碱性成纤维细胞生长因子转染兔关节软骨细胞的研究

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)基因转染兔关节软骨细胞后对培养的关节软骨细胞形态、分裂增殖及代谢等方面的影响。方法　将bFGF基因克隆于真核表达载体pHβ。AP 1中 ,构建重组真核表达载体 pHβ bFGF ,转染兔关节软骨细胞。G418筛选阳性克隆 ,检测阳性细胞bFGF基因的表达水平。测定培养软骨细胞的DNA含量、糖醛酸含量、软骨细胞增殖情况及进行细胞周期分析。结果　bFGF基因转染软骨细胞表型未见显著变化 ;bFGF基因转染组、载体对照组、空白对照组DNA含量分别为 ( 77.37± 6 .2 1)、( 40 .39± 4.33)、( 33 .77± 4.2 5 ) μg/瓶 (P <0 .0 1) ,糖醛酸含量分别为 ( 30 8.8± 10 .2 )、( 77.9± 8.7)、( 80 .2± 10 .5 ) μg/瓶 ( P <0 .0 1) ,软骨细胞G1期分别为 5 9.3± 2 .1、6 9.5± 4.0、73 .1± 3 .9(P <0 .0 5 )。结论　bFGF转染关节软骨细胞后 ,可显著促进细胞分裂增殖并缩短细胞周期 ,为软骨组织工程研究提供新的技术路线及理论基础。     

应用碱性成纤维细胞生长因子体外扩增猪耳软骨细胞老化的规律

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外扩增软骨细胞的老化规律。方法细胞取自猪耳弹性软骨,实验分两组:培养液含10μg/L b-FCF组(简称bFGF组),培养液无bF- GF组(简称对照组),分别收集两组多代细胞,按5×107个/ml浓度与30%Pluronic F-127/Ham’s F-12混合,按每一样本0.5 ml注射到猪自体皮下,8周后取材,从大体观察、称重及组织学染色,对再生的软骨组织进行评价。结果bFGF组和对照组从第3代开始均未能形成软骨组织,bFGF组第2代软骨细胞和原代比较,在两周内扩增70倍,是对照组的12.7倍,且体内能形成很好的软骨。结论应用bFGF体外扩增的软骨细胞在第3代开始老化,失去成软骨能力,种子细胞应取第2代,可兼顾适量细胞数与具备成软骨能力。     

卵磷脂,多聚赖氨酸和PLA包埋PGA与软骨细胞体外培养的实验研究

组织工程技术中细胞培养支架的选择是研究的焦点之一，以ＰＬＡ包埋的ＰＧＡ无纺网是应用较为广泛的支架之一。但其亲水性差，对细胞吸附力弱，是其不足之处，此实验选择了卵巢脂和多聚赖氨酸来分别和共同包埋ＰＧＡ＋ＰＬＡ，来观察其亲水性和对细胞吸附力的改变，及对细胞功能的影响，本实验证明卵磷脂具有增强支架亲水性作用，而多聚氨酸除具有增加支架对细胞的吸附力强，还具有促进细胞功能的作用。以卵磷脂和多聚赖氨酸共同包埋     

包埋后的聚羟基乙酸与软骨细胞体外培养实验研究

目的:通过卵磷脂和多聚赖氨酸分别和共同包埋以聚乳酸固定成形的聚羟基乙酸支架与软骨细胞体外培养,来观察其亲水性和对细胞吸附力的改变以及对细胞功能的影响。方法:将软骨细胞种于上述支架体外培养,通过倒置显微镜及扫描电镜观察支架的亲水性、对细胞的吸附力及基质产生情况。结果:支架以卵磷脂包埋后细胞悬液易浸入到支架内;以多聚赖氨酸包埋后细胞易吸附在支架纤维表面;以卵磷脂和多聚赖氨酸共同包埋后细胞均匀分布于支架纤维之间及吸附在支架纤维表面,且基质产生旺盛。结论:卵磷脂具有增强支架亲水性作用;而多聚赖氨酸除增加支架对细胞的吸附力外,还具有促进细胞功能的作用。以卵磷脂和多聚赖氨酸共同包埋支架可能是组织工程技术中较理想的支架之一。     

不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对体外培养兔肌腱细胞增殖的影响

目的探讨不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养兔肌腱细胞增殖的影响,并确定促进肌腱细胞增殖的最佳浓度。方法在体外培养第2代兔肌腱细胞的培养液中分别加入不同浓度(0.5、1、2、5、10、20、30、40、50μg/L)的bFGF,继续培养48 h,噻唑蓝(MTT)法染色,在酶联免疫检测仪上测出不同浓度bFGF组光密度(OD)值。结果与对照组OD均值相比:5、10、20、30、40、50μg/L bFGF组差异均有统计学意义(P<0.05);各组OD均值随bFGF浓度的增加,先逐渐增大(5～20μg/L),达到峰值后又逐渐降低(20～50μg/L)。结论 bFGF有明显促肌腱细胞增殖的作用,且与浓度有一定相关性,即促肌腱细胞增殖的起始bFGF浓度为5μg/L,而20μg/L时可达到促肌腱细胞增殖的最佳浓度。     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞中转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响

目的　探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对体外成骨细胞中的生长因子 :转化生长因子 β1 (TGF β1 )和bFGFmRNA表达的影响。 方法　将体外培养的新生SD大鼠颅骨成骨细胞 ,用不同浓度的bFGF(5～ 50 μg/L)进行处理 ,利用核酸原位分子杂交 ,检测两种生长因子在细胞中mRNA的表达。结果　依bFGF浓度的增加成骨细胞内TGF β1mRNA表达分别是对照组的 1 .5、1 .6、1 .9和 2 .0倍 ;bFGFmRNA表达则分别是对照组的 1 .2 8、1 .37、1 .40和 1 .51倍。bFGF组中 ,TGF β1和bFGFmRNA的表达量均明显高于对照组 (P <0 .0 1 )。结论　外源性bFGF可以对成骨细胞自分泌bGFG产生影响 ,还能够促进TGF β1的合成     

碱性成纤维细胞生长因子转染对半月板纤维软骨细胞增殖、细胞周期及胶原合成影响的研究

目的探索携带碱性成纤维细胞生长因子(bas ic fibrob last grow th factor,bFGF)基因的重组慢病毒载体转染半月板纤维软骨细胞的效能,观察半月板纤维软骨细胞对bFGF基因转染的反应。方法将从1只3月龄新西兰大白兔分离培养的第1代半月板纤维软骨细胞分为实验组(A组)、对照组(B组)和空白组(C组),3组细胞分别以2×104个/孔接种于24孔培养板。细胞生长至60%融合时,A组与克隆有bFGF基因的重组慢病毒载体悬液共培养,B组与不携带任何基因的慢病毒悬液共培养,C组未接受外加处理。共培养48 h后检测3组的细胞周期、胶原合成能力、培养液中bFGF的表达及不同时间各组细胞的细胞增殖能力的变化。结果共培养48 h后在A组测出bFGF浓度为870±60 pg/m l,而B、C组培养液中未能检测出bFGF的表达;共培养6 d后,M TT法检测,A组吸光度(A)值0.427±0.037与B组0.320±0.042和C组0.308±0.034比较差异有统计学意义(P<0.01)。A组细胞周期较B、C组缩短,A组细胞G1期,S期和G2/M期的时间分别为16.28、12.60和11.04 h;而B、C组分别为23.61、16.90和21.33 h及21.56、19.80和21.41 h;A组与B、C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。A组细胞每分衰变数(7 281.69±805.50)高于B组(5 916.40±698.11)和C组(5 883.57±922.63),比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论借助慢病毒载体能有效实现bFGF基因在半月板纤维软骨细胞的转染;bFGF基因转染能促进半月板纤维软骨细胞的增殖和胶原合成能力。     

成纤维细胞生长因子对兔关节软骨损伤的修复作用

目的：观察成纤维细胞生长因子对兔关节软骨组织损伤的修复作用。方法：于６例兔股骨外侧髁最高点膝关节面处钻孔,在术中及术后将ＦＧＦ注射入钻孔的膝关节腔,每只动物对侧作自身对照,注射生理盐水或不予处理。１月后作大体及病理组织学观察。结果：实验组关节面钻孔部位５例已封闭,较平整光滑;而对照组４例关节面未完全封闭,粗糙,凹凸不平;２例已封闭,但不平整。光镜下实验组关节软骨钻孔部位有明显的软骨性修复。结论：成纤维细胞生长因子能促进兔关节软骨损伤的修复     

卵磷脂、多聚赖氨酸和PLA包埋PGA与软骨细胞体外培养的实验研究

组织工程技术中细胞培养支架的选择是研究的焦点之一。以ＰＬＡ包埋的ＰＧＡ无纺网是应用较为广泛的支架之一。但其亲水性差，对细胞吸附力弱，是其不足之处。此实验选择了卵磷脂和多聚赖氨酸来分别和共同包埋ＰＧＡ＋ＰＬＡ，来观察其亲水性和对细胞吸附力的改变，及对细胞功能的影响。本实验证明卵磷脂具有增强支架亲水性作用；而多聚赖氨酸除具有增加支架对细胞的吸附力外，还具有促进细胞功能的作用。以卵磷脂和多聚赖氨酸共同包埋支架使细胞均匀地分布于支架纤维之间和支架表面，充分利用了支架空间，从而更好地发挥细胞的功能。所以本实验将为组织工程技术中细胞培养支架的选择提供一条新的途径。     

碱性成纤维细胞生长因子与膀胱肿瘤的研究进展

碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)是由肿瘤细胞或肿瘤浸润的炎症细胞分泌，能够刺激成纤维细胞的有丝分裂，同时诱导血管的生成，存在两种不同的机制。bFGF,bFGF受体，bFGF mRNA均在膀胱肿瘤组织里表达，也能够在膀胱肿瘤患者血和尿中测到，与bFGF相关的治疗目前尚在探讨之中。     

兔胚胎关节软骨细胞体外培养的研究

目的 探讨兔胚胎软骨细胞体外培养的生物学特性。方法 对孕4周兔胚胎关节软骨用酶消化法分离培养细胞。观察细胞存活率、贴壁率、生长曲线和组织形态学改变。结果 兔胚胎软骨细胞可从胚胎软骨组织中消化分离出来，经鉴定具有软骨细胞的特性。原代兔胚软骨细胞存活率达97％以上，细胞贴壁率达80％以上，从原代到第4代都有高增殖力，到第8代时增殖力降低。到第12代时几乎丧失细胞增殖。结论 体外培养的胚胎软骨细胞前4代适合于作修复关节软骨缺损的组织工程细胞。     

真皮多能干细胞复合聚乳酸支架修复关节软骨全层缺损的实验研究

[目的]探讨真皮多能干细胞在软骨缺损修复中的可行性,为扩大软骨缺损修复中种子细胞的选择提供实验依据.[方法]以新生青紫蓝兔为研究对象,机械法直接分离得到真皮组织,采用酶消化法获取细胞,利用干细胞贴壁粘附生长的特性获取高克隆细胞群,并进行传代培养.使细胞浓度达到1×106/ml与聚乳酸支架材料共培养一周后植入兔膝关节软骨全层缺损处,用3～5个月龄青紫蓝兔30只,60个关节,随机分为真皮多能干细胞/聚乳酸支架材料、聚乳酸支架材料、空白对照三组,每组20个关节,于术后12周空气栓塞处死实验兔,对修复组织进行取材,行HE、甲苯胺蓝染色,根据软骨缺损修复情况进行大体、组织学评分,并进行统计学分析,比较各组的评分差异是否具有统计学意义.[结果]大体及组织学观察显示,真皮干细胞/支架材料实验组修复组织表面光滑、呈透明样,与周围软骨及软骨下骨整合良好,而聚乳酸支架材料组有少许透明样软骨,主要以纤维软骨修复,空白对照组则表面有缺损,以纤维软骨修复.大体及组织学观察后进行统计学评分分析,显示A组修复效果最优、优于B、C组(P＜0.05),B组优于C组(P＜0.05)[结论]真皮多能干细胞修复关节软骨缺损效果明显,恢复正常关节软骨结构,可作为组织工程化软骨种子细胞之一.     

联合应用bFGF和ATP对体外培养乳鼠脊髓神经元的影响

目的研究联合使用碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和三磷酸腺苷(adenosinetri2phosphate,ATP)对体外培养的乳鼠脊髓神经元的作用。方法将不同的干预物加入培养基,分为bFGF组,ATP组,ATP bFGF组以及单纯对照组。相差倒置显微镜观察细胞生长情况,计数绘制细胞生长曲线,并测量细胞突起的长度;用MTT法测定培养细胞的存活率。结果(1)细胞突起长度:实验各组神经元轴突的长度均长于对照组(P<0.01)。接种48h和96h后,ATP bFGF组细胞突起长度明显长于ATP组(t=6.576、7.032,P<0.01);ATP bFGF组与bFGF组相比无差异(t=2.543、3.195,P>0.05);bFGF组细胞突起长度明显长于ATP组(t=6.245、8.026,P<0.01)。(2)比较MTT值:实验各组的灰度均明显大于对照组(P<0.01)。ATP bFGF组的灰度明显大于ATP组(t=6.053,P<0.01)。ATP bFGF组的灰度明显大于bFGF组(t=4.971,P<0.01)。bFGF组与ATP组相比无差异(P>0.05)。结论ATP、bFGF对于体外培养的脊髓神经元的存活均有较强的维持作用,并能促进轴突生长;两者联合使用作用明显增强。     

nHA-PLGA支架材料与兔软骨细胞体外培养的生物相容性研究

目的 研究新型多孔复合支架材料纳米羟基磷灰石(nHA)-聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)的生物相容性,探讨其作为骨组织工程支架的可行性.方法 将胎兔膝关节软骨细胞接种于制备的nHA-PLGA复合支架上,体外共同培养后采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测软骨细胞增殖活性,倒置荧光显微镜、扫描电镜观察支架材料表面和孔隙内软骨细胞黏附情况,流式细胞术检测软骨细胞周期情况.结果 实验组(A组)复合支架材料上细胞增殖活性与空白对照组(B组)相比,无统计学差异(P＞0.05);倒置荧光镜、扫描电镜观察显示A组细胞在复合支架材料表面和孔隙内大量黏附、生长,其数量随着共培养时间增加呈几何级增长;流式细胞仪检测显示A组与B组细胞周期差异无统计学意义(P＞0.05).结论 nHA-PLGA多孔复合支架生物相容性好,是一种性能良好的骨组织工程支架材料.     

不同代数软骨细胞及其在支架上的生物学特性

目的 观察不同代数软骨细胞及其在支架上的生物学特性，为软骨组织工程提供理想的种子细胞，方法 将2周齿的新西兰大白兔软骨细胞置盖玻片上进行原代和传代培养，同时，把相应代数的软骨细胞种植于明胶海绵上，应用倒置显微镜和电镜观察不同代数细胞形态学变化和增殖能力。以及不同代数软骨细胞种植于支架后的生长和黏附情况，应用HE染色鉴别及免疫组化观察Ⅱ型胶原的分泌情况。结果 （1）软骨细胞在体外单层培养，传5代后细胞形态由多角形变成梭形，逐渐丧失表型。（2）第4代软骨细胞在单层培养时，增殖能力最强，分泌功能旺盛。（3）传代细胞贴壁时间短于原代。（4）第4代软骨细胞种植于支架上形成软骨细胞-支架复合体所需的时间最短，软骨细胞于海绵支架上的黏附最紧密。结论 软骨细胞在体外培养第4代左右可以作为组织工程的最佳种子细胞，其形成的软骨细胞-支架复合体的质量最佳，时间最短。     

包埋后的几丁质与软骨细胞体外培养的实验研究

目的 探讨几丁质作为组织工程技术中细胞培养支架的可行性。方法 采用聚乳酸、卵磷脂及多聚赖氨酸分别或工同包埋几丁质与软骨细胞体外培养,观察其产亲水性的改变、对细胞吸附力和细胞功能的影响。结果 以聚乳酸包埋的几丁质对细胞的生长有抵制作用;以卵磷脂包埋的几柄质亲水性增强;以多聚赖氨酸包埋的几丁质对细胞吸附力增强;以卵磷脂和多聚赖氨酸共同包埋的几丁质具有良好的亲水性和对细胞吸附力,并可使细胞更好地发挥功能     

生物可降解性聚乳酸管套接不同长度神经缺损的实验研究

目的探讨套接周围神经缺损的最佳特异性再生间隙长度。方法50只大鼠平分5组,采用聚乳酸管套接双侧股神经,各组间隙为0mm、2mm、5mm、8mm和12mm。12周后,采用HRP逆行示踪,组内一侧股四头肌支和对侧隐神经支之间比较标记的运动神经元或感觉神经元数量。再生神经作光镜、电镜切片。结果5mm和2mm组中运动支标记的运动神经元和感觉支标记的感觉神经元数量最大,切片显示神经再生良好。结论聚乳酸管套接股神经缺损存在运动、感觉纤维特异性再生现象,其有效间隙长度为2～5mm,以5mm长度为优。     

Options for preventing postlaminectomy adhesion：a comparative study in rabbit model

OBJECTIVE: To compare the various methods for prevention of peridural adhesion. METHODS: Laminectomy was performed in lumbar 1, 3 and 5 segments in 30 adult rabbits that were divided into 5 groups. A 10 mmx5 mm dura was exposed, and then covered with autogenou purifieds pearl fat (APPF) mixed with basic fibroblast growth factor (bFGF) in Group A, with APPF treated with insulin in Group B, with APPF in Group C, with 2% sodium hyaluronate (SHA) in Group D, and uncovered in Group E. The slide sections for histological study were observed at 2, 4, 6, 8 and 12 weeks postoperatively. The specimens were observed with a computed imaging analysis system at 4 and 8 weeks postoperatively. RESULTS: Severe peridural adhesions were formed in Groups B, C, D and E after laminectomy. But no adhesion was formed in the Group A at all time points. bFGF could stimulate pearl fat revascularization, increase the number of newly formed vessels and contribute to the survival of pearl fat. However, insulin had no certain effect in preventing degradation and deterioration of pearl fat. SHA had some effect in prevention of peridural adhesions only in the early stage, which was weakened with the lapse of time. CONCLUSIONS: APPF implantation mixed with bFGF provides a potential new approach to improving fat survival and preventing peridural adhesion postlaminectomy.     

PDGF—A及bFGF表达与移植血管平滑肌细胞增殖的关系

目的 探讨血小板源性生长因子－Ａ（ＰＤＧＦ－Ａ）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）与移植血管平滑肌细胞增殖的关系。方法 建立３２例大鼠自体列脉移植模型,分别于术后６小时、４８小时、１周、２周、４周切取移植静脉,应用免疫组织化学动态观察不同时期移植血管ＰＤＧＦ－Ａ及ｂＦＧＦ表达情况。结果 ＰＤＧＦ－Ａ的在时间上与血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖活性的变化是相对平行的：均于术后逐渐增加,于１周达高峰,与