hsa_circ_0102049通过miR-96-5p/AK3轴促进结直肠癌细胞EMT介导的增殖和转移

目的 探讨环状RNA(circRNA)hsa_circ_0102049调控结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞增殖和转移能力的机制。方法 从GEO数据库下载GSE126094数据集并通过R软件筛选差异表达的circRNA,构建hsa_circ_0102049的小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)以敲低hsa_circ_0102049的表达量并通过RT-qPCR、CCK-8、Transwell和Western blot法等检测转染后CRC细胞的增殖和转移能力变化并探寻相关机制。结果 在GSE126094数据集中,hsa_circ_0102049在癌组织中表达量显著高于癌旁组织(P<0.001)。在HCT116和DLD-1细胞中干扰hsa_circ_0102049后,细胞的增殖和迁移侵袭能力减弱(P<0.05),Western blot法检测结果显示,E-cadherin的表达量升高而N-cadherin和Vimentin的表达量降低(P<0.05)。为了探寻hsa_circ_0102049的作用机制,数据库分析筛选出可以与hsa_circ_0102049结合的小RNA(microRNA, miRNA)miR-96-5p以及miR-96-5p的下游靶标AK3,并且敲低hsa_circ_0102049引起miR-96-5p的升高和AK3的降低(P<0.05)。结论 在CRC细胞中,高表达的hsa_circ_0102049通过miR-96-5p/AK3轴促进上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)从而增强细胞的增殖和转移。     

血清microRNA-33a-5p在结直肠癌患者中的表达及生存预后的关系研究

目的 检测结直肠癌(CRC)患者血清中microRNA-33a-5p(miR-33a-5p)的相对表达水平,探讨其辅助诊断价值及与生存预后的关系。方法 收集CRC 134例、结直肠息肉69例及同期匹配的健康对照69例血清标本,检测所有标本miR-33a-5p的相对含量及CRC患者术后miR-33a-5p的相对含量。分析CRC血清miR-33a-5p的相对表达水平在不同年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置和临床TNM分期的差异以及与CEA及CA199的相关性。利用二元Logistic回归和ROC曲线评估各项指标的诊断效能,评价其对CRC的辅助诊断价值。Kaplan-Meier及Cox回归分析其在预后中的临床价值。结果 CRC组miR-33a-5p的相对含量低于结直肠息肉组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.001);CRC组患者手术前后相比较,差异有统计学意义(P<0.001)。CRC组患者miR-33a-5p的相对含量在肿瘤大小及临床TNM分期,差异有统计学意义(P<0.001)。CRC患者血清中miR-33a-5p的相对含量与CEA及CA199之间无相关性(P>0.05)。CRC组与健康对照组比较,曲线下面积(AUC)为0.805,三者联合AUC达0.831,敏感度达97.8%。miR-33a-5p低表达组的总生存时间明显低于miR-33a-5p高表达组(P<0.05)。单因素分析临床TNM分期及miR-33a-5p表达水平与患者预后相关(P<0.05),Cox回归多因素分析发现临床TNM分期和miR-33a-5p低表达是患者预后的独立危险因素。结论 miR-33a-5p在CRC患者血清中低表达,与临床TNM分期有关,其表达水平与CRC的进展与预后有关;miR-33a-5p联合CEA和CA199可提高诊断敏感度,其有望成为筛查CRC的生物学指标。     

miR-30b-5p抑制胆固醇合成和结直肠癌细胞增殖

目的 探索 miR-30b-5p 在结直肠癌中的作用及机制.方法 收集结直肠癌患者的癌及癌旁组织、患者及正常人血清,提取RNA,实时荧光定量 PCR检测 miR-30b-5p表达.将miR-30b-5p的inhibitors转入HT-29 细胞中;将miR-30b-5p的mimics转入 HCT-116 细胞中;CCK-8 试剂盒检测细胞活力;胆固醇试剂盒检测细胞中胆固醇含量;实时荧光定量PCR检测低密度脂蛋白受体( LDLR)的表达,Western blot检测 LDLR 蛋白表达;在转入 miR-30b-5p inhibitors 的HT-29细胞中应用siRNA敲低LDLR,检测LDLR蛋白表达、细胞胆固醇含量及细胞增殖.结果 与正常人相比,miR-30b-5p在结直肠癌患者组织及血清中表达降低,且其在结直肠癌细胞系HT-29、Caco-2及HCT-116中的表达量低于正常结直肠细胞系NCM460;在HT-29细胞中转入miR-30b-5p的inhibitors,细胞增殖加快,胆固醇含量增加,LDLR表达上调;在HCT-116细胞中转入miR-30b-5p的mimics,细胞增殖减慢,胆固醇降低,LDLR表达被抑制;此外,在miR-30b-5p沉默的HT-29细胞中敲低LDLR,胆固醇含量减少,细胞增殖减慢.结论 miR-30b-5p在结直肠癌中是一种抑癌microRNA,它通过抑制LDLR和胆固醇合成抑制结直肠癌细胞增殖.     

miR-30c-1-3p在人结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨miR-30c-1-3p在人结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法采集行手术治疗的52例结直肠癌患者的癌组织及癌旁正常黏膜组织,实时定量PCR法检测两种组织中miR-30c-1-3p的表达水平并作比较;进一步分析结直肠癌组织中miR-30c-1-3p表达水平与患者临床特征的关系。结果结直肠癌组织中miR-30c-1-3p表达水平明显低于癌旁正常黏膜组织（P＜0.05）。结直肠癌组织中miR-30c-1-3p表达水平与患者有无淋巴结转移及临床分期有关,有淋巴结转移、临床分期Ⅲ~Ⅳ期的患者结直肠癌组织中miR-30c-1-3p表达水平均较低（均P＜0.05）;而与患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤位置、分化程度、浸润深度等均无关（均P＞0.05）。结论miR-30c-1-3p在人结直肠癌组织中表达下调,与有无淋巴结转移、临床分期有关,提示miR-30c-1-3p可能与结直肠癌的转移侵袭相关。     

miR-30 c-5p在肿瘤中表达和功能的研究进展

 miR-30 c-5p是miR-30家族的重要成员,研究表明其在肺癌、乳腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌等多种肿瘤组织以及患者血浆、血清中表达异常,并且其作用于肿瘤的增殖、侵袭和迁移以及多种肿瘤相关基因和通路等,暗示其在肿瘤诊断、治疗、监测和预后预测等方面有一定的应用价值。本文就miR-30 c-5p在肿瘤中表达和功能的研究进展进行简要综述。     

miR-30a-5p靶向调控TRIM31表达对结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药的逆转作用及其机制

目的:探讨miR-30a-5p靶向三结构域蛋白31(TRIM31)基因对结直肠癌(CRC)细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响,并阐明其作用机制.方法:收集27例5-FU化疗敏感(5-FU/S组)CRC患者和23例5-FU化疗耐药(5-FU/R组)CRC癌患者的CRC组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测癌...     

沉默circ_0000745通过靶向 miR-296-5p对结直肠癌细胞增殖及转移的影响

摘要:目的 探讨circ_0000745对结直肠癌细胞增殖及转移的影响及其可能的作用机制。方法 收集2013年3月 ~2016年7月在四川省人民医院确诊的结直肠癌及癌旁组织65例,采用实时定量 PCR(qRT-PCR)法检测结直肠癌组 织、癌旁组织中circ_0000745与 miR-296-5p表达,分析circ_0000745与 miR-296-5p表达与结直肠癌患者预后的关系。 将人结直肠癌细胞 HCT-116分为si-NC组、si-circ_0000745组、miR-NC组、miR-296-5p过表达组、si-circ_0000745+anti-miR-NC组、si-circ_0000745+anti-miR-296-5p组;采用 CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell实验分别检测各组细 胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;采用双荧光素酶报告实验检测circ_0000745与 miR-296-5p的靶向关系;采用 Western blot法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达量。结果 与癌旁组织比较,结直肠癌组 织中circ_0000745的表达升高(P<0.05),miR-296-5p的表达降低(P<0.05);随访5年,65例患者中死亡9例,存活56 例,与存活患者相比,死亡患者的circ_0000745明显增高(P<0.05),miR-296-5p明显降低(P<0.05)。与 HT-29细胞 相比,HCT-116细胞的circ_0000745mRNA 表达升高(P<0.05),miR-296-5p的表达降低(P<0.05),选择 HCT-116细 胞进行下一步研究。与si-NC组比较,si-circ_0000745组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白、细胞克隆形成数、迁移及侵 袭细胞数减少(均P<0.05);circ_0000745可靶向调控 miR-296-5p的表达;与 miR-NC组比较,miR-296-5p过表达组细 胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白、细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(均 P<0.05);与si-circ_0000745+anti-miRNC组比较,si-circ_0000745+anti-miR-296-5p组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞克隆形成数、迁移及侵袭 细胞数增多(均P<0.05)。结论 结直肠癌组织中circ_0000745呈高表达,miR-296-5p呈低表达,高表达circ_0000745 及低表达 miR-296-5p可用于评估结直肠癌患者预后,circ_0000745通过靶向 miR-296-5p促进结直肠癌细胞增殖及转 移,沉默circ_0000745可为结直肠癌治疗提供新思路。     

miR-30a-5p对肺癌细胞增殖与迁移的影响及其机制

研究miR-30a-5p 对非小细胞肺癌（NSCLC）增殖和迁移的影响,并探讨其调控机制。方法NSCLC A549细胞系分成两组,miR-30a-5p组和对照组,分别转染miR-30a-5p mimics和microRNA scramble,MTT实验及细胞划痕实验分别测定两组细胞增殖和迁移能力,实时聚合酶链反应（real time-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别测定两组泛素蛋白连接酶（UBE3C）mRNA 和蛋白质表达水平。结果培养48 h后,miR-30a-5p 组相对活细胞百分比低于对照组[（203.7±16.8）% vs（330.4±20.7）%（p =0.000）];培养72 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比（258±30.2）%,对照组相对活细胞百分比（403.4±28.4）%,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组（p =0.001）。细胞划痕实验示：miR-30a-5p组划痕愈合率为（23.2±2.7）%,对照组划痕愈合率为（89.2±4.8）%,miR-30a-5p 组划痕愈合率低于对照组（p =0.000）。real time-PCR显示,miR-30a-5p 组UBE3C mRNA 表达水平为（0.15±0.02）,对照组UBE3C mRNA 表达水平为（1.03±0.09）,miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平低于对照组（p =0.000）;Western blot显示,miR-30a-5p组UBE3C 蛋白表达水平为（1.57±0.26）,对照组UBE3C 蛋白表达水平为（5.32±0.42）,miR-30a-5p 组UBE3C 蛋白表达水平低于对照组（p =0.000）。结论miR-30a-5p抑制NSCLC 增殖和迁移,其机制与下调UBE3C表达有关。     

血清miR-30a-5p作为原发性肾病综合征新分子标志物的研究

目的 观察原发性肾病综合征(PNS)患者血清miR-30a-5p的表达水平,并探索其临床价值.方法 选取在首诊并诊断为PNS的160患者作为病例组,按照1 ∶ 1匹配原则另选160例同期健康体检人员为对照组.收集两组临床资料和血液样本,检测血生化指标,并采用定量PCR技术检测血清miR-30a-5p的表达水平.对患者进...     

结直肠癌组织中miR-767-3p表达水平与上皮-间质转化的关系分析

目的：分析结直肠癌组织中miR-767-3p表达水平与上皮-间质转化的关系。方法：选取江西省中西医结合医院病理科2017年1月-2021年12月收治的70例结直肠癌患者的资料纳入研究。检测结直肠癌组织和癌旁正常组织中miR-767-3p表达水平和EMT指标：E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、β-连环素(β-catenin)、波形蛋白(Vimentin)的阳性率,并检查肿瘤浸润深度和是否发生淋巴结转移、远处转移。分析miR-767-3p与其他指标的相关性。结果：结直肠癌组织的miR-767-3p表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05);癌组织患者EMT各蛋白不同表达下的miR-767-3p的表达量均显著不同,E-cadherin(+)者,miR-767-3p的表达量明显更低,N-cadherin(+)者、β-catenin(+)者、Vimentin(+)者,miR-767-3p的表达量均明显更高(P<0.05);EMT各蛋白的表达在miR-767-3p高表达组和低表达组上分布有显著差异,高表达组的E-cadherin阳性率更低,而...     

术前血清miR-148a-3p及miR-139-5p表达水平预测前列腺癌患者术后复发转移的价值

目的：探讨血清miR-148a-3p及miR-139-5p水平对前列腺癌（prostate cancer,PCa）患者术后复发转移的价值。方法：选取2015年1月1日至2017年12月31日海口市第三人民医院收治的PCa患者142例,根据其术后是否发生复发转移分为未复发转移组（n=84）和复发转移组（n=58）。检测两组术前miR-148a-3p、miR-139-5p及前列腺特异性抗原（prostate specific antigen,PSA）表达水平,分析其与临床病理特征的关系。应用ROC曲线分析miR-148a-3p、miR-139-5p及PSA预测PCa术后复发转移的价值。Pearson相关分析miR-148a-3p、miR-139-5p与PSA相关性。结果：复发转移组血清miR-148a-3p、miR-139-5p及PSA水平分别为（4.80±0.75）、（7.64±2.38）和（63.75±14.92） ng/mL,均高于未复发转移组的（2.15±0.36）、（3.50±0.62）和（18.72±8.60） ng/mL,差异有统计学意义（t值分别为10.648、14.715和9.804,均P=0.000）。复发转移患者血清miR-148a-3p及miR-139-5p表达水平与肿瘤分期（t=5.117,P=0.024;t=5.304,P=0.018）、Gleason评分（t=5.512,P=0.006;t=6.218,P=0.000）及PSA水平（t=10.208,P=0.000;t=13.620,P=0.000）有关联。ROC曲线分析显示,血清miR-148a-3p、miR-139-5p及PSA预测PCa术后复发转移的最佳截值分别为3.40、5.38和36.80 ng/mL,三项联合预测PCa术后复发转移的AUC（0.914,95%CI=0.858～0.972）最大,其敏感度和特异度为92.0%和83.6%。相关分析显示,复发转移患者血清miR-148a-3p、miR-139-5p水平与PSA均呈正相关（r=0.774,P＜0.001;r=0.806,P＜0.001）。结论：术前血清miR-148a-3p及miR-139-5p表达上调与PCa术后复发转移有关,联合PSA检测对预测PCa术后复发转移具有较高的价值。     

miR-30a-5p靶向URGCP调控胃癌细胞凋亡和糖酵解的机制研究

目的:探究miR-30a-5p通过靶向细胞增殖调控基因4(Up-regulated gene 4/Up-regulator of cell proliferation,URG4/URGCP)对胃癌(Gastric cancer,GC)细胞凋亡和糖酵解的影响,并阐明其潜在调控机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-30a-5p和URGCP在正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和GC细胞(AGS、HGC-27和SGC-7901)中的表达。选用HGC-27细胞作为后续实验研究对象并随机分为六组,除Control组外,其他组细胞分别转染miR-NC、miR-30a-5p mimic、pcDNANC、pcDNA-URGCP和pcDNA-URGCP+miR-30a-5p mimic。CCK-8实验用于检测各组细胞增殖活力,流式细胞术用于检测各组细胞凋亡水平。三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate,ATP)和乳酸检测试剂盒检测各组细胞乳酸生成和ATP水平。此外,双荧光酶素报告实验用于验证miR-30a-5p和URGCP之间的靶向关系。结果:相比较正常胃黏膜上皮细胞...     

miR-33a-3p通过调控EphA2影响结直肠癌化疗耐药

摘要:目的 探讨微小 RNA-33a-3p(miR-33a-3p)对结直肠癌化疗耐药的影响及其调控机制。方法 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)法检测结直肠癌亲本株(HCT8)及耐药细胞株(HCT8/5-Fu及 HCT8/DDP)中 miR-33a-3p的表达。构 建 miR-33a-3p模拟物和阴性对照转染至结直肠癌耐药细胞后检测细胞增殖、凋亡、周期分布及化疗敏感性变化,运用生 物信息学方法预测 miR-33a-3p的靶基因,运用qRT-PCR和 Westernblot检测过表达 miR-33a-3p对下游靶基因 EphA2 的影响。结果 结直肠癌耐药细胞系中 miR-33a-3p的表达显著低于亲本株(均 P<0.01)。与阴性对照组相比,过表达 miR-33a-3p的耐药细胞增殖能力降低,细胞凋亡增加,细胞于 G2/M 周期阻滞,化疗敏感性增强(均 P<0.05)。生物信 息学预测结果显示 EphA2可能为 miR-33a-3p的下游靶基因。当过表达 miR-33a-3p时,耐药细胞 EphA2表达明显降 低。结论 miR-33a-3p可能通过调控下游靶基因 EphA2的水平逆转结直肠癌化疗耐药。     

MiR-30a-5p通过泛素水解酶22抑制人宫颈癌细胞上皮-间质转化功能

【目的】研究microRNA-30a-5p（miR-30a-5p）对人宫颈癌Hela细胞上皮-间质转化功能的影响及其相关机制。【方法】宫颈癌Hela细胞株分别转染目的mir的模拟物和阴性对照模拟物,分别以30a-5p组、NC组命名并标记细胞。同时,以未经过处理的Hela细胞作为对照（Control组）。分别用逆转录-聚合酶链反应法检测各组宫颈癌细胞的miR-30a-5p含量。Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力。Western-blot法检测3组细胞神经-钙粘素（N-cadherin）、α-连环蛋白（α-Catenin）和泛素水解酶22（USP22）表达水平。运用生物信息学方法预测miR-30a-5p的靶基因。采用Western blot法检测USP22过表达对miR-30a-5p抑制EMT的拮抗作用。双荧光素酶实验检测miR-30a-5p与USP22的关系。建立皮下移植瘤模型观察miR-30a-5p的体内作用。【结果】30a-5p组宫颈癌细胞miR-30a-5p的表达水平明显上调,表达水平为Control组的853.82（862.26~843.11）倍（P＜0.01）。30a-5p组侵袭细胞数量8.17（8.32~8.03）明显低于Control组（P＜0.01）。30a-5p组细胞N-cadherin蛋白的细胞内含量明显下降,α-Catenin蛋白的细胞内含量明显上升,USP22蛋白表达量明显降低。合并USP22过表达处理的30a-5p组宫颈癌细胞中N-cadherin蛋白表达量明显升高,α-Catenin蛋白表达量明显降低。双荧光素酶检验结果显示USP22为miR-30a-5p的下游靶基因（P＜0.01）。30a-5p组皮下移植瘤明显小于Control组（P＜0.01）。与Control组肿瘤组织相比,30a-5p组肿瘤组织miR-30a-5p的相对含量升高,USP22蛋白含量降低,N-cadherin蛋白的含量降低,α-Catenin蛋白含量升高。【结论】miR-30a-5p在宫颈癌Hela细胞中,可能通过靶向识别下游靶基因USP22,进而抑制其翻译。最终实现对宫颈癌细胞EMT过程的抑制。     

miR-30c对胃癌细胞株HGC-27侵袭转移能力的影响

目的探讨miR-30c对胃癌细胞株HGC-27侵袭转移能力的影响。方法使用miR-30c mimics和inhibitor分别进行miR-30c的过表达和抑制,采用划痕实验和transwell小室实验分析癌细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达差异。结果抑制miR-30c可促进胃癌细胞系HGC-27的侵袭(P<0.05),同时高表达miR-30c可抑制细胞侵袭(P<0.05)。抑制miR-30c后E-cadherin表达降低、Vimentin和Fibronectin表达升高,高表达miR-30c后E-cadherin的表达升高、Vimentin和Fibronectin表达下降。结论 miR-30c可能通过调节上皮间质转化(EMT)相关蛋白来影响胃癌的侵袭能力。     

卒中后抑郁患者血浆中miR-30a-5p的差异性表达及其作用机制的生物信息学预测

目的 探讨卒中后抑郁（PSD）患者miR-30a-5p的表达差异性及其在PSD中的诊断价值,基于生物信息学方法,分析其可能作用机制。方法 检索PubMed数据库,利用VENNY2.1在线软件获取到目标microRNA。贯续性纳入2018年10月~2019年3月就诊于皖南医学院弋矶山医院神经内科卒中病房并首次诊断为急性脑梗死的患者,收集患者入院时人口统计学资料、卒中危险因素、既往卒中病史、美国国立卫生研究院脑卒中量表（NHISS）评分等临床基线资料及影像学资料,并与入院当天留取研究对象外周静脉血5 mL。随访3个月根据Hamilton 抑郁量表（HAMD-17）行抑郁程度的评价,对于评分值≥7 者按照《美国精神病学会叶精神疾病诊断与统计手册》第4 版（DSM-IV）诊断标准诊断抑郁,分为PSD组（n=11）和non-PSD组（n=25）。使用qRT-PCR法检测卒中后抑郁患者（PSD）和非卒中后抑郁患者（NPSD）外周血miR-30a-5p表达水平,利用ENCORI数据库和CTD（Comparative Toxicogenomics Database）数据库共同预测和筛选miR-30a-5p调控的抑郁相关可能作用的靶基因,通过生物信息学方法对靶基因的可能作用机制进行进一步分析。结果 通过交叉筛选得到同时与卒中和抑郁相关的 miR-30a-5p,临床样本 qRT-PCR 验证 miR-30a-5p 在 PSD 和 non-PSD 组有差异性表达（2.462±0.326 vs 1±0.126,P<0.0001）。ROC曲线分析提示miR-30a-5p预测PSD的AUC=0.869（95%CI,0.745-0.993,P=0.0005）,cut-off值为1.597,对应的敏感性和特异性分别为0.727、0.840。靶蛋白主要作用的生物学过程包括信号转导、细胞间通讯、核酸碱基、核苷、核苷酸和核酸代谢的调节;KEGG通路富集分析发现,靶蛋白主要作用于神经营养素信号通路、轴突导向信号通路、胰岛素信号传导系统;经过CytoHUBBA分析得出可能与卒中后抑郁相关的前20种HUB基因。结论 外周血miR-30a-5p在卒中后抑郁患者和非卒中后抑郁患者中存在差异性表达,可以作为诊断PSD的临床标志物,其可能是通过神经营养素信号通路、轴突导向信号通路、胰岛素信号传导系统来影响PSD的发生。     

血浆外泌体miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病中的表达及诊断价值

目的 研究miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病血浆外泌体中的表达差异性及其诊断价值。方法 通过生物信息学网站筛选结核病外泌体中具有差异性表达的miRNAs(miR-26a-5p和miR-151a-3p)。再以70例结核病患者(结核病组),58例体检健康者(健康对照组)样本进行临床验证：采用差速离心法提取血浆外泌体,透射电子显微镜,粒径分析,Western blot对其鉴定,采用RT-qPCR检测血浆外泌体中miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病组和对照组中的表达水平,并通过ROC曲线评价二者在结核病中诊断价值。结果 透射电镜、粒径分析、Western blot鉴定到典型的外泌体特性,即成功提取到血浆外泌体。在临床验证中,以内参和外参同时校准,结核组患者血浆外泌体中miR-26a-5p表达水平低于对照组(P<0.000 1),结核组患者血浆外泌体中miR-151a-3p表达水平高于对照组(P<0.000 1),与生物信息学结果一致。作为诊断标记,以内参为基准,血浆外泌体miR-26a-5p、miR-151a-3p鉴别结核病的曲线下面积(AUC)分...     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测人卵巢上皮细胞HOSEpi C以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区(3’-UTR)的野生型(WT)和突变型(mut)荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义(P <0. 05),选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-499a-5p在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤发生发展的影响

目的:探讨miR-499a-5p在骨肉瘤(OS)中的表达及其对OS发生发展的影响.方法:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证miR-499a-5p在OS细胞系(143B、MNNG)及正常成骨细胞(hFOB1.19)中的差异表达,并使用3种在线预测工具对miR-499a-5p的靶基因进行了预测,并取3种数据共同交...