罗通定在人、比格犬和大鼠肝微粒体代谢转化的体外比较研究

目的体外研究罗通定(rotundine,RTD)在大鼠、比格犬和人肝微粒体中酶代谢动力学及代谢产物差异。方法优化3个种属肝微粒体与RTD反应体系,应用LC-MS测定RTD在3种肝微粒体中的体外代谢消除,应用LC-MS/MS分析比较RTD在3种肝微粒体中代谢产物种类和生成量的差异,计算并比较相应的活性值。结果RTD在人肝微粒体中代谢转化最慢,其相应的动力学参数为Km=2.67μmol·L-1、Vmax=0.095μmol·L-1·min-1、T21=298±18.0min、CLint=14.6±0.91ml·min-1·kg-1;大鼠中相应的动力学参数为Km=3.24μmol·L-1、Vmax=0.122μmol·L-1·min-1、T12=71.0±2.30min、CLint=87.5±2.79ml·min-1·kg-1;比格犬中相应的动力学参数为Km=5.31μmol·L-1、Vmax=0.228μmol·L-1·min-1、T21=62.3±0.647min、CLint=139±1.43ml·min-1·kg-1。RTD在3个种属肝微粒体中均代谢产生4个O-去甲基后的羟基化同分异构体产物,但4个产物的相对生成百分比在不同种属肝微粒体中有一定差异。结论罗通定在体外人、大鼠和比格犬肝微粒体中主要的I相代谢途径相同,但是酶代谢动力学性质及代谢产物的生成量存在着一定的差异。     

细胞色素P450同工酶在外源物代谢中的作用

细胞色素Ｐ４５０酶系（ＣＹＰ）中的Ｐ４５０Ⅰ￣Ｐ４５０Ⅳ家族是代谢外来化合物的主要酶系。环境致癌主要是ＣＹＰ１Ａ的底物，ＣＹＰ２Ｄ６的突出特征是它的遗传多态性，而ＣＹＰ２Ｅ１主要参与乙醇等小分子化合物的代谢，ＣＹＰ３Ａ则是参与大多数临床口服药物代谢的主要同工酶。本文综述了细胞色素Ｐ４５０铎外源性化合物代谢转换及调控研究，对ＣＹＰ１Ａ、ＣＹＰ２Ｅ的诱导机制及ＣＹＰ３Ａ的主要抑制机制也作了叙述。     

采用重组人源CYP酶研究艾瑞昔布的体外羟基化代谢

目的　探讨新型抗炎镇痛药艾瑞昔布在人体内的羟基化代谢酶。方法　用体外重组的人源细胞色素P450(CYP)进行孵育代谢实验,液相色谱多级质谱法分析代谢产物和残留的母体药物,利用整体归一化法对4种CYP酶的代谢作用大小进行评估。结果　艾瑞昔布羟基化代谢可由CYP2C9,CYP2D6和CYP3A4催化,其各自作用大小分别为62.5%, 21.1%和16.4%。结论　CYP2C9为艾瑞昔布羟基化的主要代谢酶。     

采用重组人源CYP酶研究艾瑞昔布的体外羟基化代谢

目的 探讨新型抗炎镇痛药艾瑞昔布在人体内的羟基化代谢酶。方法 用体外重组的人源细胞色素P450（CYP）进行孵育代谢实验，液相色谱多级质谱法分析代谢产物和残留的母体药物，利用整体归一化法对4种CYP酶的代谢作用大小进行评估。结果 艾瑞昔布羟基化代谢可由CYP2C9，CYP2D6和CYP3A4催化，其各自作用大小分别为62.5%，21.1%和46.4%。结论 CYP2C9为艾瑞昔布羟基化的主要代谢酶。     

采用重组人源CYP酶研究艾瑞昔布的体外羟基化代谢

目的探讨新型抗炎镇痛药艾瑞昔布在人体内的羟基化代谢酶。方法用体外重组的人源细胞色素P450(CYP)进行孵育代谢实验，液相色谱-多级质谱法分析代谢产物和残留的母体药物，利用整体归一化法对4种CYP酶的代谢作用大小进行评估。结果艾瑞昔布羟基化代谢可由CYP2C9，CYP2D6和CYP3A4催化，其各自作用大小分别为62.5%，21.1%和16.4%。结论CYP2C9为艾瑞昔布羟基化的主要代谢酶。     

甘草次酸在人细胞色素CYP450中体外代谢研究(英)

甘草根是中医临床常用解毒草药, 其活性成分甘草次酸主要是通过肝脏代谢。本文研究了人肝微粒体以及人源性CYP450s对甘草次酸的体外代谢影响, 以及甘草次酸对几种CYP450酶活性的影响。实验结果表明, 甘草次酸体外主要代谢酶为CYP3A4。体外药代动力学参数K_m, V_max和CL_int分别为18.6 μmol·L⁻¹, 4.4 nmol·mg⁻¹(protein)·min⁻¹和0.237 mL·mg⁻¹(protein)·min⁻¹。体外抑制试验显示, 50 μmol·L⁻¹甘草次酸可以抑制CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4酶的活性, 其抑制率可高达50%以上。     

双环醇在大鼠和人肝微粒体的代谢

目的研究参与双环醇代谢的主要药物代谢酶及代谢动力学参数，分离鉴定双环醇代谢产物。方法双环醇与大鼠和人肝微粒体进行温孵，以高效液相色谱、质谱、核磁共振技术检测并分离鉴定双环醇及其代谢产物。结果双环醇在地塞米松诱导大鼠肝微粒体中的代谢速率显著高于正常大鼠肝微粒体，酮康唑可显著抑制双环醇的代谢。双环醇主要代谢产物为:4-羟基-4′-甲氧基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯和4-甲氧基-4′-羟基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯。结论双环醇在大鼠和人肝微粒体的主要代谢产物为4-羟基-4′-甲氧基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯和4-甲氧基-4′-羟基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯，细胞色素P450 3A主要参与双环醇代谢。     

雌二醇在人、比格犬和大鼠的肝微粒体中体外代谢比较研究

采用体外肝微粒体孵育体系, 研究雌二醇在大鼠、比格犬和人肝微粒体中酶代谢动力学及代谢产物差异。通过对雌二醇浓度、肝微粒体蛋白含量和孵育时间等条件的考察, 优化雌二醇与肝微粒体的反应体系; 应用LC-MS/MS定量检测孵育体系中的雌二醇及代谢产物, 分析比较雌二醇在3个种属、不同性别肝微粒体中代谢产物种类和生成量的差异, 计算并比较相应的动力学参数。在3个种属肝微粒体中均发现9个I相代谢产物, 且百分比有种属差异。结果表明, 3个种属的肝微粒体对雌二醇I相代谢途径基本相同, 但是代谢产物的生成量及雌二醇的药物代谢动力学性质存在一定的差异。     

羟氯喹在人肝微粒体CYP酶中的代谢研究

目的：探讨羟氯喹在人肝微粒体中的主要代谢酶及其代谢特点和参数。方法：建立高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FLD）测定孵育液中羟氯喹的方法,观察9种CYP酶特异性抑制剂对羟氯喹代谢的影响,计算羟氯喹的酶促动力学参数如米氏常数（Km）、最大反应速度（Vmax）和药物的内在清除率（CLint）。结果：9种酶抑制剂中孟鲁司特（CYP2CB抑制剂）、酮康唑（CYP3A4抑制剂）、噻氯匹定（CYP2B6抑制剂）能够显著抑制羟氯喹的代谢（P ＜ 0.05）。羟氯喹在人肝微粒体中Vmax为233.6 ng·mL-1·h-1·mgprotein-1,Km为14.5 ng·mL-1,CLint为16.2 h-1·mgprotein-1。结论：羟氯喹主要通过CYP2C8、CYP3A4和CYP2B6代谢,药物在体内清除速率慢,药物相互作用和蓄积是发生不良反应的重要因素。     

HPLC-MS/MS测定人体血浆和尿液中罗通定的浓度

目的 建立一种简便、灵敏的测定人体血浆和尿液中罗通定浓度的高效液相色谱串联质谱( HPLC-MS/MS)方法.方法 血浆、尿液样品分别采用乙腈沉淀处理后,进样分析.采用Agilent-ECLIPSE-C18柱(2.1mm×150 mm,5μm),以乙腈-0.2％甲酸溶液=85∶15为流动相,采用正离子,多反应监测方式测定样品浓度.检测离子为m/z356.3→192.3(罗通定)和m/z 285.0→193.0(地西泮,内标).结果 罗通定血浆及尿样均在2.5～1000 ng· mL-1与峰面积线性关系良好(r=0.999 4);最低定量浓度均为2.5 ng·mL-1.日内与日间RSD均＜10％,血浆样品回收率在91.4％～109.2％,尿样回收率在88.63％～115.8％.结论 本方法简便快速、灵敏准确,适用于罗通定在人体内的药物动力学研究.     

In vitro comparative inhibition profiles of major human drug metabolising cytochrome P450 isozymes (CYP2C9, CYP2D6 and CYP3A4) by HMG-CoA reductase inhibitors

Objective: The affinity of (+)-, (−)- and (±)-fluvastatin, a new synthetic HMG-CoA reductase inhibitor developed as a racemate, for specific human P450 monooxygenases in liver microsomes was compared with that of the pharmacologically active acidic forms of lovastatin, pravastatin and simvastatin. Methods: Affinity was determined as the inhibitory potency for prototype reactions for 3 major drug metabolising enzymes: diclofenac 4′-hydroxylation (CYP2C9), dextromethorphan O-demethylation (CYP2D6), and midazolam 1′-hydroxylation (CYP3A4). Results: Lovastatin acid, pravastatin and simvastatin acid displayed moderate affinity for all three P450 isozymes (estimated K_i > 50 μmol⋅l⁻¹). Racemic and (+)- and (−)-fluvastatin showed moderate affinity (estimated K_i > 50 μmol⋅l⁻¹) for CYP2D6 and CYP3A4, whereas their affinity for CYP2C9 was high (estimated K_i < 1 μmol⋅l⁻¹). Diclofenac 4′-hydroxylation was competitively and stereoselectively inhibited, with measured K_i’s of 0.06 and 0.28 μmol⋅l⁻¹ for (+)- and (−)-fluvastatin, respectively. Conclusion: Fluvastatin selectively inhibits a major drug metabolising enzyme (CYP2C9), the (+)-isomer (pharmacologically more active) showing 4–5 fold higher affinity. As already reported for lovastatin and simvastatin, in vivo drug interactions by inhibition of liver oxidation of CYP2C9 substrates (e.g. hypoglyceamic sulphonylureas and oral anticoagulants) may be expected. Received: 9 June 1995/Accepted in revised form: 7 November 1995     

CYP1A2 is the major isoform responsible for paeonol O-demethylation in human liver microsomes

1. Paeonol, the primary active component of a traditional Chinese medicine Moutan Cortex, has a wide range of pharmacological activities. In the present study, the metabolism of paeonol by cytochrome P450s (CYPs) was investigated in human liver microsomes.

2. One O-demethylated metabolite was detected in reaction catalysed by human liver microsomes, and was identified as resacetophenone by comparing the tandem mass spectra and the chromatographic retention time with that of the standard compound.

3. The study with a chemical selective inhibitor, cDNA-expressed human CYPs, a correlation assay, and a kinetics study demonstrated that CYP1A2 was the major isoform responsible for the paeonol O-demethylation in human liver microsomes.

     

罗通定在唾液和皿浆中浓度的测定及相关性分析

目的建立大鼠唾液和血浆中罗通定浓度的HPLC测定方法,研究单次静脉注射后大鼠唾液及血浆中罗通定浓度的相关性。方法色谱柱为Diamonsil（R）C18柱（250mm×4．6mm,5μm）;流动相为甲醇：水（70：30,V/V）;流速1．0mL·min^-1;柱温30℃;检测波长281nm。测定唾液和血浆中的罗通定浓度,并对腮腺、颌下腺唾液浓度与对应血浆质量浓度进行Pemarson相关分析。结果罗通定的唾液和血浆浓度在0．1-20．0mg·L^-1和0．5．40．0mg·L^-1内线性关系良好,在唾液和血浆中的最低定量限和相对回收率分别为0．1mR·L^-1、100．97％-107．50％和0．5mg·L^-1、98．30％～111．20％,日内、日间精密度（RSD）均〈10％;静注给药后,腮腺和颌下腺唾液浓度与对应血浆浓度呈正相关,Pearson相关系数（R）分别为0．9,37（P〈0．01）和0．985（P〈0．01）。结论首次建立了同时适用于唾液和血浆中微量罗通定分析的HPLC方法;唾液和血浆中的罗通定浓度具有良好的相关性,在罗通定的药动学研究及临床药物浓度监测时可以考虑以唾液代替血浆样本进行分析,     

重组人血小板生成素联合白介素-11衍生物治疗化疗所致血小板减少症的临床观察

目的研究重组人血小板生成素(rhTPO)联合白介素-11衍生物(rhIL-11Ala10)治疗化疗所致血小板减少症的临床疗效和安全性。方法选取郑州大学第一附属医院2012年6月—2013年6月接受化疗期间出现血小板(Plt)≤50×109/L的实体瘤患者32例,采用自身交叉对照试验的方法将患者随机分为AB、BA两组,每组均接受两阶段治疗。A疗程为化疗结束后12~24 h皮下注射rhTPO 1.5×104U/次,1次/d,连续给药2 d后换用rhIL-11Ala10皮下注射,1.5 mg/次,1次/d;B疗程为化疗结束后12~24 h单用rhIL-11Ala10皮下注射1.5 mg/次,1次/d。AB组第一阶段为A疗程,第二阶段为B疗程,BA组恰好相反。A、B疗程的治疗过程中当Plt的绝对值升高≥50×109/L,或Plt≥100×109/L,或用药达14 d即可停药。监测所有患者血小板生长情况和不良反应。结果联合用药与单一用药相比,化疗后血小板下降的最低值平均升高5×109/L,血小板恢复的最高值平均升高78×109/L,持续用药的天数平均缩短了3.7 d,且不良反应发生率低。结论联合应用rhTPO和rhIL-11Ala10治疗化疗后血小板减少症的临床效果更优,更经济,更安全。     

Polymorphic CYP2D6 mediates O-demethylation of the opioid analgesic tramadol

Objective: This study was designed to investigate whether the in vivo metabolism of tramadol was influenced by CYP2D6 polymorphism. Methods: The extent of tramadol O- and N-demethylation was calculated by determining the amounts of tramadol and O- and N-desmethyltramadol in 24 h urine after ingestion of a test dose of tramadol. The O- and N-demethylation rates were calculated by dividing the 24-h urinary excretion amount of tramadol by that of O-and N-desmethyltramadol. Volunteers were phenotyped for CYP2D6 polymorphism using sparteine as an in vivo probe. Results and conclusion: High correlation was found between tramadol-O-demethylation and sparteine oxidation in 71 extensive metabolizers of sparteine (r _s= 0.544). The mean metabolic ratio of tramadol O-demethylation was significantly higher in poor metabolizers of sparteine than in extensive metabolizers (4.4 vs 0.8). These in vivo results confirm that tramadol O-demethylation is carried out to a large extent by the polymorphic CYP2D6. Received: 9 January 1997 / Accepted in revised form: 23 July 1997     

半乳糖化重组人生长激素和重组人生长激素在小鼠体内的药物动力学

目的：比较半乳糖化重组人生长激素和重组人生长激素在小鼠体内的药物动力学特征。方法：用＾１２５Ｉ标记Ｇａｌ－ｒｈＧＨ和ｒｈＧＨ、通过小鼠尾静脉ｉｖ，测定血和肝中相对放射性随时间的变化，以３Ｐ８７药物动力学程序进行模型拟合和参数求算。结果：＾１２５Ｉ－ｒｈＧＨ－Ｇａｌ在血中的相对放射性呈现双峰，其体内药行动力学特征与＾１２５Ｉ－ｒｈＣＨ明显不同，进一步证实了Ｇａｌ－ｒｈＧＨ的肝靶向性。     

Lack of effects of recombinant human interleukin-4 onin vitro colony formation of freshly explanted human tumor cells

Summary Interleukin-4 is a highly pleiotropic T-cell derived lymphokine that has been reported to stimulate a host cell-mediated antitumor response. Recombinant human interleukin-4 (rhuIL-4) is currently undergoing clinical phase I trials. We have studied the growth modulating effects of rhuIL-4 on a variety of freshly explanted human tumor specimens using anin vitro soft agar cloning system. Final concentrations of 0.1 to 10 ng/ml were used in continuous incubation experiments. Of 147 specimens, 73 (50%) were evaluable for the determination of tumor growth modulating activity. The most common tumor types recruited included breast, nonsmall cell lung, ovarian cancer and melanoma. Stimulation of tumor colony forming units (colony formation 1.5× controls) was observed in 0/73 tumors. Similarly, only 1/73 (1.3%) specimens (a non-small cell lung cancer) had a significant decrease in tumor colony forming units (colony formation 0.5× controls) at 1 ng/ml. We conclude that rhuIL-4 is not a direct modulator of tumor colony formationin vitro. However, antitumor effects could perhaps be achievedin vivo via the immune-modulating effects of Interleukin-4.     

微透析法研究罗通定经皮给药在大鼠体内不同部位的浓度分布

目的研究罗通定经皮给药后,药物在大鼠脑、皮下、血管3个部位微透析液和尾静脉血浆的浓度变化。方法采用微透析技术取样,HPLC测定不同时间点大鼠脑、皮下、血管的微透析液的药物浓度以及尾静脉血浆的药物浓度,DAS2．0药动学软件计算药动学参数。结果罗通定20cm^2经皮给药后,在大鼠体内消除缓慢,脑、皮下、血管和血浆AUC0→10h分别为（387．19±162．81）、（245．97±74．60）、（211．41±65．19）和（1677．05±598．83）min·mg·L^-1。体内药物含量血浆中最高,脑微透析次之,血管微透析最低,经皮给药后的AUC脑／AUC血浆、AUC皮下／AUC血浆、AUC血管／AUC血浆分别为（23．45±6．51）％、（15．66±5．03）％和（13．87±5．84）％。结论微透析法能很好地应用于罗通定经皮给药后大鼠不同部位的浓度研究,反映脑、皮下和血管之间的关系。