一种快速微量外周血基因组DNA的提取方法

目的建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法.方法采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核,用氯仿:异戊醇(24:1)直接提取基因组DNA.结果该方法提取外周血基因组DNA的纯度高A260 nm/A280 nm=(1.87±0.11),提取效率每毫升外周血可得DNA(31±3.12)μg.结论该法简便、快速、有效,适应于批量临床标本的处理.     

经典酚/氯仿抽提法和纯化试剂盒法提取全血基因组DNA的比较

目的 比较经典酚/氯仿法和纯化试剂盒法抽提全血基因组DNA的差异.方法 分别对两种方法抽提的全血DNA产物进行紫外分光光度仪、琼脂糖凝胶电泳和体外聚合酶链锁反应（PCR）扩增.结果 两种方法DNA的提取效率相似,TaKaBa试剂盒法提取的纯度[光密度（OD）260nm/280nm]较常规酚/氯仿法明显提高.结论 TaKaBa试剂盒法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备.     

人非抗凝血块中基因组DNA提取不同方法的比较

目的:比较三种不同方法提取人非抗凝血块基因组DNA的效果差异。方法:分别采用酚/氯仿法,天根试剂盒,Invitrigen purelinkTM试剂盒提取冻存时间较长的非抗凝血块基因组DNA,测定浓度、OD260/280值,琼脂糖凝胶电泳检测提取的DNA浓度和纯度,测定PCR产物灰度值。结果:三种方法都可以提取出基因组DNA,测定DNA浓度分别为:(35.56±15.27)ng/μL,(45.13±16.54)ng/μL,(57.93±14.5)ng/μL,组间存在统计学差异(P<0.01),A260/A280值分别为:1.46±0.19,1.49±0.16,1.519±0.23,三组间比较差异无统计学意义(P>0.05);三种方法提取的基因组DNA都能通过PCR扩增出目的条带,PCR产物电泳灰度值结果分别为:75.421±3.435,149.32±6.875和229.52±19.55,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:三种不同方法都能提取出冻存时间较长的非抗凝血块基因组DNA,但Invitrigen purelinkTM试剂盒法效果最好。     

鼠麴草基因组DNA的提取方法及随机扩增多态性DNA分析

目的以鼠麴草的叶为材料,研究鼠麴草DNA的提取方法及对其进行随机扩增多态性DNA（RAPD）的分析。方法采用略改进的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、高盐低pH法、木本法和十二烷基硫酸钠（SDS）法分别提取鼠麴草叶的基因组DNA。通过RAPD分析所提取的DNA,比较所用的提取方法。结果CTAB法得到DNA的A260/A280为1.937,浓度为992.25μg/ml,优于其他3种方法。结论CTAB法是4种方法中最佳的方法。     

一种从唾液中快速提取基因组DNA的方法

目的 探索一种快速、有效且对人体无创伤的基因组DNA提取方法.方法 比较碘化钾法和口腔拭子基因组DNA提取试剂盒法对新鲜和室温放置1周的唾液标本的基因组DNA提取和TP53、PRB-3基因PCR扩增效果.同时采集99名健康儿童和成人的唾液标本验证碘化钾法提取唾液基因组DNA的稳定性.结果 两种DNA提取方法都能从新鲜唾液标本中获得高质量的基因组DNA,其中碘化钾法的得率和D260/D280分别为(1.91±0.15) μg和1.99±0.05,试剂盒法分别为(2.64±0.34) μg和1.81±0.02.对于室温放置1周的唾液标本,两种提取方法获得的DNA虽然降解明显,但是对TP53和PRB-3基因都能扩增正确大小的目的片段.碘化钾法提取的99名健康儿童和成人的唾液基因组DNA虽然个体差异明显[得率为(1.89±0.46) μg],但是DNA质量稳定可靠(D260/D280为1.96±0.10).结论 碘化钾法提取唾液基因组DNA不仅廉价、高效,而且对人体无创伤,非常适合大范围分子流行病学研究.     

天麻DNA的快速提取方法

目的建立天麻基因组DNA快速提取方法.方法CTAB 酚/氯仿法加以改良提取DNA.结果本方法提取的DNA纯度高(A260/A280》1.8),耗时短(2～3h),分子大小约为50kb,适用于随机扩增多态性DNA(RAPD)分析.结论本方法提取DNA纯度高,耗时短,成本低,提取的DNA适宜RAPD分析.     

多重引物等位特异PCR法快速检测Apo E基因型的研究

目的 建立多重引物等位特异PCR方法结合内参照基因对Apo E基因型进行分析,并与PCR-RFLP法和直接测序结果进行比较.方法 以基因组DNA为模板,用多重引物等位特异PCR法、PCR-RFLP检测了158例体检者的APO E基因型,典型基因型用直接测序法检测并通过Gene Bank对比.结果 共检测出5种常见的基因型:ε2/2(0%),ε3/3(77.2%),ε4/4(0.6%),ε3/2(13.3%),ε4/3(7.0%),ε4/2(1.9%),两种方法结果一致,测序结果与Gene Bank对比一致.结论 多重ASP-PCR检测ApoE基因型具有快速简便、准确可靠和经济、适用的特点,有一定的推广价值.     

煮沸裂解法快速提取大鲵DNA

目的建立大鲵基因组DNA快速简便高效的提取方法。方法借鉴煮沸裂解法制备质粒DNA方法,改进后用于提取大鲵基因组DNA。结果本方法提取DNA纯度高（A260/A28介于1.7~2.1之间）,耗时短（2h）,毒性小,分子大小约为23kb,适用于PCR扩增及后续分析。结论本方法提取基因组DNA纯度高、耗时短、提取所用试剂毒性小、成本低,值得在大鲵基因组DNA提取中使用,也可为其他动物的相关研究提供参考。     

一种快速获得Vav1基因敲除稳定细胞系的方法

目的建立一种快速获得Vav1基因敲除稳定细胞系的方法。方法构建针对小鼠Vav1基因的特异性打靶载体,利用脂质体转染法转染B16小鼠黑色素瘤细胞,使用流式细胞仪对GFP阳性单细胞进行分选,对得到的GFP阳性单克隆细胞使用直接裂解法获取基因组DNA,将其用于荧光PCR,产物通过毛细管电泳和分析后即可快速获知其基因型。结果使用以上方法在短时间内得到了大量GFP阳性单克隆细胞,从中随机挑选16个,通过荧光PCR检测其基因型,结果表明敲除效率为87.5%;通过测序对部分荧光PCR结果进行验证,发现其基因型结果完全正确。结论将CRISPR/Cas9基因编辑系统、流式细胞仪单克隆分选、荧光PCR和大批量DNA样本处理技术结合,可以短时间内在B16小鼠黑色素瘤细胞中获得大量Vav1基因敲除稳定单克隆细胞。     

盐析法快速提取口腔拭子DNA

目的建立盐析法快速从口腔拭子中提取基因组DNA的方法。方法首先以细胞裂解液和蛋白酶K消化口腔上皮细胞,然后用5 mol/L NaCl沉淀蛋白质,用异丙醇沉淀DNA,最后用70%乙醇洗涤得到的DNA并将其溶于TE(10mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,pH 8.0)中。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对TP53基因的rs1042522和CHRNA3基因的rs12910984位点进行分型。对不同基因型的样本测序验证。结果单支口腔拭子提取得到的DNA量在0.68～2.56μg之间,D260/D280比值在1.77～1.94之间。经PCR扩增和酶切消化,10个样本的两个单核苷酸多态性都得到了清楚分型。酶切结果与测序结果吻合。结论本实验所建立的盐析法可以快速、简便、经济地从口腔拭子得到高质量的基因组DNA。