丁酸钠对胃癌细胞株AGS增殖分化的影响及其机制

背景与目的:研究表明丁酸钠能够抑制多种肿瘤细胞增殖,诱导其分化。本实验研究丁酸钠对人胃癌细胞AGS增殖和分化的影响及其可能的作用机制。方法:用不同浓度(0～4.0mmol/L)的丁酸钠分别对AGS细胞进行处理,应用MTT法检测细胞的增殖率,光学显微镜和电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期分布,RT-PCR和Westernblot检测细胞周期蛋白激酶抑制剂P21表达的变化。结果:不同浓度丁酸钠处理AGS细胞24～72h后,细胞增殖受到显著抑制,抑制率最高达81.54%;细胞超微结构发生明显改变;S期细胞明显减少,G1期细胞比例逐渐增多,并伴有DNA倍体的改变;p21 mRNA及蛋白水平表达显著上调。且随着时间、浓度增加,这些效应均有增强趋势。结论:丁酸钠可能通过上调细胞周期蛋白激酶抑制剂P21的表达,将细胞周期阻滞于G1期,从而显著抑制AGS细胞的增殖,并在一定程度上逆转其恶性表型。     

NO对胃癌细胞系AGS增殖的影响

背景与目的:一氧化氮(nitric oxide,NO)参与机体内的多种生理和病理反应,它作为重要的生物介质在肿瘤发生、发展和死亡中的作用已成为肿瘤研究的热点.本实验通过研究NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对胃癌细胞系AGS的作用,探讨NO对胃癌细胞生长增殖的影响.方法:应用MTT法评价SNP对细胞生长的抑制,流式细胞术检测细胞周期的变化,RT-PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase-3的mBNA基因表达,Western biot检测PCNA和caspase-3蛋自的表达.结果:SNP可剂量依赖性地抑制AGS细胞的生长,100、500、1 000、1 500、2 000 μmol/L SNP处理24 h,细胞生长抑制率分别为(2.02±2.96)%、(10.82±2.21)%、(18.95±3.35)%、(26.88 ±2.54)%、(42.57±1.27)%;SNP可以使细胞周期发生变化,与对照组比较100、500、1 000、1 500、2 000 μmol/LSNP处理24 h,S期细胞分别减少2.29%、7.8%、11.34%、20.49%、23.6%.G_0/G_1期细胞分别增加3.33%、9.3%、13.46%、21.37%、24.73%(P<0.05):随着SNP剂量增加和作用时间延长,PCNA mRNA和蛋白表达逐渐降低;caspase-3 mRNA表达无改变,但caspase-3酶原被裂解活化.结论:NO能抑制AGS细胞的生长和增殖,诱导细胞的凋亡,其作用呈显著的浓度依赖性.     

EGFR表达抑制对胃癌AGS细胞生物学行为及化疗敏感性的影响

目的:观察表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor,EGFR）表达抑制对胃癌AGS细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡、细胞周期及化疗药物敏感性的影响。方法:设计3条EGFR-siRNA,转染胃癌AGS细胞,CCK-8方法测定细胞增殖,Transwell方法检测细胞侵袭和转移能力,流式细胞术测定细胞凋亡与周期,RT-PCR方法检测EGFR mRNA表达,Western blot方法检测EGFR、ERK、p-ERK、AKT和p-AKT蛋白表达。结果:EGFR干扰能有效抑制胃癌AGS细胞中EGFR的基因和蛋白表达水平（P＜0.05）。与对照组、阴性siRNA转染组相比,EGFR-siRNA转染组AGS细胞增殖抑制显著增加,迁移、侵袭能力显著下降,细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）,对顺铂、多柔比星、紫杉醇的化疗敏感性显著增加（P＜0.05）。EGFR表达抑制后,处于S期的细胞比例明显减少,G2/M期细胞比例明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。EGFR表达抑制后,AKT和p-AKT表达下调。结论:抑制EGFR表达可抑制胃癌AGS细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力,增加细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的化疗敏感性,其机制可能与AKT、p-AKT的表达下降有关。     

Neuropilin-1的干扰RNA对胃癌细胞株AGS生物学行为的影响

目的:探讨神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人胃腺癌细胞株AGS某些生物学行为的影响.方法:通过脂质体lip-2000分别将NRP-1特异性siRNA、control siRNA转染入人胃腺癌AGS细胞株作为转染组、无意义序列组,加入PBS的细胞作为空白对照组,采用MTT法检测三组细胞24h、48h、72h的增殖情况;Transwell小室侵袭和迁徙实验检测细胞的迁徙和侵袭能力.结果:转染后,转染组细胞的增殖能力在24h、48h和72h与对照组相比,均显著下降(P=0.00).小室迁徙及侵袭实验表明:与对照组相比,转染组的胃癌AGS细胞迁徙能力显著下降,差异具有统计学意义(P＜0.05).转染组的胃癌AGS细胞侵袭能力显著下降,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:Neuropilin-1的siRNA能够明显影响人胃癌细胞株AGS的某些生物学行为.     

miRNA-141对胃癌细胞生长的抑制调节作用

目的:研究miRNA-141在胃癌细胞中的生物学功能。方法:定量PCR检测人胃黏膜细胞GES-1,胃癌细胞株BGC823、MGC803、SGC7901中miRNA-141的表达,通过miRNA-141 inhibitor、mimics分别抑制及促进miRNA-141的表达,观察癌细胞增殖、克隆形成、侵袭能力的变化。结果:胃癌细胞BGC823、MGC803、SGC7901中miRNA-141处于低表达状态。上调miRNA-141的表达后,miRNA-141明显抑制SGC7901细胞增殖（P<0.05）,抑制肿瘤细胞克隆形成（P<0.05）及癌细胞侵袭力（P<0.05）。结论:miRNA－141对胃癌细胞SGC7901具有负性调控作用,可以作为潜在的治疗靶点。     

榄香烯乳联合顺铂抑制胃癌AGS细胞生长的实验研究

目的：研究榄香烯乳（elemene）单独或联合顺铂（cisplatin）对人胃癌AGS细胞增殖和周期的影响,并探讨两药是否有协同作用及其可能的分子机制。方法：榄香烯乳单独或联合顺铂作用人胃癌AGS细胞。MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;BrdU掺入标记增殖的AGS细胞,免疫荧光细胞染色法测定增殖细胞数;Western印迹检测细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的表达。结果：榄香烯乳（10-160μg/ml）对AGS细胞生长的抑制作用呈现浓度和时间依赖性,与对照组比较,除10μg/ml作用12h外,其它各组差异均有统计学意义（P〈0.05）。细胞周期中DNA合成前期（G0/G1期）细胞比例增加,DNA合成期（S期）细胞比例下降。榄香烯乳作用AGS细胞后,降低BrdU的渗入率,减少cyclinD1的表达。榄香烯乳（80μg/ml）联合顺铂（4μg/ml）对细胞增殖和周期的抑制明显强于单独用药（P〈0.05）。结论：榄香烯乳可抑制人胃癌AGS细胞的增殖并阻滞细胞于G0/G1期,与顺铂联合具有协同作用,其机理可能与降低cyclinD1的表达有关。     

榄香烯乳联合顺铂抑制胃癌AGS细胞生长的实验研究

目的 研究榄香烯乳(elemene)单独或联合顺铂(cisplatin)对人胃癌AGS细胞增殖和周期的影响,并探讨两药是否有协同作用及其可能的分子机制.方法 榄香烯乳单独或联合顺铂作用人胃癌AGS细胞.MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;BrdU掺入标记增殖的AGS细胞,免疫荧光细胞染色法测定增殖细胞数;Western印迹检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表达.结果 榄香烯乳(10-160μg/ml)对AGS细胞生长的抑制作用呈现浓度和时间依赖性,与对照组比较,除10μg/ml作用12h外,其它各组差异均有统计学意义(P<0.05).细胞周期中DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例增加,DNA合成期(S期)细胞比例下降.榄香烯乳作用AGS细胞后,降低BrdU的渗入率,减少cyclinD1的表达.榄香烯乳(80μg/ml)联合顺铂(4μg/ml)对细胞增殖和周期的抑制明显强于单独用药(P<0.05).结论 榄香烯乳可抑制人胃癌AGS细胞的增殖并阻滞细胞于G0/G1期,与顺铂联合具有协同作用,其机理可能与降低cyclinD1的表达有关.     

KLK7 siRNA对胃癌AGS细胞的抑制作用

目的： 体外合成4条靶向人组织激肽释放酶7（kallikrein-related peptidase 7, KLK7 ）基因的片段,并筛选最有效siRNA片段,观察沉默 KLK7 表达对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响。 方法： 设计4条靶向 KLK7 的siRNA片段（KLK7-siRNA-416、KLK7-siRNA-596、KLK7-siRNA-474、KLK7-siRNA-795）,瞬时转染AGS细胞,qRT-PCR检测各干扰组 KLK7 mRNA表达的变化,Western blotting检测AGS细胞中HK7蛋白（由 KLK7 基因编码）的表达,MTT法检测转染后AGS细胞的增殖,流式细胞术检测AGS细胞的细胞周期及凋亡。 结果： 4条KLK7-siRNA片段中以KLK7-siRNA-416的干扰效率最高,KLK7-siRNA-416组 KLK7 mRNA表达率显著低于NC组\[(0.32±0.049）% vs (0.93±0.071)%, P<0.01\],KLK7-siRNA-416组转染48 h后AGS细胞HK7蛋白的表达水平显著降低\[（1.18±0.198） vs（0.52±0.096）,P<0.01\]。KLK7-siRNA-416转染72 h后对AGS细胞增殖的抑制率达（37.70±0.12）%（P<0.05）,该转染阻滞AGS细胞于G0/G1期但不影响AGS细胞的凋亡。 结论： KLK7-siRNA沉默 KLK7 的表达可抑制AGS细胞的增殖,可阻滞细胞于G0/G1期,对细胞凋亡的作用不明显。     

沉默dnmt1基因对胃癌细胞株AGS细胞周期、增殖及凋亡的影响

背景与目的:DNA甲基转移酶1(DNAmethyltransferase1,dnmt1)基因在多种肿瘤细胞中表达量相当高,而在正常成人细胞中则低表达,因此dnmt1基因的高表达与肿瘤的发生有密切的关系。本研究观察以dnmt1基因为靶基因的重组质粒对胃癌细胞株AGS细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法:设计短发夹状RNA(shorthairpinRNA,shRNA)的寡核苷酸片段,再克隆至载体pTZU6 1中构建重组体pshRNA-dnmt1,转染胃癌细胞株AGS。实验分为空白对照组(仅予脂质体)、pTZU6 1组(予空质粒pTZU6 1)和pshRNA-dnmt1组(予以重组质粒pshRNA-dnmt1)3组。Westernblot检测dnmt1蛋白水平变化;RT-PCR法评估mRNA水平;流式细胞技术分析细胞周期的变化;MTT法检测细胞生长情况;吖啶橙/溴乙锭双染色(AO/EB)法、电镜和TUNEL观察细胞凋亡情况。结果:成功构建重组质粒pshRNA-dnmt1,并经序列分析得到确认。pshRNA-dnmt1转染AGS细胞后24h出现dnmt1蛋白表达量减少,24、48、72h抑制率分别为28.24%、68.54%、81.47%。转染pshRNA-dnmt1后24、48、72h对AGS细胞中dnmt1mRNA的抑制率分别为21.63%、52.97%、72.06%。转染后72hS期细胞由空白对照组的(36.58±1.76)%降至pshRNA-dnmt1组的(18.54±6.59)%;G2/M期细胞由空白对照组的(6.18±0.32)%升至pshRNA-dnmt1组的(18.53±1.42)%,均有显著性差异(P<0.05)。转染后24、48、72h细胞存活率分别为79.49%、51.63%和39.16%。AO/EB法、电镜和TUNEL均可见大量典型的凋亡和坏死细胞。结论:重组质粒pshRNA-dnmt1能特异有效地抑制AGS细胞内dnmt1的表达、抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,为肿瘤的基因治疗提供依据。     

姜黄素对膀胱癌细胞的p300 表达的影响

 目的 了解姜黄素对p300表达的影响，探讨其抗膀胱癌的机制。方法 用不同浓度的姜黄素作用膀胱癌细胞T24，MTT检测细胞增殖抑制率，RT-PCR法检测p300、c-fos、c-jun-的mRNA表达，蛋白免疫印迹法检测乙酰化组蛋白H3、H4、c-fos、叫un、p300蛋白表达。结果 姜黄素能抑制T24细胞增殖，且具有量效关系和时效关系。姜黄素能抑制p300、c-fos、叫unmRNA和蛋白的表达，抑制组蛋白H3、H4的乙酰化，也具有量效关系。结论 姜黄素可以抑制p300的表达，此可能是姜黄素抗膀胱癌的机制之一。     

癌基因c-fos和c-jun与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性研究

 引言肺癌是常见的恶性肿瘤,其发病机制和早期诊断一直困扰着临床医师。c fos和c jun蛋白是核内癌基因产物,参与多个基因的转录调节,控制着细胞的增殖和分化。本文旨在通过研究c fos和c jun与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性来探讨它们在非小细胞肺癌发生、发展中的意义。1　资料与方法1.1　临床资料　收集武汉大学人民医院2 0 0 3年1月～2 0 0 3年4月肺癌根治术切除的标本5 2例,其中男性2 9例,女性2 3例,中位年龄5 2岁(36～70岁)。采取1997年国际抗癌联盟肺癌病理分期标准,Ⅰ期14例,Ⅱ期7例,Ⅲ期2 8例,Ⅳ期3例;鳞癌2 7例,腺癌2 3例,大细胞癌2例。每例标本取癌组织及癌旁正常组织(距肿瘤边缘>5cm) ,所有标本均经病理证实。1.2　研究方法1.2 .1　固定化蛋白质印迹法　应用RIPA组织裂解液分别裂解肺癌与正常肺组织,提取组织总蛋白;蛋白定量试剂盒测定组织提取液的蛋白浓度。每例标本取蛋白5 0微克电泳,经10 %聚丙烯凝胶电泳分离后电转移至PVDF膜上,封闭后,加一抗(兔抗人c fos及c jun多克隆抗体) ,二抗(辣根过氧化物酶结合羊抗兔多克隆抗体)进行杂交...     

Effect of First Line Gastric Cancer Chemotherapy Regime on the AGS Cell Line - MTT Assay Results

Background: Combination chemotherapy regimes are common treatments for cancer. The aim of this study was to evaluation the effect of individual chemotherapeutic agents in comparison with a first line chemotherapy regime treatment in the AGS gastric cancer cell line by MTT assay. Materials and Methods: In this experimental study, AGS cells were grown in RPMI-1640 supplemented with 10% fetal calf serum and 100 IU/ml penicillin, and 10 μg/ml streptomycinin, under a humidified condition at 37°C with 5% CO2. All cells were washed with PBS and detached with trypsin, centrifuged and 8000 cells re-plated on to 96- well plates. LD50 doses of Epirubicin, Cisplatin and 5-fluorouracil were added to each well in mono or triple therapy. Anti-proliferative activities were determined by MTT assay after 24, 48 or 72 h. Results: Results of MTT assays showed that there were no significant differences among 3 drugs in monotherapy (p=0.088), but there was significant difference between combination therapy with epirubicin (P=0.031) and 5FU (p=0.013) on cell survival at 24 h. After 48 and 72 hours, cell viability showed significant differences between the 3 drugs (p=0.048 and P=0.000 for 48 and 72 h, respectively) and there was significant difference between combination therapy with epirubicin (P=0.035 and P=0.002 for 48 and 72 h, respectively). Conclusions: The results showed no significant differences between these chemotherapy drugs each given alone, but combination therapy with 3 drugs had significant effects on cell viability in comparison with epirubicin alone.     

一氧化氮对胃癌细胞系BGC-823增殖的影响

目的通过研究一氧化氮(nitricoxide，NO)供体硝普钠(sodium nitroprusside，SNP)对胃癌细胞系BGC823的作用,探讨NO对胃癌细胞生长增殖过程的影响.方法应用光学显微镜和透射电子显微镜进行形态观察,四氮唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium     

rmhTNF-α对胃癌细胞系MKN45的生物学效应及其机制研究

摘 要：［目的］ 研究rmhTNF对胃癌细胞系MKN45的生物学效应及其机制。［方法］ 采用不同浓度（50、100、200IU/ml）重组改构人肿瘤坏死因子（rmhTNF）处理胃癌细胞MKN45,增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)观察其细胞增殖抑制率;实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测MKN45细胞p53异构体Δ133p53、STAT1及 STAT3 mRNA的表达变化。［结果］ CCK-8结果显示,随 rmhTNF 作用浓度增高（50、100、200IU/ml）,MKN45 细胞抑制率分别为17.133%,24.800%和31.733%,差异有统计学意义（F=16.246,P<0.01）。RT-PCR结果显示,随 rmhTNF 浓度增高,MKN45 细胞STAT1 mRNA表达上升（F=164.290,P<0.001）,STAT3、Δ133p53 mRNA表达下降（F=29.921,F=24.243;P均<0.001）。Pearson 相关性分析结果显示,Δ133p53 与STAT1表达呈负相关（r=-0.951,P<0.01）,与STAT3表达呈正相关（r=0.840,P<0.01）。［结论］MKN45细胞中,Δ133p53是STAT1、STAT3调控肿瘤细胞的共同靶基因,STAT1、STAT3-Δ133p53-p53通路可能是rmhTNF抑制胃癌细胞MKN45的机制。     

MTT法研究化疗药对人胃癌细胞株（SGC-7901）的抑制作用

[目的]研究化疗药物顺铂（DDP）、长春新碱（VCR）、吉西他滨（GEM）、奈达铂（NDP）、奥沙利铂（L-OHP）、氟尿嘧啶（5-Fu）、丝裂霉素（MMC）对人胃癌细胞株（SGC．7901）抑制率及化疗药物浓度和作用时间对细胞抑制率的影响。[方法]采用M1Tr测定法观察DDP、VCR、GEM、NDP、L-OHP、5-Fu和MMC不同浓度及作用时间对SGC-7901细胞株的抑制作用。化疗药物浓度参照其在人体血浆峰值浓度（plasma peak concentration，PPC）的0．001～1倍范围，作用时间选择24h、48h、72h。[结果]SGC．7901细胞株对不同化疗药物的敏感性存在差异，对DDP、L-OHP、MMC、NDP、5-Fu敏感，最大抑制率分别为99．5％、100％、100％、100％和97．5％；对GEM次之，最大抑制率为67．6％；对VCR不敏感。DDP、L-OHP、NDP和MMC的药物浓度与抑制率密切相关，GEM、5-Fu和MMC的药物作用时间与抑制率密切相关。[结论]不同化疗药物对人胃癌细胞株（SGC-7901）的抑制作用及量效、时效关系，为临床胃癌化疗方案的制定提供实验依据。     

野生型p53基因对人胆囊癌细胞生长及致瘤性的抑制作用

目的:研究野生型p53(wtp53)基因对人胆囊癌细胞生长及致瘤性的影响.方法:应用免疫细胞化学染色、PCR产物直接测序方法分析细胞系遗传背景,在脂质体介导下将含有wtp53的真核表达质粒pCMV-p53,导入GBC-SD细胞中.用G418筛选,建立转染克隆细胞系.以PCR,RT-PCR和蛋白印迹证实外源p53基因的整合与表达;以细胞生长曲线和集落形成实验反映细胞增殖状况;以裸鼠移植瘤试验检测体内致瘤性的影响.结果:GBC-SD细胞P53蛋白过表达;直接测序发现第5外显子126位密码子存在TAC→AAC的碱基突变.外源p53基因已整合入转染后的GBC-SD细胞并获稳定表达.表达外源wtp53的GBC-SD-wtp53细胞生长速率减慢、集落形成能力下降及裸鼠致瘤性受到显著抑制.结论:野生型p53基因可有效抑制人胆囊癌GBC-SD细胞的体内、外生长.     

三氧化二砷对人胃癌裸鼠腹腔种植 腹水生成的影响

目的：研究三氧化二砷 (As2O3)对人胃癌裸鼠腹腔种植腹水生成的影响及其作用机制。方法： 100只 BALB/C-nu/nu裸鼠腹腔内接种胃癌 MKN-45细胞株后,随机分为 5组,然后分别腹腔内注射生理盐水 (第 1组 )、表阿霉素 (第 2组 )及不同剂量的 As2O3(第 3、 4、 5组 ),观察癌细胞株对各组裸鼠的致瘤率、腹水生成量及生存时间;透射电镜观察 As2O3作用后腹腔内肿瘤细胞的形态学变化。结果：表阿霉素、低剂量 As2O3与生理盐水对照组相比可显著抑制裸鼠腹水的生成,延长生存期 (P<0.01);中高剂量 As2O3除上述作用外还可通过诱导肿瘤细胞凋亡消除腹腔内肿瘤细胞,抑制腹水产生,并使裸鼠寿命明显延长。结论： As2O3可通过诱导胃癌细胞凋亡而抑制或消除人胃癌裸鼠腹腔种植及腹水的生成,不同程度地延长生存期。     

NDGA对HT-29结肠癌细胞生长抑制及对端粒酶表达影响的研究

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA在体外对结肠癌HT-29细胞株生长抑制、诱导凋亡,并对端粒酶表达的影响进行研究.方法:应用MTT法绘制生长曲线,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;扫描电镜观察细胞超微结构变化,观察凋亡小体;RT-PCR检测端粒酶催化活性亚单位(hTERT)表达水平变化.结果:不同浓度NDGA处理HT-29结肠癌细胞,随着药物浓度加大,细胞形态变圆,体积缩小,从瓶壁上逐步脱落,肿瘤细胞生长抑制.应用扫描电镜可见凋亡小体形成.对照组结肠癌HT-29细胞hTERT mRNA呈阳性表达,随着药物浓度上升,hTERT mRNA表达水平逐步下降.结论:NDGA对结肠癌HT-29细胞具有抑制生长、诱导凋亡作用,并且具有剂量依赖效应.端粒酶参与其诱导凋亡的过程.     

TNF—α基因转染对胃癌细胞系的生长抑制效应

本工作以逆转录病毒为载体将TNF-α基因导入胃癌细胞系MKN28和BGC823,经筛选获阳性克隆MKN28-TNF和BCC823-TNF.对TNF基因在肿瘤细胞中的表达及其对肿瘤细胞的作用进行了探讨.证明外源TNF基因在肿瘤细胞中获得表达;肿瘤细胞生长速度明显减慢,生长抑制率分别达71%和 66%.HTdR掺入率在TNF基因转染细胞明显降低.转染后的肿瘤细胞丧失了裸鼠体内成瘤能力.实验结果表明TNF基因导入胃癌细胞后,细胞生长及致癌能力受到明显抑制,为TNF最终能用于临床胃癌基因治疗提供了有意义的资料.