非水介质中酶促酯化反应机制及醇抑制动力学

以非极性大孔吸附树脂吸附固定化脂肪酶在异辛烷／四氯化碳混合溶剂中选择性催化Ｓ－２（６－甲氧基－２－萘基）丙酸与正辛酯化为反应模型,对非常规溶剂中酶催化反应机制及动力学进行了初步研究。结果表明：在有机溶剂中该脂肪酶催化萘普森与正辛醇的酯化反应同样符合米氏方程,此酯化反应符合双底物乒乓反应机制,但值得提出的是酰基受体的过量存在会对酯化产生竞争性抑制作用。     

有机相中大孔吸附树脂固定化酶催化拆分消旋萘普生

考察了大孔吸附树脂对柱状假丝酵母脂肪酶（CCL）的固定化效果,实验证明了大孔吸附树脂HZ-841作为固定化载体可以为酶营造一个良好的微环境,对水分具有较强的缓冲能力,当固定化酶的含水量8%时催化效率最高,醇既是底物又是竞争性抑制剂,它的浓度对反应具有较大的影响,在萘普生浓度为20mmol/L时正辛醇最适浓度为40mmol/L。选择弱极性大孔吸附树脂HZ-841固定化酶在填充床反应器中进行循环反应。20h左右转化率超过40%,反应3批反酶活仍保持在98%以上。     

溶剂,酰化剂和底物浓度对手性氯醇酶促酯化的影响

利用脂肪酶在非水相体系中催化的对映选择性酯化反应,对外消旋手性药物中间体（±）－１－氯－３－（１－萘氧）－２－丙醇（简称萘氧氯丙醇）进行了拆分,考察了溶剂、酰化剂和底物浓度对酶活性和选择性的影响。结果表明,当溶剂为异辛烷,酰化剂为醋酸酐、底物浓度为氯醇１００ｍｍｏｌ／Ｌ、酸酐５０ｍｍｏｌ／Ｌ时,酶显示出最佳的催化活性和选择性,产物酶的光学纯度可达９０％。     

缩水甘油丁酸酯的对映选择性酶促水解

研究了猪胰脂肪酶催化缩水甘油丁酸酯的对映选择性水解反应,考察了各种因素对酶促水解拆分过程的影响,结果表明,水解产物丁酸的大量生成会抑制脂肪酶的水解活性,至ｐＨ〈５时酶促水解反应几乎停止。     

脂肪酶催化新反应--酯氨解反应在制备光学纯药物中的应用

脂肪酶催化的新反应－酯氨解反应,不仅是合成手性酰胺的一个非常有用的方法,而且也是手性羧酸及手性醇动力学拆分的有效途径。通过比较脂肪酶催化几种外消是水解、转酯及氨解反应,得出脂肪酶催化酶氮解反应在制备光学纯化合物中将有广阔的应用前景这一结论。     

有机介质中固定化酶催化萘普森与硅醇的酯化反应

柱状假丝酵母脂肪酶，在异辛烷体系中可选择性地催化Ｓ－２－（６－甲氧基－２萘基）丙酸（萘普森）与三甲基硅甲醇发生酯化反应。利用硅藻土吸附固定化酶有效地改善了酶在有机介质中的分散状态，提高了催化效率。选择和确定了四氯化碳作为辅溶剂——底物酸的增溶剂，并对辅溶剂与异辛烷的比例、醇浓度及温度对酯化反应过程的影响进行了研究。结果表明：在酯化反应中，高浓度的醇具有抑制作用；较高反应温度也导致酶的失活；去除水有利于酯化反应的进行。     

木瓜脂肪酶催化洛芬类药物的酶促拆分

利用木瓜脂肪酶(CPL)作为催化剂对布洛芬类药物进行手性拆分,建立了底物布洛芬、布洛芬乙酯及其他洛芬类底物的手性检测方法,重点研究了拆分过程中反应温度、有机溶剂、底物结构对拆分效果的影响,并结合动力学分析揭示了木瓜脂肪酶催化手性拆分的分子基础。动力学分析表明对同一底物的不同构型而言,反应速率常数k2S及k2R的差异是木瓜脂肪酶具有手性拆分能力的基础,而不是由于酶对不同构型的底物具有不同的Km值;对一系列化合物的拆分结果表明2芳基丙酸类手性化合物2位上空间位阻较大的底物比空间位阻小的化合物具有更好的拆分效果。实验表明CPL对洛芬类底物均具有拆分能力,对萘普生的拆分效果最好,经过30 h的反应转化率达到49%,反应的对映体选择值(E值)为173。     

大孔吸附树脂富集小蓟中咖啡酸酯类成分的研究

目的通过对23种大孔吸附树脂筛选,寻找适用于纯化小蓟中咖啡酸酯类成分的大孔吸附树脂,为从小蓟中工业化生产咖啡酸酯类成分提供依据。方法采用23种大孔吸附树脂对小蓟提取物进行吸附纯化,以总咖啡酸酯收率和纯度作为指标综合评价。结果23种吸附树脂中,以树脂HPD-100吸附洗脱的总咖啡酸酯的收率最高为87.6%、纯度为52.2%。结论HPD-100树脂综合性能良好,适用于小蓟中咖啡酸酯类成分的纯化。     

大孔吸附树脂纯化鹿衔草总黄酮的研究

目的：优选大孔吸附树脂纯化鹿衔草总黄酮的最佳工艺。方法：以总黄酮比吸附量、洗脱率为指标,采用静态吸附法对8种大孔吸附树脂进行筛选;以总黄酮吸附量和纯度为指标,进行吸附条件的优化;以总黄酮洗脱率和纯度为指标,对洗脱条件进行考察。结果：选用L S A‐40型大孔吸附树脂,其吸附条件为上样液浓缩至1∶10（g∶mL）,上样流速2.5 BV／h ,树脂柱径高比1∶6,上样量按每毫升树脂处理1.0g鹿衔草的提取液,洗脱条件为上样后用5BV水洗脱除去水溶性杂质,2.5BV70％乙醇洗脱,洗脱流速2 B V／h ,纯化后总黄酮的纯度达到22％。结论：该纯化工艺稳定可行,可用于工业生产。     

肉豆蔻抗痛风有效部位的富集工艺研究

目的　利用大孔树脂富集、纯化肉豆蔻抗痛风有效部位的工艺条件及参数.方法　选择紫外分光光度法,以五味子酯甲为对照品建立肉豆蔻总木脂素的 测定方法;研究大孔吸附树脂富集、纯化肉豆蔻中总木脂素的吸附性能,优化洗脱参数.结果　大孔树脂AB－８的静态吸附容量为５４．２０mg??ml－１;用９０％乙醇富 集时,所得总木脂素含量可达４１．４０％.结论　本方法可方便有效地纯化富集肉豆蔻中总木脂素.     

粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶拆分制备（S)-2-氨基-4-苯基丁氨酸

粪产碱杆菌来源的青霉素G 酰化酶（Alcaligenes faecalis penicillin G acylase ,AfPGA）可以对映选择性地水解N苯乙酰苯基丁氨酸制备（S）-2-氨基-4-苯基丁氨酸。反应体系的pH及温度对酶的对映选择性影响不显著。研究表明,水饱和的乙酸乙酯体系要优于传统的水相体系,该体系显著提高了底物N苯乙酰化苯基丁氨酸的溶解度,并可简化产物的分离过程。当底物的转化率为48.6%时,（S）2氨基4苯基丁氨酸的光学纯度（e.e.值）为99.8%。     

逆胶束系统中脂肪酶对橄榄油的水解

在丁二酸双(2-己基已)酯磺酸钠(即AOT)/异辛烷逆胶束系统中,研究了圆柱形假丝酵母脂肪酶所催他的橄榄油水解过程。结果表明,R=[H_2O]/[AOT]=9.8时,水解速度最快;当R值固定时,系统的含水量越大,水解率则越高。增加橄榄油浓度,可提高水解速度,但水解率随之下降。适度搅拌能使水解速度略有提高,但会降低酶的稳定性。添加少量的甘氨酸或甘油,也会降低酶的稳定性,因而对水解不利。     

韦格纳肉芽肿病自身抗原蛋白酶3的抗原决定簇研究

目的　研究韦格纳肉芽肿病患者血清中抗蛋白酶 3自身抗体的抗原决定簇。方法　应用免疫印记分析法 ,研究在还原和非还原条件下蛋白酶 3的抗原活性。应用竞争性抑制ELISA和免疫印记分析法 ,研究两个抗蛋白酶 3的单克隆抗体HZ1F12和HZ1H3之间 ,及单克隆抗体和 2 2份韦格纳肉芽肿活动期的抗蛋白酶 3血清之间 ,对蛋白酶 3的竞争抑制能力 ,并分析其可能的抗原决定簇。结果　患者血清及单克隆抗体均识别非还原条件下的蛋白酶 3。HZ1F12可以被HZ1H3抑制 74 %。 2 2份血清中 ,10份 (46 % )可以完全或部分被HZ1F12抑制 ,9份 (41% )可以部分被HZ1H3抑制 ,6份 (2 7% )可以被HZ1F12和HZ1H3二者抑制。单克隆抗体也可以明显抑制患者血清的结合能力。结论　韦格纳肉芽肿病自身抗体的抗原决定簇是三维立体构型。单克隆抗体HZ1F12和HZ1H3识别相似或相近的抗原决定簇。韦格纳肉芽肿病患者的抗蛋白酶 3阳性血清识别的抗原决定簇是不一致的。     

根霉脂肪酶催化水解（R,S）—环氧丙醇丁酸酯的反应特性

对根霉脂肪酶的粗酶拆分（Ｒ,Ｓ）－环氧丙醇丁酸酯的水解反应进行了初步研究,结果表明：３０℃下ＰＨ５．３时反应初速度最大;ＰＨ５．５－６．０地酶的立体选择季最高,对映体比率（Ｅ值）为５７。４２℃下ＰＨ５．５时反应初速度最大;酶的立体选择性随温度升高而下降,酶促水解反应中未到产物和底物抑制现象,根霉发酵液中脂肪酶的反应特性与硫酸铵沉淀法所得粗酶相吻合。     

基于4-氨基-5-甲酰基-8,10-二去氮杂四氢叶酸二乙酯侧链的水解反应条件优化

目的：改进经典抗叶酸类药物关键中间体4-氨基-5-甲酰基-8,10-二去氮杂四氢叶酸二乙酯侧链的水解条件。方法：以经典叶酸拮抗剂侧链N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸二乙酯(1)为反应原料,尝试了氢氧化钠（NaOH）和氢氧化钾（KOH）2种碱催化、20~180 min 5种反应时间和0.175~1 mol/L 3种碱浓度的反应条件,用高效液相色谱法检测目标产物和副产物,最终确定副产物为单酯水解产物以及酰胺键水解产物,并以此为依据完成了4-氨基-5-甲酰基-8,10-二去氮杂四氢叶酸二乙酯(5)水解条件的优化。结果:改进后的4-氨基-5-甲酰基-8,10-二去氮杂四氢叶酸二乙酯侧链的水解条件为0.3 mol/L KOH溶液中室温条件反应60 min,在该反应条件下,水解反应收率为95.6%。反应产物通过磁共振氢谱（1H nuclear magnetic resonance,1H NMR）、磁共振碳谱（13C nuclear magnetic resonance,13C NMR）和电喷雾飞行时间质谱（electrospray ionization time of flight mass spectrometry,ESI-MS）分析鉴定后结构正确,并通过高效液相色谱法确定其纯度为96%。新的水解反应条件避免了副产物的生成,提高了反应收率。结论：利用新的水解条件可以简便、高效地完成4-氨基-5-甲酰基-8,10-二去氮杂四氢叶酸二乙酯的水解反应,该条件对经典叶酸拮抗剂的合成和生产工艺的改进也有重要的意义。     

Pulmonary infiltrates associated with naproxen

Pulmonary infiltrates developed in three middle-aged women while receiving naproxen sodium. Weakness, fatigue, cough, low-grade fever, and eosinophilia in blood and/or sputum were common to all. All symptoms and findings resolved within a few days after discontinuing naproxen therapy in two cases and with use of corticosteroids (prednisone) in one case. A hypersensitivity reaction due to naproxen seemed to be the likely cause.     

急性期带状疱疹患者病情、病毒载量、S100β及NSE水平与PHN的相关性研究

目的 探讨急性期带状疱疹(HZ)患者病情评分、水痘-带状疱疹病毒(VZV)DNA载量、血浆S100β蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的水平变化情况,并分析其与带状疱疹后遗神经痛(PHN)的关系。 方法 选择2016年11月-2017年5月入住绍兴市人民医院的急性期HZ患者56例作为观察组,于治疗前后对HZ患者的病情进行评分,同时检测VZV DNA载量、血浆S100β蛋白和NSE水平,并选择同期体检的健康志愿者50例作为对照组。于治疗后1个月随访HZ患者发生PHN的情况,并采用Spearman相关性分析分析PHN与HZ患者病情评分、VZV DNA载量、血浆S100蛋白和NSE的关系。 结果 HZ患者治疗后病情评分明显低于治疗前(P<0.05);对照组血液中均未测出VZV DNA,观察组HZ患者疱液均检测出VZV DNA;治疗前HZ患者外周血VZV DNA呈现阳性者21例(37.5%),治疗后HZ患者外周血VZV DNA呈现阳性者7例(12.5%),HZ患者外周血治疗前后VZV DNA载量均明显低于HZ患者疱液的VZV DNA载量(均P<0.05),且治疗后HZ患者外周血VZV DNA载量明显低于治疗前(P<0.05);观察组治疗前后S100β、NSE水平均明显高于对照组(均P<0.05),治疗后观察组S100β、NSE水平均明显低于治疗前(均P<0.05);治疗前PHN与病情评分、疱液VZV、NSE呈正相关(r=0.347、0.562、0.281,均P<0.05),与外周血VZV、S100β无关;治疗后,PHN与病情评分、外周血VZV、S100β和NSE均呈正相关(r=0.606、0.594、0.606、0.379,均P<0.05)。 结论 HZ患者病情评分、VZV载量、S100β、NSE水平的变化情况对PHN的发生具有一定的预测价值。      

S-萘普生印迹聚合物药物释放性能的研究

目的：利用药物可与分子印迹聚合物特异性结合的特性,控制药物释放。方法：以甲基丙烯酸为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂,甲苯／异辛烷为致孔剂,在模板存在下利用本体聚合法制备分子印迹聚合物。所得的印迹聚合物与S-萘普生结合,用紫外分光光度仪测定药物的释放度。结果：S-萘普生累积释放曲线可以看出交联剂、致孔剂的用量变化会给分子印迹聚合物的外观和释药性能带来变化。结论：分子印迹聚合物对S-萘普生有一定的特异性结合,可以作为一种载体控制药物的释放。     

用两种可回收辛可尼定季铵盐催化剂催化合成L-苯丙氨酸

目的：用2种新型辛可尼定季铵盐手性催化剂不对称催化合成L-苯丙氨酸（L-phe）.方法：以辛可尼定,1-氯甲基苯并三唑或2-氯甲基苯并咪唑为原料,在甲苯中回流3h后过滤,得2种新型辛可尼定衍生物季铵盐手性催化剂.将该类催化剂用于催化N-二苯甲酮亚胺甘氨酸叔丁酯的不对称烷基化反应,得（S）-α-苄基二苯甲酮亚胺甘氨酸叔丁酯;再经过水解等步骤,得L-phe.体系中加入乙醚,过滤,使2种催化剂得到回收.结果：合成的2种新型辛可尼定季铵盐手性催化剂的化学产率分别达到90%和81%.（S）-α-苄基二苯甲酮亚胺甘氨酸叔丁酯的化学产率为75%～91%,对映体过量值为90%ee～99%ee,合成L-phe的总产率为41%～53%,2种催化剂的回收率为75%～80%.结论：2种辛可尼定季铵盐催化剂可催化N-二苯甲酮亚胺甘氨酸叔丁酯的不对称烷基化反应,并高产率地合成L-phe.手性催化剂可以回收.