多重耐药鲍曼不动杆菌氨基糖苷类耐药基因的研究

目的调查山东省潍坊市人民医院临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌氨基糖苷类耐药基因的流行情况,为院内感染控制提供依据。方法采用VITEK2全自动微生物仪对2013年11月26日至12月12日山东省潍坊市人民医院临床分离的9株多重耐药鲍曼不动杆菌进行细菌鉴定和药敏试验,部分抗菌药物的敏感度检测采用纸片扩散法。聚合酶链反应检测氨基糖苷类耐药基因,对部分阳性基因进行测序。结果 9株多重耐药鲍曼不动杆菌中,2株aac(3)-Ⅰ基因阳性,3株ant(3″)-Ⅰ基因阳性,3株aac(6′)-Ⅰ基因阳性,9株armA基因阳性。所有菌株对氨基糖苷类抗菌药物阿米卡星、庆大霉素和妥布霉素耐药。5株标本来源于重症监护病房,3株标本来源于神经外科病房。所有标本来源于痰液。结论该院这段时间分离的多重耐药鲍曼不动杆菌对阿米卡星、庆大霉素和妥布霉素同时耐药与携带armA氨基糖苷类耐药基因有关。院感部门应重点监测重症监护病房和神经外科病房多重耐药鲍曼不动杆菌引起的院内感染。     

耐氨基糖苷类抗生素鲍曼不动杆菌中armA和rmtB甲基化酶基因的检测

目的了解我院临床分离鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性,并检测其耐药基因。方法收集我院2009年1—10月临床分离鲍曼不动杆菌共80株,采用CLSI推荐的纸片扩散法（K-B法）对分离菌株进行抗生素敏感试验。用PCR法筛选2种甲基化酶基因armA、rmtB,并对阳性标本进行测序。结果 80株鲍曼不动杆菌对阿米卡星、庆大霉素、链霉素和奈替米星的耐药率分别为66.2%、72.5%、87.5%和68.8%,对4种氨基糖苷类抗生素全部耐药52株（65%）,耐药菌株中armA基因阳性48株（60%）,未检出rmtB阳性菌株。结论近年来我院鲍曼不动杆菌分离率逐年增高,16S rRNA甲基化酶基因armA在鲍曼不动杆菌广泛存在,且对多种抗生素耐药,应引起临床医师高度关注。     

鲍曼不动杆菌耐药性和氨基糖苷类修饰酶基因的研究

目的 了解鲍曼不动杆菌(ABA)耐药性和氨基糖苷类修饰酶基因(AME)存在状况.方法 用K-B法测定ABA对14种抗菌药物的敏感性,用PCR法检测6种AME和Ⅰ类整合酶基因(int Ⅰ 1).结果 85株ABA的耐药率除头孢哌酮/舒巴坦(8.2%)和阿米卡星(18.8%)外,其余12种抗菌素均在50%以上(48.2%～81.2%),其中妥布霉素、奈替卡星和庆大霉素的耐药率分别达55.3%、48.2%和70.6%.耐药基因检测ant(3“)-Ⅰ阳性61株(71.8%)、aac(6‘)-Ⅰ b阳性53株(62.3%)、aac(3)-Ⅰ阳性39 株(45.9%),int Ⅰ 1阳性66株(77.6%),其余基因均阴性.锚定PCR扩增结果表明ant(3“)-Ⅰ、aac(3)-Ⅰ型AME在Ⅰ类整合子上.结论 绍兴地区临床分离的ABA多重耐药情况十分严重,对氨基糖苷类抗生素耐药主要由ant(3“)-Ⅰ、aac(6)-Ⅰ b、aac(3)-Ⅰ基因介导,Ⅰ类整合子在耐药性传播中起着非常重要的作用.     

鲍曼不动杆菌耐药性和氨基糖苷类修饰酶基因的研究

目的了解鲍曼不动杆菌(ABA)耐药性和氨基糖苷类修饰酶基因(AME)存在状况。方法用K-B法测定ABA对14种抗菌药物的敏感性,用PCR法检测6种AME和Ⅰ类整合酶基因(intⅠ1)。结果85株ABA的耐药率除头孢哌酮/舒巴坦(8.2%)和阿米卡星(18.8%)外,其余12种抗菌素均在50%以上(48.2%～81.2%),其中妥布霉素、奈替卡星和庆大霉素的耐药率分别达55.3%、48.2%和70.6%。耐药基因检测ant(3″)-Ⅰ阳性61株(71.8%)、aac(6')-Ⅰb阳性53株(62.3%)、aac(3)-Ⅰ阳性39株(45.9%),intⅠ1阳性66株(77.6%),其余基因均阴性。锚定PCR扩增结果表明ant(3″)-Ⅰ、aac(3)-Ⅰ型AME在Ⅰ类整合子上。结论绍兴地区临床分离的ABA多重耐药情况十分严重,对氨基糖苷类抗生素耐药主要由ant(3″)-Ⅰ、aac(6')-Ⅰb、aac(3)-Ⅰ基因介导,Ⅰ类整合子在耐药性传播中起着非常重要的作用。     

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药机制研究

目的研究对氨基糖苷类抗菌药物耐药的鲍曼不动杆菌分子流行病学特征和耐药机制。方法采用琼脂稀释法检测抗菌药物对鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(MIC),采用肠杆菌科基因间重复一致性序列(ERIC)-聚合酶链反应(PCR)研究耐药菌株的分子流行病学特征,采用特异性PCR、序列分析和接合试验研究介导耐药的分子机制。结果临床分离菌株对包括氨基糖苷类抗菌药物在内的多种药物广泛耐药,同源性分析显示属于7个流行克隆型。所有分离菌株均扩增出介导氨基糖苷类抗菌药物耐药的修饰酶和药物"外排泵"基因,部分菌株扩增出甲基化酶基因。结论修饰酶和甲基化酶介导鲍曼不动杆菌临床分离株对氨基糖苷类药物耐药,药物"外排泵"参与介导耐药机制形成,垂直传播和通过耐药性质粒的水平传递可能是耐药菌株播散的主要方式。     

36株多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药基因的流行病学研究

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类耐药基因的存在情况。方法收集2012年8—11月江苏大学附属医院和镇江市第一人民医院住院患者的临床标本中分离到的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株36株。应用KB纸片扩散法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性、应用PCR检测细菌对氨基糖苷类药物的耐药基因。结果36株多重耐药鲍曼不动杆菌对头孢哌酮一舒巴坦有较高的敏感率（33．3％）,对其他抗菌药物的敏感率均较低（20．0％）。36株多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类耐药基因aac（3）-I、aac（6’）Ib、aph（3’）-I和16SrRNA甲基化酶基因armA的阳性率分别为72．2％（26株）、72．2％（26株）、80．6％（29株）和80．6％（29株）。结论本组多重耐药鲍曼不动杆菌多耐药情况比较严重,其对氨基糖苷类药物耐药与氨基糖苷类耐药基因的存在密切相关。     

广泛耐药鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物获得性耐药基因研究

目的了解重症监护病房（ICU）患者分离的广泛耐药（XDR）-鲍曼小动杆菌（AB）对氨基糖苷类药物获得性耐药基因情况。方法用phoenix-100全自动细菌鉴定药物敏感性分析仪对AB进行细菌鉴定和药物敏感性试验,gyrA和parC基因扩增测序确定AB。聚合酶链反应（PCR）测定20株XDR—AB的10种氨基糖苷类修饰酶基因、6种16SrRNA甲基化酶基因和外排泵adeB基因,并用DNA测序比对。结果20株XDR—AB中,氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-I、aac（6’）-Ib、ant（3”）-I、aph（3’）-I检出率分别为90．0％、30．0％、95．0％、95．0％,而aac（3）-lI、aac（6’）-Iad、aac（6’）-lI、ant（2”）-I、ant（4’）-I及aph（3’）-VIa基因均未检出。armA型16SrRNA甲基化酶基因和外排泵adeB基因检出率均为100％。结论20株XDR—AB均携带rarmA和adeB基因,同时aac（3）-I、ant（3”）-I和aph（3）-I检出率较高,提示ICU分离的XDR—AB对氨基糖苷类药物高水平耐药可能与携带的耐药基因有关。     

鲍曼不动杆菌耐药监测及氨基糖苷修饰酶基因分布

目的 了解该院鲍曼不动杆菌的耐药状况和主要氨基糖苷修饰酶基因的分布情况。方法 用K-B法检测鲍曼不动杆菌的药敏情况，用PCR法检测选取的25株菌氨基糖苷修饰酶耐药基因的分布。结果 亚胺培能敏感率为98．3％，其次是头孢哌酮／舒巴坦、阿米卡星和头孢吡肟，分别为48．6％、44．2％和41.1％。阿米卡星耐药株占43．3％，且呈多重耐药性，与敏感株之间的耐药性有显著差别。15株阿米卡星耐药株均有aacA4基因，13株有aacC1和aadA基因，另外2株含有aphA1基因；10株阿米卡星敏感株均不含有4种待测耐药基因。结论 该院鲍曼不动杆菌的耐药性相当严重，aacA4、aacC1和aadA1氨基糖苷修饰酶耐药基因在多重耐药的鲍曼不动杆菌中普遍存在，aphA1阳性菌则少见。     

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗菌药物双圈耐药现象的初步探讨

目的 探讨鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗菌药物的双圈耐药现象.方法 用琼脂稀释法检测庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、依替米星等4种氨基糖苷类药物对56株鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(MIC).用阿米卡星诱导试验检测该药对该表型的基因是否存在诱导现象.用PCR法检测该类菌是否携带整合子.结果 庆大霉素、依替米星对56株鲍曼不动杆菌的MIC均＞1 024 mg/L;71.4%(40/56)的鲍曼不动杆菌妥布霉素的MIC≥1 024 mg/L;阿米卡星的MIC呈抑制后再生长现象,大多在512 mg/L出现抑制,而到4 096 mg/L又开始生长. 用K-B法进行诱导试验,传至15代双圈耐药现象转为完全耐药.56株菌中53株检测到Ⅰ类整合子.结论 MIC试验证实了K-B法中的双圈现象,介导这一现象的基因呈诱导型表达,这类菌大多携带Ⅰ类整合子.     

鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物的耐药机制研究

目的探讨鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药机制。方法K-B法检测19株鲍曼不动杆菌对4种氨基糖苷类药物的敏感性,聚合酶链反应(PCR)检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果14株鲍曼不动杆菌携带aacA4基因,检出率为74%。结论aacA4型氨基糖苷类修饰酶是鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药的重要机制。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌对氨基糖甙类药物耐药性及耐药基因研究

目的研究产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌对氨基糖甙类药物的耐药特性及耐药基因表达。方法用琼脂稀释法检测庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、妥布霉素、奈替米星和新霉素6种药物对37株产ESBLs大肠埃希菌的最低抑菌浓度。用PCR法检测5种氨基糖甙类药物修饰酶基因,并使用DNA测序加以证实。结果庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、妥布霉素和奈替米星对37株大肠埃希菌MIC50、MIC90均大于256mg／L,其耐药率分别为78．4％、45．9％、72．9％、83．8％和64．9％,而新霉素仍具有较高的抗菌活性。从37株菌中检出5种修饰酶基因,aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰb、aac（6′）-Ⅱ、ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ阳性率分别为56．8％、27．0％、2．7％、5．4％和13．5％,未发现aac（3）-Ⅰ基因。结论产ESBLs的大肠埃希菌对氨基糖甙类药物的耐药与修饰酶基因的表达有关。     

肠球菌氨基糖苷类高水平耐药基因的检测

目的调查肠球菌对高水平氨基糖苷类的耐药情况，并检测其耐药基因。方法琼脂稀释法筛选对氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌，PCR扩增5种高耐药基因：双功能酶AAC(6′)-APH(2″)的编码基因aac(6′)-Ie—aph(2″)-Ia，磷酸转移酶APH(2″)-Id、APH(2″)-Ib的编码基因aph(2″)-Id、aph(2″)-Ib，核苷酸转移酶ANT(6-′)、ANT(3″)(9)的编码基因ant(6′)-Ia和ant(3″)(9)，并通过PCR产物的基因测序及寡核苷酸探针斑点杂交试验验证结果的可靠性。结果粪肠球菌对氨基糖苷类高水平耐药率达63％，屎肠球菌达84％。95％以上庆大霉素高耐肠球菌(HLGR)检测到aac(6′)-Ie—aph(2″)-Ia、3株HLGR肠球菌检测到aph(2″)-Id，99％以上HLSR肠球菌检测到ant(6′)-Ia。结论肠球菌对氨基糖苷类高水平耐药十分普遍，双功能酶AAC(6′)-APH(2″)、核苷转移酶ANT(6′)分别介导了大多数肠球菌对庆大霉素、链霉素的耐药。     

多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解南京地区多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法自2007年7—10月间南京地区住院病人标本中分离并筛选出20株多重耐药鲍曼不动杆菌,微量肉汤稀释法测定11种抗菌药物的敏感性;PCR法检测16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因。结果20株多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶(armA、rmtB)基因均为阴性;氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅰ基因阳性株10株、aac(3)-Ⅱ阳性株1株、aac(6′)-Ⅰb基因阳性株13株、ant(3″)-Ⅰ基因阳性株12株;ant(2″)-Ⅰ基因、aac(6′)-Ⅱ基因及aac(6′)-Ⅰad基因均为阴性。结论南京地区多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷药物耐药的主要原因是aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ4种氨基糖苷类修饰酶基因的存在;尚未检出氨基糖苷类修饰酶新亚型———aac(6′)-Ⅰad基因和16S rRNA甲基化酶armA、rmtB基因。     

淋球菌耐药性分析及相关耐药基因检测

目的：了解佛山地区淋球菌对5种抗菌药物的耐药性,并检测相关耐药基因突变情况。方法收集57株淋球菌,药敏试验采用琼脂稀释法。PCR 法扩增相关耐药基因,PCR 产物测序结果在 GenBank 中用 blastn 进行核酸序列同源性搜索。结果淋球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、头孢曲松、大观霉素的敏感率分别为0．0％、8．8％、7．0％、61．4％、100．0％,产β-内酰胺酶淋球菌和质粒介导的四环素高度耐药淋球菌阳性率分别为35．1％、56．1％。耐药基因突变率均在80％以上。结论头孢曲松、大观霉素可以作为佛山地区治疗淋球菌的首选药物。淋球菌耐药机制较复杂,应加强对相关耐药基因分子流行病学监测。     

大肠埃希菌氨基糖苷酰基转移酶基因型的研究

目的了解大肠埃希菌的耐药谱、氨基糖苷酰基转移酶基因(aac)的分布规律及其与氨基糖苷类抗生素耐药的相关性。方法琼脂稀释法测定无菌体液分离的44株大肠埃希菌对阿米卡星等12种抗生素的耐药性,聚合酶联反应(PCR)法测定酰基转移酶基因型aac(3)-Ⅰ、Ⅱ和aac(6′)-Ⅰ。结果大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率为45.45%(20/44),对亚胺培南(IPM)、美罗培南(MEM)的耐药率为0,对哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶的耐药率较低(<20%),对左氟沙星、环丙沙星的耐药率较高(>60%),对氨基糖苷类阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率分别为18.18%、56.82%、61.36%。氨基糖苷类耐药模式TG(妥布霉素、庆大霉素)>TGA(妥布霉素、庆大霉素、阿米卡星)>T(妥布霉素)>G(庆大霉素),分别占36.36%、18.18%、6.82%、2.27%。氨基糖苷酰基转移酶基因检出以aac(3)-Ⅱ最高,占52.27%(23/44),aac(6′)-Ⅰ次之,占29.55%(13/44),aac(3)-Ⅱ和aac(6′)-Ⅰ同时检出者占15.91%(7/44),未检出aac(3)-Ⅰ。ESBLs阳性株的aac(3)-Ⅱ、aac (6′)-Ⅰ检出率分别为60%、50%,高于ESBLs阴性株的45.81%、12.51%。TG模式与其耐药基因aac(3)-Ⅱ符合率较高,为93.75%(15/16)。结论本地分离大肠埃希菌氨基糖苷类耐药模式以TG为主,酰基转移酶基因以aac(3)-Ⅱ为主,aac(6′)-Ⅰ次之,aac(3)-Ⅰ罕见。     

临床产ESBLs大肠埃希氏菌的检测及耐药性研究

目的了解产ESBLs大肠埃希氏菌(E.coli)感染及耐药状况,指导临床合理使用抗生素,控制院内感染。方法由VITEK32细菌鉴定仪分析得出,部分采用双纸片协同试验(DDST),必要时按NCCLS推荐的初筛试验、确证试验加以证实。结果产ESBLs E.coli主要来源于尿液、痰液和脓性分泌物,ESBLs阳性率为27.1%(88/325);IMP、AMC、SAM、SCF、TZP、TIM、FOT、CT、NIT、FEP耐药性较低,在0%~16.9%之间,青霉素类、1~3代头抱菌素类及单酰胺类如ATM耐药性高,在94.3%以上;氨基糖甙类、氟喹诺酮类抗生素耐药性低,在18.8%~52.3%之间。结论产ESBLs E.coli发生率和耐药性日趋严重;治疗时应避免使用青霉素类、1~3代头抱菌素类及单酰胺类如ATM抗生素,建议首选IMP、AMC、SAM、SCF、TZP、TIM、FOT、CT、NIT或头霉素类与氨基糖甙类或含酶抑制剂类复合氨基糖甙类抗生素联合用药;开展产ESBLs E.coli检测及耐药性研究对指导临床合理使用抗生素、了解其流行趋势和防止院内感染意义重大。     

CYP3A5参与急性白血病耐药机制的研究

目的探讨细胞色素P4503A亚家族多肽5(CYP3A5)在急性白血病(AL)耐药机制中的作用。方法RT-PCR、免疫组化、MTT法检测白血病细胞株、AL患原代细胞CYP3A5转录表达与细胞株对化疗药物敏感性、患化疗疗效及预后的相关性，检测化疗药物对CYP3A5的转录调控；构建CYP3A5重组质粒稳定转染HI，60细胞，观察细胞对化疗药物的敏感性是否改变。结果转录CYP3A5的K562、U937细胞与不转录CYP3A5的NB4、HL-60细胞相比，对柔红霉素明显耐受(耐药倍数均为2．1倍)；原发耐药组患初治时CYP3A5阳性率(17．2％)显高于持续完全缓解(CCR)组(0．4％)与继发耐药组初治时(5．4％)，早期复发组第1次完全缓解(CR1)时阳性率(23．9％)显高于CCR组CR时(1．3％)；柔红霉素可诱导K562／A02、HL-60／ADR细胞CYP3A5转录；HL-60细胞稳定转染CYP3A5重组质粒后明显耐受柔红霉素、长春新碱(耐药倍数分别为3．0，4．0倍)。结论白血病细胞表达CYP3A5可能使其原位代谢多种化疗药物，是直接导致AL耐药的机制之一。     

成人急性白血病患者细胞周期蛋白A基因表达与耐药的关系

目的 探讨细胞周期蛋白A（cyclin A)基因在成人急性白血病（AL）患者中的表达以及与耐药的关系。方法 采用半定量RT－PCR技术对32例多药耐药和32例化疗敏感的AL患者和20名正常人进行细胞周期蛋白A、mdr1、TopoⅡα、bcl-2 mRNA水平的测定。结果 耐药组患者细胞周期蛋白A及TopoⅡα mRNA的表达水平均明显低于敏感组患者（P＜0．01），20名正常人在同一实验条件下未检出细胞周期蛋白A mRNA的表达；耐药组患者mdrl及bcl-2 mRNA表达水平均明显高于敏感组（P＜0．01）；64例AL患者中，细胞周期蛋白A与TopoⅡα表达水平呈高度的正相关（r=0.794,P=0.000)；细胞周期蛋白A与TopoⅡα同时阳性低表达的10例AL患者全部耐药；经Binary逻辑回归分析显示细胞周期蛋白A与耐药显著相关。结论 细胞周期蛋白A可能会成为判断AL患者预后的新指标，联合TopoⅡα检测对判断AL耐药有意义。     

女性泌尿生殖道无乳链球菌的耐药性分析

目的对女性泌尿生殖道分离的无乳链球菌对常用抗菌药物的耐药情况做回顾性分析,了解常用抗菌药物的耐药趋势变化,指导临床合理使用抗菌药物。方法对2009年1月至2012年12月送检的女性泌尿生殖道标本进行常规培养,使用VITEK32全自动细菌鉴定分析仪对分离出的细菌进行鉴定和药敏试验,同时对红霉素耐药、克林霉素敏感或中介的无乳链球菌菌株做D-抑菌圈试验。结果妇科患者检出569株无乳链球菌,产科患者检出192株无乳链球菌,二者年龄差异有统计学意义(P0.01)。761株无乳链球菌中无万古霉素耐药菌株,青霉素和利奈唑胺耐药率均3%;呋喃妥因的耐药率2009年至2011年均0.5%,2012年为7.2%;四环素耐药率90%;红霉素、克林霉素及左氧氟沙星的耐药率较高,且呈逐年上升趋势;D-抑菌圈试验阳性率为21.7%。结论临床须根据体外药敏试验结果合理使用抗菌药物,同时须加强耐药性监测。