STAT3及相关生长调控基因在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨转录信号传导子与激活子3（STAT3）及相关生长调控基因在胃癌发生发展中的作用及意义。方法应用RT—PCR检测STAT3基因及相关基因c—myc，p53，生存素（survivin），血管内皮生长因子（VEGF）的mRNA表达水平，应用Western印迹法及免疫组化法检测STAT3基因的蛋白水平及定位表达。结果胃癌组织及癌旁组织中STAT3 mRNA的表达均明显高于正常胃组织（P〈0．01），胃癌及癌旁组织中c—myc，surovivin，VEGF mRNA的表达上调（P〈0．01），p53 mRNA的表达下调（P〈0．01），胃癌组织及癌旁组织中STAT3蛋白水平的表达均高于正常胃组织（P〈0．01）。结论STAT3基因的持续激活在胃癌的发生发展中起重要作用，可作为早期诊断的指标及治疗的靶点。     

大肠癌组织中P16蛋白和血管内皮生长因子的表达及其临床意义

目的：探讨大肠癌组织中P16蛋白和血管内皮生长因子（VEGF）表达及其临床意认。方法：用S－P免疫组织化学方法测定66例大肠癌组织和20例正常大肠组织中P16蛋白和VEGF的表达。结果：大肠癌中P16蛋白阳性率为48．5％（32／66）明显低于对照组的70．0％（14／20）（P＜0．01），VEGF阳性率为72．7％（48／66）则明显高于对照组的15．0％（3／20）（P＜0．01）：P16蛋白和VEGF在大肠癌中表达具有明显负相关性；P16蛋白和VEGF表达与大肠癌组织学类型、肿瘤直径、肿瘤部位无关（P＞0．05），而与淋巴结转移、Duke's分期五年生存率有明显的关系（P＜0．01）。结论：大肠癌中存在P16蛋白下调和VEGF上调，P16蛋白和VEGF表达可作为反映大肠癌生物学行为的指标之一。     

食管鳞癌组织中IGF-1R、VEGF-C的表达变化及意义

目的观察食管鳞癌组织中的胰岛素样生长因子-1R（IGF．1R）、血管内皮生长因子C（VEGF—C）的表达变化,并探讨其意义。方法分别采用免疫组化法、免疫印迹法检测食管鳞癌和癌旁正常食管组织中的IGF-1R、VEGF—C。结果食管鳞癌组织中IGF-1R、VEGF—C阳性率分别为81．05％、67．37％,癌旁组织中分别为20％、5％,P均〈0．01;食管鳞癌组织中IGF—IR、VEGF．C蛋白条带灰度比值分别为0．58土0．03、0．43±0．05,癌旁组织中分别为0．43±0．02、0．31±0．04,P均〈0．05。IGF—IR、VEGF—C表达与食管鳞癌淋巴结转移、浸润深度有关（P均〈0．01）,二者表达呈正相关（r=0．29,P〈0．05）。结论食管鳞癌组织中IGF—IR、VEGF—C高表达,在食管鳞癌的发生发展及转移中有重要作用。     

甲基转移酶3B基因在胰腺癌中的表达

目的检测胰腺癌组织中甲基转移酶3B（DNMT3B）基因表达,分析其与胰腺癌临床病理参数的关系。方法应用实时定量PCR和免疫组织化学方法检测42例胰腺癌组织及相应癌旁组织、10例正常胰腺组织中DNMT3B mRNA和蛋白表达。结果胰腺癌组织、癌旁组织和正常胰腺组织DNMT3B mRNA表达量分别为9．4±5．9、1．02±0．71和0,相差非常显著（P〈0．05）;DNMT3B蛋白表达阳性率分别为83．3％、14．3％和10．0％,相差也非常显著（P〈0．01）。DNMT3B mRNA表达与临床分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关（P〈0．05或P〈0．01）;DNMT3B蛋白表达与肿瘤的部位、淋巴结转移有关（P〈0．01或P〈0．05）;DNMT3B mRNA和蛋白表达均与年龄、性别、神经浸润、肿瘤大小、血CEA和CA19—9浓度无关。结论胰腺癌DNMT3B mRNA和蛋白高表达提示胰腺癌已发生淋巴结转移,预后较差。     

RUNX3、Bcl-2和bax蛋白在大肠癌中的表达及其意义

目的探讨大肠癌组织中RUNX3、Bcl-2和bax蛋白的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测86例大肠癌、38例不典型增生、40例大肠腺瘤中RUNX3、Bcl-2和bax蛋白的表达。结果RUNX3和bax在大肠癌中的阳性表达率分别为28．63％和34．27％,明显低于在不典型增生（86．25％和84．8％）及大肠腺瘤（82．65％和88．34％）中的表达率（P〈0．05）。大肠癌中Bcl-2的表达率（71．47％）明显高于良性病变中表达。RUNX3和bax蛋白表达与大肠癌的临床分期、淋巴结转移呈负相关。bax蛋白表达与病理分级呈负相关,Bcl-2蛋白表达与病理分级呈正相关。大肠癌组织RUNX3阳性细胞率与bax蛋白表达呈正相关（P〈0．01）,与Bcl-2蛋白表达呈负相关（P〈0．05）。结论RUNX3、Bcl-2和bax蛋白在大肠癌的发生发展中起重要作用。     

大肠癌组织中TAMs、TGF—β1表达与上皮间质转化的关系

目的探讨大肠癌组织中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）、转化生长因子β1（TGF—β1）表达与上皮间质转化（EMT）的关系。方法采用免疫组化法检测80例大肠癌及癌旁正常组织中CD68标记的TAMs、TGF—β1、上皮标志物E．cadherin、间质标志物Vimentin蛋白。结果大肠癌组织中TAM计数为（30．6±8．2）个／HP,TGF—β1蛋白阳性58例（72．5％）,E-cadherin蛋白阳性31例（38．8％）,Vimentin蛋白阳性38例（47．5％）;而癌旁正常组织中分别为（16．4±7．2）个／HP、23例（28．8％）、64例（80．0％）、0例。两者比较,P均〈0．01。TAMs计数及TGF-β1、E—cadherin、Vimentin蛋白表达与大肠癌分化程度、浸润深度、Duke分期和淋巴结转移有关（P均〈0．05）。TAMs计数、TGF-β1与E—cadherin蛋白表达呈负相关（r值分别为-0．64、-0．39,P均〈0．01）,而与Vimentin蛋白表达成正相关（r值分别为0．62、0．33,P均〈0．05）。结论大肠癌组织中TAMs浸润及TGF—β1高表达所造成的炎症环境可能与大肠癌的EMT有关。     

非小细胞肺癌中血管内皮生长因子C表达与淋巴结转移关系的研究

目的探讨血管内皮生长因子C（VEGF—C）与非小细胞肺癌（NSCLC）淋巴管生成和淋巴结转移的关系。方法52例NSCLC患者分为淋巴结转移阳性组（25例）和淋巴结转移阴性组（27例）,采用半定量反转录PCR及免疫组织化学方法检测2组患者手术切除癌组织及196枚淋巴结组织（2组各98枚,淋巴结转移阳性组98枚中病理阳性淋巴结72枚,阴性26枚）中VEGF．CmRNA及蛋白的表达。结果淋巴结转移阳性组患者癌组织VEGF-CmRNA表达水平（0．273±0．179）明显高于淋巴结转移阴性组（0．089±0．087,P〈O．01）;阳性淋巴结组织VEGF—CmRNA表达水平（0．207±0．174）明显高于淋巴结转移阴性组的淋巴结组织（011±0．107,P〈0.01）。在淋巴结转移阳性组中,阳性与阴性淋巴结组织VEGF—CmRNA表达水平分别为0．207±0．174、0．196±0．186,差异无统计学意义（p〉O．05）。淋巴结转移阳性组15例患者中14例（93．3％）肺癌组织VEGF—C蛋白表达阳性,46枚阳性淋巴结组织中37枚（8014％）VEGF—C蛋白表达阳性;而淋巴结转移阴性组15例患者中仅1例（6．7％）肺癌组织VEGF-C蛋白表达阳性,52枚淋巴结组织VEGF-C蛋白表达均为阴性,组间差异均有统计学意义（均JD〈O．01）。结论VEGF—CmRNA与蛋白的表达水平与NSCLC淋巴结转移关系密切,在淋巴结转移的早期诊断中有潜在的应用价值。     

L-FABP在大肠腺瘤和大肠癌中的表达及意义

目的探讨肝脂肪酸结合蛋白（L—FABP）在大肠腺瘤和大肠癌中的表达及意义。方法应用免疫组化法检测34例大肠癌癌组织、34例癌旁正常大肠组织及22例大肠腺瘤组织L-FABP的表达。结果大肠癌癌组织、癌旁正常大肠组织及大肠腺瘤组织中L-FABP表达率分别为50．O％、88．2％及72．7％,大肠癌中L—FABP表达率显著低于癌旁正常大肠组织和大肠腺瘤组织（P〈0．05）。大肠腺瘤组织和癌旁正常大肠组织L—FABP表达率无统计学差异（P〉0．05）。L—FABP的表达强度与大肠癌肿瘤生物学特性关系密切（P〈0．01）。结论L—FABP的下调可促进大肠癌的进展。     

大肠癌组织中PTEN和COX-2的表达及其相关性研究

目的通过对PTEN和环氧合酶-2（COX-2）在大肠癌中表达的研究，探讨PTEN和COX-2的相关性。方法应用免疫组织化学S-P法检测58例大肠癌组织及20例正常大肠组织中PTEN和COX-2的表达。结果大肠癌组织中PTEN蛋白表达显著低于正常大肠组织中表达（P〈0．01）。且与淋巴结转移及Dukes分期相关（P〈0．05），而与大肠癌组织分化程度不相关（P〉0．05）。COX-2在大肠癌中的表达显著高于正常大肠黏膜的表达（P〈0．01），与淋巴结转移及Dukes分期相关（P〈0．05），而与大肠癌组织分化程度不相关（P〉0．05）。PTEN在大肠癌中的表达与COX-2呈负相关（P〈0．05）。结论PTEN失活或蛋白表达降低与大肠癌淋巴结转移及Dukes分期相关，且与COX-2呈负相关。抑癌基因PTEN和COX-2在大肠癌的发生发展过程中起着重要的作用。     

蛋白激酶B在胃癌中的表达及其生物学意义

目的研究丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶（Akt）在胃癌中的表达、活化情况及其与血管内皮生长因子C（VEGF—C）的关系，以初探Akt表达和活化的生物学意义及其可能的机制。方法采用RT—PCR法检测20例新鲜胃癌及癌旁正常组织标本中Akt1、Akt2和Akt3 mRNA的表达；Western印迹法检测Akt和磷酸化Akt（pAkt）蛋白的表达；免疫组化检测pAkt蛋白和VEGF-C在55例胃癌配对组织中的原位表达。结果20例胃癌及相应癌旁正常组织中Akt1、2、3mRNA的表达阳性率皆为100％，且三者在癌和正常组织中的表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。Western印迹显示Akt蛋白在胃癌组织中的表达水平为正常组织的2．7倍（P〈0．001），而pAkt蛋白的表达水平为癌旁正常组织的4．1倍（P％0．01）。免疫组化分析表明，pAkt表达于67．3％（37／55）的胃癌组织，且较高表达于组织分化较差（X^2=9．751，P％0．01）和TNM分期较晚（X^2=7．684，P〈0．05）者；VEGF—C在胃癌组织中的表达阳性率为61．8％（34／55），其表达与肿瘤的TNM分期（X^2=9．298，P〈0．01）及淋巴结转移（X^2=7．605，P〈0．05）密切相关，统计分析表明，pAkt与VEGF—C的表达呈显著性正相关（Pearson r=0．524，P〈0．05，Spearman，rho=0．747，P〈0．01）。结论Akt及pAkt蛋白特异性过表达于胃癌组织，可能是蛋白翻译水平和（或）代谢水平改变的结果。Akt蛋白的磷酸化可能促进胃癌细胞的恶性转化和淋巴结转移，VEGFC可能在其中发挥重要的介导作用。     

应用表达载体介导siRNA抑制胰腺癌STAT3基因表达的研究

目的探讨表达载体介导小干扰RNA（siRNA）对人胰腺癌细胞系SW1990转录激活因子-3（STAT3）表达的抑制作用。方法设计合成3种可编码后形成小发夹结构针对STAT3基因的siRNA的DNA序列，将其连入pRNAT—U6．1／Neo质粒中，构建STAT3siRNA表达载体。表达载体进行PCR及测序鉴定，并分别转染SW1990细胞，实时定量PCR和Western blot观察SW1990细胞转染后STAT3 mRNA和蛋白表达的改变。结果PCR和DNA测序证实携带3种STAT3 siRNA表达载体构建成功，分别转染SW1990细胞后，STAT3基因的mRNA和蛋白表达量与空质粒转染相比均明显下降（P〈0．05），其中，第二种STAT3 siRNA作用明显，可使mRNA和蛋白表达水平分别下降63％和60％。结论本研究构建的STAT3．siRNA表达载体可有效抑制SW1990细胞STAT3的mRNA和蛋白表达，为下一步以STAT3为靶点的胰腺癌基因治疗实验研究奠定了基础．     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球信号转导和转录活化因子3表达的影响

目的探讨氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球信号转导和转录活化因子3(STAT3)及STAT3 mRNA表达的影响。方法30只大鼠随机分成正常对照组、糖尿病组和氯沙坦治疗组(每日灌胃给予氯沙坦40mg／kg，共2周)。腹腔注射STZ诱发糖尿病大鼠模型，采用免疫组化和Western印迹检测磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达，Western印迹检测STAT3蛋白表达，半定量RT—PCR检测STAT3 mRNA的表达。结果糖尿病组肾小球STAT3、p-STAT3及STAT3 mRNA表达较正常对照组明显增强；氯沙坦治疗组p-STAT3表达较糖尿病组降低，但对STAT3蛋白及STAT3 mRNA的表达无明显影响。结论氯沙坦的肾脏保护作用可能是部分通过影响STAT3磷酸化，抑制信号通道而发挥作用。     

卵巢上皮性癌组织中EGFR、STAT3 mRNA的表达及意义

目的观察卵巢上皮性癌（卵巢癌）组织中表皮生长因子受体（EGFR）与信号转导和转录激活因子3（STAT3）mRNA的表达,并探讨其意义。方法用RT-PCR技术检测13例正常卵巢、11例卵巢良性肿瘤及43例卵巢癌组织中的EGFR mRNA和STAT3 mRNA。结果卵巢上皮性癌组织中EGFR、STAT3 mRNA阳性表达率显著高于正常卵巢及卵巢良性肿瘤组织（P均〈0.05）。卵巢上皮性癌组织中EGFR、STAT3 mRNA表达均与卵巢癌病理分期有关,与患者年龄、肿瘤分化程度、组织学类型及有无淋巴结转移等临床病理参数无关（P均〉0.05）;卵巢癌组织中EGFR和STAT3 mRNA表达有显著相关性（r=0.42,P〈0.01）。结论卵巢癌组织中EGFR、STAT3表达上调。二者在卵巢癌的发生发展中起重要作用。     

RNAi沉默STAT3基因表达对Lewis肺癌细胞生长影响的实验研究

目的 探讨RNA干扰技术沉默转录信号传导子与激活子家簇3（STAT3）对Lewis肺癌细胞凋亡、细胞生长抑制的影响。方法 应用真核细胞转染技术将Psilencer2.1-U6一siRNA—STAT3重组质粒转入小鼠Lewis肺癌细胞，同时分别设立转染空质粒阴性对照组和转染试剂阴性对照。于72h后收集细胞，分别提取细胞总蛋白及总RNA，分别用Western blot和RT—PCR测定STAT3基因在蛋白水平及mRNA水平的表达，用MMT法测定细胞的生长抑制状态，通过流式细胞仪检测Lewis肺癌细胞凋亡情况。结果 重组质粒明显抑制STAT3蛋白的表达、降低STAT3 mRNA水平并诱导Lewis肺癌细胞凋亡、使肿瘤细胞生长明显受抑。结论 Psilencer2.1-U6-siRNA—star3 Lewis转染肺癌细胞后，可有效抑制STAT3蛋白表达和STAT3 mRNA的表达，诱导Lewis肺癌细胞凋亡和肿瘤细胞生长抑制。     

Ghrelin对脓毒症小鼠肺脏炎症及JAK/STAT通路的影响

目的 通过观察生长素释放肽(ghrelin)对脓毒症小鼠肺组织炎症反应、肺组织janus激酶/信号转导通路和转录激活因子mRNA、STAT3蛋白及肺组织炎细胞因子肿瘤细胞α(TNF-α)、IL-6的表达水平的影响,探讨ghrelin在脓毒症炎症反应中的调节作用及可能的分子机制.方法 选用腹腔注射脂多糖的方法制作小鼠脓毒性模型:选取雌性小鼠54只,随机分为对照组、模型组及ghrelin干预组,对照组经腹腔注射等量生理盐水;模型组经腹腔内注射脂多糖(6 mg/kg);干预组先经腹腔注射ghrelin(200 μg/kg),30 min后再经腹腔注射脂多糖(6 mg/kg);各组分别于3、9、18h随机处死小鼠各6只,光镜下观察肺组织炎症改变;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检查肺组织STAT3mRNA的基因转录水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定肺组织STAT3、TNF-α、IL-6的表达量.结果 Ghrelin可抑制肺组织STAT3mRNA基因转录活性,从而降低STAT3蛋白表达、减少炎症因子TNF-α、IL-6的分泌(P值均＜0.05);改善脓毒症小鼠肺组织病理结构损伤(充血、水肿、炎症细胞浸润).结论 ghrelin可减轻脓毒症小鼠肺脏炎症反应,其作用机制可能与抑制了janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT通路)、下调TNF-α和IL-6的表达有关.     

VEGF-D expression correlates with colorectal cancer aggressiveness and is downregulated by cetuximab

AIM： To gain mechanistic insights into the role played by epidermal growth factor receptor （EGFR） in the regulation of vascular endothelial growth factors （VEGFs） in colorectal cancer （CRC）. METHODS： The impact of high-level expression of the growth factor receptors EGFR and VEGF receptor （VEGFR）3 and the VEGFR3 ligands VEGF-C and VEGF-D on disease progression and prognosis in human CRC was investigated in 108 patients using immu- nohistochemistry. Furthermore, the expression of the lymphangiogenic factors in response to the modulation of EGFR signalling by the EGFR-targeted monoclonal antibody cetuximab was investigated at the mRNA and protein level in human SW480 and SW620 CRC cell lines and a mouse xenograft model. RESULTS： Human CRC specimens and cell lines displayed EGFR, VEGF-C and VEGF-D expression with varying intensities. VEGF-C expression was associated with histological grade. Strong expression of VEGF-D was significantly associated with lymph node metas- tases and linked to a trend for decreased survival in lymph node-positive patients. EGFR blockade with cetuximab resulted in a significant decrease of VEGF-D expression in vitro and in vivo. CONCLUSION： In conclusion, the expression of VEGF-D in colorectal tumours is significantly associated with lymphatic involvement in CRC patients and such expression might be blocked effectively by cetuximab.