片仔癀对人骨肉瘤MG63细胞相关凋亡蛋白表达的影响

目的观察不同浓度片仔癀对人骨肉瘤MG63细胞相关凋亡蛋白表达的影响。方法不同浓度片仔癀溶液干预人骨肉瘤MG63细胞24h后,采用Westernblot法检测各组骨肉瘤MG63细胞凋亡标志蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax的表达。结果片仔癀通过内源性的线粒体途径,促进人骨肉瘤MG63细胞Caspase-3、Caspase-9的激活,诱导骨肉瘤细胞的凋亡,同时可以调节Bcl-2、Bax的表达,有剂量依赖性。结论片仔癀促进骨肉瘤MG63细胞凋亡可能通过调节相关凋亡蛋白表达而实现。     

片仔癀通过PI3K/Akt信号通路诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡

目的探讨片仔癀诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）途径的关系。方法采用不同浓度片仔癀（0.4,0.8,1.2mg/mL）作用U2OS细胞,采用MTT法检测片仔癀对U2OS细胞增殖的影响;Hoechst 333258染色观察细胞凋亡情况;Western blot检测PI3K调节亚基p85α（PI3K p85α）、磷酸化PI3K调节亚基p85α（p-PI3K p85α）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核多聚（ADP-核酶）聚合酶（PARP）、裂解PARP（Cleaved PARP）等PI3K/Akt途径相关蛋白的表达。结果片仔癀可明显抑制U2OS细胞的增殖,呈时间和浓度依赖性,诱导U2OS细胞凋亡;Western blot显示p-PI3K p85α、p-Akt蛋白表达明显下调,Cleaved PARP表达量增加,与空白对照组相比有明显差异（P<0.05）。结论片仔癀可通过抑制PI3K/Akt信号途径PI3K p85α、Akt磷酸化,促进PARP裂解,诱导骨肉瘤U2OS凋亡。     

人参皂苷对人体骨肉瘤细胞U2OS增压的影响

目的：为寻找人参中抑制骨肉瘤细胞增殖的活性成分,方法：采用细胞计数法检测了27种从人参中得到的单体化合物对体外培养的人体骨肉瘤细胞U2OS增殖的影响。以流式细胞术分析DNA含量, 抑制肿瘤细胞增殖作用的化合物对肿瘤细胞的细胞增殖周期的变化进行研究,另外,以荧光染色法检测了人掺皂苷对细胞死亡率变化的影响。结果对骨肉细胞增殖的抑制作用研究表明,在5μmol/L浓度下,人参皂苷－Ro-Rh1,-Rh2,F1和－L8较明显地抑制了肿瘤细胞的增殖,人参皂苷－Rg1,F3,Rf,PPT和PT显著地抑制了肿瘤细胞的增殖,进一步对骨肉瘤细胞有抑制作用的化合物检测其对细胞增殖周期影响发现;人参皂苷－Ro,-Rf,-Rg1,-F1-Rh2,PPT和PT使处于G0／G1期的细胞数目明显增多,伴随着S期和G2＋M期的细胞明显减少,说明这些化合物抑制了肿瘤细胞增殖周期的进行,与对照相比人参皂苷－Rf1-,Rg1-F1和PPT显著地促进了肿瘤细胞的细胞死亡现象。结论人参皂苷是通过阻止细胞增殖周期的G0／G1期或促使细胞死亡两种方式抑制了肿瘤细胞U2OS的增殖。     

干扰AURKA基因表达对人骨肉瘤细胞系U2-OS细胞增殖与细胞周期的影响

目的:探讨AURKA基因表达下调对骨肉瘤细胞增殖和细胞周期分布的影响?方法:脂质体瞬时转染法介导AURKA 小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)处理骨肉瘤U2-OS细胞, 采用实时荧光定量PCR及 Western blot方法检测转染前后AURKA mRNA和蛋白表达,CCK8实验检测细胞活力变化,流式细胞术检测细胞周期分布变化,Western blot检测周期相关蛋白的表达,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)细胞增殖实验检测细胞增殖情况?结果:AURKA siRNA作用U2-OS细胞后, AURKA mRNA和蛋白的表达水平较正常对照组及阴性对照组显著降低,且差异有统计学意义 (P < 0.05),两对照组间AURKA表达无明显差异;下调AURKA表达后,细胞活力降低,且作用72 h后抑制率最高,约为(36.63 ± 2.38)%;细胞周期中S期细胞比例下降,G2/M期细胞比例增加,与正常对照组及阴性对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05),提示存在G2/M期阻滞,S期细胞增殖率下降(P < 0.05),周期相关蛋白D1(Cyclin D1)表达水平下降(P < 0.05),周期相关蛋白B1(Cyclin B1)表达水平明显增加(P < 0.05)?结论:下调AURKA表达可抑制骨肉瘤细胞U2-OS的增殖, 同时导致细胞阻滞于G2/M期?     

全反式维甲酸对骨肉瘤细胞OS732生长的影响

目的 观察全反式维甲酸（all—trails—retinoic acid，ATRA）对骨肉瘤细胞OS732生长的影响，并探讨其作用的分子机制。方法 用10^-5 MATRA作用骨肉瘤细胞OS732，6d后，进行细胞形态学观察、活细胞计数、流式细胞仪分析细胞周期、半定量RT—PCR检测细胞周期调控蛋白CyclinD（D1、D2、D3）、CD比、P21^WAF1 mRNA表达的改变。结果 ATRA作用后，OS732细胞胞浆展开，细胞核变小，核浆比例变小；瘤细胞生长减慢，细胞计数为正常对照组的39．5％；G0／G1期细胞明显增多，S期细胞减少，细胞阻滞于G0／G1期；CyclinD1、CyclinD2、CDK4mRNA表达均下降，尤以CycfinD2、CDK4下降最明显，CyclinD3、P21^WAF1mRNA未见明显改变。结论 10^-5M全反式维甲酸可明显抑制骨肉瘤细胞OS732的增殖，并使细胞周期出现G1／G0期阻滞，该作用可能与维甲酸处理后OS732细胞中CyclinD2、CDK4表达的下调以致低磷酸化pRb积累有关。     

siRNA沉默细胞周期蛋白A2基因对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用

目的研究siRNA对骨肉瘤MG-63细胞株及正常成纤维细胞细胞周期蛋白cyclin A2基因表达的抑制及对细胞增殖的影响。方法设计并化学合成靶向cycllnA2基因的siRNA,用oligofectamine将其转染到骨肉瘤细胞系MG-63及正常人成纤维细胞（HSF）中,用无义siRNA转染作为阴性对照,以单加缓冲液磷酸盐缓冲液（PBS）作为空白对照,实时-聚合酶链反应（PCR）、Western印迹方法检测cyclinA2基因沉默效果,采用MTT、RT-PCR、流式细胞、平板克隆培养等方法评价cycllnA2基因表达后被抑制后细胞的生长状态,同时检测细胞PCNA及cyclinB1基因表达的改变。结果1、10、50、100nmol／L浓度的cyclinA2-siRNA分别使MG-63细胞cyclinA2基因表达降低了9．4％,56．4％,79．2％和84．3％,同时cyclinA2蛋白表达也相应降低。转染10nmol／L及50nmol／LsiRNA后48h,MG-63细胞增殖抑制分别达到39．1％及54．9％,细胞周期阻滞于G0／G1期,平板克隆形成率降低,细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）及cyclinB1的mRNA表达水平明显下降。对正常成纤维细胞HSF,50nmol／LcyclinA2-siRNA可抑制58．1％的cyclinA2基因及蛋白表达,其导致细胞周期出现轻度改变,但细胞的增殖及平板克隆形成能力未受影响。结论cyclinA2是肿瘤细胞增殖所依赖的关键基因,针对cyclinA2基因的siRNA能有效降低细胞中cyclinA2mRNA及蛋白的表达,其能抑制骨肉瘤细胞的生长而对正常细胞的增殖影响很小,靶向cyclinA2的siRNA有望成为治疗骨肉瘤的新途径。     

干扰素α对人骨肉瘤U2OS细胞化疗敏感性的影响

目的 了解干扰素α(IFN-α)对骨肉瘤U2OS细胞化疗敏感性的影响.方法 细胞分为对照组、IFN-α组、顺铂组和IFN-α+顺铂组,处理72 h,应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,通过Hochest 33258荧光染色和DNA梯形条带检测凋亡,Caspase-3、8、9的表达由Western blot检测,细胞经Z...     

姜黄素诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡的实验研究

目的 探讨姜黄素对人骨肉瘤 U2OS 细胞凋亡的诱导作用及其分子机制,为姜黄素应用于骨肉瘤治疗提供实验依据.方法 以不同浓度的姜黄素处理骨肉瘤 U2OS 细胞,应用 MTT 法检测细胞活性,用 Bliss 法计算 IC50 值,通过流式细胞术和 Hoechst 33258 荧光染色检测细胞凋亡,比色法检测 Caspase-3、8、9活性.结果 2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0μmol/L的姜黄素明显抑制骨肉瘤 U2OS 细胞生长并呈剂量依赖关系,48 h的 IC50 值为 21.63 μmol/L;20μmol/L 姜黄素作用 12、24、48 h 诱导 U2OS 细胞的凋亡率分别为:12.5%、23.1%和46.2%,细胞出现明显的凋亡特征性形态变化;姜黄素处理 U2OS 细胞 48 h后 Caspase-3、8、9的活性明显增强.结论 姜黄素可通过激活 Caspase 级联活化而抑制骨肉瘤 U2OS 细胞生长并诱导其凋亡.     

人参皂苷对人体骨肉瘤细胞U_2OS增殖的影响

目的为寻找人参中抑制骨肉瘤细胞增殖的活性成分。方法采用细胞计数法检测了27种从人参中得到的单体化合物对体外培养的人体骨肉瘤细胞U     

两种人骨肉瘤 U2OS 细胞阿霉素耐药株的比较

目的研究不同方式建立的人骨肉瘤 U2OS 细胞阿霉素耐药株的生物学特性及其耐药机制.方法采用大剂量间隙作用、浓度梯度递增间隙作用建立 U2OS 阿霉素耐药株 U2OS/ADM1,U2OS/ADM2,光镜及透射电镜下观察细胞形态变化;MTT 法测定其耐药指数、药物敏感性,绘制生长曲线计算倍增时间;罗丹明外排实验检测 P-糖蛋白(P-gp)泵功能;RT-PCR 检测多药耐药基因1(MDR1)mRNA、多药耐药相关蛋白1(MRP1)mR-NA 的表达.结果 U2OS/ADM1,U2OS/ADM2的耐药指数分别为79.63和91.06,对紫杉醇、顺铂有交叉耐药;细胞倍增时间延长(P <0.01);耐药株细胞线粒体丰富,粗面内质网及游离核糖体增多;细胞内罗丹明蓄积量低于亲本细胞(P <0.01),两种耐药株之间无明显差异(P >0.05);MDR1mRNA,MRP1mRNA 表达均高于亲本细胞(P <0.05),MDR1mRNA 表达两种耐药株间无明显差异(P >0.05),U2OS/ADM1的 MRP1mRNA 表达低于U2OS /ADM2(P <0.05).结论两种耐药株均可产生 MDR,耐药机制可能与 MDR1,MRP1过表达有关;不同建立方式存在一定差异,浓度梯度递增间隙作用方式更容易产生耐药.     

片仔癀对乙醇代谢的影响

目的 研究片仔癀的解酒作用。方法 将48只SD雄性大鼠随机分为正常对照组,模型组,片仔癀高、中、低剂量组,海王金樽对照组,每组8只。乙醇灌胃前0.5 h,分别给予海王金樽300 mg/kg,片仔癀组360、180、90 mg/kg灌胃,正常对照组和模型组分别给予等容积生理盐水,乙醇灌胃后0.5、1、2、3、5 h分别采用顶空气质联用仪测定血液乙醇含量。结果 乙醇灌胃1 h后,各组血中乙醇浓度达到峰值,5 h后乙醇浓度降至最低值;片仔癀可明显降低血液中乙醇浓度,呈现明显的量效关系,以片仔癀低剂量的作用最优;低、中、高剂量片仔癀降低血中乙醇浓度的效应均明显优于海王金樽。结论 片仔癀有促进乙醇代谢的作用。     

片仔癀体外抗肿瘤作用研究

目的 研究片仔癀对体外肿瘤细胞增殖的影响,以及对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制作用。方法 采用MTT法检测片仔癀对体外培养肿瘤细胞（肝癌SMMC-7721细胞、胃癌SGC-7901细胞、宫颈癌HeLa细胞）的抗肿瘤作用;以鸡胚尿囊膜血管生成（CAM）实验,研究片仔癀对新生血管生成的抑制作用。结果 片仔癀在0.2～1.0 mg/mL对各肿瘤细胞的增殖有显著抑制作用,1.0 mg/mL片仔癀对肝癌细胞增殖抑制率达到81.55%;片仔癀在0.1～1 000 μg/mL对鸡胚尿囊膜血管生成有显著抑制作用,给药鸡胚的新生血管数减少,血管变细,其中10 μg/mL抑制率最高,一级血管抑制率为61.1%,二级血管抑制率为59.1%。结论 在实验给药浓度下,片仔癀对受试肿瘤细胞的增殖具有较强抑制作用,对鸡胚尿囊膜血管生成有显著抑制作用。     

Corilagin对HUVEC增殖及细胞周期的影响

目的 研究corilagin对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)损伤人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial ceils,HUVEC)增殖及细胞周期的影响,探索corilagin抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的机理.方法 采用ox-LDL复制HUVEC的损伤模型,MTT法观察Corilagin对ox-LDL损伤HUVEC的保护作用.流式细胞术方法分析Corilagin对ox-LDL损伤HUVEC细胞周期的影响.结果 与模型对照组比较,Corilagin (6.25 μmol/L～ 50 μmol/L),作用12h、24 h、48 h对HUVEC有保护作用(P＜0.05).与模型组比较,corilagin组S期细胞比例增加,G1、G2的变异系数减小,sub-G1减小,其各期细胞分布图趋于正常组的分布比例.结论 Corilagin呈浓度依赖性明显抑制ox-LDL对HUVEC的损伤,其机制可能是通过改善内皮细胞周期的G2/M期阻滞而发挥作用.     

叶酸对白血病细胞周期分布的影响

目的研究叶酸(FA)影响白血病细胞增殖和细胞周期分布,以探讨FA抑制白血病细胞增殖的机理.方法体外培养白血病细胞株HL-60、K562.利用台盼蓝拒染法进行细胞计数,流式细胞术检测细胞周期分布.结果 10nmol/L和300nmol/L的FA对HL-60细胞无显著性抑制.而100nmol/L FA对HL-60细胞作用48h后出现显著性抑制作用.不同的是,10nmol/L和100 nmol/L FA对562细胞具有显著性促进作用.FCM结果提示:100nmol/L FA对HL-60细胞的抑制是由于G1期阻滞所致,而对于K562细胞则具有促进增殖生长的作用.结论 FA的作用机制可能类似于Vit B12,具有促癌和抗癌的双重作用.我们的结果提示不能单纯地给白血病患者补充FA,而应与其它抗癌药物结合共同使用,以达到最佳治疗效果.     

薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞周期的影响

目的：探讨薏苡仁酯(coixenolide,CXL)对人鼻咽癌CNE-2Z细胞周期的作用。方法：采用微量细胞克隆形成法检测CNE-2Z细胞的增殖能力和对药物的敏感性,用流式细胞仪分析细胞周期时相。结果：CXL以量效方式抑制CNE-2Z细胞的克隆形式,ID50-10^-5.003mol／L。小剂量、短时问使细胞阻滞于S期,大剂量、长时间则停留在G2／M期。结论：CXL通过作用于S期或G2／M期而抑制CNE-2Z细胞生长。     

丁酸对人肺癌细胞的生长,细胞周期和形态的影响

运用鉴别细胞群体生物学特性的常规方法和流式细胞光度术(FCM),我们研究了正了酸对人肺癌细胞(PLA-801D)的某些生物学作用。当培养液中含2或3mmol/L丁酸时,细胞分裂和增生受到明显抑制,群体倍增时间几乎延长1倍,细胞周期行进受阻,大多数细胞阻断在G1期,平皿集落形成率从23.9％降为1.9％,饱和密度从237.4万/ml降至48.8万/ml,细胞群体提前3d进入饱和状态。与此同时,细胞变扁平,几乎丧失叠堆生长能力,表面膜活动减弱,核形趋于规则,染色质颗粒分散变稀疏,细胞间粘着连接明显增多。以上发现提示丁酸可使PLA-801D肺癌细胞获得一些相对正常的生长特性和表型,显示丁酸对该细胞有一定程度的分化诱导作用和潜在的抗癌作用。     

姜黄素抑制人肾癌786-O细胞增殖及对细胞周期影响的研究

目的研究姜黄素对人肾癌786-O细胞体外生长及细胞周期的影响,为肾癌治疗提供理论依据。方法应用MTT比色法和流式细胞仪检测人肾癌786-O细胞增殖抑制率及细胞周期各时相的变化和凋亡率。结果姜黄素对人肾癌786-O细胞有抑制作用,存在剂量依赖（F=6207．813,P〈0．01）与时间依赖（F=1210．386,P〈0．01）;流式细胞仪分析,G1期细胞增多,S期细胞减少,C2／M期细胞相对增多。结论姜黄素可以抑制人肾癌786-O细胞增殖,阻止G1期细胞向S期的进程,促进人肾癌786-O细胞凋亡。