Toll样受体5激动剂CBLB502的辐射造血损伤保护作用

目的：研究CBLB502对辐射造血损伤的防护作用。方法C57BL/6J小鼠随机分为正常对照、60Co γ射线6.5Gy一次性全身照射对照和CBLB502照前30 min 0.2mg/kg皮下给药预防组,照前1 d和照后30 d定期检测外周血细胞数,照射后2和24 h取骨髓检测有核细胞数和集落形成数,竞争性移植方法观察骨髓造血细胞植入能力,流式细胞仪测定外周血中各系细胞比例。结果CBLB502能显著减轻60Co γ射线6.5 Gy照射小鼠的外周血中白细胞、红细胞及血小板数的急剧降低并加速其恢复,照后2和24 h CBLB502预防给药组小鼠骨髓各系造血祖细胞集落形成数均显著高于照射对照组（P＜0.01）,且预防给药可明显提高受照射小鼠骨髓造血细胞的植入能力。结论 CBLB502具有明显的辐射造血损伤保护作用。     

气血康口服液抗辐射的实验研究

采用内源性脾集落形成法，骨髓有核细胞计数及脾脏称重法观察了气血康口服液对辐射小鼠造血功能的影响。研究结果表明，经气血康处理的小鼠ＣＦＵ－Ｓ、骨髓有核细胞数及脾重等项指标均明显明显高于阴性对照组和阳性对照组，提示气血康口服液在辐射损伤紧急状态下，不仅可促进髓内造血细胞生成，而且对动物体内髓外造血也有显著促进作用。其抗辐射的确切机理有待于进一步研究。     

苯、X射线、环磷酰胺联合复制小鼠再障模型实验研究

目的:探讨以苯、X射线、环磷酰胺联合应用的方法建立小鼠再生障碍性贫血动物模型.方法:BALB/c小鼠,采用皮下注射苯油混合液,苯剂量为1 mL/kg,注射总剂量以玉米油补足至4 mL/kg,隔日注射,共8次.第2天X射线2.0 Gy照射后,于试验第6天环磷酰胺80 mg/kg腹腔注射.观察试验小鼠的血象、骨髓象、造血细胞内的线粒体、造血干细胞集落形成及肝脏、脾脏的病理变化;TUNEL及免疫组化法检测小鼠造血细胞凋亡以及相关调控蛋白Fas与Caspase-3的表达.结果:与对照组相比,再障模型组小鼠外周血象三系细胞均有显著降低;骨髓有核细胞数显著降低;造血干细胞集落的形成减低;同类造血细胞内线粒体数目明显减少;促红细胞生成素(EPO)含量升高;骨髓造血细胞凋亡率明显升高;肝脾出现再障的病理改变.结论:采用苯、X射线、环磷酰胺联合应用的方法建立的再生障碍性贫血小鼠模型,外周血和骨髓的病理变化持续、稳定,符合再生障碍性贫血的临床表现,方法简单易行,发生率高,适合于实验血液学研究.     

Υ射线850伦辐照后小鼠造血干细胞增殖分化的调节

本文观察850伦辐照后造血干细胞生成的恢复与调节。小鼠30天死亡79.3%。造血细胞最大的抑制:~3H-TdR掺入率8%(24h);CFU-S 3%(48h);有核细胞数3%(96h)。细胞内cAMP含量照后显著增加。~3H-TdR掺入率照后4～5天开始上升表明造血干细胞增殖活力的恢复。细胞数量和cAMP是造血干细胞增殖分化恢复的重要的调控信息。     

过量表达LMO2对成血管细胞增殖和造血分化的作用

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。收集分化0～12 d的胚胎体细胞,检测造血细胞相关基因的表达;利用EB细胞进行细胞集落形成实验及血细胞集落形成单位实验,并统计集落形成数。结果成功构建了成血管细胞特异性表达目的基因的表达载体,转染目的基因的小鼠胚胎干细胞在其分化中产生的成血管细胞可特异表达目的基因。过量表达lmo2能够促进造血相关基因的表达,所产生细胞集落数是对照组的2倍,晚期造血分化的血细胞集落形成单位总数是对照组的2.5倍,其中红系集落单位数是对照组的3倍。结论在成血管细胞中过量表达LMO2,促进其细胞增殖及其造血细胞分化。     

右归丸对骨髓抑制小鼠造血功能的影响

目的：观察右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、造血干细胞增殖能力、骨髓细胞周期和凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法：小鼠48只,随机分为正常组、模型组,右归丸低、中、高剂量组和阳性对照组,每组8只。除正常组外,余五组均予造模,连续3天给予腹腔注射环磷酰胺制备骨髓抑制模型。造模后各组应用相应药物治疗7天。用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法、造血祖细胞培养和流式细胞术（FCM）分别检测右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数、体外培养各系造血祖细胞的集落数以及骨髓细胞周期和凋亡的影响。结果：右归丸中、高剂量均能明显升高外周血红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、骨髓有核细胞（BMC）数,高剂量对血小板（PET）和白细胞（WBC）有明显升高作用。右归丸能明显提高体外培养各系造血祖细胞的集落数,以中、高剂量效果显著。右归丸低、高剂量均能促进骨髓G0／G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2／M期细胞的转化,提高G2／M期细胞比例,增殖指数（PI）明显升高。右归丸中、低剂量组的骨髓细胞凋亡比例显著下降。结论：右归丸可能通过促进G0期造血干细胞进入细胞周期,进行增殖;加速骨髓细胞修复受损的DNA,通过GI／S和S期监测点;抑制造血细胞的凋亡;调节造血细胞增殖与凋亡之间的平衡等机制,从而促进损伤骨髓造血功能恢复。     

集落刺激因子对造血的调控作用及其检测的临床意义

集落刺激因子(CSF)是指能够刺激多能造血干细胞和不同发育分化阶段的造血干细胞进行增殖、分化,并在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。CSF不仅在造血细胞的增殖和分化中起重要作用,而且也参与对成熟细胞的功能调节,促进炎症反应和抗感染免疫。CSF的研究对血液病的诊断、治疗具有重要意义。现就几个主要CSF对造血的调控作用及其检测的临床意义浅述如下。1CSF对造血的调控作用1.1粒-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种能够刺激红系、粒系、单核系、巨系及嗜酸系祖细胞增殖、分化并形成集落的多集落造血生长因子,其造血调控作用主要是可以刺激骨髓细胞生成由粒系和单核巨噬细胞组成的集落,促进中性粒细胞和单核细胞祖细胞增殖、分化、成熟。1.2粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是一种刺激粒细胞集落形成的系列特异性生长因子,对造血调控作用主要是促进粒系祖细胞的增殖和分化形成集落;诱导早期造血干/祖细胞从G0期进入G1-S期;与IL-3、GM-CSF及其他因子协同促进造血细胞的增殖与分化;诱导某些白血病细胞株分化成熟。1.3单核细胞集落刺激因子(M-CSF)又称CSF-1,由单核细胞、巨噬细胞、纤维母细胞、上皮细胞、血管内皮...     

骨髓基质细胞输注对化疗小鼠造血功能恢复的实验研究

目的以BALB/C小鼠为实验对象,探讨骨髓基质细胞输注对化疗小鼠造血功能的影响.方法BALB/C小鼠骨髓基质细胞体外扩增培养后输注给化疗后的同系小鼠,在输注后第3、7、14天进行各项指标的检测和观察.用常规方法进行外周血细胞计数;在体外骨髓细胞混合集落培养形成后计数集落形成单位;用流式细胞仪测定细胞周期,计算骨髓细胞增殖指数(PI).结果(1)骨髓基质细胞输注组外周血WBC、PT在第7天较单纯化疗组明显提高(P＜0.05);(2)骨髓细胞混合集落形成单位数在第3、7、14天显著高于单纯化疗组(P＜0.01);(3)输注组骨髓细胞增殖指数(PI)第7、14天显著高于单纯化疗组(P＜0.05).且输注了骨髓基质细胞的小鼠各项指标到第7天就已恢复至正常水平,而对照组则需14d,两组间差异具有显著性(P＜0.05).输注扩增培养的骨髓基质细胞无毒副反应.结论骨髓基质细胞输注可加快化疗小鼠造血功能的重建.     

脐血造血细胞培养的特性

目的　培养脐血中具有造血潜能的造血细胞 ,分析脐血中造血细胞的特性。方法　用密封的采血袋采集脐血 ,采用羟乙基淀粉一次沉淀法分离有核细胞 ,用半固体培养体系培养 ,7天计数红系集落形成单位 (CFU E) ,14天后计数红系爆式集落形成单位 (BFU E)、粒单系集落形成单位 (CFU GM) ,同时染色分析集落的组成成分。结果　采集 34份脐血 ,平均体积为 (99± 2 2 )ml;有核细胞数为 (0 6 4～ 2 5 9)×10 9,有核细胞回收率为 79 2 %± 13 7% ,回收的有核细胞绝对值为 (1 2 2± 0 43)× 10 9;平均每份脐血中含有BFU E(1 39± 0 75 )× 10 6,CFU GM (2 15± 1 2 2 )× 10 6。结论　脐血富含各期具有造血潜能细胞 ,每份脐血在有核细胞数和各种集落总数都可以满足成人移植的需求。     

低能量激光与集落刺激因子对人脐带血造血细胞的增殖作用

目的研究低能量激光对人脐带血造血细胞的增殖效应,并探讨其与集落刺激因子（ＣＳＦ）效应的关系。方法用铜蒸气激光照射人脐带血造血细胞,体外培养扩增细胞并计数集落细胞数。结果激光加ＣＳＦ对造血细胞粒细胞巨噬细胞集落形成单位（ＧＭＣＦＵｃ）有协同增殖作用,与单用激光照射组、ＣＳＦ刺激组及对照组相比,差异有非常显著意义（Ｐ＜００１）。将经激光照射与未照射脐血造血细胞在液体培养基中培养２周,前者活细胞数较培养前增加５５～１１０倍,后者增加１１～２７倍,再次软琼脂接种培养,仍有集落形成,生长的集落绝对数较液体培养前显著增加,而且激光照射组比未照射组更明显。结论低能量激光照射脐血细胞是体外扩增造血细胞的一种有效方法。     

蝎毒对放疗后小鼠骨髓造血功能保护作用的实验研究

目的探讨蝎毒对放疗后小鼠骨髓保护的效应及其机制。方法将小鼠分为对照、治疗和预防组,观察比较放疗后外周血WBC数、骨髓有核细胞数、脾重指数等造血功能指标。结果蝎毒多肽、蝎毒对放疗后小鼠外周血WBC均有明显促进作用,低剂量蝎毒多肽对放疗后小鼠外周血WBC及骨髓造血细胞具有明显促进作用;高剂量蝎毒多肽对放疗后小鼠外周血WBC具有明显促进作用。低剂量蝎毒对小鼠骨髓造血细胞具有明显促进作用。低剂量蝎毒多肽对小鼠外周血WBC及骨髓造血细胞促进作用最为明显。蝎毒多肽、蝎毒预防和治疗对放疗后小鼠脾重指数的恢复均有显著的促进作用。结论蝎毒多肽、蝎毒对放疗后小鼠骨髓造血功能具有保护作用。     

白血病红系、粒系造血祖细胞集落测定及血清调控作用研究

本文报告了应用我们已建立的红系造血细胞体外培养方法,并配合粒系造血祖细胞体外培养方法,观察了慢性粒细胞白血病(简称慢粒)红系和粒系造血祖细胞集落细胞的体外增殖特性、集落产率、集落细胞染色体核型变化,以及慢粒集落细胞对刺激因子反应特性。此     

胚胎干细胞来源造血细胞的细胞表型和功能分析

【目的】 分析经卵黄囊(YS)、胎肝(FL)和骨髓来源(BM)的基质细胞条件培养液(SCCM)诱导产生的胚胎干细胞(ES)来源造血细胞的细胞表型与功能差异。【方法】 制备YS-SCCM、 FL-SCCM及BM-SCCM,将3种基质细胞条件培养液分别加入ESE 14.1细胞分化培养体系培养7 d,通过对分化ESE14.1细胞造血发育表面标志FLK-1、Integrin-α4(整联蛋白-α4、Sca-1(干细胞抗原-1)、CD34的检测、体外高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)分析及体内脾集落形成单位(CFU-S)检测,评价3种基质细胞条件培养液对ESE14.1细胞体外造血发育的调控作用。【结果】 经FL-SCCM诱导的EB细胞Flk-1、Integrinα4+ 和Sca-1+ 细胞均高于YS-SCCM和BMSC-CM诱导组,分别为3.03%、2.9%和13.74%;经BMSC-CM诱导产生的CD34+ 细胞比例最高,为1.07% 。经FLSC-CM或BMSC-CM诱导产生的造血细胞其HPP-CFC产率明显高于对照组,分别为7.4个/105细胞(P < 0.01)和5.8个/105细胞(P < 0.05);经FLSC-CM或BMSC-CM诱导产生的造血细胞其CFU-S产率亦明显高于对照组,分别为8.5个/5 × 105细胞和6.75个/5 × 105细胞(P < 0.001)。【结论】 YS-SCCM、 FL-SCCM及BM-SCCM均可诱导ESE14.1向造血细胞分化,FL-SCCM和BM-SCCM造血定向诱导效率较高,所产生的细胞具备造血细胞的正常功能,FL-SCCM诱导产生的造血细胞原始程度高于BM-SCCM诱导产生的造血细胞。     

体外培养的小鼠骨髓基质细胞对血细胞集落形成的支持

为探讨骨髓基质细胞在液体条件下支持造血的能力,对小鼠骨髓有核细胞体外培养,在液体培养基中形成基质细胞贴壁层,更换培养液,再种植骨髓有核细胞。结果在贴壁的基质细胞上形成了细胞集落。按细胞形态特征分为两类:一类为基质细胞集落,仅为偶见。另一类为造血细胞集落,数量较多,并且集落通过一定的结构与贴壁的基质细胞连接。结果提示,造血细胞集落的形成,需要有与骨髓基质细胞接触的微环境,并可对基质细胞的生长发育有一定的反作用。本文提出了造血细胞集落的液体培养法。     

人参总皂苷对骨髓造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究

目的 探讨骨髓造血细胞的冷冻保存效果及人参总皂苷(TSPG)降低冷冻损伤的作用。方法 以5％二甲基亚砜(DMSO)为冷冻保护剂，采用逐步降温法将骨髓造血细胞在液氮中保存3～5个月，复苏后应用台盼蓝拒染法、集落形成试验、CD34^ 及细胞总数回收率等，测定骨髓造血细胞生物学活性的变化；将不同剂量的TSPG与复苏的骨髓造血细胞共培养，应用集落形成试验、MTT比色分析法及流式细胞术等方法检测TSPG对骨髓造血细胞冷冻损伤可恢复性的影响。结果 骨髓造血细胞在低温保存时一部分细胞会失去增殖能力，但这种损伤并不与保存时间成正比。细胞复苏后，加入合适剂量的TSPG(25μg／mL)，可明显提高冻存骨髓造血细胞的集落产率；TSPG在一定浓度范围内(25～50μg／mL)能促进冻存骨髓造血细胞的增殖；TSPG(25μg／mL)能促进冻存骨髓造血细胞进入细胞增殖周期。结论 TSPG能促进冷冻骨髓造血细胞的复苏、增殖，提高骨髓细胞冷冻损伤的可恢复性，对应用冻存骨髓造血细胞进行造血移植有一定意义。     

参芪扶正注射液对化疗后小鼠造血功能影响的实验研究

目的 探讨参芪扶正注射液对化疗后小鼠造血功能的影响.方法 用5-氟尿嘧啶（5-FU）225 mg/kg腹腔注射复制骨髓抑制动物模型,治疗组给予参芪扶正注射液5 ml/kg,对照组给予同剂量生理盐水.治疗1周后,做血细胞计数、各系造血祖细胞集落（CFU-GM、CFU-E、CFU-MK）培养和骨髓病理检查.结果 参芪扶正注射液能升高外周血细胞计数：治疗组小鼠外周血的红细胞、白细胞和血小板计数均高于对照组（P〈0.05）.促进造血祖细胞增殖：治疗组小鼠的CFU-GM、CFU-E、CFU-MK集落数均大于对照组（P〈0.05）.改善骨髓抑制：骨髓病理检查对照组出现大片空白区,造血细胞稀少,而治疗组造血组织结构较完整,造血细胞量丰富.结论 化疗后小鼠在骨髓抑制、造血功能低下时,参芪扶正注射液能通过促进骨髓各系造血祖细胞的增殖,改善骨髓造血组织增生,从而促进血细胞的生成.     

脐血造血细胞的冷冻保存方法的比较

目的 :比较程控降温和 - 70℃冰箱直接保存脐血造血细胞对细胞活性的影响及免疫磁珠分离法对细胞生物学活性的影响。方法 :用密度梯度离心法分离出脐血中单个核细胞后 ,采用联合冷冻保护剂经程控降温后存放于液氮和直接存放于 - 70℃冰箱两种方法冷冻保存一个月 ,从细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率等方面比较这两种冷冻方法的优劣。另外 ,用免疫磁珠分离法正性分选脐带血中CD34+细胞 ,流式细胞仪计数分选前后的CD34+细胞的纯度及回收率 ,并分别进行分选前后的细胞培养。结果 :细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率在冷冻的两组间差异不显著。用免疫磁珠分选后CD34+细胞纯度达 88.3% ,回收率为 4 6 .2 % ,分选后的CD34+细胞比分选后CD34 细胞的细胞活力及集落形成能力明显要高。结论 :两种方法均可对脐血造血细胞进行保存。免疫磁珠分选法能够提供高纯度的造血干细胞 ,其分选过程不会影响细胞的活力及集落形成能力 ,为CD34+细胞分选和移植的临床应用提供实验依据     

小蘖胺对小鼠升白细胞作用机理的研究

本文采用小鼠体内扩散盒及脾结节法,结合骨髓有核细胞计数,探讨了小蘖胺对小鼠骨髓白细胞系造血功能的影响.该药能显著提高小鼠骨髓有核细胞数,量效关系显著,促进骨髓造血干细胞及粒系祖细胞的集落生成率.认为其作用机理与促进骨髓造血干细胞及粒系祖细胞的增殖、分化有关.     

当归多糖对脐血造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究

目的探讨当归多糖(APS)是否具有恢复脐血造血细胞冷冻损伤的作用及与造血生长因子(HGFs)联合促进冷冻复苏后脐血单个核细胞(MNC)体外扩增的效应。方法将冷冻30d的脐血MNC复苏后,立即在常规培养体系中分别加入APS0、50、100、200、400μg/mL,或同时加入HGFs组合,培养24h或14d,采用MNC计数,台盼蓝拒染实验、MTT法、CFU-Mix集落形成实验以及流式细胞术计数CD34 细胞等方法分别观察APS促进冷冻损伤的脐血造血细胞恢复的能力以及APS联合HGFs对脐血造血细胞的扩增能力。结果冷冻复苏后加入一定质量浓度的APS可使脐血MNC数量与台盼蓝拒染率明显增加,造血细胞的增殖能力显著提高,CFU-Mix集落产率明显提高(P<0.05),且能明显提高冻存脐血MNC中CD34 细胞率(P<0.05);一定质量浓度的APS联合HGFs可显著提高冷冻复苏后的脐血MNC扩增倍数及CFU-Mix集落产率(P<0.05);其作用无明显量效关系。结论APS能提高冷冻复苏后脐血造血细胞的活力、增殖能力以及CD34 细胞率,可促进脐血造血细胞冷冻损伤的恢复;与HGFs联合可促进冷冻复苏后的脐血MNC体外扩增。     

flk-1基因在胎肝造血细胞增殖中的调控作用

[目的]探讨flk-1基因在胎肝造血细胞体外扩增中的调控作用.[方法]体外培养E14胎肝造血细胞,应用Western-Blot检测flk-1配基VEGF及其抑制剂SU5416对E14胎肝造血细胞flk-1蛋白表达水平的影响,通过细胞计数、氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验及细胞周期分析观察flk-1配基VEGF及其抑制剂SU5416对E14胎肝造血细胞增殖的影响,造血集落CFU-GM(colony-forming unit-granulocyte/macrophage粒-巨噬细胞系集落形成单位)培养检测造血祖细胞的功能状态.[结果]VEGF或VEGF加SU5416均可促进胎肝造血细胞的增殖,细胞数目分别为对照组的108%和142%,并且集落数量也显著增加,分别为对照组的159%和151%(P<0.01);单独应用SU5416使造血细胞的数目较对照组减少了8%,但集落产率与对照组无显著性差异.Western blot结果经统计学分析,S U5416组和VEGF加SU5416组flk-1蛋白表达强度分别为对照组的165%(P<0.01)和57%(P<0.05),与对照组相比有显著性差异.[结论]VEGF受体flk-1和flt-1均参与介导VEGF对胎肝造血细胞增殖的调控作用.SU5416阻断flk-1信号转导可上调flk-1的蛋白表达,flt-1活化可下调flk-1的蛋白表达.