金雀异黄素抑制肝癌干细胞样细胞的特性及对氟尿嘧啶耐药性的影响

目的：研究金雀异黄素对SMMC-7721细胞系肝癌干细胞样细胞特性以及氟尿嘧啶敏感性的影响。方法不同浓度金雀异黄素处理SMMC-7721细胞系球形成细胞。肿瘤球形成法检测自我更新能力。MTT比色法测定氟尿嘧啶药物敏感性。Western blot分析干细胞标志物CD133、CD44、Gli1和ABCG2蛋白表达。结果金雀异黄素显著抑制SMMC-7721细胞肿瘤球形成,并优先抑制球形成细胞增殖活性(P<0.05)。金雀异黄素(10μmol/L)有效逆转球形成细胞对氟尿嘧啶的耐药性。金雀异黄素降低CD133、CD44、Gli1和ABCG2蛋白表达水平。结论金雀异黄素抑制肝癌干细胞样细胞特性和氟尿嘧啶耐药性,其作用机制与抑制干细胞标志物蛋白表达和阻断Hedgehog信号传导有关。     

白杨素抑制肺癌A549细胞系球形成细胞自我更性

目的:研究白杨素(chrysin,ChR)抑制肺癌A549细胞系球形成细胞自我更新作用。方法:不同浓度ChR处理体外培养A549细胞系球形成细胞。肿瘤球形成法测定自我更新。Western blot分析CK2α和Gli1蛋白表达。pcDNA3.1-CK2α转染探讨作用机制。结果:ChR(10、20和40μM)处理24小时显著降低A549细胞系肿瘤球形成率(P<0.05),并伴随着CK2α和Gli1蛋白表达下调。与pcDNA3.1-LacZ转染细胞相比,pcDNA3.1-CK2α转染A549细胞系球形成细胞CK2α和Gli1蛋白表达显著上调,并增高肿瘤球形成率和减弱ChR的作用。结论:下调CK2α和Gli1表达参与ChR抑制A549细胞系球形成细胞自我更新作用。     

三七提取液对SMMC-7721细胞Bcl-2与Bax蛋白表达的影响

目的:研究三七提取液体外抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖及对凋亡调控基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响.方法:不同浓度的三七提取液作用于体外培养的SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞的抑制率;以流式细胞术观察细胞凋亡率的变化;以蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2及Bax和蛋白水平的表达情况.结果:三七提取液对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖具有抑制作用,且具有明显的时间和剂量相关性.细胞凋亡率随着药物浓度的增加而逐步增高.三七提取液作用后细胞内Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平均升高,二者的变化趋势均呈一定的时间依赖关系.结论:三七提取液能够显著抑制人肝癌细胞增殖,诱导SMMC-7721细胞凋亡,其作用机制可能与上调Bax的表达及下调Bcl-2的表达有关.     

芹菜素通过下调HK-2表达抑制非小细胞肺癌H460细胞糖酵解和球形成

目的 ：研究芹菜素能否通过下调糖代谢相关激酶HK-2表达抑制体外培养非小细胞肺癌H460细胞糖酵解及自我更新能力。方法 ：HK-2 cDNA转染、亚细胞毒浓度的芹菜素（20μM、40μM和80μM）处理或芹菜素（80μM）联合HK-2 cDNA转染H460细胞。蛋白质印迹检测HK-2表达水平,检测乳酸产物和葡萄糖消耗水平,同时,球形成实验测验自我更新能力。结果 ：亚细胞毒浓度的芹菜素以剂量依赖趋势下调非小细胞肺癌H460细胞的糖代谢相关激酶HK-2表达和减少乳酸产物和葡萄糖消耗,并且降低球形成率。此外,过表达HK-2能救援芹菜素抑制非小细胞肺癌H460细胞乳酸产生、葡萄糖消耗以及球形成率作用。结论 ：芹菜素通过下调HK-2表达抑制非小细胞肺癌H460细胞糖酵解及自我更新能力。     

紫草素通过抑制PKM2/PHD3/HIF-1α通路诱导肝癌细胞凋亡

目的 探讨紫草素诱导人肝癌细胞SMMC-7721死亡的可能机制。方法 体外培养人肝癌细胞（SMMC-7721）和正常肝细胞（L-02）,实验分为对照组和紫草素给药组（4、8、16μmol/L）。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,MTT法检测细胞活力,试剂盒检测三磷酸腺苷（ATP）和乳酸水平,免疫共沉淀和免疫荧光双染实验明确M2型丙酮酸激酶（PKM2）、脯氨酰酸羟化酶3(PHD3)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)三者之间的作用关系及蛋白表达情况;Annexin V/PI检测细胞凋亡;Western blot观察PKM2、PHD3、HIF-1α及凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3、Bcl-2表达水平;采用小干扰核糖核酸（siRNA）干扰法建立PKM2低表达的人肝癌SMMC-7721细胞,Western blot检测PKM2低表达对人肝癌SMMC-7721细胞中的PHD3、HIF-1α蛋白表达水平的影响。结果 紫草素对SMMC-7721和L-02细胞的半抑制浓度（IC50）分别是8.0...     

小檗碱对人肝癌SMMC-7721细胞 bcl-2、bax表达的影响

目的:研究小檗碱(Berberine)对体外培养肝癌SMMC-7721细胞bcl-2和bax表达的影响。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用CCK8法测定Berberine不同浓度(0mmol/L、0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.5mmol/L)及不同时间点(24h、48h、72h)对细胞增殖的影响,选取最适浓度和最适时间点,采用Western blot检测凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达。结果:CCK8发现Berberine对肝癌SMMC-7721细胞有显著的增殖抑制作用,在48h时间点和0.2mmol/L浓度条件下抑制最明显。Western blot检测结果发现,Berberine可致人肝癌SMMC-7721细胞bcl-2表达下调,bax表达上调,bax/bcl-2比值升高,促进凋亡发生。结论:Berberine抑制肝癌SMMC-7721细胞生长,通过上调bax蛋白、下调bcl-2蛋白,诱导凋亡。     

紫花牡荆素对宫颈癌HeLa细胞系干细胞样细胞自我更新的影响

目的 :观察紫花牡荆素(CAS)是否能抑制HeLa细胞系宫颈癌球形成细胞即宫颈癌干细胞样细胞(CCSLCs)自我更新能力。方法:体外培养HeLa细胞系细胞。干细胞条件培养基悬浮培养得到和扩增CCSLCs。MTT法测定细胞活性,肿瘤球形成法检测自我更新能力,Western blot分析磷酸化Akt蛋白表达。结果:CAS优先抑制CCSLCs细胞活性,同时,显著抑制CCSLCs自我更新能力,呈浓度依赖性(P<0.05)。与亲本HeLa细胞系细胞比较,CCSLCs细胞磷酸化Akt表达水平增高。CAS有效地降低CCSLCs细胞磷酸化Akt蛋白表达水平。结论:CAS抑制源自HeLa细胞系CCSLCs自我更新作用与其下调细胞磷酸化Akt蛋白表达有关。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素抑制肝癌细胞NF-κB表达的研究

目的：研究5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素（ADFMChR）抑制体外培养人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导凋亡作用及机制。方法：体外培养SMMC-7721细胞,MTT比色法测定ADFMChR对SMMC-7721细胞增殖活性的影响;Western Blotting法分析ADFMChR对SMMC-7721细胞NF-kB蛋白表达活性的影响。结果：MTT比色法结果显示ADFMChR有效抑制SMMC-7721细胞增殖活性,呈剂量依赖性,其IC50值为3.56μM;Western Blot分析证实ADFMChR下调NF-κB蛋白表达,呈浓度和时间依赖性。结论：ADFMChR具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和诱导细胞凋亡作用,其机制与NF-κB蛋白表达有关。     

甘草黄酮诱导肝癌ＳＭＭＣ-７７２１细胞凋亡及其对相关蛋白ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达的影响

目的:探讨甘草黄酮(GF9)对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用及其机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测GF9对人肝癌细胞SMMC-7721细胞生长的影响,Hoechst染色法和电镜观察GF9诱导细胞凋亡的形态变化,流式细胞仪检测GF9诱导的细胞凋亡率,并通过免疫印迹法检测凋亡相关蛋白survivin和pro-caspase-3表达水平的变化.结果:GF9可抑制SMMC-7721细胞增殖,并呈时间剂量效应;400 μmol/L GF9可诱导细胞凋亡,呈时间依赖性;随着GF9作用时间的延长,survivin和pro-caspase-3表达下调.结论:GF9能诱导SMMC-7721细胞凋亡,这可能与GF9能够引起抑制凋亡蛋白survivin的下调有关.     

苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞JAK-STAT信号通路的影响

目的 观察苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞JAK-STAT通路的影响.方法 苦参碱和/或JAK-STAT途径特异性抑制剂AG490培养肝癌细胞SMMC-7721,MTT法检测苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞株增殖的影响,RT-PCR法检测苦参碱对SMMC-7721细胞stat3、 stat5 mRNA表达的影响,Western blotting法检测苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达的影响.结果 苦参碱对肝癌细胞增殖的抑制率呈剂量和时间依赖性.苦参碱能下调stat3、 stat5 mRNA表达水平(P<0.05、0.01),降低STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量(P<0.05、0.01).AG490作用于SMMC-7721细胞后,star3、 stat5 mRNA和STAT3、STAT5蛋白的表达量与对照组比较无显著差异(P>0.05),P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量与对照组比较显著降低(P>0.05、0.01).与AG490组比较,AG490 苦参碱组stat3、 stat5 mRNA的表达量显著降低(P<0.05),STAT3、STAT5蛋白表达量显著降低(P>0.05),P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量无显著差异(P>0.05).与苦参碱组比较,AG490 苦参碱组stat3、 stat5 mRNA的表达量无显著差异(P>0.05),STAT3、STAT5、P-STAT3、P-STAT5蛋白表达量无显著差异(P>0.05).结论 苦参碱能下调stat3、 stat5 mRNA表达水平,因而能降低STAT3、STAT5蛋白表达水平,抑制细胞JAK-STAT信号转导通路,从而抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖.     

三氧化二砷诱导人肝癌细胞凋亡及相关分子机制研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导人肝癌细胞凋亡时,细胞周期及细胞周期调节蛋白的变化,探讨As2O3抗肝癌作用的分子机制.方法:体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率;透射电镜观察细胞形态变化及细胞凋亡情况;免疫细胞化学检测cyclinD1、cyclinA、p21蛋白的表达.结果:As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G0/G1、S期,与对照组比较,Aa2O3在诱导SMMC-7721细胞发生凋亡的同时,p21蛋白的表达水平显著增高(对照组1.128;As2O3组:3.794),cyclinD1、cyclinA蛋白的表达水平明显下降(对照组:3.647,2.833;As2O3组:1.133,1.179).结论:As2O3能干扰细胞周期的进程,诱导SMMC-7721细胞凋亡.其作用机制与上调p21蛋白及下调cyclinD1、cyclinA蛋白的表达有关.     

三氧化二砷对人肝癌细胞周期相关基因表达的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞周期的阻滞作用及相关基因的表达.探讨As2O3抗肝癌作用的机理.方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化;通过免疫细胞化学检测cyclin D1、PCNA基因编码蛋白的表达.结果 As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G0/G1期.与对照组比较,经As2O3作用的人肝癌细胞cyclin D1、PCNA基因编码蛋白的表达减少.结论 As2O3 通过干扰细胞周期的进程,下调cyclinD1、PCNA基因编码蛋白的表达,抑制肿瘤的增殖和转移,从而具有抗肿瘤的作用.     

三氧化二砷对人肝癌细胞株SMMC-7721中p27~(kip1)及其相关分子Skp2表达的影响

目的 通过检测三氧化二砷(As2O3)对肝癌SMMC-7721细胞周期素依赖性激酶抑制剂(CDKI)p27kip1及S期激酶相关蛋白2(Skp2)的影响,探讨其抗癌作用机制.方法 体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率,应用Western blot方法检测p27kip1、Skp2及CDK2基因编码蛋白的表达.结果 与对照组比较,As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G2/M期.经As2O3作用的人肝癌细胞p27kip1基因编码蛋白表达增加,而p27kip1相关分子Skp2及CDK2的表达减少.结论 As2O3可干扰细胞周期的进程,抑制SMMC-7721细胞的增殖.其作用机制与上调p27kip1蛋白及下调Skp2、CDK2有关.     

槲皮素对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制及细胞凋亡的诱导作用

目的探讨槲皮素体外对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用及诱导细胞凋亡的作用机制。方法以10、30、60、100#mol／L槲皮素作用于体外培养的SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,Annexi—V／PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况,免疫组化染色法检测bcl-2、bax蛋白表达的变化。结果30、60、100umol／L槲皮素可显著地抑制SMMC-7721细胞的生长（P〈0．01）,诱导细胞发生凋亡（P〈0．01）,并呈现量墩和时-效关系;槲皮素作用48h后,免疫组化染色法检测显示bcl-2蛋白表达降低和bax蛋白表达上调。结论槲皮素体外通过引起人肝癌SMMC-7721细胞bcl-2蛋白表达下调和bax蛋白表达上调诱导细胞发生凋亡,抑制细胞生长,槲皮素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

扶正消瘤汤抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的实验研究

目的 探讨扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的作用.方法 MTT法测定扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖的影响;Elisa法测定肿瘤坏死因子(TNF-α)生成;流式细胞法检测扶正消瘤汤对人肝瘤细胞SMMC-7721凋亡的影响;免疫组化法测定bcl-2和bax表达.结果 扶正消瘤汤100 μg/ml、50μg/ml剂量组在12～84 h对人肝癌细胞SMMC-7721的生长有明显的抑制作用,24～48h对SMMC-7721细胞TNF-α生成均有明显的促进作用,对SMMC-7721细胞凋亡具有明显的促进作用,并随浓度和时间(24～72h)的增加凋亡率增加,活细胞减少;扶正消瘤汤高剂量组对SMMC-7721细胞bax表达有明显上调作用,浓度越大上调越明显.扶正消瘤汤高、低剂量组对SMMC-7721细胞bcl-2表达有明显下调作用,其中高剂量组与模型组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 扶正消瘤汤对肿瘤的治疗作用的机制可能与促进TNF-α生成有关,并且与抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、调控bax、bcl-2表达有关.     

芹菜素对NCI-H446细胞系球细胞自我更新和uPAR表达的影响

目的：研究芹菜素对人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞自我更新的影响及机制。方法：采用干细胞条件培养基超低黏附板悬浮培养法从体外培养NCI-H446细胞系得到球细胞。测定球形成率用以评价0(0.1% DMSO对照组),5.0,10.0,20.0 μmol/L芹菜素对NCI-H446细胞系球细胞自我更新的抑制作用;Western印迹分析球细胞尿激酶型纤维蛋白酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)的表达。结果：0,5.0,10.0,20.0 μmol/L 芹菜素呈剂量依赖性抑制NCI-H446细胞系第2代球细胞的球形成率[球形成率分别为(18.2±1.9)%,(13.6±1.7)%,(10.6±1.6),(6.9±1.3)%],并呈浓度依赖性下调uPAR蛋白的表达(P<0.05)。结论：芹菜素抑制人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞自我更新作用,可能与下调uPAR表达相关。     

8-溴-7-甲氧基白杨素对Huh-7细胞系肝癌干细胞样细胞自我更新的影响

目的:研究8-溴-7-甲氧基白杨素(BrMC)抑制源自人肝细胞癌Huh-7细胞系细胞肿瘤球形成细胞即肝癌干细胞样细胞(LCSLCs)自我更新作用。方法:体外培养人肝癌Huh-7细胞系细胞,干细胞条件培养基悬浮培养法富集和扩增LCSLCs。MTT比色法测定细胞活性;肿瘤球形成法检测自我更新能力;FITC-CD133标记FCM分析CD133表达。结果:干细胞条件培养基悬浮培养6天,Huh-7细胞形成非粘附、三维生长的肝癌球体细胞即LCSLCs。与Huh-7细胞相比,BrMC抑制LCSLCs细胞活性作用更强(P<0.05),并以浓度依赖性方式减少肿瘤球数目(P<0.05),降低CD133蛋白表达(P<0.05)。结论:干细胞条件培养基悬浮培养能分离和富集LC-SLCs;BrMC具有抑制LCSLCs细胞自我更新能力作用,其作用机制与降低干细胞标记物CD133蛋白的表达相关。     

缺氧环境肝癌SMMC-7721细胞ABCG2和HIF-1α的表达及其关系

目的探讨在缺氧条件下人肝癌SMMC-7721细胞中三磷腺苷结合盒转运体G2(ABCG2)和缺氧诱导因子-1α(HIF-lα)的表达及其关系。方法将SMMC-7721细胞分为对照组、缺氧24h组、缺氧48h组及缺氧72h组,Western blot检测各组SMMC-7721细胞ABCG2和HIF-1α蛋白的表达。将缺氧72h组SMMC-7721细胞分别用终浓度为1.0、2.0、4.0μmol/L的HIF-1α抑制剂YC-1处理,Western Blot检测不同浓度YC-1处理的SMMC-7721细胞ABCG2和HIF-1α蛋白的表达。结果随缺氧时间延长,ABCG2和HIF-1α蛋白表达均逐渐增加(P<0.05),且ABCG2与HIF-1α的表达呈正相关(r=0.944,P<0.05);随YC-1浓度的增加,缺氧72h组SMMC-7721细胞ABCG2和HIF-1α蛋白表达下调(P<0.05)。结论 ABCG2和HIF-1α的表达随缺氧加重而增加,ABCG2表达上调可能是HIF-1α介导肝癌细胞缺氧环境中生存及耐药的机制之一。     

索拉菲尼与BrMC合用对SMMC-7721细胞系肝癌干细胞样细胞凋亡的影响

目的 :研究索拉菲尼(SO)、8-溴-7-甲氧基白杨素(Br MC)及两者合用对SMMC-7721细胞系肝癌干细胞样细胞凋亡的影响。方法 :不同浓度Br MC、SO及两者合用处理体外培养的SMMC-7721细胞系肝癌干细胞样细胞。流式细胞术测定细胞凋亡。Western blot分析NF-κB(p65)蛋白表达。结果 :SO(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)与Br MC联合处理SMMC-7721细胞系球形成细胞24h,相比于SO单独用药和Br MC单独用药对照组,凋亡率显著增加,同时,NF-κB(p65)蛋白的表达明显下调。结论 :Br MC增强SO诱导SMMC-7721细胞系肝癌干细胞样细胞凋亡作用,其机制涉及下调NF-κB(p65)蛋白表达。     

蔓荆子总黄酮抑制肝细胞癌球形成与激活AMPK抑制AKT相关

目的：研究蔓荆子总黄酮（FVTF）抑制人肝细胞癌自我更新作用及其机制是否涉及AMPK/Akt信号传导。方法：肿瘤球形成法测定FVTF对肝细胞癌SMMC-7721和MHCC97H细胞系球形成率的影响。Western blot分析FVTF处理SMMC-7721细胞AMPK和Akt磷酸化水平。结果：FVTF显著降低SMMC-7721和MHCC97H细胞系球形成率,呈浓度依赖性。不同浓度FVTF（1.0、2.0、4.0μg/mL）处理SMMC-7721细胞24 h,AMPK磷酸化水平增高;Akt磷酸化水平下降。结论：FVTF抑制肝细胞癌自我更新作用与其激活AMPK抑制Akt活性相关。