免疫电镜技术在肾活检中的应用

肾活检标本中 ,多数是免疫复合物介导的肾小球肾炎 ,通过免疫病理学方法检测肾小球内的免疫沉积物的性质和分布 ,对于最终的病理诊断至关重要。免疫电镜检查对肾小球炎的病理诊断虽然不是常规方法 ,但为了精确分析沉积于肾小球的抗原抗体复合物 ,免疫电镜仍为行之有效的手段。本文探讨了肾活检标本的低温包埋及常规树脂包埋的胶体金标记的透射电镜方法。材料和方法选取膜性肾病及 Ig A肾病患者肾活检组织标本各 2例 ,经固定 ( 4 %多聚甲醛加 0 .1 %戊二醛混合固定液于 4℃固定 2 h) ,蔗糖冲洗液洗后 ,0 .5 M氯化铵溶液封闭游离醛基 4℃ 30…     

肾组织电镜包埋后银染色技术

银染色是肾脏组织学诊断的重要特殊染色技术,已广泛应用于肾脏疾病光镜水平鉴别诊断,然而电镜肾组织银染色技术的报道甚少,尤其是包埋后银染色技术国内还未见记载。我们参照国外的方法,开展电镜包埋后银染色技术获得满意结果。1 材料和方法1.1 取材人肾活检组织切成1mm~3大小,3.75%戊二醛4℃固定,0.1mol·L~(-1)pH7.4磷酸缓冲液漂洗3次,2%锇酸与3%亚     

石蜡包埋肾活检组织改作电镜样品的快速制备方法

电镜检查在肾小球疾病的诊断中起着十分重要的作用,但在工作中常因电镜样品没有肾小球,而放弃最终的诊断,因此利用石蜡包埋的肾穿组织转制电镜样品有着极高的临床诊断意义.目前报道的石蜡包埋组织转制电镜样品的方法[1-3],存在着步骤繁琐、操作性差或不适合肾穿标本等缺点.为解决上述问题,我们结合肾活检超微病理观察要求,摸索了一种省略锇酸后固定的快速石蜡包埋组织改制电镜样品的方法.     

眼组织的透射电镜制样方法

介绍一种眼组织透射电子显微镜标本制备方法。组织先用４％多聚甲醛－２．５％戊二醛混合固定液预固定,１％四氧化锇固定液后固定,丙酮逐级脱水,延长Ｅｐｏｎ８１２包埋液的浸透时间并包埋,用玻璃刀或钻石刀作超薄切片,醋酸主枸橼酸铅双重染色,Ｈ６００－Ⅳ型透射电子显微镜观察。此方法的优点在于眼组织各层超微结构保存良好,没有损伤及变性,我们对该方法的操作要点作了讨论。     

一种显示肾组织结构的新染色法——酸性复红银染法

对肾小球和其他肾脏疾病的诊断,主要依赖于对活检标本的光镜、电镜观察,或利用免疫细胞化学技术进行诊断,但电镜及免疫组化方法并非在所有病理实验室都可施行,大部分诊断仍需依赖常规福尔马林固定、石蜡包埋组织进行普通染色和一系列特殊染色.如过碘酸雪夫氏反应,Masson染色法、地衣红弹性蛋白染色和银染法等.许多肾小球的异常取决于光镜的鉴别,因此,肾组织各种结构的清晰显示与分辨至关重要,我们将常规染色与一些特殊染色相结合,建立一种显示肾组织各种结构的染色方法.     

免疫胶体金在标记超薄切片中抗原的几点体会

金标法是利用胶体金在碱性环境中带负电的性质 ,使其与抗体相吸引 ,从而将抗体标记。我们在使用免疫胶体金标记超薄切片抗原的实验中深深地体会到 ,要提高标记阳性的成功率 ,某些因素将在实验中起到很重要的作用。1、材料和方法1 .1材料　 2 0例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为 Ig A肾病的肾活检组织的环氧树脂包埋块。1 .2方法　取肾活检组织 ,经 0 .0 5 %戊二醛 ,1 %多聚甲醛 (二甲砷酸钠缓冲液配制 )固定 3- 4 h,1 % Os O4后固定 2 h,梯度丙酮脱水 ,Epon81 2包埋 ,6 0℃聚合 1 2 h,制备超薄切片 ( 5 0 - 70 nm) ,粘贴于带有 formar膜的…     

透射电镜EMTP组织处理仪制样方法

对透射电镜制样国内许多学者及研究人员在标本的取材时间、包埋、染色等环节进行了有效的探索[1～3].透射电镜制样周期较长,在长时间制样过程中,传统手工制样较容易吸收空气中的水份,从而影响标本的脱水和包埋剂的浸透,并最终影响电镜下的观察结果.我们采用德国LeicaEMTP组织处理仪进行制样,主要在标本脱水与浸透环节.并与常规制样进行比较,具体如下.     

大鼠左心室壁的凝集素受体观察

<正> 本文利用六种生物素化凝集素即刀豆球蛋白A凝集素(ConA).蓖麻凝集素(RCA—I).荆豆凝集素(UEA—I),花生凝集素(PNA).大豆凝集素(SBA)及麦胚凝集素(WGA),采用凝集素亲和组织化学的方法(ABC法)对用2.5%戊二醛和2%多聚甲醛(0.1MPB.PH7.2)灌注固定、石蜡包埋的大鼠左心室壁进行研究,结果表明,六种生物素化凝集素在大鼠左心室心肌细胞膜及胞浆中均不显色,而ConA.RCA—I和WGA则均在心室壁的血     

油红O染色在甲醛固定的乳腺富于脂质癌中的实践应用

在临床病理诊断中,常规HE切片中常可见到胞质透亮或胞质内有许多大小不等的圆形空泡,此现象是水泡样变、黏液样物质、脂肪或脂质组织,还是溶解了的糖原,往往不易区分,这就要依赖于脂肪染色、黏液染色、糖原染色等来鉴别。黏液染色和糖原染色可用石蜡包埋后切片染色即可,而脂肪染色不能用常规石蜡包埋组织切片。日常病理诊断工作中,很多标本可能未行冷冻或者在冷冻时未考虑脂肪染色的问题,但在常规HE染色切片观察时却要考虑或验证其脂质或脂肪成分。为弥补新鲜冷冻时未行脂肪染色,本文收集1例已明确诊断为乳腺富于脂质癌的剩余标本,用甲醛固定后的标本来制作冷冻切片进行油红O脂肪染色,并记录甲醛固定30天内的标本中脂肪染色情况。     

介绍一种新的弹性纤维染色法——改良Luna法

在研究人及某些脊椎动物视神经筛板的发育及结构过程中,我们将Luna弹性纤维染色法加以改良,后发现新方法能较清晰地显示弹性纤维的组织分布情况。现介绍如下。1 材料和方法标本用10%中性缓冲甲醛溶液或2.5%～5%戊二醛磷酸缓冲固定液(pH7.4)固定。石蜡包埋、切片厚5μm。染液配方:     

黏液样/圆细胞型脂肪肉瘤石蜡包埋组织中FUS-CHOP融合基因检测的临床病理学意义

目的 探讨在甲醛固定、石蜡包埋组织中检测FUS-CHOP融合基因的可行性及其对黏液样／圆细胞型脂肪肉瘤的诊断和鉴别诊断的价值。方法 收集黏液样／圆细胞型脂肪肉瘤档案标本44例,以非典型性／分化良好型脂肪肉瘤、多形性脂肪肉瘤、低度恶性黏液纤维肉瘤／黏液样恶性纤维组织细胞瘤等作为阴性对照,共60例。所有标本均为甲醛固定、石蜡包埋组织。用嵌套式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测FUS-CHOP融合基因mRNA表达并经测序证实,以看家基因PGK作为内对照检测mRNA质量。结果 104例肿瘤标本中,93例(89．4％)可检出PGK mRNA表达,其中黏液样／圆细胞型脂肪肉瘤标本PGK阳性39例(88．6％),对照组PGK阳性54例(90％)。44例黏液样／圆细胞型脂肪肉瘤中20例可检出Ⅱ型FUS-CHOP融合基因表达,未能检测到Ⅰ型FUS-CHOP融合基因表达,排除内对照阴性病例5例,阳性率为51．3％(20／39)。对照组60例肿瘤标本均未检出FUS-CHOP融合基因表达。结论 (1)嵌套式RT-PCR方法检测FUS-CHOP mRNA表达可用于甲醛固定、石蜡包埋组织。(2)FUS-CHOP是黏液样／圆细胞型脂肪肉瘤的特异性分子遗传学标志物。采用嵌套式RT-PCR方法检测FUS-CHOP敏感性较高,特异性强,可用于该肿瘤的诊断和鉴别诊断。     

慢性活动性肝炎细胞外基质的免疫电镜研究

本文利用Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ型胶原及LM、FN抗体,对10例CAH肝穿刺组织标本用戊二醛多聚甲醛固定;NaBH_4恢复抗原性,厚片染色再包埋等作改良免疫电镜观察,结果较为满意。证实各型抗体在Disse腔均阳性,但强度各有差异。肝细胞之间只有FN阳性,其余阴性,意义未明。储脂细胞内质网Ⅲ型胶原、LM和FN阳性,支持该细胞是肝内产生间质的重要细胞。     

实验性脑缺血大鼠肾小球毛细血管超微结构的电镜研究

目的 探讨急性脑缺血时肾微循环的超微结构改变。方法 结扎颈总动脉建立急性脑缺血模型。动物随机分组,用常规超薄切片技术制样电镜观察。结果 急性脑缺血时肾脏肾小球毛细血管有明显缺血性改变,中药治疗组结构基本正常。结论 急性脑缺血引起循环功能紊乱,可以导致肾小球毛细血管微循环失调,中药能使肾小球微循环灌流改善。     

小鼠肾脏发育中凋亡细胞的超微结构变化

1　材料和方法1 1　动物取昆明小鼠 ,雌雄比例 3∶1同窝饲养 ,以雌鼠阴道精栓出现为第 1日计算胎鼠胚龄。部分孕鼠分笼饲养 2 0日后 ,每天早八时观察分娩情况 ,新生仔鼠按生后计算日龄。选取 1 4、1 8日胎鼠各 4只 ,生后 1、7、1 4日龄仔鼠各 4只为观察对象。1 2　光镜和电镜标本制作　在冷操作条件下切开胎鼠和仔鼠腹部 ,取左肾于 2 5 %戊二醛内固定。胎鼠做全肾树脂包埋 ,仔鼠肾脏经肾门做矢状面切开 ,皮质和髓质分别进行树脂包埋。ＬＫＢ Ｖ型超薄切片机半薄连续切片 ,甲苯胺蓝染色 ,按Ｋｏｓｅｋｉ判断光镜下凋亡细胞后制超薄切片 ,…     

RT-PCR法检测外周原始神经外胚叶瘤石蜡包埋组织中EWS-FLI1融合基因

目的 研究嵌套式逆转录-聚合酶链反应(nested RT-PCR)方法检测外周原始神经外胚叶瘤石蜡包埋组织中EWS-FLI1融合基因的可行性和临床意义。方法 收集12例外周原始神经外胚叶瘤及8例对照肿瘤标本,均为福尔马林固定石蜡包埋组织。EWS-FLI1融合基因检测方法采用嵌套式RT-PCR法。看家基因B-actin为内参照。结果 9例标本检测到β-actin片断,6例检测到EWS-FLI1融合基因表达,其中,“1型”4例,“2型”2例。8例对照肿瘤中未检测到EWS-FLI1基因。结论 在外周原始神经外胚叶瘤石蜡包埋组织中,用嵌套式RT-PCR检测EWS-FLI1融合基因是可行的方法,检测结果对肿瘤鉴别诊断和预后判断有意义。     

不同时期大鼠整胚石蜡标本的制备

目的探讨不同时期大鼠整体胚胎石蜡标本的制备。方法收集胚龄11天至19天的大鼠胚胎,经4%多聚甲醛固定、酒精梯度脱水、浸蜡、包埋技术制备石蜡标本,光镜下观察胚胎组织结构。结果不同时段的整胚石蜡标本其组织器官的脱水、透明和浸蜡均较完全,镜下观察各组织结构完整,层次清楚。结论经本实验采用的制备流程,胚胎石蜡标本效果良好。     

235例疑难病理标本的电镜诊断价值

电镜作为一种先进技术手段 ,在医学科研和疾病诊断中作出了重要贡献。近 1 0年我院将光镜与电镜密切配合进行病理诊断 ,现将相关材料分析如下。1　材料与方法1 .1　材料　本组 2 35例标本 ,多为光镜病理疑难诊断病例。每例经石蜡切片 ,先行光镜诊断 ,然后在光镜引导下用电镜观察细胞超微结构特征 ,做出最后病理诊断。标本来源 :①新鲜活检组织 (包括冷冻切片时获取的组织 )。②外检大标本 ,常规取材时有意留取电镜标本 ,以上均固定于戊二醛。③光镜下不能诊断 ,回顾性电镜观察甲醛固定的标本 ,按电镜要求取材 ,缓冲液浸泡 ,再用电镜常规制片…     

大鼠肾球旁颗粒供高分辨率光镜观察的简易染色法

肾脏中的肾素——血管紧张素系统在急性肾功能衰竭的发展中起着关键性作用。虽然肾球旁细胞内的特殊颗粒已能为许多方法所显示,但结果均不甚满意。本文作者提出一种简易染色技术,一、固定和包埋:1.用200毫渗量的磷酸缓冲液(PH 7.2-7.4),内含2％甲醛和1％戊二醛,灌注肾脏或将     

PCR-膜芯片检测石蜡包埋组织中结核杆菌耐药基因突变

目的探讨PCR-膜芯片技术检测石蜡包埋组织中结核杆菌耐药基因突变的可行性及其在临床病理中的应用价值。方法采集100例石蜡包埋的肺或淋巴结组织标本(临床诊断为结核患者80例,非结核患者20例),TB膜芯片检测标本中的结核杆菌IS6110基因,阳性者利用12对特异性引物进行多重PCR,扩增产物与含有59个探针的耐药-TB膜芯片反向点杂交检测结核杆菌耐药基因突变并测序验证。结果 TB膜芯片检测石蜡包埋组织标本中的结核杆菌IS6110基因,以临床诊断为标准时,灵敏度为52.5%(42/80),特异度为100%(20/20);以抗酸染色结果为标准时,灵敏度为90.5%(19/21),特异度为61.0%(36/59)。耐药-TB膜芯片检测石蜡包埋组织结核杆菌耐药基因突变,在42例结核杆菌IS6110基因阳性的标本中,检出INH基因突变2例,RFP或SM基因突变各1例,INH、RFP和EMB基因同时突变1例,与测序结果基本符合,提示上述5例可能为耐药结核病。结论应用PCR-膜芯片技术可提高石蜡包埋组织中结核杆菌基因的检出率,耐药-TB膜芯片检测结果可为耐药结核病的病理学诊断提供有价值的参考。     

前列腺标本的检查方法及病理报告的基本内容

一、前列腺标本的检查1.穿刺标本的检查 :前列腺的Ｂ超、ＣＴ及ＭＲＩ检查 ,明显提高了前列腺占位性病变的检出率 ,在Ｂ超引导下行穿刺活检已成为临床上诊断前列腺疾病的行之有效的手段 ,尤其是对前列腺恶性肿瘤的诊断方面起着非常重要的作用。其标本检查要求及程序如下 :(1)查对标本并登记编号。 (2 )依椐穿刺部位分别检查标本 ,并记录其数量、大小、颜色。 (3)标本尽量展直 ,避免弯曲 ,应整条取材。如果标本条索过长时 (长于包埋框 )可切断取材。把标本用伊红点染、用滤纸包好、放入包埋框、盖好盖、置入 4%中性甲醛固定[1] 。 (4 )常规脱…