顺铂诱导肝细胞性肝癌细胞凋亡及其临床意义

日的 :探讨顺铂 (CDDP)体内诱导肝细胞性肝癌 (HCC)细胞凋亡的发生情况及其临床意义。方法 :18例HCC患者随机分成 2组 ,10例行CDDP诱导治疗 ,另 8例作对照。用流式细胞仪 (FCM )检测 2组患者手术切除之肿瘤组织 ,作凋亡及细胞周期分析。结果 :CDDP治疗组肝癌细胞凋亡率较对照组显著增高 (P <0 .0 1)。CDDP治疗组肿瘤细胞G0 -G1 期较对照组明显增加 (P <0 .0 5 ) ;而S期细胞有显著减少 (P <0 .0 1)。细胞增殖指数 (PI)在CDDP治疗组显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :CDDP在体内能显著增加HCC细胞的凋亡。小剂量CDDP诱导治疗为肝癌辅助治疗可行方法之一     

顺铂诱导人肝癌细胞凋亡模型的构建

目的 建立肝癌细胞凋亡模型,探讨顺铂抗癌作用机理,为进一步研究细胞凋亡分子机制打下基础。方法 用抗癌药顺铂诱导增减的人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１肝癌细胞发生凋亡,用四氮甲唑蓝比色试验（ＭＴＴ）,细胞形态学检查,ＤＮＡ凝胶电泳检测。结果 顺铂可显著抑制ＳＭＭＣ－７７２１细胞的生长,并有很好的量效和时效关系,经药物作用后,肝癌细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变,ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳吴现明显的梯度     

顺铂化疗对肝细胞性肝癌syndecan—1蛋白表达的影响

目的：探讨术前化疗药物顺铂对肝细胞肝癌syndecan-1表达的影响,方法：应用免疫组化技术（ABC法）检测syndecan-1在未化疗组和顺铂化疗组肝细胞肝癌的表达,结果：在47例肝细胞癌中,31例未化疗者syndecan-1阳性表达13例,而在16例化疗者中syndecan-1阳性表达13例,化疗组syndecan-1 阳性表达率高于未化疗组,有显著性差别（P＜0．05）,结论：顺铂化疗会增加肝细胞肝癌syndecan-1 的表达,从而有助于预后的改善。     

顺铂化疗对肝细胞性肝癌syndecan-1蛋白表达的影响

目的探讨术前化疗药物顺铂对肝细胞肝癌syndecan-1表达的影响.方法应用免疫组化技术(ABC法)检测syndecan-1在未化疗组和顺铂化疗组肝细胞肝癌的表达.结果在47例肝细胞癌中,31例未化疗者syndecan-1阳性表达13例,而在16例化疗者中syndecan-1阳性表达13例.化疗组syndecan-1阳性表达率高于未化疗组,有显著性差别(P＜0.05).结论顺铂化疗会增加肝细胞肝癌syndecan-1的表达,从而有助于预后的改善.     

顺铂诱导的喉癌细胞凋亡及其对细胞周期的影响

目的 探讨顺铂对喉癌Ｈｅｐ２细胞株诱导细胞调恨的作用,为抗肿瘤药物的筛选和用药方式提供理论依据。方法 体外培养的Ｈｅｐ２细胞与不同浓度顺铂作用２小时,利用充式细胞仪,荧光显微镜和ＤＮＡ凝胶电泳技术,研究不同时间细胞凋亡的发生,形态学改变和对细胞周期的影响。     

未折叠蛋白反应通过自噬抑制顺铂诱导的肝癌细胞凋亡

目的：研究未折叠蛋白反应对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法：在采用二硫苏糖醇和衣霉素诱导未折叠蛋白反应的基础上,利用流式细胞和免疫印迹技术分析未折叠蛋白反应对顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的影响及其机制。结果：二硫苏糖醇和衣霉素预处理促进顺铂诱导的自噬反应并抑制顺铂介导的肝癌细胞凋亡,抑制自噬反应明显削弱二硫苏糖醇和衣霉素预处理对顺铂作用下肝癌细胞的保护作用。结论：未折叠蛋白反应能够通过促进自噬抵抗顺铂诱导的肝癌细胞凋亡。     

黄芩苷联合顺铂体外诱导人肝癌细胞HepG2.0凋亡的实验研究

目的观察黄芩苷联合顺铂是否能诱导HepG2.0细胞凋亡及探讨其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用体外细胞培养方法,分别用黄芩苷、顺铂及黄芩苷联合顺铂干预HepG2.0细胞。用CCK-8法检测细胞活性;光学显微镜观察HepG2.0细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测HepG2.0细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-myc表达的影响。结果光学显微镜下可观察到药物组细胞凋亡的形态改变;各药物组细胞早期凋亡率显著升高;各药物组细胞Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax、c-myc和Caspase-3表达升高。结论黄芩苷、顺铂及黄芩苷联合顺铂均能诱导HepG2.0细胞凋亡,其机制可能通过调控Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-myc蛋白的表达有关。     

索拉非尼对顺铂诱导肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的 探讨索拉非尼对顺铂抑制肝癌细胞HepG2增殖的影响及其可能机制.方法 分别及联合应用两药后以MTT法检测HepG2细胞的增殖抑制,用流式细胞术检测细胞凋亡,用RT-PCR检测MDR-1的mRNA表达.结果 索拉非尼及DDP单药对HepG2均有抑制作用,两药联合具有协同或相加作用.联合用药细胞凋亡率明显高于单药组(P＜0.05).单药顺铂组与联合组MDR-1的mRNA表达高于对照组及索拉非尼单药组,其中单药顺铂组表达最高(P＜0.05).结论 索拉非尼联合顺铂对肝癌HepG2细胞有更强的抑制及促凋亡作用,其机制可能与增加HepG2细胞的凋亡,索拉非尼下调MDR-1,增强顺铂对HepG2细胞的诱导凋亡作用有关.     

顺铂诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的观察

在体外采用光镜、电镜及ＤＮＡ断片检测方法对顺铂作用于人食管癌Ｅｃａ１０９细胞后的形态学及生化改变进行了观察。药物作用后细胞皱缩变小，呈圆形，细胞核固缩、破裂或消失，胞浆红染，有的细胞似出芽状，可见到凋亡小体及凋亡小体被吞噬的现象。顺铂低浓度时凋亡现象不明显，５ｍｇ／Ｌ以上时作用明显。药物作用２４ｈ时经ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳，可见到呈梯状的条带。结果提示：顺铂可引起Ｅｃａ１０９细胞凋亡，ＤＮＡ降解是细胞凋亡过程中的重要变化之一。     

顺铂诱导人食管癌Eca—109细胞凋亡的观察

在体外采用光镜、电昏头昏脑主ＤＮＡ断片检测方法对顺铂作用于人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞后的形态学及生化改变进行了观察。药物作用后细胞皱缩变小，呈圆形、细胞核固缩、破裂或消失、胞浆红染，有的细胞似出芽状，可见到凋亡小体被吞噬的现象。顺铂低浓度时凋亡现象不明显，５ｍｇ／Ｌ以上时作用明显。药物作用２４小时经ＤＡ琼脂糖凝胶电泳，可见到呈梯状的条带。结果提示，顺铂可经起Ｅｃａ－１０９细胞凋亡，ＤＮＡ降蟹 细胞     

凋亡抑制基因Survivin在人肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的 :探讨凋亡抑制基因Survivin在人肝癌 (HCC)中的表达及其临床意义。　方法 :应用SABC免疫组化染色技术和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,检测 95例HCC及其癌旁组织、8例非肝癌肝组织Survivin蛋白以及 8例HCC组织SurvivinmRNA的表达 ,分析其与病理分级、临床分期和肿瘤大小等临床指标之间的关系。　结果 :HCC组织中Survivin基因蛋白表达率显著高于癌旁组织和非肝癌肝组织 (5 9.77%vs 2 6 .0 0 %和 5 9.77%vs0 .0 0 % ,P <0 .0 1) ;HCC组织中SurvivinmRNA表达阳性率显著高于癌旁组织 (37.5 %vs 0 .0 0 % ,P <0 .0 1) ;Sur vivin蛋白表达与肝癌组织学分级、临床分期、肿瘤大小无相关关系。　结论 :Survivin基因在HCC组织表达上调 ,提示该基因参与了HCC的发生过程 ;Survivin基因表达与组织分化程度无关 ,提示其可能成为HCC特异性诊断指标或基因治疗的新靶点。     

顺铂对肝癌细胞凋亡中wtp53,C—myc基因表达的影响

目的 研究顺铂对抑癌基因ｗｔｐ５３及癌基因Ｃ－ｍｙｃ在肝癌细胞凋亡过程中表达的影响。方法 用抑癌药顺铂诱导凋亡,通过细胞形态学检查,ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳证明调亡发生,采用原位杂交技术检测ｗｔｐ５３,Ｃ－ｍｙｃ基因在人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１凋亡过程中的表达。结果 ｗｔｐ５３基因在顺铂作用后１ｈ开始表达,６ｈ达到高峰,１２ｈ则明显下降。Ｃ－ｍｙｃ基因在顺铂作用后表达逐渐增强,１２ｈ达到高峰。结论     

促卵泡激素抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡

目的 探讨促卵泡激素(FSH)对顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的影响及其机制。方法 应用DNA Fragmentation梯带电泳分析,TUNEL荧光原位凋亡检测法测定对FSH敏感的卵巢癌细胞系OVCAR3(OVCAR3-FSHR)细胞凋亡状态,应用Caspase-3活性分析法检测Caspase-3活性,RT-PCR检测凋亡相关基因survivin mRNA表达,Western blot检测其Survivin及bcl-2蛋白表达。结果 不论是DNA梯带电泳还是TUNEL荧光原位凋亡检测都表明促卵泡激素能抑制顺铂诱导的OVCAR3-FSHR细胞的凋亡。Caspase-3活性分析表明促卵泡激素能降低顾铂引起的Caspase-3活性增加。半定量RT-PCR结果表明FSH能增加survivin mRNA表达,Western blot结果表明FSH能增加Survivin蛋白表达而对bcl-2表达无影响。结论 促卵泡激素能够抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡,其作用机剖可能与促进Survivin表达及降低Caspase-3活性有关。     

雷帕霉素在顺铂诱导HeLa细胞凋亡中的协同作用

目的评价雷帕霉素联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞的协同作用。方法HeLa细胞经雷帕霉素和（或）顺铂处理后,以MTT法检测细胞的增殖情况。以流式细胞仪检测细胞凋亡。Westernblot检测p-4E-BP1和p-S6K1的表达情况。结果雷帕霉素联合顺铂抑制HeLa细胞的增殖,且随时间延长抑制作用越显著,与单独用药组相比差异有显著性。雷帕霉素可增强顺铂诱导的HeLa细胞凋亡。经雷帕霉素作用后的HeLa细胞表达p-4E-BP1和p-S6K1较对照组下降,两者联用明显下降。结论雷帕霉素和顺铂联用在抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡上具有协同作用。这预示着雷帕霉素和顺铂联用可能是一种合理的靶向治疗宫颈癌的方法。     

原发性肝细胞性肝癌细胞凋亡及p53基因表达的研究

目的研究原发性肝细胞性肝癌(HCC)细胞凋亡的发生情况及与凋亡相关的p53基因的表达,探讨p53基因与细胞凋亡的关系.方法以TUNEL法检测HCC细胞凋亡的发生情况,免疫组化SABC法检测p53基因的表达.结果34例HCC平均凋亡指数为4.16%±0 70%,有18例p53蛋白阳性,凋亡指数的高低与p53蛋白的阳性率有关,p53蛋白阳性者凋亡指数低;正常肝组织平均凋亡指数为0 51%±0.09%,无p53蛋白阳性者.结论HCC患者中存在肿瘤细胞增殖和死亡调控的异常,其细胞凋亡的发生可能与p53基因失控有关.     

顺铂通过诱导膀胱癌细胞自噬促进细胞凋亡

目的：研究自噬在顺铂引起膀胱癌细胞凋亡中的作用。方法：以膀胱癌细胞T24为细胞模型,利用透射电镜观察自噬泡形成,荧光显微镜观察转染绿色荧光蛋白和微管相关蛋白1轻链3融合蛋白（green fluorescent protein and microtubule associated protein 1 light chain 3 fusion protein,GFP-LC3）的质粒的荧光聚集情况。应用蛋白质免疫印迹检测LC3-Ⅱ的积累,检测顺铂能否诱导膀胱癌T24细胞发生自噬。此外,蛋白质免疫印迹还被用来检测自噬相关信号通路哺乳动物雷帕霉素受体（mammal target of rapamycin, mTOR）及其下游相对分子质量70 000的核糖体蛋白质S6激酶（70 000 ribosomal protein S6 kinase,P70S6K）的变化,以及凋亡标志蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的切割,之后利用3-(4,5-二甲基)-5-(3-羧甲基苯环)-2-(4-硫基苯)-2H-四唑盐复合物检测法［ 3-( 4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-5-( 3-carboxymethoxyphenyl)-2-( 4-sulfophenyl)-2H- tetrazolium, inner salt,MTS］观察在自噬促进剂雷帕霉素（rapamycin）存在与否的情况下顺铂引起的膀胱癌细胞活力变化。本实验还使用了RNA干扰技术敲降LC3表达。结果：电子显微镜显示相比对照组,顺铂可以引起膀胱癌细胞出现大量自噬泡。荧光显微镜观察GFP-LC3聚集程度,顺铂组也明显高于对照组。蛋白质免疫印迹检测LC3的结果发现顺铂组的LC3-Ⅱ含量随时间延长和顺铂浓度增加而明显增加,尤其是在48 h时,50与100 μmol/L顺铂处理下LC3-Ⅱ/Actin（%）的灰度值分别升高了30和44,而mTOR/P70S6K的磷酸化也受到顺铂处理的抑制,在48 h,100 μmol/L顺铂处理下其磷酸化条带几乎完全被抑制。MTS结果发现顺铂可导致细胞活力的丢失,在50和100 μmol/L顺铂处理24 h时分别下降了12%和35%,而且用自噬促进剂雷帕霉素和顺铂联合处理组的细胞活力丢失大于单用顺铂处理的对照组（F=74.890,P<0.01）。RNA干扰实验显示,敲降自噬相关基因LC3,可减少顺铂引起的PARP剪切,细胞凋亡减少。结论：发现顺铂可以引起膀胱癌细胞T24发生自噬,并发现该自噬的作用能促进顺铂诱导的细胞凋亡。     

顺铂诱导骨肉瘤细胞自噬及其与凋亡关系的体外研究

目的研究顺铂(DDP)诱导的骨肉瘤细胞自噬性活化,并探讨自噬与凋亡的关系。方法利用免疫荧光染色和电镜观察DDP对骨肉瘤细胞自噬的影响;应用3-甲基腺嘌呤(3MA)下调自噬,采用MTT比色法,测定DDP对骨肉瘤细胞增殖抑制率的影响;MDC荧光染色和流式细胞术定量检测骨肉瘤细胞自噬的表达;应用流式细胞仪检测骨肉瘤细胞的凋亡情况。结果 DDP给药后可见LC3-Ⅱ绿色荧光呈点状散在分布于细胞膜附近。电镜下观察到DDP给药后骨肉瘤细胞内自噬体的形成。DDP能诱导自噬和凋亡的发生。3MA能抑制自噬的发生,对凋亡无明显影响。与单独DDP作用相比,3MA提前给药细胞的凋亡率增加,其细胞增殖抑制率也增高;3MA迟后给药细胞的凋亡率略有下降,其细胞增殖抑制率也下降。结论 DDP能诱导MG63细胞发生自噬性活化。DDP作用早期,自噬能延缓凋亡的发生,发挥保护细胞的作用;在DDP作用后期,自噬则作为另一种死亡形式出现,和凋亡一起促进细胞死亡。     

体外顺铂诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡时细胞信号转导因子活性变化

目的体外使用顺铂诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡,检测细胞转导因子MAPKs及转录因子(JUN,CREB)活性的变化. 方法采用免疫细胞化学法和流式细胞术法. 结果 15 mg*L-1顺铂作用肝癌SMMC-7721培养细胞48 h可观察到明显的凋亡峰,72 h免疫细胞化学染色发现胞质或(和)胞核中MAPKs(JIN/SAPKs,p38MAPK,ERK)及转录因子(JUN, CREB)均有明显表达. 结论在体外顺铂诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡过程中,MAPKs途径(JIN/SAPKs,p38MAPK,ERK)及转录因子(JUN,CREB)参与诱导了细胞凋亡.