广东省2014年食源性副溶血弧菌病原学特征分析

目的 了解2014年广东省食源性副溶血弧菌分离株的血清型别、抗生素敏感性、毒力基因携带情况以及分子分型特征。方法 对60株副溶血弧菌分离株进行血清分型、抗生素敏感性试验及检测耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热相关溶血素基因(trh),并进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列(MLST)分型。结果 60株分离株可分为13个血清型,主要型别为O3:K6、O4:K8、O1:K36和O4:KUT;对氨苄西林、磺胺复合物和头孢噻吩的耐药率分别为100.0%、43.3%和28.3%,有56.7%(34/60)的菌株对2类及以上抗生素同时耐药,2株菌对3类抗生素同时耐受。毒力基因PCR检测发现,有63.3%(38/60)的分离株为tdh⁺trh^-菌株,仅1株为tdh⁺trh+菌株。分子分型显示,经NotⅠ酶消化后,60株副溶血弧菌可产生48个PFGE谱型,可分为3个聚类(Cluster A、B和C)。其中Cluster B的菌株主要分离自食源性疾病监测中心散发病例,血清型以O3:K6为主,PFGE谱型的相似度在62.6%～100.0%;Cluster C主要是由4株O4:K8型菌株组成,谱型相似度为56.7%～62.5%。60株菌MLST分型可分为26个ST型,其中33株菌为ST-3型,主要是O3:K6和O1:K36菌株;4株O4:K8菌株聚集成另一个不同于ST-3型的相对优势的菌群。结论 2014年广东省副溶血弧菌菌型多样性可能是疾病高发的原因之一,O4:K8型菌株的分子特征与其他优势血清型别明显不同,应高度警惕该型菌株引起暴发的可能。     

2008年-2010年台州市食源性副溶血性弧菌分子特征研究

目的:分析2008年-2010年台州市食源性副溶血性弧菌的主要毒力基因分布情况及分子分型特征,为建立台州市副溶血性弧菌的DNA指纹图谱数据库提供基础。方法:利用PCR方法对52株食源性副溶血性弧菌检测主要毒力基因(tdh、trh、tlh、ureC、T3SS-2(vscC2、vcrD2)),并用PFGE分析部分菌株的基因分型特征。结果:在52株食源性副溶血性弧菌中检出同时携带tdh基因和vscC2基因1株;25株菌被分为25种PFGE图谱,聚类分析显示菌株间呈现明显多态性。结论:台州市食源性副溶血性弧菌主要毒力基因携带率低,菌株间基因呈多态性,没有发现优势菌群,提示本地食品中副溶血性弧菌不存在流行趋势。     

深圳市2007--2008年腹泻病副溶血弧菌监测及分子特性分析

目的 了解深圳地区2007年和2008年腹泻病副溶血弧菌感染状况和临床分离株的分子生物学特征.方法 4个哨点监测医院每月至少对80份腹泻病例的粪便样本进行致病菌分离培养.对所分离的361株副溶血弧菌进行血清型分型和两个主要毒力基因tdh和trh的检测.对2007年8月和2008年9月6个疑似腹泻暴发地点的60株O3:K6型副溶血弧菌分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型.结果 4个哨点临测医院共检测4384份标本,分离出361株副溶血弧菌,361株副溶血弧菌分属于28种不同的血清型,其中O3:K6型占67.90%,其次是O4:K8和O1:KUT血清型,所占比例分别为7.50%和6.10%.深圳地区腹泻病副溶血弧菌临床分离株主要是tdh+trh-菌株,361株菌株中有337株是tdh+trh-菌株,11株为tdh-trh-菌株,13株为tdh+trh+菌株.60株副溶血弧菌分型得到20种图谱类型,分别属于3个克隆群.分离自同一个地点的副溶血弧菌菌株具有相同的PFGE图谱,来自不同年份的菌株仅有部分菌株有相同的PFGE图谱.结论 深圳地区腹泻患者的副溶血弧菌分离菌株主要以O3:K6型为主,大部分菌株携带tdh基因,少数携带trh基因.来自6个地点的副溶血弧菌都具有相同的PFGE图谱,说明该地区存在副溶血弧菌腹泻病的暴发.但2007年和2008年菌株的PFGE图谱又不相同,说明副溶血弧菌的来源存在多样性.     

广东省食源性副溶血弧菌表型特征与分型比较研究

目的 了解广东省食源性副溶血弧菌的表型特征,并对其分型进行综合比较.方法 对分离自广东省水产品和食物中毒的74株副溶血弧菌分离株进行生化鉴定、药敏试验、耐热直接溶血素(tdh)和耐热直接溶血素相关溶血素(trh)毒力基因的PCR检测.并对副溶血弧菌进行血清分型、核糖体基因分型(Ribotyping)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,应用BioNumerics软件对不同来源、时间和地点的分离株进行比对,分析菌株之间的相关性.结果 副溶血弧菌除对氯霉素100.00％敏感外,对其余13种抗生素均有不同程度的耐药.tdh阳性率为24.32％、trh阳性率为4.05％.74株副溶血弧菌分为26种血清型,O5:K17和O2:K28型为水产品分离株的优势血清型,O3:K6型为食物中毒分离株的优势血清型.74株副溶血弧菌分为62个核糖体型、67个PFGE型,表现出较大的遗传多样性.结论 广东省大部分食物中毒副溶血弧菌分离株携带tdh毒力基因.3种分型方法中,PFGE的分辨率最高,Ribotyping居中,血清分型最低,3种方法相结合可提高分辨率.     

沈阳地区副溶血弧菌脉冲场凝胶电泳分析

目的 运用脉冲场凝胶电泳技术(pulsed-fieldgelelectro phoresis,PFGE)和PCR技术对辽宁沈阳市2010年7-8月份临床粪便标本分离的副溶血性弧菌进行毒力基因检测和分子分型分析.方法 运用PCR技术检测24株副溶血弧菌的耐热溶血素基因(tdh)、耐热溶血素相关溶血素基因(trh)和不耐热溶血素基因(tl);用PFGE技术对其进行分子分型和聚类分析.结果 24株副溶血弧菌均含有tdh和tl基因,表明均为有毒株;PFGE结果显示,24株菌株可分为10种图谱型,其中17株O3:K6被分为4种型别(仅相差1～3条带),表明17株O3:K6在流行病学上密切相关,提示沈阳地区可能存在副溶血弧菌腹泻病的局部暴发或流行.结论 沈阳地区流行的食源性副溶血弧菌存在基因型的多样性,但以遗传关系密切的O3:K6型为优势型别.     

2018-2022年北京市某区腹泻病例副溶血弧菌流行与分子分型特征

目的 分析2018—2022年北京某平原郊区腹泻病例中副溶血弧菌的流行状况和分子分型特征,为疾病暴发和病原检测提供参考。方法 分析由副溶血性弧菌引起的腹泻病例流行病学及临床资料,对病例的分离菌株进行毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分子分型,利用致病菌识别网对PFGE图谱进行聚类分析。结果 腹泻病例中副溶血弧菌检出率为6.83%(87/1 273),不同年份和年龄组检出率差异有统计学意义(χ²_趋势=16.47,χ²=0.005,P<0.01;病例主要临床症状为腹泻(98.85%,86/87)、恶心(87.36%,76/87)、腹痛(68.97%,60/87);分离菌株有11种血清型,构成比前3位为O3∶K6 (58.62%,51/87)、O10∶K4 (14.94%,13/87)和O4∶KUT (10.34%,9/87),O3∶K6血清型比例随年份下降,O10∶K4血清型比例随年份上升,差异有统计学意义(χ²_趋势...     

2008年广东省食物中毒副溶血弧菌分子特征研究

目的了解2008年广东省副溶血弧菌食物中毒分离株的血清分型及分子特征。方法对2008年广东省14起副溶血弧菌食物中毒事件中90株分离自病例和9株分离自相关食物的菌株进行血清分型,耐热溶血素基因（tlh）、耐热直接溶血素相关基因（trh）和耐热直接溶血素基因（tdh）PCR检测以及选取优势菌型O3∶K6和O4∶K8血清型进行ER IC-PCR分子分型。结果 90株病例来源菌株以O3∶K6（62.2%）和O4∶K8（14.4%）血清型为主,9株食物来源菌株血清型别多样,无优势菌型,且同时分离到病例及食物来源菌株的4件事件中有3起食物来源菌株的血清型与同一事件中从病例分离到的血清型不同。PCR检测发现,99株副溶血弧菌tlh基因均为阳性,trh基因均为阴性,tdh基因88株阳性,其中食物来源菌株tdh基因阳性率为11.1%（1/9）,病例来源菌株tdh基因阳性率为96.7%（87/90）。选取22株O3∶K6血清型和10株O4∶K8血清型菌株（均分离自病例）进行ER IC-PCR分子分型分析,结果显示,2种血清型菌株可分为8个ER IC型别,且可区分为2类不同的聚类,这2类聚类之间的相似值为54.7%。同1起食物中毒事件中分离到的O3∶K6或O4∶K8血清型,其ER IC型别表现出多样性;而不同食物中毒事件中分离到的O3∶K6或O4∶K8血清型,部分菌株ER IC型别表现出100%的相似性。结论广东省副溶血弧菌食物中毒分离株血清型多样,同一血清型菌株存在遗传多样性,一群遗传关系密切的trh阴性、tdh阳性的O3∶K6和O4∶K8血清型为副溶血弧菌食物中毒优势菌型。     

辽宁省腹泻病例中副溶血弧菌表型及基因型特征

目的 了解辽宁地区副溶血弧菌腹泻病例分离株的表型及基因型特征。方法 对2012-2013年辽宁地区101株副溶血弧菌临床分离株进行血清型分型;采用微量肉汤法,进行16种抗菌药物的药敏试验;通过PCR方法对其进行tlh、tdh和trh毒力基因检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对菌株进行基因分型。结果 101株副溶血弧菌分属于25种血清型,其中O3:K6为优势血清型,占37.62%(38/101);对磺胺甲恶唑、链霉素、氨苄西林产生耐药;对环丙沙星、强力霉素、头孢吡肟、甲氧苄啶、亚胺培南、头孢曲松钠等均具有较高敏感性;全部菌株tlh基因阳性;tdh存在于大部分菌株中,所占比例为84.16%(85/101);全部菌株trh基因阴性;O3:K6型菌株tdh基因阳性率100%,明显高于非O3:K6型菌株(76.19%,77/101)(P=0.00081)。101株副溶血弧菌分成63种型别,38株O3:K6型菌株分成19种型别,带型分散,无明显聚集性。结论 辽宁省感染性腹泻病例副溶血弧菌分离株以O3:K6型为主;毒力基因tlh和tdh携带率高,且O3:K6型临床分离株毒力更强;副溶血弧菌对多数抗生素均具有较高敏感性;PFGE结果提示辽宁地区流行的副溶血弧菌存在多克隆来源。     

深圳西乡近五年副溶血弧菌的分子特征及血清型别变迁研究

目的了解深圳西乡街道五年来引起感染性腹泻的副溶血弧菌血清型分布、毒力因子及分子流行病学特征,为暴发疫情早期预警预测提供基础数据。方法用传统血清凝集法做血清型鉴定、用荧光PCR法检测毒力基因,再采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对副溶血弧菌进行分子分型。并用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行聚类分析。结果从4 825份标本中,分离出目标致病菌1 077株,其中病原菌副溶血弧菌851株,占79.01%。851株中,563株副溶血弧菌为O3:K6型,占66.15%,其次是O4:K8型,占10.34%。93.4%(795/851)的菌株是tdh+tlh+trh-菌株。对60株O3:K6型副溶血弧菌进行PFGE图谱分析共得到20种不同的PFGE图谱类型,各菌株图谱条带差异小于3条。结论深圳西乡街道五年来副溶血弧菌感染以O3:K6型为主,93.4%的菌株是tdh+tlh+trh-菌株。各菌株图谱具有同源性。     

杭州地区2000-2002年副溶血弧菌的分子分型研究

目的了解杭州地区2000-2002年副溶血弧菌临床和环境分离菌株的分子流行病学特征.方法对172株2000年和2002年从临床食物中毒患者和散发腹泻病例以及外环境（小水产品）中分离的副溶血弧菌菌株进行血清分型.对40株临床来源O3：K6型菌株及环境来源O3：KUT（K抗原未分型）型菌株,应用PCR技术进行耐热直接溶血素基因（tdh）和耐热直接溶血素相关基因（trh）的检测,并进行核糖体基因分型（ribotyping）、随机扩增多态性DNA分析（RAPD）、肠道细菌重复基因间共同序列PCR（ERIC-PCR）等.结果在调查的13起副溶血弧菌引起的食物中毒中,tdh阳性、trh阴性的O3：K6血清型引起的有11起（84.6%）;tdh阳性、trh阴性的O4：K8菌引起有2起（15.4%）.在散发腹泻病例中,tdh阳性、trh阴性的O3：K6、O4：K8和O1：KUT菌株分别占26.5%（9/34）、17.6%（6/34）和38.2%（13/34）,未能分型的占17.6%（6/34）.在水产品中分离的菌株中,37株分属7种O血清型,其中未见有O3：K6和O4：K8血清型;另外有9株未能分型;其中除1株O1：KUT菌株trh阳性外,其余tdh和trh均为阴性.绝大部分食物中毒患者和散发腹泻病例分离的O3：K6菌株在ribotyping、ERIC-PCR及RAPD三种指纹上均属于一种密切相关的克隆群,而环境分离的O3：KUT菌株与临床分离的O3：K6菌株间,在三者指纹上均有明显差异.结论临床来源和小水产品来源的副溶血弧菌菌株间血清型分布有显著差别;一群关系密切、tdh阳性、trh阴性的O3：K6血清型菌株在杭州地区呈优势流行.     

马鞍山市不同来源副溶血弧菌生物学特征及分子流行病学研究

目的了解马鞍山市不同来源副溶血弧菌分离株的病原学及分子生物学特征。方法从市场流通食物、食物中毒事件标本及临床腹泻病例标本中分离培养、鉴定副溶血弧菌;并进行尿素酶、神奈川试验、药敏试验;PCR方法检测tlh、tdh和trh基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果 40株不同来源的副溶血弧菌尿素酶阳性17株,神奈川试验阳性20株;头孢唑啉的耐药达到95.00%,氨苄西林的耐药达到69.00%,对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、头孢噻肟、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、派拉西林/三唑巴坦、美洛培南均100.00%敏感;毒力基因检测tlh阳性36株,阳性率为90.00%,tdh 29株阳性,阳性率为72.50%,40株菌trh全部阴性;PFGE将40株副溶血弧菌分成19种型别,部分菌株相似性100.00%,整体菌株带型相对分散。结论马鞍山市副溶血性弧菌对大多数抗生素均具有较高敏感性,3种毒力基因携带率低,PFGE提示有部分菌株有流行趋势,但整体没有发现明显优势菌群,提示本地食品中副溶血性弧菌未出现大流行迹象。     

多位点序列分型技术在深圳副溶血弧菌同源性分析中的应用研究

目的 了解副溶血弧菌临床分离株的毒力基因、血清型及基因分型特征,探讨多位点序列分型(MLST)分型技术对其同源性分析的应用价值。方法 收集深圳地区2007-2014年食物中毒及医院散发病例来源的68株副溶血弧菌菌株,对其进行血清型、毒力基因分析。选择副溶血弧菌MLST数据库提供的7个管家基因,PCR扩增测序后采用BioEdit、eBURST等软件,对本次研究的68株副溶血弧菌进行MLST同源性分析。结果 68株副溶血弧菌共得到7种不同的血清型,优势血清型为O3∶K6(47/68),其余血清型分别为O4∶K8、O5∶K68、O4∶K13等。副溶血弧菌临床分离株94%为tdh+trh-。MIST分型将68株副溶血弧菌分为5个序列型(ST型),ST3为优势序列型(55/68),其余4种ST型中的ST189与ST345构成一个同源复合体CC345,且ST189为ST345的单位点变异型。结论 深圳地区副溶血弧菌所致的腹泻病暴发疫情,其流行菌株ST型别多样化,疾病控制中需警惕非主流ST型别引起暴发可能。     

2018—2019年包头市市售水产品中副溶血性弧菌监测结果及病原学特征分析

目的 了解包头市市售水产品中副溶血性弧菌（vibrio parahaemolyticus,VP）的带菌率,并对其毒力基因、耐药性、分子分型等病原学特征进行分析。 方法 2018—2019年共采集市售水产品160份,分离培养获得VP,荧光定量PCR测定毒力基因、微量肉汤稀释法测定抗生素敏感性、脉冲场凝胶电泳进行分子分型。 结果 160份市售水产品中共检出VP 43株,海水、淡水、地产淡水产品检出率分别为20.62%、36.51%、33.33%,本地产水产品与外地产水产品检出率无统计学差异（χ2 = 0.069,P＞0.05）;43株VP thl基因的携带率为100%,1株携带tdh基因;仅有12株VP对全部22种抗生素敏感,主要耐药性表现在头孢噻肟（51.16%）、氨苄西林（46.51%）,1株细菌最高耐受11种抗生素并发现2株碳青霉烯类药物耐药菌;43株VP分为39个PFGE型别,相似度1.9%～100%,无明显优势型别条带。 结论 包头市市售水产品中存在VP污染,本地产与其他地区来源的水产品污染程度相当;VP对β内酰胺类抗生素耐药程度高,PFGE型别呈多态性。后续应持续对水产中VP污染的监测,重视多耐药的发生及耐药谱的改变,加强爆发菌株及相关患者的溯源工作。     

2014-2015年烟台市副溶血性弧菌临床分离菌株的生物学特征及分子分型研究

目的 了解烟台市副溶血性弧菌临床分离株的耐药特性、毒力基因分布情况以及分子分型特征。方法 对2014-2015年的副溶血性弧菌临床分离菌株按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法进行14种抗生素的药敏试验;通过实时荧光PCR检测tlh、trh、tdh、orf8 4种毒力基因;采用脉冲场凝胶电泳对菌株基因组DNA进行分子分型。结果 (1)20株副溶血性弧菌仅对头孢唑啉耐药或处于耐受敏感之间,耐药率为5.0%,对其他13种抗生素100.0%敏感。(2)20株副溶血性弧菌均携带特异性基因tlh,其他3种毒力基因trh、tdh、orf8的阳性率分别为30.0%(6/20)、100.0%(20/20)、65.0%(13/20),毒力基因组成以orf8-tdh型为主,占60.0%(12/20)。(3)20株菌被限制性内切酶NotⅠ切出6个PFGE types(PT),带型相似度60.7%～100.0%,根据PT相似系数大于80.0%的菌株,可以分成A群和B群2个聚类群。结论 烟台市副溶血性弧菌临床分离菌株耐药较轻,毒力基因tdh、orf8的携带率较高,PFGE带型聚类群内相似度较高且存在优势明显的分子型别。     

水产品中副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分型

目的 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对水产品中副溶血性弧菌进行分子分型。方法 采用PFGE技术,对80株分离自11个国家和中国浙江省和山东省的水产品中的副溶血性弧菌进行分子分型;基因组DNA用Not I和Sfi I 2种酶进行消化。结果 Not I和Sfi I 2种内切酶均得到68种带型,综合系统树图中分成70种带型;Not I和Sfi I的分辨率分别为78.8%和76.3%;14株来自加拿大的菌株分聚成相似度100%的4组,其中有4株菌和10株菌分别聚成相似度91.8%和93.3%的2组;挪威和新西兰分别有3株和2株菌相似度为100%;其他国家的菌株无与本国相同的菌株。结论 2种酶均适合于副溶血性弧菌的PFGE分型,Not I的效果略好于Sfi I;菌株间的亲缘关系与来源地无明显关联,但具有毒性基因的菌株更易在系统发育树上处于较近的分枝上。     

副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型研究

目的用脉冲场凝胶电泳方法绘制副溶血性弧菌食物中毒分离株的DNA指纹图谱,分析各菌株间的同源性关系。方法 55株食物中毒来源的副溶血性弧菌基因组DNA经限制性内切酶NotI酶切,用脉冲场凝胶电泳方法获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果实验得到55株副溶血性弧菌的DNA指纹图谱,可大致分为30种PFGE图谱。聚类分析显示,在大约90%的相似性水平上,有38株菌的PFGE图谱属于同一个克隆群,为2007-2008年引起闵行区食物中毒的优势流行菌型。结论闵行地区存在遗传谱系密切相关的副溶血性弧菌流行克隆。脉冲场凝胶电泳方法是分析副溶血性弧菌同源性的有效方法 ,有助于追溯传染源。     

PFGE技术对一起副溶血性弧菌引起食物中毒的同源性研究

目的:了解一起食物中毒事件中副溶血性弧菌(VP)分离株的同源性。方法:按国标方法进行VP的分离与鉴定;对分离出的VP做血清分型及tdh、trh毒力基因检测;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行基因分型。结果:从10例患者肛拭子和1份砧板涂抹物中分离到的11株VP,血清型均为O3:K6,tdh毒力基因均为阳性,PFGE分型图谱也完全相同。结论:这是一起因VP污染了食品加工环节而导致的食物中毒事件。