雷公藤内酯醇人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

用碳二亚胺(EDC)法将14位羟基修饰的雷公藤内酯醇(TP)和不同的蛋白载体(阳离子化牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白)偶联合成TP的人工免疫抗原和检测抗原,紫外光谱鉴定偶联效果,计算偶联率。利用免疫抗原免疫小鼠,制备小鼠多克隆抗体,用检测抗原分析血清抗体效价,利用抗原竞争ELISA分析抗体特异性,为进一步研究TP的分子作用机理以及制备TP的单克隆抗体奠定基础。     

分泌抗组胺单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立(简报)

本研究用1,4-对苯醌(Bq)做交联剂,制备组胺-Bq-牛血清白蛋白结合物(组胺-Bq-BSA)并免疫BALB/C小鼠,用Sp2/0.Ag14骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞融合。应用ELISA间接法检测抗体,包被抗原为组胺-Bq-卵清蛋白结合物(组胺-Bq-OA).筛选出两株抗组胺单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株.即Z255B3和Z253E2。经三次克隆后分别注入同系小鼠腹腔内,所产生的腹水经ELISA间接法测定Z255B3     

树鼩经甲型肝炎减毒活疫苗、乙型肝炎疫苗及联合硫酸乙酰肝素佐剂免疫后的免疫效果评价

目的 探讨甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)、乙型肝炎疫苗(Hbv)以及HepA-1、Hbv分别与佐剂硫酸乙酰肝素(HS)联合对树鼩进行免疫后树鼩体液免疫应答的影响.方法 按照疫苗种类、佐剂以及免疫途径将树鼩随机分组,同时设空白对照组,分别于末次免疫后的4周、8周、12周、16周和20周尾静脉采血,用ELISA法检测树鼩血清中的特异性IgG抗体水平.结果 除空白对照组外,实验组均在末次免疫的第四周检测到抗甲型肝炎病毒(HAV)及抗乙型肝炎病毒(HBV)抗体,抗体水平随着免疫时间延长而逐渐升高并于12周达到峰值,此后逐渐下降.同时,联合HS佐剂组的体液免疫效果均优于单纯疫苗免疫组.并且不同抗原以及联合佐剂采用不同的免疫途径免疫树鼩其免疫效果存在显著性差异.结论 通过对树鼩进行疫苗免疫原性和增强免疫效果检测,证实以树鼩作为动物模型进行疫苗评价的可行性.     

苯妥英戊酸牛血清白蛋白免疫原的合成

为了建立苯妥英钠放射免疫测定药箱、制备特异性的苯妥英钠抗体的需要,作者研究了苯妥英钠免疫原的制备条件和紫外分析方法。文献报道过的苯妥英钠免疫原有(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)三种结构类型,其中以苯妥英戊酸牛血清白蛋白结合物(Ⅲ_a)diphenylhydantoin-3-valerate-bovine serume albumin(简称DPH-VA-BSA)的特异性最好。作者参考文献方法,按下列线路合成Ⅲ_a,对其中由Ⅳ合成Ⅲ_a反     

寻常型天疱疮抗原细胞外区1～2表位抗体亚型的致病性

目的探讨不同寻常性天疱疮(PV)抗体亚型在PV中的作用。方法分别用完全弗氏佐剂(CFA)、铝[Al(OH)3]佐剂联合重组寻常型天疱疮抗原(PVA)细胞外区1～2融和蛋白免疫C57BL/6小鼠。免疫后对其细胞因子的类别、特异性抗体滴度和抗体亚型进行检测;并通过诱导新生鼠的动物模型评价其致病性。结果免疫后经细胞因子检测显示CFA组小鼠产生较多的Th1型细胞因子γ-干扰素(IFNγ),Al(OH)3组则以Th2型细胞因子白介素-4(IL-4)为主;抗体亚型的型别在CFA组中以IgG2a为主,而Al(OH)3组以IgG1为主。新生鼠被动转移实验显示,转移Al(OH)3组小鼠的抗血清可使被转移鼠皮肤出现糜烂,组织病理、免疫荧光均符合PV的表现,而CFA组小鼠的抗血清不能出现上述表现。结论相同PVA在不同免疫佐剂作用下可诱导产生不同抗体亚型;不同亚型的抗PVA抗体其致病性不同。     

灭活A组链球菌全菌体抗原诱导风湿性心脏炎的可行性

 【目的】 探讨以Lewis 大鼠为实验对象,用皮下注射灭活A组链球菌全菌体抗原的方法诱导风湿性心脏炎的可行性。【方法】 复活并繁殖A组β溶血性链球菌,细菌用40 g/L甲醛液灭活。实验大鼠分为3组:对照组(4只)。模型A组(8只)。模型B组(5只)。模型A组大鼠后足垫注射灭活A组链球菌全菌体抗原/完全弗氏佐剂(CFA)混合液。初次免疫后第1周腹部皮下再次注射上述抗原1次,第3周(第21天)解剖动物。模型B组大鼠初次免疫同模型A组,第1。2。3周腹部皮下重复接受注射上述抗原,第6周(第42天)解剖动物。对照组大鼠后足垫注射生理盐水/CFA混合液,第3周(第21天)解剖动物。观察动物的体质量。足关节炎症程度。抗心肌抗体IgG吸光度,以及心脏。肾脏。肺脏和足关节的病理组织切片。【结果】 模型A组大鼠的抗心肌抗体IgG吸光度免疫前。免疫后第2周。第3周分别为0.13(S = 0.03)。0.24(S = 0.06)和0.27(S = 0.03),提示HRAb IgG抗体浓度从免疫后第2周开始呈上升趋势。免疫后第3周,模型A组8只大鼠中有3只心肌间质出现少量的灶性炎症细胞浸润,未观察到心瓣膜炎症变化。模型B组大鼠5只大鼠中有4只心肌间质小血管旁出现较明显的灶性炎症细胞浸润,其中2只观察到心瓣膜炎症。 【结论】 以Lewis大鼠为对象,使用皮下注射灭活A组链球菌的方法,可以诱发大鼠发生心脏炎。     

BrdU免疫组织化学染色方法的改进（漂片法）

目的改进用漂片法进行BrdU免疫组织化学染色时的封闭液,以减少组织切片破损。方法用5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU）标记大鼠踏转轮运动中所引起增殖细胞,通过ABC免疫组织化学方法染色。在染色过程中,比较不同的封闭液（羊血清、牛血清白蛋白、胰酶抑制剂）减少脑片破损的效果。结果踏转轮运动可使大鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数明显多于对照组。加入不同的封闭液后,组织片破损率明显下降,尤其是加入牛血清白蛋白和胰酶抑制剂组,但胰酶抑制剂组有非特异性染色。结论牛血清白蛋白是较理想的封闭液。     

大鼠脊髓背角浅层中γ-氨基丁酸能神经末梢与含NMDA样 受体或蛋白激酶C样受体神经元之间突触联系的电镜研究

本研究利用受体自显影方法探讨了孤啡肽 (nociceptin/orphaninFQ)在外周炎症和痛觉过敏中的调制作用。将完全弗氏佐剂 (CFA)注射到大鼠一侧后脚掌 2d、4d或 8d后 ,分别进行脊髓C4[3H]孤啡肽结合物的定量测定。放射自显影光密度测定分析表明 ,注射CFA 4d后的动物与对照组相比 ,两侧脊髓Ⅰ -Ⅱ层的中间和外侧区均有 [3H]孤啡肽结合物的明显增加 ;而X层中放射性结合物没有任何改变。生化研究证实 ,[3H]孤啡肽与大鼠脑片的特异性结合 [3H]孤啡肽受体的结合特征是一致的。以上结果提示 ,脊髓 [3H]孤啡肽受体在痛觉过敏期间发生了上调 ;该反应可能通过增强内源性镇痛机制以减弱CFA引起的痛觉过敏。     

糖化牛血清白蛋白及其抗体的制备

目的制备特异性强、效价高的抗晚期糖化终末产物(AGEs)的多克隆抗体,以用于AGEs免疫化学方法的检测。方法用牛血清白蛋白与葡萄糖在体外共同孵育,制备糖化牛血清白蛋白(AGEs-BSA),经凝胶层析纯化后,免疫新西兰家兔,获取抗AGEs-BSA抗血清,经硫酸铵盐沉淀法制备多克隆抗体。结果荧光光谱和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定结果表明,成功制备出AGEs-BSA。ELISA结果证实,制备出特异性强、效价高的抗AGEs的多克隆抗体,其效价高达1:2 000。结论应用高糖孵育BSA可以制备出AGEs-BSA,通过AGEs-BSA免疫新西兰家兔成功制备特异性强、效价高的抗AGEs的多克隆抗体,可以用于AGEs免疫化学方法的检测,并为进一步研究AGEs在阿尔茨海默病发病中的作用奠定基础。     

人胰岛提取物与大鼠β肿瘤细胞具有共同抗原决定簇

鉴定抗大鼠β肿瘤细胞系Rin5F细胞膜单克隆抗体所结合的胰岛特异性抗原。采用匀浆后超速离心的方法提取动物胰腺及胰岛细胞膜蛋白。经SDS-PAGE、电转移后,分别与大鼠β肿瘤细胞系Rin5F细胞膜单克隆抗体1A2(第一抗体)和羊抗鼠(第二抗体)反应。用放射自显影、Dot blot、western blot方法显示结果。除单抗1C7以外的其他6株抗大鼠β肿瘤细胞系Rin5F细胞膜单克隆抗体能与正常大鼠胰腺提取物不同成分结合。其中单抗1A2能与大鼠、狗、猪、猴、人的胰腺提取物及人、猪胰岛提取物不同分子量的抗原结合。大鼠β肿瘤细胞系Rin5F细胞与正常大鼠胰腺有共同的抗原决定簇。单抗1A2所结合抗原在不同动物胰腺,尤其是在人和猪胰岛上具有共同抗原决定簇。为1型糖尿病自身免疫发病机制及临床前早期诊断带来了新的希望。     

日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗诱生免疫应答的实验研究

目的初步研究日本血吸虫大陆株副肌球蛋白核酸疫苗在C57BL／6小鼠诱生的免疫应答特征。方法利用TRIzol方法抽提日本血吸虫大陆株成虫总RNA，并通过逆转录聚合酶链反应；扩增编码日本血吸虫大陆株副肌球蛋白（SjC97）的全基因cDNA，将其克隆入质粒表达载体（pcDNA／Amp）构建成日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗（pCMV－SjC97）；将其通过后腿胫前肌免疫C57BL／6小鼠，共免疫3次，每次间隔3周；利用酶联免疫吸附试验（ELISA）分析pCMV－SjC97免疫所诱生的特异性抗体IgG及IgG亚类，以及特异性抗体IgM及IgE。并初步分析了pCMV－SjC97免疫C57BL／6小鼠脾淋巴细胞抗原特异性体外增殖能力。结果pCMV－SjC97免疫能够诱生特异性抗体IgG及IgM；pCMV－SjC97诱生的抗体滴度与注射的DNA间存在一定的量-效关系；IgG亚类分析显示，pCMV-SjC97免疫主要诱生IgG2a和IgG2b亚类，未测到IgG1及IgG3亚类。PCMV-SjC97免疫能够诱导小鼠Th细胞激活。结论pCMV-SjC97核酸疫苗能够在C57BL／6小鼠诱生较强的体液免疫应答；pCMV-SjC97免疫主要诱生Th1型细胞免疫应答。     

聚氨酯表面接枝聚甲基丙烯酸羟乙酯的研制

【目的】用2,4-甲苯二异氰酸酯(TDI)作偶联剂在聚氨酯(PU)片表面引入聚甲基丙烯酸羟乙酯(PHEMA),以得到一种具有良好的机械性能和优良的血液相容性的高分子材料。【方法】先用TDI活化PU表面,生成PU-NCO衍生物,然后PHEMA中的-OH再和PU-NCO上的-NCO起反应生成PU-PHEMA。用拉力机测定材料的抗张强度,并进行血小板粘附实验。【结果】与PU相比,在PU表面接枝PHEMA后,材料的抗张强度基本不变,粘附的血小板数量减少,变形也小。【结论】PU-PHEMA是一种具有良好的机械性能和优良的血液相容性的高分子材料。     

EHF早期快诊技术研究(Ⅱ.RFC—SpA法检测EHF病人血清中IgG抗体)

用RFC—SpA法诊断流行性出血热。先在抗原片中加入EHF病人血清,经作用后加入SpA菌体试剂,洗涤、染色后在普通光学显微镜下观察花环形成细胞。共检测77份病人血清中EHF IgG体滴度,结果表明本法与IFA及HRP—SpA染色法是特异的,敏感的。还就RFC—SpA实验条件选择以及IgG抗体检测与病程的关系进行了讨论。     

大鼠牙胚发育过程中釉原蛋白含量在空间和时间上的变化

目的:研究随着大鼠牙胚的发育，釉原蛋白(Am)在空间和时间上的变化。方法：以重组、纯化的大鼠釉原蛋白为抗原。混入完全/不完全弗氏佐剂，免疫新西兰大白兔；用双向免疫扩散法到抗体效价，将获得的多克隆抗血清经硫酸胺初步纯化后，用Western blot和免疫组化检测大鼠牙胚Am的组织表达特异性。结果：Western blot显示：在大鼠牙胚组织总蛋白中有特异性表达，而在肝、脑、肾组织中没有表达。免疫组化检测，在成釉细胞和发育早期的釉基质中有Am的表达，而在成牙本质细胞和成熟牙釉质、牙本质中无表达。结论：釉原蛋白的表达具有严格的空间和时间依赖性，在牙胚发育早期高表达而在发育后期和已矿化期表达低或无表达。     

Evaluation of therapeutic efficacy by detection of specific IgG and IgG4 against KLH in schistosomiasis japonica]

The specific IgG and IgG4 antibodies in the sera of patients with Schistosoma japonicum were determined by KLH-ELISA and SEA-ELISA. The results showed that KLH-ELISA was as sensitive and specific as SEA-ELISA. The negative conversion rates of IgG and IgG4 12 months after treatment detected by KLH-ELISA were significantly higher than those by SEA-ELISA. The negative conversion rate of IgG was 92.9%, and that of IgG4 was 97.6% 24 months after treatment. Therefore, it is regarded that detecting specific IgG and IgG4 by KLH has high value in both diagnosing schistosomiasis japonica and assessing its therapeutic efficacy. Particularly the specific IgG4 may be a short-duration antibody which can indicate successful chemotherapy of patients with chronic Schistosoma japonicum infection.     

KLH检测日本血吸虫病人血清中特异性IgG和IgG4考核疗效的研究

用KLH-ELISA和SEA-ELISA分别检测日本血吸虫病人治疗前IgG及治疗后不同时期血清中特异性IgG和IgG4.结果表明:两种方法在敏感性和特异性方面差异无显著性(P>0.05);用KLH检测治疗后12个月血清中IgG及IgG4的阴转率均显著高于SEA者;KLH检测治疗后24个月血清中IgG阴转率为92.9%,IgG4阴转率为97.6%.提示KLH检测特异性IgG和IgG4具有较高的诊断价值和疗效考核价值;特异性IgG4可能系一疗效敏感抗体,可望作为疗效评价指标.     

实验感染HEVIV型后恒河猴HEVRNA及抗HEVIgM（IgG）动态变化研究

目的 观察实验感染HEV（Hepatitis E Virus）Ⅳ型后恒河猴HEVRNA及抗HEV—IgM（IgG）的动态变化，探索HEVIV型感染的规律。方法 用逆转录PCR．检测实验动物接种前后血清及粪便HEVR-NA，用酶联免疫法（ELISA）检测血清抗HEV—IgM及抗HEV—IgG，并同步观察其血生化及肝脏组织学的变化。结果感染后的恒河猴均发生了典型的急性肝炎，血清HEVRNA首先呈现阳性，相继出现谷丙转氨酶（ALT）升高、抗HEV—IgM阳性及抗HEV-IgG阳性。结论 中国恒河猴是HEVⅣ型感染的较好的动物模型。检验资料为阐明HEVⅣ型感染的规律提供了证据。     

应用日本血吸虫病患者血清特异性抗体亚类考核疗效

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ＫＤ原建立的ＢＡ－ＥＬＩＳＡ系统检测慢性血吸虫病患者治疗前、后血清中的ＩｇＧ１，ＩｇＧ３和ＩｇＧ４抗体水平，同时用常规ＥＬＩＳＡ检测ＩｇＧ和ＩｇＭ特异抗体。结果表明：各类抗体均未见假阳性，亦未与肝吸虫病和肺吸虫病者血清出现交叉阳性。提示ＩｇＧ１和ＩｇＧ４抗体的敏感性和特异性高，具有诊断和疗效考核的价值。     

应用日本血吸虫病患者血清特异性抗体亚类考核疗效

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ＫＤ抗原建立的ＢＡ－ＥＬＩＳＡ系统检测慢性血吸虫病患者治疗前、后血清中的ＩｇＧ１，ＩｇＧ３和ＩｇＧ４抗体水平；同时用常规ＥＬＩＳＡ检测ＩｇＧ和ＩｇＭ特异抗体。结果表明：各类抗体均未见假阳性，亦未与肝吸虫病和肺吸虫病患者血清出现交叉阳性。提示ＩｇＧ１和ＩｇＧ４抗体的敏感性和特异性高，具有诊断和疗效考核的价值。     

甲苯二异氰酸酯哮喘特异性诊断方法的改进

用自行设计的袋式吸入试验装置,对18例可疑甲苯二异氰酸酯(TDI)哮喘进行了TDI特异性吸入激发,确诊12例为TDI哮喘,其中速发型反应3例,迟发型反应6例,双向反应3例。吸入TDI后FEV_1,PEFR,V_(50)和V_(25)均有明显下降(P<0.01),提示TDI对大小气道的口径均有影响。用TDI和人血清白蛋白(HSA)交联剂作皮肤过敏试验,12例TDI哮喘中11例呈阳性;62例接触TDI但无呼吸道症状的工人中11例呈阳性;18例不接触TDI的普通哮喘患者均为阴性。因此,我们认为TDI-HSA皮试对TDI哮喘的诊断有辅助价值,但不能替代特异性吸入激发试验。并认为袋式吸入激发装置与方法,准确合理,且方便易行。