法检出率为25.46%,PCR法检出率36.36%,PCR-微孔板反向杂交法检出率47.27%.对30例非结核呼吸系统疾病患者检测MTB,PCR法出现2例假阳性,其余3种方法均阴性,PCR-微孔板反向杂交法比单纯PCR法灵敏度高、特异性强.结论PCR-微孔板反向杂交法具有简便、快速、抗污染、灵敏度高、特异性强的优点,缺点是存在假阴性,应改进标本前处理方法,在对结核病的辅助诊断中应与细菌学方法相结合,以提高检出率.     

噬菌体生物扩增法对结核病临床诊断的意义

目的 探讨噬蒲体生物扩增法技术检测临床标本对结核病临床诊断的应用价值.方法 采用噬菌体生物扩增法技术对86例活动性肺结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液,共计189份临床标本进行检测;对非结核病患者痰标本10例、胸水5例、灌洗液5例共计20份标本进行检测.同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 86例活动性结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液噬菌体生物扩增法检测阳性率分别为53.49%(46/86)、49.32%(36/73)、60.00%(18/30);涂片抗酸染色阳性率分别为24.42%(21/86)、2.74%(2/73)、20.00%(6/30);罗氏培养阳性率分别为44.19%(38/86)、4.11%(3/73)、36.67%(11/30).20份非结核患者标本,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性.结论 噬菌体生物扩增法检测结核病标本的阳性率高于涂片法和罗氏培养,该方法 敏感性高、特异性强、操作简便,对结核病临床诊断有较高的应用价值.     

重庆某二甲医院痰涂片结果与培养结果的分析

目的对痰涂片结果和培养结果之间的关系进行分析,提高痰标本合格率和培养阳性率。方法对2015年该院送检的431份痰标本作革兰染色涂片镜检,并与培养结果进行比较分析。结果 142份合格标本,培养阳性率为67.6%;145份可接受合格标本,培养阳性率49.7%;144份不合格标本培养阳性率27.8%。结论革兰染色涂片镜检合格的痰标本,病原菌检出率远高于不合格标本;痰涂片提高培养的阳性率,减少培养结果的误差。     

痰液结核杆菌的检查方法结果比较

目的：探讨不同方法结果比较痰液结核杆菌(TB)阳性率。方法：痰直接涂片和浓集涂片找抗酸杆菌；痰培养；实时动态荧光定量PCR(FQ—PCR)检测痰液TB—DNA。结果：浓集法较直接法阳性率有大幅提高，培养法阳性率较低。对50份来自临床诊断肺结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，FQ—PCR检出28份阳性，直接法检出6份阳性，浓集法检出16份阳性，培养法检出12份阳性，其中1例假阳性，其余证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论：涂片检查结核杆菌应提倡用浓集法，FQ—PCR法检测TB—DNA可列入TB实验诊断常规项目，涂片。培养，及FQ—PCR同时检测可从不同方面满足临床需要。     

LAMP法在肺结核患者痰标本中的应用评价

目的评价环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核患者痰标本中的应用。方法收集该院2016年12月至2017年4月门诊及住院诊断为肺结核且抗结核治疗涂片阳性的患者痰标本75份、涂片阴性患者痰标本72份,每份痰标本同时进行LAMP法结核分枝杆菌复合群核酸快速检测、罗氏固体(L-J)培养,分别计算LAMP法及L-J培养的阳性率。结果 75份痰涂片抗酸染色阳性标本中,LAMP法检测阳性75份,L-J培养阳性64份,LAMP法阳性检出率[(100%)75/75]显著高于L-J培养阳性检出率[(85.3%)64/75],且差异具有统计学意义(χ2=9.09,P0.05)。72份痰涂片抗酸染色阴性标本中,LAMP法检测阳性23例,L-J培养阳性12例;与痰涂片阴性标本比较,LAMP阳性检出率[31.9%(23/72)]显著高于L-J培养阳性检出率[16.7%(12/72)],且差异具有统计学意义(χ2=6.67,P0.05)。结论 LAMP法具有较高的灵敏度及特异度,对结核分枝杆菌的阳性检出率高于痰涂片和L-J培养,且LAMP法具有快速、简便、准确的特点,可用于临床上早期发现结核病患者。     

环介导等温扩增技术快速检测结核分枝杆菌核酸

摘要:目的：建立一种快速准确的检测结核分枝杆菌（MTB）核酸的环介导等温扩增（LAMP）方法。 方法：以重复插入序列IS6110为目的基因,设计LAMP引物,特异检测MTB核酸。用本法与痰涂片抗酸染色镜检法、实时荧光PCR法对100例可疑患者痰标本进行对比检查。 结果：LAMP法特异性强,仅扩增MTB复合群核酸;灵敏度高,检测限达100 fg;而实时荧光PCR检测限为1 pg。对100例疑似结核病患者痰液标本检测,涂片抗酸染色法、LAMP法、实时荧光PCR法的阳性率分别为28%、39%和38%。 结论：本研究建立的LAMP方法检测MTB核酸特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为临床快速检测MTB的新方法。     

环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核诊断中的应用研究

目的探讨环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核病的诊断中的应用。方法收集140例本院临床诊断为肺结核病或者怀疑为肺结核患者的痰液标本,分别用涂片抗酸染色法、LAMP法和改良罗氏培养法检测痰标本中结核分枝杆菌的阳性检出率、敏感性和特异性。结果 140份痰标本中涂片抗酸染色法、LAMP法和改良罗氏培养法的阳性检出率分别是25.71%(36/140)、43.57%(61/140)和41.43%(58/140)。LAMP法的阳性检出率明显高于涂片法,差异有统计学意义(P0.05)。以改良罗氏培养法为金标准,并结合临床诊断及患者使用抗结核药物的反应性综合判断,LAMP法的敏感性是87.93%(51/58),特异性是87.80%(72/82),两种方法检测结果的一致性κ=0.752,说明LAMP法在检测结核分枝杆菌方面与罗氏培养法有较好的吻合性。结论 LAMP法在检测痰标本中的结核分枝杆菌方面有着比较高的敏感性和特异性,在结核病的快速诊断上具有优势。     

分子信标荧光探针检测结核分枝杆菌的临床应用

目的:探讨分子信标荧光探针检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法:应用设置内参照的分子信标荧光探针检测178例肺结核标本,并与痰涂片和培养结果进行比较。结果:肺结核组分子信标荧光探针阳性率显著高于痰涂片和培养,检出率分别为56.2%(100/178),34.8%(62/178)、34.8%(62/178)。结论:分子信标荧光探针具有较高的灵敏度和特异度,对结核病的辅助诊断有一定的临床意义。     

噬菌体扩增技术在结核分枝杆菌检测中的应用

目的评价FASTPlaque TB结核分枝杆菌快速检测方法在结核病诊断中的应用价值。方法应用FASTPlaque TB、BACTEC-460及涂片法共同检测112份临床标本。结果31例涂片阳性、BACTEC-460阳性的标本中,FASTPlaque TB方法阳性29例（93．5％）;27例涂片阴性、BACTEC-460阳性的标本中,FASTP1aque TB方法阳性19例（70.3％）;54例涂片阴性、BACTEC-460阴性的标本中,FASTPlaque TB方法阳性14例（25．9％）。结论FASTPlaque TB方法能快速、简便地检测结核分枝杆菌,且检出率较高,可作为结核病诊断的重要方法。     

聚合酶链反应-探针杂交-酶显色用于结核分支杆菌的检测

目的　评价聚合酶链反应 探针杂交 酶显色方法 ,检测结核分支杆菌。方法　收集 131例活动性肺结核患者和 30例非结核呼吸系疾病患者的痰标本以双盲法进行痰涂片抗酸染色检查 ,结核菌培养、PCR 探针杂交 酶显色法、PCR 琼脂糖凝胶电泳技术检查对比。结果　涂片法、培养法、PCR 探针杂交 酶显色法的敏感性分别为 2 6 72 %、4 1 2 2 %、70 2 3% ,PCR 探针杂交 酶显色法的敏感性显著高于培养法和涂片法 (P <0 0 1)。PCR 探针杂交 酶显色法和PCR琼脂糖凝胶电泳法的敏感性分别为 70 2 3%、70 99% ,特异性分别为 96 6 7%、86 6 7% ,前者特异性比后者高 ,且PCR 探针杂交 酶显色法只检出结核分支杆菌和牛型分支杆菌。结论　PCR 探针杂交 酶显色技术检测结核分支杆菌灵敏度高 ,特异性好 ,简便快速 ,同时能筛检非结核分支杆菌。因此 ,该技术具有很强的临床应用价值     

离心沉淀集菌涂片法检查痰内结核分枝杆菌

目的 建立一种操作简单、阳性检出率高的痰涂片结核分枝杆菌检查方法。方法 采用离心沉淀集菌涂片技术，检测53例肺结核患者痰内结核 分枝杆菌，与漂浮集菌涂片、直接涂片法进行比较。结果 53例肺结核患者痰内结核分枝杆菌检出率改良离心沉淀集菌涂片法为62．3％，漂浮集菌涂片法为39.6%，直接涂片法为45.3%。结论 离心沉淀集菌涂片法痰内结核分枝杆菌检出率显著高于漂浮集菌涂片法和直接涂片法，值得推广应用。     

噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用

目的 探讨噬菌体生物扩增法（Phab）快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法 应用Phab、BACTEC-460检测仪及厚涂片法共同检测206例痰标本。结果 58例涂片阳性、BACTEC-460培养阳性的标本中．Phab检测阳性55例（94．8％）;47例涂片阴性、BACTEC-460、培养阳性的标本中,Phab检测阳性35例（74．4％）;101例涂片阴性、BACTEC-460培养阴性的标本中,Phab检测阳性25例（24．8％）。结论 Phab快速、简便、灵敏,有助于结核分枝杆茵的快速检测,可用于结核病的初步诊断,但测定条件的选择非常重要。     

实时荧光PCR分子信标检测耐利福平结核分枝杆菌印rpoB基因

目的 应用实时荧光PCR分子信标技术,建立快速检测临床标本中结核分枝杆菌利福平rpoB相关耐药突变点方法,探讨其缩短耐药实验报告时间的临床应用价值.方法 以分枝杆菌药物敏感性实验绝对浓度法为标准,12株非结核分枝杆菌、4株非分枝杆菌作对照,对174例结核患者临床分离株应用实时荧光PCR分子信标方法,检测利福平rpoB核心区域的耐药突变点并将结果与直接测序进行比较.结果 (1)实时荧光PCR分子信标方法:82例结核分枝杆菌利福平敏感菌株中,3例发生rpoB基因突变,特异度为96.3%;92例结核分枝杆菌利福平耐药菌株中,82例检出耐药突变,敏感度为89.1%;准确性为92.5%.(2)DNA直接测序分析:82例结核分枝杆菌利福平敏感株中,1例发生rpoB基因突变,特异度为98.8%;92例结核分枝杆菌利福平耐药菌株中,83例发生:rpoB基因突变,敏感度为90.2%;准确性为94.2%.检测174株结核分枝杆菌临床分离菌株,与实时荧光PCR分子信标方法检测一致性为98.3%(171/174).结论 实时荧光PCR分子信标方法检测耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变点可作为结核患者快速耐药检测的初筛方法之一.     

荧光定量PCR技术检测结核分支杆菌DNA的应用价值

目的评价荧光定量PCR技术检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法,对179例活动性肺结核患者晨痰、123例活动性肺结核患者外周血、34例结核性胸膜炎患者胸水、20例非结核性呼吸系统疾病患者的晨痰标本进行检测。结果179例活动性肺结核患者晨痰、123例活动性肺结核患者外周血、34例结核性胸膜炎患者胸水,涂片抗酸染色阳性率分别为20．67％（37／179）、0．00％、0．00％;细菌培养阳性率分别为41．34％（74／179）、0．00％、2．94％（1／34）;荧光定量PCR技术阳性率分别为64．25％（115／179）、38．21％（47／123）、44．12％（15／34）。3种标本荧光定量PCR技术阳性率高于抗酸染色和结核杆菌培养,经统计学处理发现,差异有统计学意义。用荧光定量PCR技术检测临床标本特异性为95．00％。结论荧光定量PCR技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性高等优点,是结核病诊断的有效方法之一。     

直接杂交法检测痰液中结核分枝杆菌

目的 建立了一种高度灵敏、特异、快速和简便的探针杂交检测技术，以解决临床上结核病快速诊断的难题。方法 采用简易的方法处理标本，以对结核分枝杆菌特异的生物素标记188bpDNA探针进行点杂交，与链霉亲合素标记的辣根过氧化酶偶联后，以化学发光自显影方式记录检测信号。结果 此法的第三性可检出200个菌，较PCRI地为高，对20种分枝杆菌和9种非分枝杆菌检测时发现只有结核分枝杆菌呈阳性，以本法检测104例临床标本。结果发现，对其中45例结核病人痰涂片阳性标本。41例结核病人痰涂片阴性标本和18例非结核标本。检测阳性率分别为100%、65.9%和0.0%。结论 本法简便，特异。     

结核分枝杆菌L型的培养及临床研究

目的探讨肺结核患者结核分支杆菌L型培养结果与临床状况的关系。方法对151例活动性肺结核、31例非活动性肺结核、27例非肺结核作痰结核分支杆菌L型培养,并分别作痰抗酸涂片、培养、PCR检测,结核分支杆菌L型培养阳性病例进行病程长短、初复治、有无空洞的比较;对70例活动性肺结核、12例非活动性肺结核作外周血结核分支杆菌L型培养。结果151例活动性肺结核、31例非活动性肺结核、27例非肺结核痰结核分支杆菌L型培养阳性分别为30例、3例、0例,其中87例抗酸染色与罗氏培养均阴性的活动性肺结核结核分支杆菌L型培养阳性12例(13.79%)。病程大于12月者明显高于小于1月者(P<0.01),复治病人明显高于初治病人(P<0.01),有空洞者明显高于无空洞者(P<0.05)。结论结核病患者L型结核菌的存在是结核病难治、复发的主要原因之一。开展痰、血等标本的结核分支杆菌L型检测,对于提高结核病诊断正确率有重要意义。