原发性胃癌p16INK4a基因缺失和突变的研究

目的探讨p16INK4a基因缺失和突变在胃癌发病机制中所起的作用。方法采用多重PCR、PCR-SSCP和DNA测序对62例胃癌、癌旁组织及10例正常胃黏膜标本中p16INK4a基因纯合性缺失和突变进行检测。结果62例胃癌中发现p16INK4a基因第一外显子和第三外显子各有2例纯合性缺失,缺失率6.5%(4/62),PCR-SS-CP和DNA测序发现1例p16INK4a基因第一内含子区碱基插入,突变率1.6%(1/62),癌旁和正常胃黏膜均未发现缺失和突变。结论在原发性胃癌中,p16INK4a基因纯合性缺失率很低、突变罕见。     

葡萄胎中CDKN2A基因纯合性缺失和突变的研究

目的：探讨细胞周期依赖性激酶抑制基因（CDKN2A基因，包括p16^INK4a和p14^ARF基因）外显子1、2的纯合性缺失和突变情况与葡萄胎发生的关系。方法：对38例葡萄胎和30例早孕绒毛的新鲜组织标本进行基因组DNA抽提、PCR扩增．而后应用变性高效液相色谱分析（DHPLC）的方法对扩增产物进行突变检测。结果：1）38例葡萄胎组织样本中．5例发生p16^INK4a基因外显子1的纯合性缺失．其纯合性缺失率为13．16％；而30例早孕绒毛组织标本中．未发现p16^INK4a基因外显子1的纯合性缺失。p16^INK4a外显子1的纯合性缺失率在早孕绒毛组织和葡萄胎组织中差异具有统计学意义（P=0．036）；2）38例葡萄胎组织样本和30例早孕绒毛组织样本中，无一例发生p14^ARF基因外显子1和p16^INK4a外显子2的纯合性缺失：3）经DHPLC检测，38例葡萄胎组织样本和30例早孕绒毛组织样本中，p16^INK4a基因外显子1、2和p14^ARF基因外显子1扩增产物的所有谱图均为单一峰型，未检测到任何位点的突变发生。结论：p16^INK4a基因外显子1的纯合性缺失与葡萄胎的发生具有一定的相关性；在葡萄胎中，CDKN2A基因的遗传变异主要是由于此基因的纯合性缺失造成的，突变可能不是此基因变异的主要形式。     

人非小细胞肺癌中FHIT等位基因缺失和突变的研究

目的　探讨FHIT等位基因缺失、突变在肺癌发生、发展中的作用。方法　应用PCR SSCP和DNA序列分析方法对 3 5例人非小细胞肺癌和 4个肺癌细胞株中FHIT基因的 4个外显子 (外显子 3、4、5、8)和微卫星D3S13 0 0、D3S13 12、D3S13 13进行研究 ,并以远癌肺组织和 10例肺良性病变组织做对照。结果　在 3 5例肺癌中 ,2 2例肺癌发生了一个或两个以上的FHIT等位基因缺失 ,缺失率为 62 .86% ( 2 2 /3 5 )。在鳞癌中 ,FHIT等位基因缺失率 ( 88.2 4% ,15 /17)明显高于腺癌 ( 3 8.89% ,7/18) (P <0 .0 1) ;在吸烟患者中 ( 76.19% ,16/2 1)亦明显高于不吸烟患者 ( 4 2 .86% ,6/14 ) (P <0 .0 5 )。而FHIT等位基因缺失与肺癌的细胞分化程度、P TNM分期、原发肿瘤大小、部位、患者性别、年龄及有无转移均无明显关系 (P >0 .0 5 )。Lewis肺癌、A5 49细胞株亦有FHIT基因部分缺失。 4例肺癌组织具有微卫星灶D3S13 12点突变 ,经DNA序列分析显示均为D3S13 12微卫星灶基因的 87位点密码子发生了CT点突变。结论　FHIT基因异常主要以等位基因的缺失为主 ,而点突变发生率较低。FHIT等位基因缺失主要发生在肺鳞癌和吸烟患者中 ,且FHIT基因可能为烟草致肺癌的靶基因 ,其等位基因缺失可能是肺癌的早期分子事件。     

非小细胞肺癌不同组织标本中P16基因的PCR-SSCP分析

目的 :研究非小细胞肺癌 (NSCLC)不同来源与病理分期类型的组织标本中P16基因表达的相互关系。方法 :应用PCR -SSCP方法 ,检测 2 8例手术标本、2 1例支气管镜活检及 2 7例恶性胸水NSCLC患者中P16基因的表达。结果 :2 8例Ⅰ期手术标本中 8例P16基因发生改变 (2 8 6 % ) ,其中 5例纯合性缺失 ,3例点突变 ;2 1例支气管镜活检中 ,8例P16基因发生改变 (38 1% ) ,其中 3例纯合性缺失 ,5例点突变 ;2 7例恶性胸水标本中 ,17例P16基因发生改变 (6 3 0 % ) ,其中 16例纯合性缺失 ,1例点突变。恶性胸水患者的P16基因改变率与Ⅰ期手术标本、支气管镜活检相比较 ,有显著性差异 (分别为P <0 0 1、P<0 0 0 5 )。在 76例NSCLC中 ,Ⅰ期患者的P16基因改变率为 30 0 % (9/ 30 ) ,Ⅱ期患者为 5 0 % (2 / 4 ) ,Ⅲ期患者为 5 1 6 % (16 /31) ,Ⅳ期患者为 5 4 5 % (6 / 11)。Ⅰ期患者的P16基因改变率与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者相比较 ,均有显著性差异 (P <0 0 5 )。腺癌患者的P16基因改变率为 4 5 0 % (18/ 4 0 ) ,鳞癌患者为 4 2 3% (11/ 2 6 ) ,而腺鳞癌混合型为 4 0 0 % (4/ 10 ) ,经统计学分析 ,三者无显著性差异。而鳞癌患者的P16基因突变率为 2 3 1% (6 / 2 6 ) ,腺癌患者为 7 5 % (3/ 4 0 ) ,二者有显著性差异 (P <0 0     

不对称PCR-SSCP检测鼻咽癌p130基因研究

目的:探讨p130基因改变与鼻咽癌发生、发展的关系。方法:提取鼻咽癌组织DNA,用不对称单链构象多态性(SSCP)PCR技术,分别对20例散发性鼻咽癌患者及3个鼻咽癌高发家系进行性p130基因第11、17和19外显子纯合性缺失及突变研究,以20例慢性鼻咽炎患者的鼻咽部组织做为对照。结果:散发性鼻咽癌患者有相同的p130 E11、E17纯合性缺失2例,未发现p130E19缺失;对照组中检出1例p130E11、E17纯合性缺失,也无p130E19缺失;鼻咽癌家系未发现缺失和突变。结论:鼻咽癌中p130 E11、E17纯合性缺失可能涉及到p130/Rb2基因的改变,在鼻咽癌的发生发展中起一定的作用,而且p130/Rb2基因作为一种抑癌基因可能成为鼻咽癌新的基因治疗手段的候选基因。     

云锡矿工肺癌中FHIT基因外显子缺失及其蛋白表达

背景与目的:云南锡矿工人肺癌发生率极高.已有研究表明,脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad,FHIT)异常与肺癌的发生、发展密切相关.本研究旨在探讨云锡矿工肺癌中FHIT外显子3、4、5、8缺失及其蛋白表达异常.方法:采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测30例云锡矿工肺癌组织、云锡矿工肺癌细胞株YTMCC及22例其他地区非矿工肺癌组织中FHIT外显子3、4、5、8的缺失.用免疫组化法检测90例人肺癌组织FHIT蛋白表达,并对43例云锡矿粉诱发的不同阶段F344大鼠肺癌肺组织进行FHIT蛋白检测.结果:FHIT基因异常在YTMLC细胞表现为FHIT基因3和8两个外显子的缺失,而矿工和非矿工肺癌组织可出现3、4、5、8中1个或几个外显子的杂合性缺失,云锡矿工肺鳞癌中FHIT基因外显子缺失及蛋白失表达率分别为68.2%及70.6%,矿工肺鳞癌和腺癌、非矿工肺鳞癌和腺癌FHIT基因杂合性缺失与正常肺组织相比差异均有显著性(P＜0.01).矿粉诱发F344大鼠肺癌变早期即有FHIT的失表达,在8例鳞状上皮非典型增生、原位癌及早期肺鳞癌FHIT蛋白失表达率达100%.结论:在矿工及非矿工肺癌中,FHIT基因外显子缺失及其蛋白表达异常均常见.肺癌早期及癌前病变即有很高的FHIT失表达率,对FHIT检测分析有可能作为肺癌早期筛查的指标之一.     

非小细胞肺癌分子病理学的研究

目的　探讨上海地区人肺癌发生及发展过程中的分子病理学模式。方法　采用DNAslotblot、PCR、PCR SSCP等方法 ,先后检测 2 0 0例NSCLC组织DNA标本中C erbB2、C myc、EGFR癌基因扩增 ,抑癌基因中p5 3基因外显子 5～ 8点突变、p15基因的纯合性丢失 ,以及某些与肺癌相关的染色体 3p及 17p13 .3位点的杂合性丢失 (LOH)。结果　多种癌基因共扩增率与肺癌TNM分期呈正相关 (P <0 .0 0 1)。p5 3基因外显子 5～8点突变率为 49.2 % ( 3 1/63 ) ,其中以外显子 8为主。肺癌组织中p15基因出现高频率纯合性丢失 ,并与肺癌TNM分期密切相关 (P <0 .0 0 5 )。 17p13 .3杂合性丢失率为 40 % ( 8/2 0 ) ,并与p5 3基因的点突变相关联。 3p14及 3p2 5位点处的杂合性总丢失率可高达 66.7% ( 10 8/162 ) ,其中肺腺癌中 3p14及 3p2 5二位点的共丢失率明显高于鳞癌 (P <0 .0 5 )。结论　根据上述结果 ,提出上海市区居民的非小细胞肺癌分子病理学的初步模式 :癌前期病变时已可出现 3p丢失 ,原位癌时以p5 3基因突变及 17p13 .3丢失为主 ,浸润癌及向转移性癌过渡时有多种癌基因C myc、C erbB2及EGFR癌基因共扩增 ,并出现p15基因纯合性丢失。     

宫颈癌P27kip1基因突变、缺失及表达

目的　探讨p2 7蛋白在宫颈癌中表达的意义及p2 7基因缺失、突变在宫颈癌发生中的作用。方法　采用链霉菌抗生素蛋白 -过氧化酶 (S -P)免疫组化法及聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)分析法分别检测宫颈癌中p2 7基因的蛋白表达及其两个外显子的缺失、突变。结果　p2 7蛋白表达 ,18例正常宫颈上皮组织均为高表达 ,48例宫颈癌组织中 ,19% ( 9/48)高表达 ,81% ( 39/48)低表达 ,宫颈癌中高表达率明显低于正常宫颈组织 (P <0 .0 5 ) ;宫颈癌的分化程度中 ,Ⅰ级高表达 5 0 % ( 5 /10 )明显高于Ⅱ级 13% ( 3/2 4)及Ⅲ级 7% ( 1/14 ) (P <0 .0 5 ) ;伴有淋巴结转移的高表达4% ( 1/2 3) ,不伴淋巴结转移的高表达 32 % ( 8/2 5 ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;p2 7基因缺失、突变分析 ,17例宫颈癌及 8例正常宫颈组织均未发现一例外显子Ⅰa、Ⅰb及外显子Ⅱ缺失、突变。结论　p2 7与宫颈癌的发生发展、分化程度及淋巴结转移有关 ;宫颈癌中未发现p2 7基因缺失与突变 ;对p2 7蛋白进行检测为诊断宫颈癌及临床综合治疗提供参考。     

胃肠道间质瘤c-kit基因突变的研究

目的　探讨c kit基因在胃肠道间质瘤 (GIST)中的突变状况。方法　用PCR扩增和基因测序的方法 ,检测 5 2例GIST及 2 8例对照肿瘤c kit基因第 11号外显子序列 ,其中 30例GIST另检测了c kit基因第 9和第 13号外显子序列。结果　 2 5例恶性GIST中 ,14例有c kit基因 11号外显子突变 (5 6 .0 % ) ;2 7例良性及交界性GIST中 ,仅 2例有突变 (7.4 % )。良恶性GIST中 ,c kit基因突变的差异有显著性 (χ2 =14 .39,P <0 .0 1)。 5 2例GIST中 ,14例为杂合性突变 ,2例为纯合性突变。突变方式有点突变和片段的缺失或重复等 ,缺失和重复的片段为 3～ 4 8bp不等 ,碱基数是 3的倍数。原发及复发组织突变方式相同 ,突变病例瘤旁正常组织及伴发的腺癌无突变。对照肿瘤无c kit基因突变。GIST中c kit基因 11号外显子的突变位点多不固定 ,但有集中趋势 ,点突变和片段的缺失集中在5 5 0～ 5 70密码子 ,片段的重复集中在 5 70～ 5 85密码子。结论　 11号外显子的突变是恶性GIST的分子生物学机制之一 ,可作为辅助判断GIST良恶性的参考指标。c kit基因突变提示GIST是不同于消化道平滑肌瘤及神经鞘瘤的独立疾病。     

星形细胞瘤P^16基因结构改变的研究

自的检测星形细胞瘤P16基因纯合子缺失和第2外显子点突变情况,探讨P16基因的失活方式及其与星形细胞瘤发生、发展的关系。方法应用多重比较聚合酶接式反应（PCR）技术和银染PCR一单链构象多态性（SSCP）分析的方法对45例星形细胞瘤标本和5例正常脑组织标本进行了检测．结果11例多形性胶质母细胞瘤（WHOgradeⅣ）5例发生了P16基因纯合子缺失,缺失率为45．5％;20例间变型星形细胞瘤（WHOgradeⅢ）P16基因纯合子缺失6例,缺失率为30％;14例低级别星形细胞瘤（WHOgradeⅠ～Ⅱ）和5例正常脑组织标本未发现P16基因纯合子缺失。银染PCRSSCP分析无P16基因纯合子缺失的肿瘤标本仅发现1例多形性胶质母细胞瘤出现了第2外显子点突变。结论1．约合子缺失是P16基因在星形细胞瘤中较常见的失活方式;2．P16基因的缺失失活可能与星形细胞瘤的恶性发展及演化有关。     

Peutz-Jeghers综合征脆性组氨酸三连体基因突变与癌变的关系

背景与目的：Peutz-Jeghers综合征（Peutz-Jeghers syndrome,PJS）是一种常染色体显性遗传性疾病。脆性组氨酸三连体(fragile histidine triad,FHIT)基因是定位于3p14.2脆性位点区域的重要抑癌基因。我们以往的研究结果认为PJS患者在3p14.2区域可能存在易感基因。本文旨在明确PJS患者FHIT基因突变与癌变的关系和FHIT基因的改变及规律。方法：应用变性高效液相色谱（DHPLC）分析、聚合酶链反应-单链构象多肽分析技术（PCR-SSCP）和DNA测序方法,对6个PJS家系中的15个患者及其20例正常家族成员的FHIT基因进行了研究。结果：在6个家系中,有1位患者的FHIT基因第159位核苷酸由G→T,相应的第54位密码子编码的氨基酸由谷氨酸变成终止密码子;在第62位密码子处存在碱基G插入,使读码框架发生移位,在第111位密码子处提前出现终止密码子;在2例癌变患者的息肉标本DNA和癌标本DNA中检测到FHIT基因第8外显子的纯合性缺失;在3个散发的PJS患者中发现,患者与其母亲在第8外显子,有相同的SSCP带型和DHPLC峰型,DNA测序结果显示,在第98位密码子处发生同义突变,由CAT→CAC,相应编码的氨基酸未发生改变,均为苏氨酸。另外,有7例患者和2例正常人在FHIT基因的第6内含子5′端第42位核苷酸位点发生由A→G的点突变。结论：FHIT基因在PJS患者中存在点突变,突变频率较低,在癌组织中存在缺失,这提示FHIT基因突变可能参与了PJS发病过程,而FHIT基因缺失可能与癌变有关。     

皮肤鳞状细胞癌FHIT基因的异常改变及意义

目的检测脆性组氨酸三联体基因在皮肤SCC中外显子5和8的缺失和突变情况,分析该异常在皮肤SCC发生中的作用机制。方法PCR-SSCP方法检测皮肤SCC患者皮损FHIT基因外显子5和8的缺失和突变状况。结果10例CSCC组织中,E5有3例缺失,E8有8例缺失,其中有2例同时缺失E5和E8,对扩出的外显子进行SSCP分析没有检测到其突变。结论皮肤SCC中存在外显子5和8的缺失异常,没有发现其突变,这种异常与该肿瘤的发生可能有关,其具体的发生机制需做更进一步的探讨。     

原发性肝细胞癌组织中乙肝病毒整合与p53基因突变关系研究

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法检测１５例原发性肝细胞癌及癌旁组织乙肝病毒（ＨＢＶ）存在状态，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（Ｐｏｌｙ－ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ－ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）银染技术研究其ｐ５３基因突变。结果癌组织中１３例（８６．７％）有ＨＢＶＤＮＡ整合，同时３例伴游离ＨＢＶＤＮＡ；癌旁４例（２６．７％）有ＨＢＶＤＮＡ整合，而游离的ＨＢＶＤＮＡ却有６例。癌组织中ｐ５３基因变异８例（５３．３％），１例位于第５外显子，各有２例位于第６、第７外显子，３例位于第８外显子，癌旁组织未见ｐ５３基因异常，ｐ５３基因异常的癌组织中均有ＨＢＶＤＮＡ整合。研究结果表明，ＨＢＶＤＮＡ整合与ｐ５３基因突变密切相关，ＨＢＶＤＮＡ可能通过整合基因组后导致抑癌基因突变失去抑癌作用而引发肝癌。     

乳腺癌中P16基因缺失与突变的研究

背景与目的:了解乳腺癌与p16基因的关系.材料与方法:采用PCR和DNA测序方法,对33例乳腺癌患者肿瘤组织标本的p16基因进行检测,研究p16基因的缺失和突变情况.结果:所有标本均未检出纯合缺失,10例标本进行了外显子2的序列测定,也未发现点突变.结论:p166基因的纯合缺失和点突变可能与乳腺癌的发生无关.     

结肠癌p16基因缺失与突变的研究

目的 :探讨p16抑癌基因外显子 2缺失、突变与结肠癌发生、发展的关系。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)、聚合酶链反应—单链构象多态性 (PCR SSCP)分析方法检测结肠癌中p16基因外显子 2的缺失、突变。结果 :30例结肠癌样本中 ,高分化及低分化腺癌各 1例PCR扩增无扩增产物 ,可能为p16基因缺失 ;其余 2 8例结肠癌、正常组织均有产物出现。SSCP分析 ,30例结肠癌中未见异常泳动带 ,无p16基因突变。结论 :p16基因外显子 2缺失可能很少参与结肠癌的发生发展 ;而p16基因突变可能与结肠癌发生无关。     

Alterations of CDKN2(p16/MTS1) exon 2 in human hepatocellular carcinoma

To determine the state of CDKN2(p16/MTS1) gene in human hepatocellular carcinoma (HCC), the polymerase chain reaction (PCR), dot blot hybridization, PCR-single-strand conformation polymorphism (SSCP) and DNA sequencing techniques were applied to investigate the homozygous deletions and intragenic mutations of CDKN2 exon 2 in tumor and non-tumor liver tissues from 24 patients with HCCs. Alterations of CDKN2 exon 2 were found in 10 (2 homozygous deletions and 8 intragenic mutations) of the 24 tumor samples (41.7%), no alteration was found in any of the non-tumor liver tissues. All of the intragenic mutations were located at codon 81 of CDKN2 with GC bases deletions confirmed by DNA sequencing. A different sequence at codon 53-54 (C-G rather than G-C) was also found in all of the liver and tumor tissues. Our study indicates that alterations of CDKN2 gene is not a rare phenomenon in HCC, however, it might play an important role in the development of HCC and codon 81 might be a mutational hotspot of CDKN2 gene in HCC.     

PTEN基因在子宫内膜癌中的突变表达及其临床意义

目的:探讨子宫内膜癌组织中PTEN抑癌基因突变、蛋白表达异常及其与子宫内膜癌发生发展的关系。方法:采用聚合酶链反应—单链构象多态性分析方法和DNA测序技术,检测52例子宫内膜癌组织中PTEN基因突变高发区外显子5、8的突变情况,同时应用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶免疫组织化学方法检测PTEN蛋白的表达。结果:1)52例组织中PTEN外显子5突变率为17.31%,外显子8突变率为7.69%,总突变率为25.00%。统计分析表明,PTEN基因突变与子宫内膜癌的组织学分级、组织病理类型和肌层浸润深度密切相关(P<0.05)。2)52例组织中PTEN蛋白表达缺失率为59.62%,蛋白表达缺失率与组织学分级和组织学分类密切相关(P<0.05)。3)52例中21例PTEN蛋白表达阳性,31例表达阴性,表达缺失组织中13例发生PTEN基因突变。结论:1)PTEN蛋白表达异常与PTEN基因突变有关,基因突变是基因失活的重要机制之一。2)PTEN蛋白表达缺失、PTEN基因突变与子宫内膜癌的发生和发展密切相关。     

肺癌组织细胞FHIT 基因启动子甲基化和转录表达

 目的 探讨FHIT（fragile histidine triad，脆性组氨酸三联体）基因表达水平及其启动子CpG岛甲基化状态与肺癌发生发展的关系。方法 用实时定量PCR检测FHIT mRNA在肺癌组织、肺癌旁组织与去甲基化剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-2’-deoxycytidine、5-Aza—CdR）处理前后A549细胞株中的表达，用甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测FHIT启动子CpG岛甲基化状态。结果 FHIT mRNA在肺癌旁组织中全部表达，在肺癌组织中表达缺失率为48．89％（22／45），且表达量低于正常肺组织（t=-15．851，P〈0．001），但在不同年龄和性别、肿瘤大小、恶性程度、肿瘤分类的差异无显著性；FHIT基因启动子在肺癌组织中发生甲基化的频率为40％（18／45）、在癌旁组织中频率8．7％（2／23）（X^2=7．184，P〈0．01），18份启动子区甲基化的肺癌标本中，10份同时伴有mRNA表达缺失。结论 在肺癌组织中，FHIT基因启动子甲基化频率明显升高，其表达缺失或下调，提示FHIT启动子甲基化可在肺癌发生和发展中起一定作用。     

Primary malignant lymphoma of the brain: frequent abnormalities and inactivation of p14 tumor suppressor gene

Ten primary central nervous system lymphomas (PCNSL, brain lymphomas) were examined for p14 gene exon 1beta deletion, mutation and methylation by Southern blot analysis, nucleotide analysis of polymerase chain reaction clones and Southern blot-based methylation assay. In Southern blot analysis, from the signal densities of the hybridized bands and their similarities to those of exons 2 and 3 in our previous quantitative study, we found that exon 1beta was homozygously deleted in four cases, hemizygously deleted in five cases and not deleted in one case. Thus, the same deletion patterns covered the entire p14 gene for all cases except for one case, which suggested the hemizygous deletion of exons 1beta and 2 and homozygous deletion of exon 3. In addition, although exon 1beta mutation is rare in various tumors, we detected a missense mutation (L50R) in one case with a hemizygous deletion. Methylation of the 5'CpG island of the p14 gene was not suggested for any case without homozygous deletion. Our observation of frequent p14 gene abnormalities (90%) and inactivation (40-60%) was in striking contrast to the same pathological subtype of systemic lymphoma in which p14 gene abnormalities and inactivation were infrequent, suggesting a difference in carcinogenesis between PCNSL and systemic lymphoma.