内毒素血症时小鼠肺泡巨噬细胞CD14和清道夫受体的表达

目的 探讨内毒素肺损伤时,肺泡巨噬细胞逐步由免疫防御型转变为效应型的分子机制。方法 建立内毒素肺损伤动物模型,免疫组化法观察肺泡巨噬细胞ＣＤ１４及清道夫受体（ＳＲ）表达的变化,并辅以计算机图像分析;同时检测肺体指数,肺组织的病理变化及动物存活率。结果 内毒素对ＣＤ１４的表达呈时间依赖性升高,但加大剂量并未使其进一步增加;ＳＲ呈时间及剂量依赖性降低。肺泡巨噬细胞ＳＲ、ＣＤ１４的表达变化与小鼠肺损伤程     

烧伤血清对离体大鼠肺泡巨噬细胞CD14表达变化的影响

目的 :探讨烧伤血清对离体大鼠肺泡巨噬细胞 (AM )CD14的mRNA基因和膜蛋白 (mCD14 )表达变化及其对AM分泌细胞因子的影响。　方法 :分离并收集大鼠AM ,以烧伤血清及LPS刺激 ,再分别以抗CD14抗体作用后提取总RNA ,用RT PCR方法检测不同时相点CD14mRNA表达 ;用ELISA方法检测培养液中TNF α和IL 6浓度 ;免疫组化法检测AM膜CD14蛋白表达变化。　结果 :经烧伤血清和LPS刺激后 ,AM的CD14基因以及蛋白表达从 1h起就开始增加 ,2h达峰值 ,然后逐渐减弱。上述改变在伤后 12h内持续 ,细胞因子分泌相应增加 ;抗CD14抗体阻断CD14作用后 ,CD14的基因和蛋白表达显著降低 ,细胞因子分泌亦相应减少。　结论 :严重烧伤后可能随着LPS增加 ,通过激活内毒素信号传导通路 ,使AM分泌细胞因子增加。这种作用可以被抗CD14抗体所阻断 ,提示严重烧伤后可以通过调节CD14的作用而减少细胞因子的合成和分泌     

不同的通气方式对大鼠肺和肺内毒素受体CD14表达的影响

目的观察不同的通气方式对大鼠肺及对内毒素受体CD14的影响。方法将成年雄性SD大鼠随机分为4组(每组12只):自主呼吸组(R组),不给予机械通气;机械通气组(M组),潮气量(Vt)=12ml/kg,呼气末正压(PEEP)=8mmHg;保护性机械通气组(P组),Vt=6ml/kg,PEEP=0mmHg;大潮气量机械通气组(N组),Vt=40ml/kg,PEEP=0mmHg。每组中6只大鼠实验开始2h后注射50mg/kg伊万斯蓝(EB)。分别于机械通气前(基础值)及机械通气1、2、3h行动脉血气分析,实验3h结束,放血处死大鼠。测定大鼠肺病理形态学积分、肺组织湿/干重比(W/D)、支气管灌洗液(BALF)炎性细胞数、血管壁通透性。酶联免疫分析法(ELISA)测血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)及巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)浓度。RT-PCR测肺组织内毒素受体CD14的表达,免疫组化法测BALF单核细胞的CD14表达。结果肺病理形态学积分:R组和P组无变化,M组有轻度升高,N组明显高于M组(分别为6·0±1·6、0·7±0·8,t=8,P=0·000)。肺W/D:与R组比较,P组和M组差异无统计学意义;N组高于R组(分别为5·73±0·39、4·91±0·24,t=4·38,P=0·000)。EB:与R组比较,P组和M组差异无统计学意义;N组明显高于R组(分别为84·50±3·01、32·33±1·75,t=36·63,P=0·000)。BALF中WBC:与R组比较,P组无显著变化;M组高于R组(分别为0·83±0·12、0·59±0·62,t=4·272,P=0·02),N组明显高于R组(分别为5·68±0·45、0·59±0·62,t=26·68,P=0·000)。TNF-α在4组都没有测到。MIP-2:P组(35·4±5·3)与R组(31·5±2·4)比较,差异无统计学意义,M组(44·7±6·9)升高(t=4·382,P=0·04),N组(167·7±11·8)明显升高(t=27·779,P=0·000)。BALF中单核细胞的CD14蛋白表达和肺组织CD14基因表达:R组和P组二者表达基本一致,M组蛋白表达与R组差异无统计学意义,但基因表达升高;N组二者表达都显著升高(P=0·000)。结论常规机械通气导致大鼠肺部发生轻度损伤,并可使肺部CD14基因表达上调,但是肺部CD14蛋白表达无改变;大潮气量机械通气导致大鼠的肺部损伤,使肺部CD14表达明显上调。保护性机械通气可使大鼠肺部避免上述改变的发生。     

严重烧伤大鼠在体肺泡巨噬细胞CD14基因表达对细胞因子影响的实验研究

目的:全身炎症反应综合征(SIRS)是炎症介质过度释放的全身炎症反应,文中探讨严重烧伤和内毒素对在体SD大鼠肺泡巨噬细胞(AM)CD14基因表达的影响及调控作用以及体外培养AM的CD14膜蛋白表达对AM产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的影响及调控作用. 方法:①在体部分:对20%m度烧伤大鼠行外周血脂多糖(LPS)浓度检测.大鼠烧伤和LPS注射后在各时相点分别处死并分离提取AM,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法观察膜表面CD14mRNA表达变化.②体外部分:各组大鼠行全肺在体支气管肺泡灌洗(BAL)分离AM进行体外培养,分别加入烧伤血清、烧伤血清+抗体、内毒素、内毒素+抗体,用RT-PCR及ELISA方法分别检测4组AM在各时相点CD14mRNA表达及分泌TNF-α和IL-6的变化. 结果:①烧伤及LPS注射后大鼠各时相点外周血LPS浓度均明显高于假烫组.②烧伤血清组、LPS组大鼠AM各时相点CD14 mRNA表达均明显增高,TNF-α和IL-6浓度亦相应显著增高(P＜0.01).烧伤血清作用1 h后TNF-α和IL-6浓度即显著增加;血清抗体组AM的CD14mRNA表达显著降低(P＜0.01),TNF-α和IL-6浓度亦显著降低(P＜O.01).内毒素抗体组AM在各时相点CD14mRNA表达显著降低(P＜0.01),TNF-α和IL-6浓度亦显著降低(P＜0.01).结论:严重烧伤后外周血LPS浓度增加,在体和离体AM CD14 mRNA表达均显著增加,这使LPS对免疫系统的激活作用显著增大,AM分泌TNF-α和IL-6明显增加,抗CD14抗体可以拮抗炎性介质的合成和分泌.提示严重烧伤后通过调节CD14的作用而减少炎性介质的合成和分泌是可行的.     

大鼠肺泡巨噬细胞内毒素耐受性与炎症因子表达的变化

目的　观察大鼠肺泡巨噬细胞对内毒素 (lipopolysaccharide,LPS)重复刺激的耐受性与炎症因子IL -1β,TNF -α ,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达变化 ,研究二者之间的联系。 方法　将从 30只Wistar雄性大鼠分离所得肺泡巨噬细胞 ,随机等分为正常对照组 (A) ,LPS单次刺激组 (B)和LPS二次重复刺激组 (C)。运用ELISA和RT -PCR方法分别检测各组大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF -α及IL - 1β ,TNF -α,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达的变化。 结果　大鼠肺泡巨噬细胞TNF -α分泌和IL - 1β ,TNF -α ,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达A组分别为 :(0 . 4 5± 0. 0 1) ,(0 . 91±0 . 0 5 ) ,(0 6 0± 0 . 0 7) ,(0 . 80± 0. 0 6 ) ,(0 . 75± 0. 0 5 ) μg/L;B组分别为 :(0 .76± 0 . 0 3) ,(1 .4 2± 0 . 11) ,(1. 2 3± 0. 0 8) ,(1 .77± 0 . 15 ) ,(1 .2 2± 0 . 12 ) μg/L,B组与A组比较显著增加 (P <0 .0 1) ;C组分别为 :(0 .4 9± 0 . 0 5 ) ,(0 . 84.± 0 0 6 ) ,(0 . 70± 0 . 0 5 ) ,(0 . 95± 0 .16 ) ,(0 . 87± 0. 0 5 ) μg/L,C组与B组比较 ,明显减少 (P <0 . 0 5 ,或 <0. 0 1)。结论　LPS重复刺激可使大鼠肺泡巨噬细胞对LPS产生耐受性 ;LPS耐受性的产生与IL - 1β,TNF -α,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达下降相关     

周期性机械牵张对大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达的影响

目的 探讨周期性机械牵张对大鼠肺泡巨噬细胞(AM) Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 采用美国Flexercell公司生产的Flexercell 4000TTM应力加载系统,对体外培养的AM进行周期性牵张.实验分为机械牵张6h组、8h组(30％应变率,0.3Hz频率,方波)和静止对照组.RT-PCR检测AM上TLR4 mRNA的表达;ELISA检测巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)的浓度;免疫细胞化学法检测AM上TLR4蛋白表达.结果 与静止对照组比较,机械牵张6h组、8h组TLR4 mRNA、MIP-2蛋白及TLR4蛋白表达显著升高(P＜0.01).结论 机械牵张导致了大鼠肺泡巨噬细胞TLR4和MIP-2表达上调.     

内毒素攻击对大鼠肺泡及间质巨噬细胞的功能影响

目的观察正常大鼠肺泡与间质巨噬细胞形态结构差异以及内毒素攻击对它们的不同影响.方法支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,肺组织机械处理结合酶消化法(DNA酶、胶原酶)分离间质巨噬细胞;电镜下比较两种细胞的形态、结构差异,并以无色孔雀绿显色法比较两种细胞吞噬功能以及LPS攻击对它们的不同影响.结果肺内两个巨噬细胞亚群在形态、结构上有明显不同;在功能上,肺泡巨噬细胞的吞噬能力显著强于间质巨噬细胞,体外复合LPS攻击能明显增强间质巨噬细胞的吞噬能力,而肺泡巨噬细胞未受影响.结论肺内两个巨噬细胞亚群间存在异质性,肺间质巨噬细胞不应被单纯看作是肺泡巨噬细胞的前体细胞.     

脂多糖结合蛋白多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子的影响

目的　研究脂多糖结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein ,LBP)多抗对内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS)急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子表达的影响 ,探讨LBP多抗对LPS炎症反应减敏作用的部分机制。方法　将从 4 0只大鼠分离、培养的肺泡巨噬细胞随机分为 4组 ,A组为正常对照组 ,B组为LPS刺激组 ,C组为LBP LPS刺激组 ,D组为LBP多抗 LBP LPS组。运用RT -PCR和ELISA的方法 ,分别检测LBP多抗对LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后IL - 1β ,IL - 18的mRNA表达与TNF -α分泌量的变化。 结果　B组细胞分泌的TNF -α和IL -1β,IL - 18的mRNA表达显著高于正常对照A组 ,而C组细胞显著高于B组 ,D组却低于C组。LBP多抗显著减少LPS刺激的大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子TNF -α的分泌和IL - 1β ,IL - 18mRNA表达。 结论　LBP多抗可能降低LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后炎症因子表达 ,减少炎症因子分泌 ,对LPS炎症反应起减敏作用     

LBP多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞IL-10、IL-18基因表达的影响

目的探讨脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein, LBP)多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞IL-10、IL-18基因表达的影响,为LBP多抗治疗急性肺损伤提供实验依据.方法 Wistar 雄性大鼠40只,随机分段等分为5组,A组为正常对照组; B组为LPS处理组;C组为LPS注射前30 min加LBP多抗预处理组;D组为LPS和LBP多抗同时处理组;E组为LPS注射后30 min加LBP多抗处理组.分离培养各组大鼠肺泡巨噬细胞,用RT-PCR方法测定其IL-10、IL-18 mRNA表达.结果 LPS显著增加IL-10、IL-18 mRNA表达(B组);LBP多抗能显著降低二者的表达,尤以预处理组(C)更明显.结论 LBP多抗能显著降低内毒素急性肺损伤炎症因子的IL-10、IL-18表达.     

内毒素与机械通气对大鼠膈肌氧化损伤的影响

 目的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）是氧化应激的核心指标。本研究通过比较iNOS在脓毒症（sepsis）与机械通气（CMV）大鼠膈肌中iNOS 的变化,分析sepsis及CMV 对膈肌氧化应激的影响。方法将32 只健康SD 大鼠随机分为4组（ n=8）,对照组、sepsis 组、CMV 组、sepsis + CMV 组。采用HE 染色在光镜下观察组织的病理改变,采用免疫组化分析膈肌组织中iNOS 的表达。结果sepsis 组肺组织病理发生改变,而sepsis + CMV 组肺部病理改变有所减轻。sepsis + CMV 组肺间质水肿明显减轻,中性粒细胞及白细胞渗出减少。免疫组化显示iNOS 的表达在sepsis组、CMV 组较对照组有明显增加（P < 0.05）;sepsis +CMV 组iNOS 表达较单独sepsis组及CMV 组增加更为明显（P < 0.05）。结论内毒素8 mg/kg 腹腔注射24 h,可明显增加膈肌的氧化损伤;CMV 8 h也可以导致膈肌氧化损伤增强;内毒素联合CMV 比单独sepsis 组及CMV 组膈肌氧化损伤增加更明显,这可能是呼吸衰竭及撤机困难的重要原因。     

机械通气对大鼠肺组织中CC10表达的影响

目的探讨机械通气对大鼠肺组织中CC10蛋白表达的影响及CC10对肺炎症反应的影响。方法建立不同潮气量机械通气大鼠动物模型,分为对照组、小潮气量组和大潮气量组。通气4h后采用Western blot法测定肺组织CC10蛋白含量,计算细支气管上皮Clara细胞百分率;酶联免疫吸附法测定肺组织匀浆中TNF-α,MIP-2含量,对肺泡灌洗液行中性粒细胞计数。结果与对照组和小潮气量组相比,大潮气量组肺组织CC10表达降低,TNF-α、MIP-2升高,细支气管上皮Clara细胞百分率降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);与对照组相比,小潮气量组上述指标无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大潮气量机械通气引起肺组织中抗炎因子CC10表达减少,炎症因子TNF-α、MIP-2表达增加,肺损伤加重。     

IL-6和IL-10对小鼠肺泡巨噬细胞CD14清道夫受体mRNA表达的影响

目的：探讨感染过程中内毒素促使肺泡巨噬细胞由免疫防御细胞转化为致炎效应细胞的分子机制。方法：通过体外培养肺泡巨噬细胞，施加IL-6和IL-10刺激，应用RT-PCR方法观察肺泡巨噬细胞CD14和清道夫受体（SR）mRNA的表达变化。结果：在基因转录水平，IL-6对CD14表达呈时间-剂量依赖性上调，对SR的表达呈进行性下调；IL-10对SR表达呈时间-剂量依赖性上调，下调CD14表达。结论：促炎因子IL-6对肺泡巨噬细胞SR表达下调及CD14表达上调可能是感染过程中内毒素促使肺泡巨噬细胞由免疫防御转化为致炎效应细胞的机制之一，抗炎因子IL-10可能对这一转化过程起到一定的抑制作用。     

血管活性肠肽对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞表达MMP-9的影响

目的：探讨血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)对经脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞分泌和表达基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响。方法：采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）及明胶酶谱法（gelatin zymography），观察经LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞给予不同浓度的VIP（10-10～10-6mol/L）作用24h后MMP-9基因表达量和活性的变化。结果：(1)正常肺泡巨噬细胞仅分泌和表达少量的MMP-9，经不同浓度LPS（0.1～10mg/L）诱导后MMP-9活性和表达均明显高于未经LPS诱导的对照组（P<0.01）；(2)不同浓度VIP (10-10～10-6mol/L）的干预，均可下调LPS诱导的MMP-9的活性和表达（P<0.01）；(3)该作用可被蛋白激酶C和钙调蛋白的相应阻断剂H-7,W-7部分逆转（P<0.01）。结论：VIP能降低LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞MMP-9的表达及活性，其细胞内信号途径可能与蛋白激酶C和钙调蛋白有关，提示VIP在肺内炎症时可能具有保护性作用。     

纤维支气管镜在机械通气中的应用

目的明确纤维支气管镜(纤支镜)在机械通气患者中的应用价值。方法在监护下对我院收治的59例机械通气患者行纤支镜检查及治疗。结果对血氧饱和度下降、呼吸和心率不稳定、气道压力明显不稳定、血痰、肺不张、严重肺部感染等能查找出原因,并予相应的镜下治疗,效果显著;纤支镜引导经鼻气管插管、换管及引导插胃管成功率高、效果好。结论纤支镜在机械通气患者中的应用可以发挥重要作用。     

大鼠机械通气相关性肺损伤与肺组织细胞凋亡的关系

目的观察不同机械通气潮气量对大鼠肺细胞凋亡的影响,探讨细胞凋亡在机械通气所致肺损伤中的作用机制及意义。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分成A、B、C三组,分别给予不同潮气量（VT）：A组7ml／kg,B组20ml／kg,C组40ml／kg,各组大鼠通气时间均为4h。凋亡细胞的检测使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术（TUNEL）,用免疫组织化学技术检测肺组织核转录因子-κB（NF—κB）的表达;观察各组肺组织的病理改变,用湿／干重比值来比较肺水肿的程度。结果A、B、C三组大鼠肺组织病理改变依次加重,肺湿／干重比值依次增加,肺组织凋亡细胞逐渐增加,NF—κB的表达也逐渐增强。结论三组大鼠肺组织病理改变、细胞凋亡及NF—κB的表达一致,细胞凋亡在大潮气量机械通气所致肺损伤中起重要作用。     

机械通气对重症监护病房患者睡眠影响的研究

目的 探讨机械通气对重症监护病房(ICU)患者睡眠时间及睡眠分裂的影响.方法 选择ICU的术后患者50例,分为5组,每组10例.对照组(C组),自主呼吸无镇静;T_0组,气管插管自主呼吸,无镇静;T_s组,低剂量镇静下气管插管自主呼吸;T_(m1)组,低剂量镇静下气管插管机械通气;T_(m2)组,高剂量镇静下气管插管机械通气.镇静药物为咪达唑仑.应用多导睡眠仪监测患者自22:00至次日6:00的睡眠时间及睡眠分裂.结果 与C组比较,T_0、T_(m1)T_(m2)组的睡眠时间显著缩短,T_0和T_(m1)组的睡眠效率显著降低(P值分别<0.01、0.05).T_0组患者的睡眠时间为(171±85)min,较T_s组的(296±87)min显著缩短(P<0.01);睡眠唤醒、觉醒次数为(35±15)次/h,较T_s组的(13±5)次/h显著增多(P<0.01).而T_s组的睡眠时间较T_(m1)组的(165±68)min显著延长(P<0.01),与T_(m2)组(245±86)min的差异无统计学意义(P>0.05);睡眠唤醒、觉醒次数较T_(m1)组的(31±14)次/h显著减少(P<0.01).结论 机械通气患者的睡眠时间缩短.睡眠分裂加重,高剂量镇静可延长其睡眠时间,减少睡眠分裂.     

机械通气患者的观察与护理

机械通气是临床上治疗呼吸衰竭患者的有效方法,本文针对患者在机械通气治疗中的临床观察和各项护理策略进行了探讨,以达到提高治疗效果的目的。