siRNA重组腺病毒增强贝伐单抗对移植骨肉瘤的治疗作用

目的：探讨以DNA损伤修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶基因（apurinic/aprimidinic endonuclease1,APE1）为靶点的siRNA在骨肉瘤治疗中的作用及其与贝伐单抗（bevacizumab,Avastin）的协同效应。方法：建立人骨肉瘤9901细胞荷瘤裸鼠模型,16只荷瘤鼠随机分为4组：EGFP对照组,APE1 siRNA治疗组,Avastin治疗组和联合治疗组（Avastin+APE1 siRNA）。观察移植瘤生长情况并计算抑瘤率,免疫组织化学法检测肿瘤组织微血管密度和Ki67表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,激光共聚焦检测肿瘤组织的缺氧状态,Western blotting检测肿瘤组织内VEGF蛋白的表达。结果：与APE1 siRNA治疗组和Avastin治疗组相比,Avastin+APE1 siRNA治疗组的抑瘤率显著增加（P<0.01）。各治疗组的微血管密度及Ki67表达明显低于对照组,且Avastin+APE1 siRNA治疗组微血管密度和Ki67表达显著低于单独治疗组（P<0.01）。各治疗组的凋亡指数明显高于对照组,且Avastin+APE1 siRNA治疗组明显高于单独治疗组（P<0.01）。APE1siRNA或Avastin治疗均可引起肿瘤组织缺氧,抑制肿瘤组织中VEGF的表达,Avastin+APE1 siRNA治疗效果更加明显。结论：以APE1为靶点的siRNA能显著抑制裸鼠移植骨肉瘤的血管生成和瘤体生长,并诱导肿瘤细胞凋亡,且与Avastin具有协同作用。     

APE1 siRNA重组腺病毒增强贝伐单抗对移植骨肉瘤的治疗作用

目的:探讨以DNA损伤修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶基因(apurinic/aprimidinie endonuclease-1,APEI)为靶点的siRNA在骨肉瘤治疗中的作用及其与贝伐单抗(bevacizumab,Avastin)的协同效应.方法:建立人骨肉瘤9901细胞荷瘤裸鼠模型,16只荷瘤鼠随机分为4组:EGFP对照组,APEI siRNA治疗组,Avastin治疗组和联合治疗组(Avastin+APEI siRNA).观察移植瘤生长情况并计算抑瘤率,免疫组织化学法检测肿瘤组织微血管密度和Ki67表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,激光共聚焦检测肿瘤组织的缺氧状态,Western blotting检测肿瘤组织内VEGF蛋白的表达.结果:与APEI siRNA治疗组和Avastin治疗组相比,Avastin+APEI siRNA治疗组的抑瘤率显著增加(P＜0.01).各治疗组的微血管密度及Ki67表达明显低于对照组,且Avastin+APEI siRNA治疗组微血管密度和Ki67表达显著低于单独治疗组(P＜0.01).各治疗组的凋亡指数明显高于对照组,且Avastin+APEI siRNA治疗组明显高于单独治疗组(P＜0.01).APEI siRNA或Avastin治疗均可引起肿瘤组织缺氧,抑制肿瘤组织中VEGF的表达,Avastin+APEI siRNA治疗效果更加明显.结论:以APEI为靶点的siRNA能显著抑制裸鼠移植骨肉瘤的血管生成和瘤体生长,并诱导肿瘤细胞凋亡,且与Avastin具有协同作用.     

贝伐单抗与重组人血管内皮抑素对人乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤生长的影响

[目的]探讨贝伐单抗、重组人血管内皮抑素对人乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤生长的影响。[方法]建立人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、低剂量贝伐单抗组、高剂量贝伐单抗组、低剂量莺组人血管内皮抑素组、高剂量重组人血管内皮抑素组、低剂量联合组以及高剂量联合组,用药3周。检测裸鼠体重、移植瘤体积、移植瘤重量,计算抑瘤率。[结果]与对照组相比,低剂量贝伐单抗组、高剂量贝伐单抗组、低剂量联合组、高剂量联合组裸鼠移植瘤生长曲线较平缓,移植瘤重量明显下降（P〈0．01）,抑瘤率分别为67．69％、68．88％、78.32％和79．26％。低剂量联合组与低剂量贝伐单抗组移植瘤重量存在统计学差异（P〈0．05）。低剂量重组人血管内皮抑素组、高剂量重组人血管内皮抑素组移植瘤生长与对照组无统计学差异（P〉0．05）。[结论]贝伐单抗能抑制人乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤生长,低剂量贝伐单抗联合重组人血管内皮抑素能进一步提高抗肿瘤作用。     

不同剂量贝伐单抗对荷结肠癌细胞裸鼠移植瘤炎症因子表达的影响

摘 要：［目的］ 观察不同剂量贝伐单抗对肿瘤局部炎症因子表达的影响。［方法］ 接种人结肠癌DLD-1细胞的裸鼠24只,随机分为4组。对照组采用0.9%生理盐水,试验1组2.5mg/kg贝伐单抗,试验2组采用5mg/kg贝伐单抗,试验3组采用10mg/kg贝伐单抗,均分别于第1、5、9d注射。第10d处死裸鼠,留取皮下肿瘤。观察4组间肿瘤大小及肿瘤组织内炎症因子IL-1β、TNF-α、PGE-23 mRNA表达的差异。［结果］ 对照组及3个试验组间肿瘤体积比较差异无统计学意义。试验3组肿瘤组织内IL-1β mRNA表达的抑制最明显,与其他3组比较均有统计学差异（P=0.022、0.043、0.022）;试验3组肿瘤组织内TNF-α mRNA表达的抑制最明显,与对照组、试验2组比较差异有统计学意义（P=0.046、0.004）;PGE-23 mRNA表达与贝伐单抗的使用无相关性。［结论］ 10mg/kg贝伐单抗治疗后肿瘤组织内炎症指标IL-1β、TNF-α mRNA的表达明显下降,提示贝伐单抗能抑制肿瘤局部炎症反应。     

分子靶向药物贝伐单抗研究进展

血管内皮生长因子(VEGF)是肿瘤发展过程中最重要的促血管生成因子之一.抗VEGF受体的人源单克隆抗体贝伐单抗,在进展期直肠癌的Ⅲ期临床试验中被证实安全有效,而且该药对非小细胞肺癌、肾癌以及其它多种实体瘤的治疗前景乐观.目前的问题仍在于最佳剂量和最适病人的选择两方面,未来的临床试验将会围绕上述问题进行,并有望提供新的循证医学结果.     

贝伐单抗治疗晚期大肠癌的研究进展

血管内皮生长因子(VEGF)是目前已知作用最强的促血管形成因子,因而是抗血管生成治疗的主要靶点.贝伐单抗是抗VEGF受体的人源单克隆抗体,可抑制肿瘤血管生成,目前用于一线治疗大肠癌.     

贝伐单抗治疗胶质母细胞瘤的进展

贝伐单抗作为全球第一个抗血管生成的单克隆抗体,2009年被FDA批准用于胶质母细胞瘤的挽救治疗,之后贝伐单抗治疗新诊断的胶质母细胞瘤成为众多学者研究的焦点,但最新的研究结果并不支持它在胶质母细胞瘤的一线治疗中应用。     

贝伐单抗治疗晚期肿瘤不良反应的临床观察

目的:观察贝伐单抗在恶性肿瘤治疗过程中的不良反应。方法:52例晚期恶性肿瘤患者,给予贝伐单抗7.5mg/（kg·3w）,3周为1观察周期,5mg/（kg·2w）,4周为1观察周期,单药或联合化疗,观察患者的主要不良反应。结果:52例患者共接受134周期治疗。主要不良反应为高血压（19.2％）、出血（13.5％）和蛋白尿（9.6％）,其中3例发生血栓栓塞、1例发生严重心肌缺血不能耐受继续治疗。结论:贝伐单抗的主要不良反应为高血压、出血和蛋白尿,多为I-II级。不良反应发生率低,耐受性好。     

贝伐单抗抑制人非小细胞肺癌A549-luc细胞裸鼠移植瘤的生长及浸润

目的:探讨贝伐单抗(bevacizumab)对人非小细胞肺癌A549-luc细胞小鼠移植瘤生长、浸润的影响.方法:将稳定表达荧光素酶的人肺癌细胞系A549-Luc接种于裸鼠皮下,成瘤后随机分为对照组、低剂量贝伐单抗组及高剂量贝伐单抗组.对移植瘤进行生物发光成像,并与体积测量结果拟合;检测移植瘤质量和体积,计算贝伐单抗的抑瘤率.结果:生物发光成像观察结果显示,贝伐单抗组移植瘤发光区域和荧光强度较对照组均显著降低,且荧光高峰值出现较晚,高剂量贝伐单抗组的抑制效果更为显著.随着治疗时间的延长,贝伐单抗组移植瘤体积增长速度小于对照组(P＜0.05),高剂量贝伐单抗组移植瘤体积缩小更为显著(P＜0.05).贝伐单抗组移植瘤细胞浸润程度和对肺组织的破坏程度均低于对照组,高剂量贝伐单抗组抑瘤率为77.3％,高于低剂量组的52.3％(P＜0.05).结论:贝伐单抗可以有效抑制活体内非小细胞肺癌A549-luc细胞移植瘤的生长和浸润.     

新药贝伐单抗的临床应用进展

血管内皮生长因子（VEGF）在肿瘤血管生成过程中起着关键作用,并已成为抗肿瘤治疗的重要靶点。贝伐单抗为重组人源化抗VEGF的单克隆抗体,其治疗肿瘤具有良好的效果。目前,FDA已批准贝伐单抗用于转移性结直肠癌、转移性乳腺癌、晚期非小细胞肺癌、转移性肾细胞癌的一线治疗。除此之外,贝伐单抗在肝癌、胃癌、食管癌等其他恶性肿瘤的应用也取得令人鼓舞的结果。现就贝伐单抗在多种恶性肿瘤中的临床应用作一综述。     

移植性人骨肉瘤OS-732裸鼠模型的建立

目的建立移植性人骨肉瘤裸鼠模型，为骨肉瘤的提供研究实验模型。方法采取皮下细胞悬液注射法与组织块植入接种法，建立人骨肉瘤裸鼠模型。人成骨肉瘤OS-732细胞株体外传代培养后，将l×10^7细胞悬液注入裸鼠腋后皮下（10只裸鼠），或将已成瘤的瘤组织块接种于裸鼠腋后皮下（10只裸鼠），观察肿瘤生长情况。接种后4周处死裸鼠，剥瘤称重，行病理鉴定。比较两种方法的成瘤率、终末瘤体积及瘤重、肿瘤相对增长率；大体观及病理组织学。结果两组裸鼠接种2周后均有局部肿瘤形成，细胞悬液组成瘤率70％，组织块组成瘤率100％，两组成瘤率差异无显著性（P〉0．05）；两组终末瘤体积及瘤重差异具有显著性（均P〈0．05）。细胞悬液组相对增长率高于组织块组，接种后第16天开始两组肿瘤增长率具有显著性差异（P〈0．05）。病理组织学鉴定符合骨肉瘤镜下特点。结论成功建立了移植性人骨肉瘤裸鼠模型，为临床研究提供了可靠方法。     

重组人血管内皮抑制素对裸鼠骨肉瘤的抑瘤作用

目的 研究Rh-Endostatin对人骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用.方法 建立人骨肉瘤细胞OS-732皮下移植瘤裸鼠动物模型,分为4组,分别给予(a)生理盐水;(b、c、d) Rh-Endostatin低、中和高剂量,分别为2.5、5.0和10mg/kg;为腹腔注射给药,1次/天,4周后裸鼠全部处死,称量肿瘤重量计算抑瘤率,用药疗效.对肿瘤标本进行微血管密度计数和细胞凋亡指数检测.结果 Rh-Endostatin单药2.5、5和10mg/kg治疗抑瘤率分别为25.3%、34.1%和35.7%;微血管密度:所有治疗组与对照组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.01).凋亡指数:治疗组与对照组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论 Rh-Endostatin单药对骨肉瘤具有明显的抑瘤作用,抗血管生成治疗骨肉瘤具有潜在的临床应用价值,值得进一步临床试验评估其疗效.     

腺病毒介导VEGF-siRNA对荷人骨肉瘤裸鼠移植瘤生长的影响

目的:观察腺病毒介导的VEGF-siRNA对荷人骨肉瘤细胞株MG63裸鼠移植瘤生长的影响。方法:将Ad-VEGF-siRNA感染MG63,用噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)法检测细胞体外增殖活力,反转录-聚合酶链反应(reverse transeription-poly-merase chain reaction,RT-PCR)法检测VEGF抑制效果。建立裸鼠移植瘤模型,定期瘤内注射Ad-VEGF-siRNA,观察裸鼠致瘤率、肿瘤体积、抑瘤率及免疫组化法检测肿瘤组织中bcl-2的表达。结果:感染Ad-VEGF-siRNA能明显抑制MG63细胞的生长,瘤灶内注射Ad-VEGF-siRNA后裸鼠移植瘤的质量和体积均显著低于对照组(P<0.01)。TUNEL染色显示肿瘤细胞凋亡增加,免疫组化结果提示肿瘤组织中bcl-2表达明显减少(P<0.01)。结论:Ad-VEGF-siRNA可有效而特异地阻断VEGF基因表达,抑制裸鼠移植瘤生长,促进肿瘤细胞的凋亡。     

原位红色荧光标记骨肉瘤肺转移裸鼠模型的建立

目的 利用红色荧光蛋白（RFP）基因建立原位骨肉瘤肺转移裸鼠模型,为体内监测骨肉瘤的生长及抗肿瘤药物的药效评价建立一种肿瘤动物模型。方法 以包含逆转录病毒pLNCX DsRed 2的PT67包装细胞转染人骨肉瘤细胞系143B,在裸鼠胫骨近端原位接种使其成瘤,活体荧光成像系统观察骨肉瘤的生长及肺转移情况。结果 获得稳定表达红色荧光蛋白的人骨肉瘤细胞株,原位接种的肿瘤发生率达100％,肺转移率为80％。通过活体荧光成像系统于移植1周观察到肿瘤形成,移植4周肿瘤呈梭形膨胀,移植6周肿瘤呈分叶状球形,发光强度亦逐渐增加。结论 通过建立原位骨肉瘤肺转移裸鼠模型可以观察原位骨肉瘤的不同生长过程以及肺转移情况,是研究骨肉瘤生长及肺转移相关因素的一种重要工具。     

Effect of ascorbic acid, lysine, proline and green tea extract on human osteosarcoma cell line MNNG-HOS xenografts in nude mice

Structural changes in the extracellular matrix (ECM) are necessary for cell migration during tissue remodeling MMPs, VEGF, Ki-67 (proliferative protein), and constitutents of ECM play a critical role in angiogenecontaining lysine, proline, arginine, ascorbic acid, and green tea extract (NM) on the growth of tumors induced by implanting human osteosarcoma MNNG in athymic nude mice and the expression of MMPs, VEGF, Ki-67 and fibroenectin in these tumors, as well as the production of mucin (by PAS staining). We also investigated the effect of the supplemented diet on serum ascorbic acid, total protein content, alkaline phosphatase activity, and liver enzymes Athymic male nude mice (n=12) were inoculated with 3×10⁶ osteosarcoma cells MNNG-HOS and randomy divided into group A (fed a regular diet) and group B (fed a regular diet supplemented with 0.5% NM). Four weeks later, the mice were sacrificed. Results showed that NM inhibited the growth and reduced the size of tumors in nude mice. Histological evaluation revealed increased mitotic index, MMP-9, and VEGF secretion in the control group tissues. Results demonstrate that the nutrient mixture of lysine, proline, arginine, ascorbic acid, and green tea extract tested strongly suppressed the growth of tumors without adverse effects in nude mice, suggesting potential as an anticancer agent.     

重组人血管内皮抑制素治疗人乳腺癌裸鼠模型的实验研究

目的 探讨重组人血管内皮抑制素注射液(恩度,YH-16)对人乳腺癌细胞株MCF-7裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 建立人乳腺癌裸鼠模型,随机分成4组,每组10只,接种人乳腺癌细胞悬液,瘤体达1.0 cm3时,于种植部位皮下注射药物:阴性对照组生理盐水0.2 mg/kg体重,阳性对照组顺铂(DDP)1 ms/ks体重,YH-16组YH-16 20 ms/kg体重,DDP联合YH-16组为DDP1 mg/kg体重和YH-16 20 ms/ks体重,隔日一次,20 d后颈椎脱位处死裸鼠,检测裸鼠体重、肿瘤体积、抑瘤率、血管内皮生长因子(VEGF)、癌细胞凋亡率、肺转移率.结果 DDP联合YH-16组、阳性对照组、YH-16单药组、阴性对照组肿瘤体积分别为(0.686±0.229)、(1.258±0.101)、(1.888±0.215)、(3.366±0.284)cm3;抑瘤率分别为92.1%、57.3%、36.5%、0;肺转移率分别为0、10%、20%、90%;癌细胞凋亡率分别为31.6%±2.7%、28.1%±2.7%、19.4%±2.9%、15.7%±3.2%;RT-PCR检测VEGF表达,吸光度(A)比值均数分别为0.530±0.164、0.759±0.210、1.063±0.295、1.268±0.145,Western blot检测结果为0.260±0.0820、0.348±0.085、0.461±0.099、0.556±0.113,以上各组间差异均有统计学意义(P<0.05).结论 YH-16对人乳腺癌裸鼠肿瘤生长及远处转移均有抑制作用,不良反应小;YH-16联合DDP有协同增效作用.     

血管内皮生长因子及其受体与骨肉瘤关系的研究进展

血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）是一种序列高度保守、高度特异性的促血管内皮细胞生长因子,广泛分布于人和动物体内的大脑、肾脏、肝脏、脾脏、胰腺和骨骼等组织中,对内皮细胞具有强烈的促有丝分裂作用,刺激血管内皮细胞增殖和血管通透性增加,促进新生血管形成。ＶＥＧＦ通过与血管内皮细胞表面受体（ＶＥＧＦＲ）特异性结合发挥生物学效应。抑制ＶＥＧＦ及ＶＥＧＦＲ的活性可以减缓或阻滞骨肉瘤侵袭和转移。研究表明,ＶＥＧＦ及ＶＥＧＦＲ对肿瘤血管及淋巴管的生成及肿瘤侵袭和转移起重要作用。本文对ＶＥＧＦ及ＶＥＧＦＲ与骨肉瘤血管与淋巴管生成及其侵袭与转移的关系作一综述。     

Suramin inhibits growth of human osteosarcoma xenografts in nude mice

The effect of suramin on tumor growth and morphology in two different human osteosarcoma xenografts (L-I OSM and L-II OSM) grown in BALB/cA-nu/nu mice was studied. Suramin (total dose, 720 mg/kg) given by i.p. injection (60 mg/kg/dose) for up to 9 weeks significantly inhibited osteosarcoma cell growth in both tumors, suramin-treated tumors showing only one-third or less of the volume of nontreated controls. Cell cycle distribution of tumor cells measured by DNA flow cytometry demonstrated that suramin treated caused accumulation of cells in the S and G2 phases of the cell cycle, in both L-I OSM and L-II OSM. In the aneuploid L-II OSM tumor suramin preferentially inhibited the growth of aneuploid cells, leading to a decrease in the ratio of aneuploid to diploid cells. Both osteosarcomas retained their histological appearance and the liver, spleen, heart, and kidneys of the treated animals were unaffected by suramin. These results are compatible with the view that suramin inhibits the growth of human osteosarcomas by cytostatic effects.     

双调蛋白反义核酸表达对裸鼠乳腺癌血管生成的抑制作用

目的 研究双调蛋白（AR）反义RNA表达对乳腺癌血管生成的抑制作用。方法 乳腺癌NS2T2A1细胞经AR反义cDNA质粒转染后,经筛选获得表达AR反义RNA的AR-AS1及AR-AS3克隆,转染空载体获得NS2T2A1 V对照细胞,接种裸鼠皮下形成肿瘤。研究条件培养液对人微血管内皮细胞（HMEC）增殖的影响,以EL1SA法测定细胞血管内皮生长因子（VEGF）分泌量。以定量RT-PCR分析肿瘤组织的VEGF表达水平。以免疫组化法标记CD31研究肿瘤内血管数量。结果 HMEC在AR-AS1和AR-AS3细胞条件培养液中的增殖比例明显降低。AR-AS1和AR-AS3细胞VEGF分泌量亦降低。AR-AS1和AR-AS3肿瘤的血管数量仅有对照组的50％左右,且VEGF表达显著降低。结论 AR反义RNA表达可有效抑制乳腺癌的血管生成,应作为新治疗靶点进一步研究．     

不同转移潜能MG63骨肉瘤细胞亚株裸鼠肺转移模型的建立

Objective: To establish a nude mice model of human osteosarcoma lung metastasis. Methods: The growth of human osteosarcoma cell sublines M8 and M6 was determined by MTT assay. 2 × 107 cells were injected into the tail vein of nude mice. Mice were sacrificed started on week 4 after injection, and lung metastases were evaluated under both mac-roscopic and microscopic observation with HE staining. Results: The growth of low-metastatic subline M6 was lower than high-metastatic sublines M8. Seventeen mice after injected M8 had occurred lung metastases while only one mice had oc-curred in M6 group. Moreover, M8 cells within metastases were arrangement disorder with variable nuclear hyperchromasia. Conclusion: A mouse model for human osteosarcoma cancer lung metastasis can be established by injection different ability of metastasis MG63 cells into tail vein.