血清镁离子的丙酮酸激酶法测定

目的：建立经济、准确、特异的酶法测定血清镁离子新技术。方法：根据Ｍｇ＾２＋为丙酮酸激酶（ＰＫ）的活动剂的原理,偶联乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）反应测定Ｍｇ＾２＋,并进行方法学研究。结果：该法与定值血清的相对误差为１．０５％～２．５０％,批纳ＣＶ〈２．０２％,日间ＣＶ〈３．１２％,线性范围０．２～２．０ｍｍｏｌ／Ｌ,回收率９８．０％～１０２．８％。钾、氨、钙、锰、铜、锌、铁离子以及胆红素、甘油三酯和血红蛋白     

丙酮酸激酶缺乏症患儿PKLR基因新发突变分析及文献复习

目的 通过对1例丙酮酸激酶缺乏症(pyruvate kinase deficiency,PKD)患儿的临床症状及其PKLR基因新发突变类型的分析,探讨基因检测对确诊PKD的重要性.方法 报告1例PKD患儿的诊断及新发突变位点,检索国内外报道的PKD患者,汇总并分析PKD临床特征及基因突变类型.结果 该PKD患儿出生后重...     

M2型丙酮酸激酶与癌胚抗原联合检测在乳腺癌诊断中的价值

目的探讨肿瘤型M2丙酮酸激酶(TuM2-PK)、癌胚抗原(CEA)在乳腺癌中的表达特性。方法采用ELISA法分别检测30例乳腺癌患者,23例乳腺良性肿瘤患者及30名健康体检人血中Tu M2-PK含量;采用化学发光免疫分析法检测血清中CEA含量。结果乳腺癌患者血中TuM2-PK、CEA值分别是(25.72±5.73)U/mL、(18.53±15.42)ng/mL。在乳腺癌的诊断中单独检测时TuM2-PK、CEA敏感性分别为76.7%、20.0%,特异性分别为91.3%、78.3%,联合检测敏感性、特异性分别达到83.3%、100%。结论联合检测TuM2-PK、CEA有助于提高乳腺癌诊断的特异性和敏感性。     

丙酮酸脱氢酶激酶PDK4在临床中的研究进展

丙酮酸脱氢酶复合物PDC可催化丙酮酸氧化脱羧,从而为三羧酸循环和脂质生物合成提供乙酰-CoA和NADH,其活性可被丙酮酸脱氢酶激酶PDK磷酸化灭活。本文主要介绍了PDK同工酶——PDK4在代谢性疾病,如糖尿病、脂质代谢异常以及血管钙化中的研究进展,并进一步对PDK4的调控机制进行总结,包括调控因子、激素水平以及基因多态性。     

肿瘤M2型丙酮酸激酶在结肠癌诊断中的意义

目的评估肿瘤M2型丙酮酸激酶(M2-PK)在结肠癌的诊断、筛查以及肿瘤分期中的意义。方法用ELISA检测结肠癌33例,结肠腺瘤27例以及正常对照30例的血浆及粪便中肿瘤M2-PK的数值,同时用化学发光法(CL)检测结肠癌患者癌胚抗原(CEA)的水平,并进行相关分析。结果结肠癌组血浆及粪便肿瘤M2-PK水平显著高于结肠腺瘤组及正常对照组(P<0.05),但结肠腺瘤组与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结肠癌Dukes C、D期患者的血浆及粪便中肿瘤M2-PK水平明显高于A、B期患者(P<0.05),有淋巴转移者明显高于无淋巴转移者(P<0.05)。血浆和粪便肿瘤M2-PK对结肠癌诊断的敏感性分别为84.8%和78.8%,高于CEA的51.5%。结论肿瘤M2-PK对结肠癌的诊断具有临床价值,敏感性高于CEA,并且与肿瘤的分期密切相关,可用于结肠癌的筛查及诊断。     

丙酮酸激酶法检测冰冻红细胞解冻后残留甘油含量研究

低温冰冻红细胞保存技术是红细胞保存的重要方法之一,通常使用甘油作为红细胞冰冻保护剂。甘油可以通过红细胞膜使溶液的冰点降低,具有冷冻保护作用,但是甘油对红细胞又有溶血作用,因此冰冻红细胞在输注前必须去除甘油,     

M2型丙酮酸激酶在肿瘤诊治中的价值

丙酮酸激酶（pyruvate kinase，PK）是人体糖代谢过程中的关键酶之一，其中M2型广布于各种组织中。低活性的M2-PK是肿瘤细胞异常的代谢活动得以维持的基础，它过度表达并出现在体液中。通过检测M2-PK在肿瘤细胞中的表达或在恶性肿瘤诊治过程中血浆中M2-PK的浓度，了解M2-PK作为一种新的肿瘤标志物在肿瘤诊治中的价值。本文综述了这种新的肿瘤标志物——M2-PK在各种不同肿瘤诊治中的意义。     

原钒酸钠对2型糖尿病大鼠丙酮酸激酶的影响

目的:研究原钒酸钠对2型糖尿病大鼠丙酮酸激酶活性的影响.方法:大鼠灌胃给予脂肪乳10d后,应用四氧嘧啶建立2型糖尿病模型.70只大鼠分为正常组、高脂组、糖尿病组、苯乙双胍组和原钒酸钠大、中、小剂量组(9、3、1mg·kg-1).连续灌胃7d后,测定各组空腹血糖值,用比色法测定肝组织和血清中丙酮酸激酶活性.结果:原钒酸钠降低2型糖尿病大鼠血糖值;与模型组相比,中、大剂量原钒酸钠升高2型糖尿病大鼠丙酮酸激酶活性(P<0.01)中剂量原钒酸钠使血清中酶活性完全恢复,大剂量原钒酸钠使肝组织和血清中酶活性完全恢复(与正常组相比P>0.05).结论:原钒酸钠增加2型糖尿病大鼠肝组织和血清中丙酮酸激酶活性,这可能是其发挥降血糖作用的一个环节.     

肺癌患者血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶的测定及其临床意义

目的探讨肿瘤型M2丙酮酸激酶(M2-PK)在肺癌患者血中的表达水平及其临床应用价值。方法用ELISA法分别检测67例肺癌(肺癌组)、30例良性肺部疾病患者(肺良性病变组)和30名健康体检者(对照组)血浆中的肿瘤型M2-PK表达水平,并进行比较分析。结果肺癌组血浆肿瘤型M2-PK水平及阳性率均高于肺良性病变组和对照组(P<0.05);肿瘤型M2-PK诊断肿瘤的敏感性为65.7%,特异性为95.0%。肿瘤直径≥3cm者血浆肿瘤型M2-PK阳性率显著高于肿瘤直径<3cm者(P<0.05);有淋巴结转移者血浆肿瘤型M2-PK的阳性率显著高于无淋巴结转移者(P<0.05);肺癌TNMⅢ～Ⅳ期患者血浆肿瘤型M2-PK的阳性率显著高于Ⅰ～Ⅱ期者(P<0.05)。结论肿瘤型M2-PK对肺癌的辅助诊断有较高的临床价值,并对临床分期、判断淋巴结转移及临床治疗具有一定的指导意义。     

甲苯达唑、阿苯达唑和吡喹酮对小鼠细粒棘球蚴囊壁延胡索酸酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶和丙酮酸激酶的影响(英文)

细粒棘球蚴囊壁的延胡索酸酶(FH)活力为911—14333,磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)与丙酮酸激酶(PK)的活力之比为2.2—2.7,表明囊壁的糖代谢以酵解途径为主,感染小鼠用甲苯达唑、阿苯达唑或吡喹酮ig治疗,剂量各为25—50,300和500mg·kg~(-1)·d~(-1),连给7—14d,未见对FH有明显的影响,而PK和PEPCK则可明显被前二种药物所抑制。     

石斛合剂对HepG2细胞葡萄糖激酶与丙酮酸脱氢酶活性的影响

目的 探讨石斛合剂促进葡萄糖代谢的酶学机制.方法 ①以5％、10％、15％石斛合剂的含药血清培养HepG2细胞24h,测定葡萄糖激酶、丙酮酸脱氢酶活性;②以高浓度胰岛素培养HepG2细胞24h,继10％合药血清干预24h,测定葡萄糖激酶、丙酮酸脱氢酶的活性.结果 石斛合剂的含药血清能提高HepG2细胞葡萄糖激酶、丙酮酸脱氢酶的活性(P＜0.05);高浓度胰岛素能降低葡萄糖激酶、丙酮酸脱氢酶活性(P＜0.05),石斛合剂的治疗能增加葡萄糖激酶、丙酮酸脱氢酶的活性(P＜0.05).结论 高浓度胰岛素能诱发胰岛素抵抗,石斛合剂能提高葡萄糖代谢关键酶活性,缓解胰岛素抵抗.     

一种新型超微量恶性肿瘤标志酶——M2型丙酮酸激酶

丙酮酸激酶(PyK，E、C、2、7、1、40)是糖酵解中关键酶之一：它有四型同功酶，即L、R、M1、Ms型，其中L型分布子肝、肾、小肠、R型存在于红细胞，M1型存在于肌肉，大脑，M2型则广泛分布于除肌肉、六脑外的身体各组织。     

丙酮酸脱氢酶激酶抑制剂的研究进展

肿瘤细胞通过抑制线粒体中丙酮酸脱氢酶复合物(pyruvate dehydrogenase complex, PDC)的活性,将葡萄糖经由糖酵解途径分解为生物大分子的合成中间体。在这一过程中,丙酮酸脱氢酶激酶(pyruvate dehydrogenase kinases, PDKs)发挥着关键作用。抑制肿瘤细胞中PDKs活性可以有效阻断这一代谢途径,同时起到激活线粒体氧化代谢、诱导细胞凋亡的作用。PDKs抑制剂的研究也成为药物化学领域研究热点之一,能够靶向经典结合位点的新颖结构不断被发现,部分化合物也进入了临床研究阶段。本文综述了近年来PDKs抑制剂的研究进展,旨在总结相关新化学实体的研发现状,并发掘其在临床中的应用价值。     

微RNA-125b靶向调控M2型丙酮酸激酶影响宫颈癌SiHa细胞机制验证

目的探讨宫颈癌细胞中微RNA(miR)-125b和M2型丙酮酸激酶(PKM2)的表达以及miR-125b对PKM2基因的调控作用,从而确定miR-125b下游调控的靶基因,阐明其在宫颈癌发生发展中可能的分子机制。方法培养宫颈癌SiHa细胞及正常上皮细胞(293T细胞),利用细胞转染技术过表达或沉默miR-125b。实验分为实验组:miR-125b mimics(M组)、miR-125b inhibitor(I组);阴性对照组:miR-125b mimics negative con-trol(MNC组)、miR-125b inhibitor negative control(INC组);空白对照组(B组):未进行转染。采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-125b的含量。采用免疫荧光及蛋白质印迹法检测各组细胞中PKM2蛋白的表达。结果与293T细胞相比,宫颈癌SiHa细胞中miR-125b的表达下调(0.82±0.05)(P<0.05),PKM2表达上调(3.4±0.5)倍(P<0.05)。SiHa细胞转染成功后,免疫荧光检测miR-125b模拟物组表达PKM2蛋白的细胞数目(1.0±0.7)低于模拟物阴性对照组表达PKM2蛋白的细胞数目(3.6±0.5)(P<0.05);miR-125b抑制物组中表达PKM2蛋白的细胞数目(6.0±0.7)高于抑制物阴性对照组表达PKM2蛋白的细胞数目(3.6±1.3)(P<0.05)。蛋白质印迹法检测miR-125b模拟物组的PKM2蛋白相对表达量(0.239±0.042)低于模拟物阴性对照组的PKM2蛋白相对表达量(0.314±0.018)(P<0.05);miR-125b抑制物组的PKM2蛋白表达水平(0.40±0.03)高于抑制物阴性对照组的PKM2蛋白表达水平(0.34±0.04)(P<0.05)。结论与正常上皮细胞相比,宫颈癌SiHa细胞中miR-125b表达下调,而PKM2蛋白表达上调;宫颈癌细胞中miR-125b表达下调可能会通过增加PKM2的表达,从而增强其糖酵解作用,促进肿瘤的生长。     

Ⅱ型p21激活激酶在肿瘤中的调节作用及其抑制剂研究进展

p21激活激酶(p21-activated kinases,PAKs)是小GTP酶Rho家族的成员Rac和Cdc42的下游靶蛋白,参与调节细胞骨架重构和细胞运动等多种生物功能.PAKs家族分为Ⅰ型PAKs(PAK1～3)和Ⅱ型PAKs(PA4～6),其中Ⅱ型PAKs在多种肿瘤中高表达,并与肿瘤的发生和预后密切相关.Ⅱ型...     

缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在胆管癌细胞中的表达及对糖酵解的影响

目的分析缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在胆管癌细胞中的表达情况及其对糖酵解的影响。方法分别以不同浓度的氯化钴溶液诱导的缺氧条件下培养胆管癌QBC939细胞,测定并比较培养24h后各组细胞HIF-1α、PK-M2蛋白表达水平和乳酸分泌量。结果缺氧组的HIF-1α、PK-M2蛋白表达水平均显著高于常氧组,胆管癌QBC939细胞24h乳酸分泌量,随氯化钴浓度逐渐增加,且均显著高于常氧培养时分泌的乳酸量,比较差异具有统计学意义(P0.05)。经Pearson相关分析法分析,PK-M2与HIF-1α呈显著正相关(r=0.436,P=0.002)。结论缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在人胆管癌QBC939细胞中的蛋白表达水平显著提高,且均在胆管癌细胞糖酵解水平的升高过程中发挥重要作用。     

微小RNA-124靶向调控丙酮酸激酶同工酶2对喉癌Hep-2细胞增殖与迁移及侵袭的影响

目的 观察微小RNA-124(miR-124)靶向调控肌肉丙酮酸激酶同工酶2(PKM2)对喉癌Hep-2细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,并探讨其作用机制.方法 将Hep-2喉癌细胞分为3组:空白组、mimics组和抑制组.将miR-124类似物(miR-124 mimics)转染到mimics组细胞中,miR-124抑...     

激活素受体样激酶4,5和7抑制剂体外高通量筛选模型的构建

目的构建适于高通量筛选的激活素受体样激酶4(ALK4),ALK5和ALK7抑制剂的筛选模型。方法利用Bac to Bac昆虫杆状病毒表达系统,构建ALK4激酶结构域(ALK4kd),ALK5kd和ALK7kd及Smad2和Smad3蛋白的病毒表达系统,转染Sf9昆虫细胞,表达目的蛋白;通过谷胱甘肽S-转移酶(GST)亲和柱纯化,获得纯化的目的蛋白;分别以纯化的ALK4,ALK5,ALK7激酶片段与纯化的Smad3和ATP构建ALK4,ALK5,ALK7激酶活性测定体系,优化各反应底物浓度及反应条件,建立适于通量化分析的筛选模型;以已知ALK激酶抑制剂SB431542为工具分子,检测其对激酶的抑制活性,确证筛选模型的可靠性。结果经酶切和PCR鉴定,所得重组Bacmid均正确。转染Sf9昆虫细胞后纯化获得相应目的蛋白。经条件优化,反应体系中激酶和底物蛋白Smad3最佳浓度均为10 mg·L~(-1),ATP最佳初始浓度为10 nmol·L~(-1)。所得ALK4,ALK5和ALK7激酶抑制剂筛选体系的Z′因子分别为0.71,0.51和0.74,符合高通量筛选要求。已知SB431542在所建模型上对ALK4kd,ALK5kd和ALK7kd的抑制活性IC50值分别为22,188和91 nmol·L~(-1)。结论成功构建了ALK4,ALK5和ALK7激酶抑制剂的体外筛选模型。