缺血再灌注对兔心肌肌浆网Ryanodine受体2功能的影响

目的 评价缺血再灌注（I／R）对心肌肌浆网（SR）钙释放功能的影响。方法 将16只新西兰兔完全随机平分为对照组、缺血再灌注组；采用langendorff离体心脏灌注模型；蔗糖密度梯度离心法制备心肌肌浆网；微孔滤过滤技术测定心肌肌浆网钙转运功能改变；并定量RT－PCR检测相应蛋白质mRNA表达水平改变。结果与对照组相比，缺血再灌组肌浆网摄钙增幅未见减少，而Ryanodine受体2（RYR2）mRNA表达水平改变。结果 与对照组相比，缺血再灌组肌浆网摄钙增幅未见减少，而Ryanodine受体2（RYR2）mRNA表达水平明显减少。结论 缺血再灌注后心肌肌浆网Ryanodine受体2基因表达减少，然后总的释钙量未见减少。     

氧自由基在缺血再灌注休克兔胃粘膜损伤中的作用研究

本实验旨在探讨氧自由基(OFR)在缺血再灌注休克胃粘膜损伤中及过氧化氢酶(CAT)抗OFR的作用。应用电子自旋共振(electron spin resonance,ESR)技术直接测定家兔胃粘膜缺血再灌注休克前后及CAT治疗后OFR的改变,同时检测胃粘膜中超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化。并观察其病理改变。结果表明:缺血90分钟胃粘膜OFR浓度已明显升高(P<0.05),再灌注后进一步递升(P<0.01),CAT治疗组OFR浓度显著低于再灌注组(P<0.01),SOD活性在再灌注后显著下降(P<0.01)。病理改变严重程度与OFR浓度变化趋势一致。     

电子自旋共振检测N-乙酰半胱氨酸对大鼠缺血-再灌注心肌中氧自由基的消除作用

目的分析于心肌缺血前全身应用N-乙酰半胱氨酸(NAC)对缺血-再灌注(I/R)后不同时刻的离体大鼠心肌组织中氧自由基(OFR)的作用情况及其动态变化,探讨NAC对离体大鼠I/R心肌中OFR的消除作用效果及程度.方法将实验大鼠分成对照组(Ctrl组)和NAC用药组(NAC组),于术前用药(分别为生理盐水和NAC),制成Langendorff离体心脏灌注模型.用电子自旋共振(ESR)波谱直接检测心肌中的OFR,观察两组再灌注后不同时刻的大鼠心肌中,OFR信号在ESR波谱中出现的频度及强度,x2检测分析两组大鼠心肌在再灌注后不同时刻的OFR信号检测阳性率的差异显著性.结果再灌注后的NAC组心肌中,无论从OFR出现的频度还是强度均较Ctrl组有较大改善(降低),OFR在再灌注后出现高峰的时机明显延迟,其再灌注后5 min和10 min的OFR信号检测阳性率较Ctrl组显著降低(P＜0.002 5),并以再灌注后5 min时最为显著.结论 NAC能明显消除离体大鼠I/R后心肌中的OFR,加强再灌注后心肌的抗氧化能力,降低OFR对心肌组织的损害程度,对缺血-再灌注心肌起到明显的保护作用.     

离体大鼠心肌缺血-再灌注损伤的电子自旋共振再观察

本文通过对于大鼠离体心肌缺血-再灌注的电子自旋共振(ESR)研究,观察到Mn(Ⅱ)在大鼠心肌组织中的存在,并发现过渡金属离子与心肌细胞中产生的超氧自由基的形成与消灭有着密切关系,提出超氧自由基在组织中可能以结合态的形式存在着。并通过对在液氮下心肌组织ESR谱变化的观察,认为即使在液氮“冷冻状态”下也不能完全终止细胞内的反应,提出利用液氮保存生物自由基样品,然后进行集中检测的方法是不可取的。     

大鼠肾下腹主动脉缺血再灌注对心肌肌浆网钙泵活性及其基因表达的影响

目的：观察大鼠肾下腹主动脉缺血再灌注对心肌肌浆网钙泵（sarcoplasmic reticulum Ca^2＋ -ATPase,SERCA）的活性及其基因表达的影响。方法：复制大鼠肾下腹主动脉缺血再灌注（ischemia and reperfusion,I／R）模型。将SD雄性大鼠随机分为假手术组,缺血30min分别再灌注2、12、24和48h（I／R2h组、I／R12h组、I／R24h组、I／R48h组）。采用无机磷比色法检测缺血再灌注不同时间点心肌肌浆网SERCA活性,反转录酶PCR技术测定SERCA基因的表达。结果：I／R24h组、I／R48h组SERCA的活性及基因表达均冠著低于假手术组（P〈0．01）;I／R12h组SERCA的活性均低于似手术组（P〈0．01）,但基因表达无明显变化（P〉0．05）;I／R2h组SERCA的活性及其基因表达与假手术组差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论：肾下腹主动脉缺血再灌注过程严重影响SERCA的活性及其基因的表达。     

ET-1增加大鼠心肌氧自由基含量的研究

目的探讨外源性内皮素-1(ET-1)是否能够增加大鼠心肌氧自由基的含量。方法 30只雄性SD大鼠平均分为3组:ET-1组:冠状动脉口注射ET-1900pmol·kg-1;SOD-1+ET-1组:冠状动脉口注射SOD-10.6mg·kg-14min后再注射ET-1900pmol·kg-1;对照组:冠状动脉口注射生理盐水0.6ml·kg-1。麻醉状态下注射ET-1或生理盐水10min后取左心室心肌约300mg,10min内用电子自旋共振(ESR)波谱仪检测心肌氧自由基的含量。结果 ET-1组心肌氧自由基的波幅比注射生理盐水组明显增高(P<0.05),而SOD-1+ET-1组氧自由基的波幅低于ET-1组(P<0.05)。结论外源性ET-1可直接增加心肌细胞氧自由基的产生。     

紫绀缺氧未成熟心肌对缺血再灌注损伤耐受性的兔实验

【目的】构建幼兔缺氧模型,研究紫绀缺氧未成熟心肌对缺血-再灌注损伤的耐受性。【方法】新生幼兔28只,分2组,Ⅰ组(缺氧组)、Ⅱ组(对照组)。Ⅰ组置于常压低氧饲养舱中喂养7～9d,构建慢性缺氧模型。在Langendorff缺血—再灌注离体心脏模型上,观察2组再灌注末心肌损伤程度及心功能恢复情况,从分子生物学和超微结构角度,初步探讨其机制。【结果】缺氧幼兔心肌大量中小线粒体增生,超氧物歧化酶(SOD)活性下降,腺苷三磷酸(ATP)含量减少。与Ⅰ比较,再灌注末Ⅱ组心肌SOD下降幅度和丙二醛(MDA)上升幅度增大(27.3±4.9)%比(14.1±8.7)%;(66.79±12.8)%比(36.5±10.1)%;心肌ATP下降更为明显(39.0±3.5)%,比(25.1±5.7)%;再灌注后冠状窦流量恢复率(CFR)、心肌收缩力恢复率也不如对照组,超微结构破坏程度更为显著。【结论】缺氧紫绀幼兔心肌对缺血—再灌注损伤耐受性下降,长期缺氧使未成熟心肌抗氧自由基酶活性下降,ATP和糖原消耗,对再灌注后氧自由基损伤更敏感。     

煎炸油中自由基的电子自旋共振(ESR)研究

用ESR法测定了三种煎炸油(豆油、菜油、棉籽油)中的自由基。结果表明,炸油中自由基浓度随油温的升高和加热时间的增长而增加,在200℃左右自由基浓度激增。煎炸油中自由基寿命相当长。     

结肠癌细胞中氧自由基含量的临床测定

目的测定结肠癌细胞内氧自由基含量,探索结肠癌细胞内微量元素与肿瘤生长的关系.方法采用紫外可见分光光度仪等先进设备检测临床结肠癌标本中氧自由基中间产物MDA含量,进而分析氧自由基与结肠癌发病的内在联系.结果结肠癌细胞中氧自由基含量明显高于正常组织.结论结肠癌细胞内氧自由基的水平可能影响临床结肠癌的发生与发展.     

肌浆网内钙容量减少对心肌细胞钙释放的影响

目的:较系统地研究肌浆网(SR)内钙容量的减少对心肌细胞钙释放的影响.方法:采用肌浆网膜的钙泵抑制剂thapsigargin(TG)耗减SR内钙容量,以喷咖啡因的方法估测SR内钙容量,以局部场刺激的方法诱发全细胞的钙释放.胞内钙信号的变化均采用激光共聚焦显微镜的方法记录.结果:SR钙泵抑制剂TG以剂量依赖和非线性的时间依赖方式引致心肌细胞SR内钙容量的耗减,而钙容量的耗减可相应地引起全细胞水平的钙释放减少.但二者的变化不完全平行,SR内钙容量的少量减少即可引起胞内钙释放的显著减少,而当SR内钙耗减到一定程度后(虽然此时SR内Ca2 仍远高于胞质内钙),场刺激已很难或无法引致钙释放.结论:心肌细胞SR内钙容量对胞内钙释放具有重要的非线性调节作用.     

性激素和氧自由基与冠心病的相关性研究

为探讨性激素、氧自由基对冠心病（ Ｃ Ｈ Ｄ） 发病的影响,检测绝经后女性 Ｃ Ｈ Ｄ 患者（ ｎ ＝ ４４） 和对照组（ ｎ ＝ ２２） 血清雌二醇（ Ｅ２） 睾酮（ Ｔ） 、超氧化物歧化酶（ Ｓ Ｏ Ｄ） 、丙二醛（ Ｍ Ｄ Ａ） 及血脂水平。结果表明： Ｃ Ｈ Ｄ 组血清 Ｔ, Ｍ Ｄ Ａ 水平显著高于对照组, Ｅ２ , Ｅ２／ Ｔ 和 Ｓ Ｏ Ｄ 显著低于对照组; Ｃ Ｈ Ｄ 组血清 Ｅ２ 与 Ｓ Ｏ Ｄ 呈正相关,与 Ｍ Ｄ Ａ 呈负相关;尼尔雌醇替代治疗１２ 周后血清 Ｓ Ｏ Ｄ 及 Ｈ Ｄ Ｌ Ｃ／ Ｔ Ｃ 显著升高,而血清 Ｌ Ｄ Ｌ Ｃ和 Ｍ Ｄ Ａ 显著降低。提示雌激素水平降低及氧化与抗氧化平衡紊乱与绝经后女性 Ｃ Ｈ Ｄ 有密切关系;尼尔雌醇替代治疗能改善血脂代谢和抗脂质过氧化,可望对女性 Ｃ Ｈ Ｄ 的防治起积极作用。     

PKC激活对离体心肌缺血再灌注自由基损伤和钙超载的影响

目的：探讨缺血预处理（IPC）保护机制中蛋白激酶C（PKC）的激活对心有缺血再灌注后的自由基损伤和钙离子（Ca^2 ）代谢的影响。方法：采用大鼠离体心脏Langendorff灌流模型，以心肌组织丙二醛（MDA）含量，线粒体中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－PX）活性以及线粒体Ca^2 含量，细胞肌浆网钙泵（Ca^2 －ATPase）活性作为反映心肌自由基代谢及Ca^2 代谢指标，观察IPC对上述指标的影响及PKC的可能作用。结果：与对照组比较，心肌单纯的缺血再灌注（I／R）可造成心肌明显的自由基及Ca^2 代谢的异常，经过IPC可使再灌注心肌这种代谢异常明显减轻，表现为IPC组心肌组织MDA含量、线粒体Ca^2 含量显著低于单纯I／R组（P均＜0．01），线粒体中GSH－PX活性，肌浆网Ca^2 －ATPase活性明显高于I／R组（P＜0．05），而在预处理过程中应用多粘菌素B抑制PKC的激活，则预处理的上述有益作用可被阻断。结论：PKC活化通过减轻心肌缺血再灌注后自由基损伤及Ca^2 超载而参与心肌缺血预处理保护。     

肌浆网释放Ca2+对心房钠尿肽分泌的影响

目的 观察肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)释放Ca2+对心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)分泌的影响.方法 利用SR激活剂和阻断剂,采用搏动的离体心房灌流模型及放射免疫技术观察SR释放Ca2+对家兔心房ANP分泌的变化.结果 SR抑制剂Ryanodine明显促使心房ANP的分泌,同时显著抑制心房搏出量和心房搏动压,而SR激活剂咖啡因的作用与Ryanodine完全相反.心肌兴奋-收缩耦联脱敏剂2,3-丁二酮单肟(BDM)促使ANP的分泌,对心房搏出量和心房搏动压呈抑制效应.腺苷酸环化酶直接激活剂福司柯林明显抑制ANP分泌,同时显著增加cAMP逸出量和心房搏出量.阻断L-型Ca2+通道明显促进心房ANP的分泌,但未能改变咖啡因对ANP分泌的抑制效应.结论 阻断SK或L-型Ca2+通道使细胞内Ca2+浓度降低可促进ANP的分泌,而激活二者则抑制ANP分泌.     

美托洛尔对心衰大鼠肌浆网Ca2+-ATP酶及心功能的影响

目的 探讨美托洛尔对心衰大鼠肌浆网Ca2+-ATP酶及心功能的影响.方法 腹主动脉缩窄法建立心衰大鼠模型,同时设假手术组.对心衰大鼠随机分为心力衰竭组及美托洛尔组10 mg/(kg·d),观察6周,行心脏超声、血流动力学检查及SERCA2a蛋白及活性测定.结果 同假手术组比较,心衰大鼠左室舒张末压(LVEDP)显著升高,短轴缩短率(FS)、左室收缩压(LVSP)、压力最大上升及下降速率(±dp/dt max)显著降低(P＜0.05),左室收缩、舒张末直径(LVESD/LVEDD),左室后壁厚度(LVPWD)、室间隔厚度(VSD)及左室质量指数(LVWI)显著增加(P＜0.05);美托洛尔治疗后,LVSP、±dp/dt max较心衰组显著增加(P＜0.05),LVEDD、VSD、LVWI显著减小(P＜0.05),但未达到假手术组水平(P＜0.05);同心衰组比较,美托洛尔对SERCA2a蛋白量无明显影响,能显著升高其活性(P＜0.05),但未达到假手术组水平(P＜0.05).结论 美托洛尔对SERCA2a蛋白量无明显影响,但能显著升高其活性,这可能是其改善心衰大鼠的心脏功能,抑制心肌重塑的机制之一.     

肌浆网钙调节蛋白在心肌肥厚病理中的作用

目的 :探讨心肌肌浆网钙调节蛋白功能变化在高血压左心室肥厚病理中的作用。方法 :用自发性高血压大鼠 (SHR)制成左心室肥厚模型 ,以 [3 H]ryanodine为放射配基、p 硝基苯酰磷酸 (PNPP)为底物分别测定左心室肌浆网ryanodine受体密度及钙ATP酶活力的改变。结果 :(1)SHR左心室肥厚时 ,ryanodine受体Bmax值比对照组 (WKY组 )升高 (P <0 .0 1) ,亲和常数 (Kd)无变化 ;钙ATP酶活力下降 (P <0 .0 1)。 (2 )与SHR组相比 ,SHR培哚普利治疗组ryanodine受体Bmax下降 (P <0 .0 5 ) ,钙ATP酶活力上升 (P <0 .0 5 )。结论 :高血压左心室肥厚与血管紧张素Ⅱ介导的肌浆网钙调节蛋白功能变化密切相关     

大豆异黄酮对糖尿病大鼠心肌钙调控蛋白基因表达的影响

目的:探讨大豆异黄酮对糖尿病大鼠心肌细胞肌浆网钙调控蛋白基因表达的影响。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照(NC)组、糖尿病对照(DC)组、大豆异黄酮治疗(ST)组和尼尔雌醇治疗(NT)组。后3组腹腔注射链脲佐菌素55 mg/kg制备糖尿病模型。第7周起,NC、DC组予0.5%羧甲基纤维素钠10 m.lkg-1.d-1,ST组予大豆异黄酮120 m l.kg-1.d-1,NT组予尼尔雌醇混悬液每周0.2 mg/kg灌胃2次。第12周末记录离体心室内压曲线并分析。取心室肌组织,应用RT-PCR技术测定钙调控蛋白的基因表达。结果:与NC组比,DC组大鼠左心室收缩压、平均压、室内压最大上升/下降速率降低(P<0.01);与DC组比,ST组、NT组以上指标均增高(P<0.01)。而左心室舒张末压,DC组明显高于NC组(P<0.01);ST组、NT组均低于DC组(P<0.01)。与NC组比,DC组大鼠心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA)、兰尼碱受体2型(RyR₂)、1,4,5三磷酸肌醇受体2型(IP₃R₂)mRNA表达降低,但受磷蛋白(PLB)mRNA表达增高(P<0.01)。与DC组比,ST组、NT组大鼠心肌SERCA、RyR₂、IP₃R₂mRNA表达增高,而PLB mRNA表达降低(P<0.01)。结论:大豆异黄酮可以改善糖尿病大鼠左心室功能,可能与其上调心肌SERCA、RyR₂、IP₃R₂mRNA的表达和下调PLB mRNA的表达有关。