糖尿病大鼠血管钙含量和骨密度变化的实验研究

目的 观察糖尿病（diabetes mellitus,DM)大鼠模型血管钙含量和骨密度的变化。方法 用大剂量链脲佐菌素 (streptozotocin, STZ)—次性腹腔注射和高脂高糖饲料喂养加小剂量STZ注射制备1型和2型糖尿病大鼠模型,观察对血管钙含量和骨密度（bone mineral density ,BMD)的影响。雄性Wistar大鼠共32只随机分为4组（每组8只）,即对照组、高脂组、1 型糖尿病组和2型糖尿病组。12周后,进行主动脉钙含量、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP)活性和骨钙素（osteocalcin, OC)含量测定;用骨密度仪测定大鼠股骨和腰椎骨密度。结果 1型糖尿病组大鼠血管钙含量（71. 67± 10. 61μmol/mg. dw) 高于对照组和高脂组（44 ± 15. 87和44.8 ±9.44μmol/mg. dw) (P <0. 05);2型糖尿病组大鼠血管钙含量（63. 67 ± 14.32μmol/mg.dw)亦高于对照组和高脂组,但无统计学差异;反映血管钙化程度的指标ALP活性在1型和2型糖尿病组（89. 46 ± 17.8 和 63.68 ±17. 83 U/mg. pr)亦明显高于对照组和高脂组（31. 22 ± 19. 42 和 31. 62 ± 15. 96 U/mg. pr) (P <0. 01 ,P <0. 05); 1 型糖尿病组大鼠的股骨骨密度较其他 3 组均降低（0. 1898 ±0. 0263 vs 0. 224 ±0. 005,0. 2374 ±0. 0113,2431 ±0. 0115 g/cm2) (P<0.01)。结论 糖尿病大鼠主动脉钙含量和骨密度均有变化,提示糖尿病可引起体内钙磷代谢异常,其机制有待进一步探讨。     

体外诱导毛囊干细胞成血管平滑肌细胞的实验研究

目的探讨体外诱导人毛囊干细胞成血管平滑肌细胞的可行性。方法采用中性蛋白酶(Dispase)分离人毛囊干细胞,用含10 ng/mL PDGF-BB、10%血清的低糖DMEM诱导液对其进行诱导,无PDGF-BB的培养液为对照组,观察每代细胞形态,诱导4代后检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SM actin)与肌钙结合蛋白(Calponin)的表达。结果在诱导液的作用下,细胞形态逐步向平滑肌样转变,对照组细胞形态改变不显著。细胞免疫荧光检测显示,至第4代,实验组已明显表达α-SM actin与Calponin,对照组表达不明显;流式细胞仪检测显示,实验组α-SM actin与Calponin阳性表达率近50%,对照组则低于8%;RT-PCR显示,实验组表达Calponin,而对照组未见明显表达。结论使用含10 ng/mLPDGF-BB的低糖DMEM培养液可体外诱导人毛囊干细胞成血管平滑肌细胞。     

血管内皮细胞与平滑肌细胞复合构建组织工程人工血管的实验研究

目的：构建既具有活性血管平滑肌细胞（VSMC）中膜层，又有血管内皮细胞（VEC）内皮化的复层结构组织工程血管支架材料。方法（1）将聚羟基乙俊（PGA）纤维无纺网，VSMC和胶原纤维相混合，设计构建VSMC活性的组织工程血支架材料。（2）采用酶消化法从兔主动脉中分离培养兔VEC并传代，纯化，接种于组织工程人工血管支架的内腔，体外培养，并行电镜观察。结果：构建的支架材料具有一定弹性和韧性，VEC在其内表达形成较完整内皮细胞层，且VSMC能够保持活性，生长状况良好。结论：经胶原包埋处理的PGA支架可作为组织工程化人工血管研究较理想支架材料，为组织工程方法构建具有分层结构的组织工程血管奠定实验基础     

小血管吻合实验研究及在断指再植中的应用

小血管吻合实验研究及在断指再植中的应用张志宏，杨东，王明辉，陶红旗在小儿及末节断指再植术中，由于血管纤细，吻合难度较大，易导致再植失败。我科自１９９０年以来，对直径在０，３５～０．５ｍｍ的微小血管的缝合针数及张力下缝合做了动物实验研究并应用于小儿及末...     

兔颈动脉平滑肌细胞DAN含量与血管缺血时间关系的图像分析研究

目的：研究兔颈动脉平滑肌细胞核DNA含量随缺血时间而变化的关系,判断断指再植时限。方法：7只新西兰大白兔过量麻醉法处死,常温（25℃）和冷藏（0－4℃）保存条件下,在0h、4h、8h、12h、16h、和24h时取材,Feulgen染色后,图像细胞光度仪检测颈动脉平滑肌细胞核DNA含量,统计学处理数据。结果：平滑肌细胞核DNA含量在常温下缺血8小时后,随缺血时间延长而较有规律的下降,缺血12h以内下降不明显,12h后下比较明显。冷藏组（0－4℃）平滑肌细胞核DNA含量无明显变化。结论：断指再植时限常温下以12h内为宜。冷藏保存的肢（指）体24h内都可再植。     

血管缺损的末节断指再植

目的探讨血管缺损的末节断指再植的方法及疗效。方法对124例血管缺损的末节断指行再植术。结果成活110指,坏死14指,成活率为88.7%。按中华医学会手外科学会上肢部分功能评定试用标准:优75例,良30例,差19例,优良率为95.4%。结论选择合适的再植方法,可大大提高血管缺损的末节断指再植成活率,减少致残率。     

超短波治疗大鼠断尾再植后血管危象的实验研究

目的探讨超短波(ultrashort wave,USW)对鼠断尾再植后血管危象的影响及作用机制。方法取3月龄雌性SD大鼠80只,体重232.8～289.6 g,随机分为5组。各组保留尾侧静脉、尾骨后断离鼠尾,A组结扎尾动脉;B、C、D、E组均吻合尾动脉,建立断尾再植模型。术后B组正常管理;C组立即按3.125 mL/kg剂量腹腔注射稀释的盐酸罂粟碱注射液(1 mg/mL)。D、E组立即给予局部吻合口处USW治疗(1次/d),至术后5 d,D组剂量:3档,50 mA,20 min;E组剂量:2档,28 mA,20 min。术后观察鼠尾成活情况至10 d;手术前后测鼠尾吻合口近远侧皮温差并计算术后与术前的变化值;术前从内眦及术后8 h从尾尖各采血1次检测血浆一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度并进行比较。结果术后7 d A、B、C、D、E组鼠尾成活率分别为0(0/14)、36.4%(8/22)、57.1%(8/14)、22.2%(4/18)、75.0%(9/12),组间比较差异有统计学意义(χ2=19.935,P=0.001);E组成活率显著高于B组(P<0.05),其余各组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术前各组间鼠尾皮温差比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后8 h、5 d、6 d及7 d各组间比较鼠尾皮温差变化值差异均有统计学意义(P<0.05),其中术后8 h B组皮温差变化值大于D组(P<0.05);术后5 d C组大于D组(P<0.05);术后6 d A、B、C组均大于D组(P<0.05);术后7 d A、E组低于B、C组(P<0.05),D组低于B组(P<0.05);其余各组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术前各组血浆NO含量差异无统计学意义(P>0.05)。术后8 h A、B、C组血浆NO含量显著低于D组(P<0.05),手术前后变化值A、B组显著低于D组(P<0.05);其余各组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论实验中大鼠断尾再植模型可行。USW治疗能提高鼠断尾再植成活率,在术后7 d内能减小皮温差,提高术后早期NO浓度,防治血管危象。     

血管平滑肌细胞增殖及定量分析研究

血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）过度增殖不仅直接导致移植静脉阻塞和血管成形术后再狭窄，而且与动脉粥样硬化形成密切相关，为深入研究其内在联系，近年开始寻求对ＳＭＣ增殖的定量分析方法，为进一步以分子生物学手段研究生长因子、细胞因子等与ＳＭＣ增殖间量效关系，为探讨再狭窄机理奠定了基础。     

兔血管平滑肌细胞和聚羟基丁酯(PHB)的细胞相容性实验研究

目的：探索血管平滑肌细胞和新型可降解材料聚羟基丁酯（PHB）的细胞相容性，为组织工程血管的构建寻找理想的支架材料。方法：将组织块法体上培养与兔血管平滑肌细胞种植在PHB膜片和PHB三维微孔支架上，在相差显微镜下观察细胞的粘附和生长情况。用MTT法测定细胞粘附率和细胞增殖指数，复合培养7天后进行扫描电镜观察并用流式细胞仪（FCM）的测定细胞周期，DNA指数。结果：兔血管平滑肌细胞在PHB膜片上粘附率为77％，细胞增殖符合细胞的生长曲线，在PHB三维微孔支架上生长情况良好，并被证实为二倍体细胞。结论：兔血管平滑肌细胞和聚羟基丁酯（PHB）的细胞相容性较好，但细胞与材料间的粘附有待进一步改善。     

掌侧软组织合并血管和（或）神经缺损的断指再植

目的 探讨掌侧软组织合并血管和（或）神经缺损的断指再植方法.方法 2005年1月-2011年12月,应用指动脉侧方皮瓣、掌背皮瓣、废弃指组织瓣、足内侧静脉皮瓣及（拇）趾腓侧瓣或足第2趾胫侧瓣修复再植掌侧软组织合并血管和（或）神经缺损的断指38例46指.结果 术后44指成活2指失败,成活率95.7％.术后随访1～3年,按照中华医学会手外科学会断指再植功能评定试用标准评定：优34指,良8指,差4指;优良率91.3％.结论 选择不同的皮瓣一期修复再植掌侧软组织合并血管和（或）神经缺损的断指,效果良好,能最大限度恢复再植手指的外形及功能.     

诱导骨髓基质细胞成血管平滑肌细胞的研究

目的 探讨体外诱导犬骨髓基质细胞(SMSC)为血管平滑肌细胞(VSMC)及其成血管的能力.方法 用含血小板源性生长因子(PDGF-BB)10ìg/L的内皮细胞培养液-2(EGM-2)诱导,无PDGF-BB的EGM-2培养液为对照,检测a-平滑肌肌动蛋白(a-SM actin)与肌钙结合蛋白(calponin)的表达并接种于聚羟基乙酸(PGA)培养4周后取材.结果 诱导组(n=5)细胞逐步呈平滑肌样转变,表达a-SM actin与calponin,流式细胞仪阳性率分别为(45.16±0.97)%、(37.54 4±1.15)%,可成血管样结构,对照组(n=5)变化不明显,阳性率(7.92±1.04)%、(6.37±0.83)%,成血管样结构能力差.结论 体外可诱导犬BMSC为VSMC并有成血管样结构的能力.     

复杂性断指再植

复杂性断指再植李锦永，李清秀，崔永光，胡洪良，谢振军，王平振，宋敬忠，王献伟，孙勇伴有组织缺损的断指，大大增加再植手术的复杂性。１９８８年以来，我们采用血管、皮瓣移植或转位的方法，再植５８例成功５２例，报道如下。临床资料本组男３９例，女１９例。完全性...     

特殊类型断指再植血管损伤的治疗

1994年以来我们共施行断指再植3145例5426指，对伴有血管损伤的特殊类型的断指956例采用血管移植桥接、动静脉转流、近断面单侧指动脉结扎、扩大近段骨髓腔的再植方法进行再植，取得较好的效果，报道如下。     

应用脂肪干细胞构建组织工程化小口径血管平滑肌层的实验研究

目的探索利用脂肪干细胞在生物反应器内构建组织工程血管平滑肌层的可行性。方法用抽吸的脂肪获取脂肪干细胞,在生长因子TGF-β1和BMP4作用下诱导成平滑肌细胞,然后将诱导的平滑肌细胞接种于PGA上,将细胞-材料复合物置于生物反应器内进行培养,在模拟胚胎发育血流动力学的刺激下(搏动频率:75次/分;扩展量<5%),构建小口径的血管平滑肌组织。培养8周后,取材行组织学和生物力学检测并与正常血管对比。结果脂肪干细胞在TGF-β1和BMP4的诱导下,细胞呈现平滑肌细胞特有的"波峰-波谷"样生长特点,并表达平滑肌细胞的特异性标记物α-SMA、SM22α、calponin和SM-MHC;反应器内培养8周后,构建的管状组织胶原分泌旺盛,具有一定的力学强度和弹性。结论利用脂肪干细胞可在体外生物反应器内构建组织工程化小口径血管平滑肌层,为临床上小血管病变的修复提供了一种新的可能的途径。     

反义内皮素受体抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

动脉旁路术或介入方法治疗外周动脉硬化闭塞症 ,可达到较好的早期治疗效果 ,然而术后 3～ 6个月内 ,约 30 %～ 50 %的病人发生血管再狭窄[1 ,2 ] 。研究表明 ,血管平滑肌细胞 (ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌ,ＶＳＭＣ)的过度增殖可能是血管再狭窄发生的主要原因之一[3 ] ,如何抑制血管平滑肌细胞的过度增殖成为防治血管再狭窄的关键。我们通过反义核酸技术特异性抑制内皮素受体 (ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒＡ ,ＥＴＡＲ)的表达 ,以达到抑制ＶＳＭＣ增殖的目的 ,为血管再狭窄的防治提供一种有效的方法。材料…